硼替佐米对K562细胞株DNMT1表达的影响

[目的]探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米(bortezomib)对K562细胞株DNA甲基转移酶(DNMTs)表达、细胞凋亡的影响.[方法]以不同浓度的硼替佐米(0、6、20、60nmol/L)处理白血病K562细胞株,Western blot法检测细胞内DNMT1的表达,流式细胞术检测细胞凋亡.[结果]与对照组相比,硼替佐米可显著抑制DNMT1表达;硼替佐米作用于细胞12、24、36h后细胞凋亡率逐渐增加,60nmol/L硼替佐米作用36h后细胞凋亡率最高,为61.68％+3.20％.[结论]硼替佐米抑制K562细胞株DNMT1表达,并诱导细胞凋亡,呈浓度依赖性.     

硼替佐米对白血病细胞株HEL抑制作用的初步探讨

 目的　探讨硼替佐米单独或联合化疗药物对急性白血病细胞株HEL生长的影响及其机制。方法　MTT法检测药物对HEL的生长抑制效应,流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡,Western blotting检测凋亡及细胞周期相关蛋白表达。结果　硼替佐米对HEL细胞的生长抑制作用呈浓度依赖关系,其半数抑制浓度（IC50）为7.15 nmol／L;硼替佐米联合化疗药物明显增强抑制HEL细胞生长;流式细胞术检测可见时间依赖性的G2／M周期阻滞;Western blotting检测显示bcl-2表达下降,bax、p27表达增高,联合用药时具有相加效应,但不管是单独或联合用药,p53蛋白的表达均无明显改变。结论　硼替佐米可能是一种有效治疗急性白血病的药物,与柔红霉素联合应用有更强的抑制肿瘤细胞生长和诱导其凋亡的作用,其机制可能与bcl-2,bax及p27蛋白的调节有关,是非p53依赖性的。     

硼替佐米联合化疗治疗浆细胞白血病的疗效观察

目的评估硼替佐米联合化疗治疗浆细胞白血病(plasma cell leukemia,PCL)的疗效和不良反应。方法 11例浆细胞白血病经骨髓穿刺确诊,给予含硼替佐米方案化疗。硼替佐米给药方案为1.3 mg/m~2,d1,d4,d8,d11;联合的化疗方案包括地塞米松(BD),吡柔比星加地塞米松(PAD),马法兰加泼尼松(VMP)等。按照国际骨髓瘤工作组制定的疗效标准评估疗效,按照NCI标准评估不良反应。结果 11例患者共完成37个治疗周期,平均每例3.4个周期。11例患者中,2例获得CR,6例获得VGPR,1例获得PR,总反应率达81.8%。中位生存期17.2个月,与历史数据相比有明显区别(17.2个月vs 5.6个月).不良反应主要是骨髓抑制和感染。结论硼替佐米联合化疗治疗浆细胞白血病的疗效确切,不良反应可耐受。     

硼替佐米联合毛喉素诱导硼替佐米耐药骨髓瘤细胞凋亡的实验研究

背景与目的：硼替佐米作为蛋白酶体抑制剂已成为新诊断和复发多发性骨髓瘤患者临床治疗的主要药物,但仍有部分患者对硼替佐米产生耐药而影响其长期生存。近年来研究发现,提高细胞内环腺苷酸浓度可以诱导骨髓瘤细胞凋亡并延缓其生长,成为骨髓瘤治疗新途径。该研究通过观察硼替佐米联合腺苷酸环化酶激动剂毛喉素(forskolin)对硼替佐米耐药骨髓瘤细胞的作用,探究克服骨髓瘤耐药的可能途径及其机制。方法：以硼替佐米耐药骨髓瘤细胞株H929-R和原代细胞为模型,通过观察细胞生长、形态、凋亡相关基因的改变来研究硼替佐米、毛喉素单独或联合处理对硼替佐米耐药细胞增殖及凋亡的影响;并应用Rh123/PI双染法检测药物处理前后细胞内线粒体跨膜电位的变化;同时采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time lfuorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测线粒体凋亡相关基因转录水平及抗凋亡基因Bcl-2和Mcl-1的蛋白水平的改变。结果：硼替佐米(20 nmol/L)与毛喉素(50 nmol/L)能够协同诱导硼替佐米耐药细胞凋亡。进一步研究发现,毛喉素可协同硼替佐米促使耐药细胞内线粒体跨膜电位下降并下调其Bcl-2和Mcl-1蛋白的表达。结论：毛喉素联合硼替佐米能够诱导硼替佐米耐药骨髓瘤细胞凋亡。     

硼替佐米联合化疗药物对肝癌、 结肠癌细胞的抑制作用研究

目的探索亚砷酸对肝癌细胞和结肠癌细胞的作用;研究硼替佐米对肿瘤细胞化疗效果的效应,初筛提高化疗效果的硼替佐米与常用化疗药物的最佳组合方案。方法M。rr法检测细胞的增殖情况,确定各药物的IC50（半数抑制浓度）;硼替佐米作用肿瘤细胞系2h、4h、8h后加入化疗药物,进行MTT法、TUNEL法和AnnexinV—PI法检测细胞的增殖和凋亡情况。结果亚砷酸对BEL-7402和HT-29的24h抑制率分别为0．59±0．09、0．71±0．12;氟尿嘧啶、奥沙利铂、亚砷酸（mg／L）作用肝癌细胞BEL-7402的Ic。分别为：5．33±0．07、28．73±O．72、25．93±4．05,而结肠癌细胞HT-29的IC50分别为：7．33±1．13、53．94±1．23、21．93±2．05。联合应用硼替佐米后,肿瘤细胞抑制率及凋亡率提高。结论亚砷酸对肿瘤细胞生长存在明显抑制作用;联合应用硼替佐米与单药抑制率比较,可以显著增强肿瘤细胞对药物的敏感性,提高肿瘤治疗的效果。     

硼替佐米提高耐药K562/ADM细胞对NK细胞杀伤的敏感性及其机制

目的:探讨硼替佐米提高耐药K562/ADM细胞对NK细胞杀伤敏感性的可能机制.方法:流式细胞术和real-time PCR检测硼替佐米处理前后K562/ADM细胞表面MHC Ⅰ类链相关分子A(major histocompatibility complex class Ⅰ chainrelated molecule A,MICA)蛋白和mRNA的表达,LDH释放法检测硼替佐米处理前后K562/ADM细胞对NK细胞的杀伤敏感性.结果:硼替佐米处理后,K562/ADM细胞表面MICA蛋白表达率上升[(17.03 ±4.94)％vs(23.77±5.26)％,P＜0.05];处理后K562/ADM细胞MICA mRNA的表达水平是处理前的(2.03±0.33)倍.效靶比为10∶1、20∶1时,NK细胞对硼替佐米处理后的K562/ADM细胞的杀伤率上升[(23.22±3.03)％、(30.30±0.74)％ vs(33.69±1.28)％、(41.40 ±1.97)％,P＜0.05].结论:硼替佐米提高耐药K562/ADM细胞对NK细胞杀伤的敏感性,其机制可能与硼替佐米上调K562/ADM细胞MICA表达有关.     

硼替佐米调控内质网应激诱导人急性T淋巴细胞白血病细胞株凋亡的机制探讨

目的:探讨硼替佐米对人急性T淋巴细胞白血病（T cell acute lymphoblastic leukemia，T-ALL）细胞株Molt-4细胞凋亡的影响。方法:硼替佐米（0、100、200和400 nmol/L）处理人急性T淋巴细胞白血病细胞株Molt-4细胞后，运用MTT法测定Molt-4细胞活力；使用Hoechst 33258染色法观察凋亡细胞形态；采用荧光定量PCR法测定Bax以及Bip mRNA水平；运用Western blot法测定Bax以及Bip蛋白水平。结果:100、200和400 nmol/L的硼替佐米处理Molt-4细胞24 h后，可浓度依赖性地降低细胞活力。100、200和400 nmol/L的硼替佐米作用细胞24 h后，Molt-4细胞核发生固缩或裂解。硼替佐米（100、200和400 nmol/L）处理细胞24 h后，Molt-4细胞的Bax mRNA和蛋白表达水平明显增加且可显著上调Bip mRNA和蛋白表达水平。结论:硼替佐米可诱导人急性T淋巴细胞白血病细胞株Molt-4细胞凋亡，作用机制可能与它调控内质网应激有关。     

蛋白酶体抑制剂硼替佐米在多发性骨髓瘤中的耐药机制

多发性骨髓瘤(MM)是好发于老年人的恶性浆细胞疾病.近年来,小分子蛋白酶体抑制剂和免疫调节剂(IMiD)的应用,使MM从一种缺乏有效治疗手段的致死性疾病转变成对新型治疗反应良好的慢性疾病.然而,耐药的发生使MM仍不可治愈,这已成为当前MM临床治疗的最大挑战之一.文章对硼替佐米在MM治疗中的获得性耐药机制进行综述,主要包括靶基因修饰、旁路信号等机制.     

硼替佐米对伊马替尼耐药细胞株K562/G01增殖抑制和诱导凋亡作用的研究

 目的　探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米（BOR）对慢性粒细胞白血病（CML）伊马替尼耐药细胞株K562／G01的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法　采用MTT法观察细胞的生长抑制效应;流式细胞术（FCM）检测细胞周期与凋亡。结果　K562／G01细胞对伊马替尼不敏感,伊马替尼对K562／G01和K562细胞的IC50分别是（20.09±1.38）、（0.54±0.13）μmol／L;BOR对K562／G01细胞具有增殖抑制作用,并于48 h时作用效果达高峰,IC50（23.10±2.71）nmol／L,随着BOR浓度和作用时间的增加,FCM检测可见G2／M 期细胞周期阻滞及明显的凋亡峰。结论　BOR对CML伊马替尼耐药细胞株具有增殖抑制和诱导凋亡的作用,其机制可能与细胞周期G2／M 期的阻滞有关。     

硼替佐米对伊马替尼耐药细胞株K562/G01增殖抑制和诱导凋亡作用的研究

Objective To explore the effect of proteasome inhibitor bortezomib (BOR) on proliferation inhibition and apoptosis in imatinib-resistant chronic myeloid leukemia cell line K562/G01. Methods MTT assay was used to observe the effect of growth inhibitory of cells; flow cytometry was used to detect cell cycle and apoptosis. Results K562/G01 cells was not sensitive to imatinib,1C50 values of imatinib to K562 and K562/G01 cells was (20.09±1.38) and (0.54±0.13) μmol/L,respectively; BOR could inhibit proliferation in K562/G01 cell,peaked at 48 h,and IC50 value of BOR to K562/G01 was (23.10±2.71) nmol/L. G2/M phase cell cycle arrest and significant apoptosis peak could be seen by flow cytometry with increased in the concentration and action time of BOR. Conclusion BOR can inhibit proliferation and induce apoptosis in imatinib-resistant K562/G01 cell,the mechanism may be related to cell cycle G2/M phase arrest.     

Reversion of multidrug-resistance by proteasome inhibitor bortezomib in K562/DNR cell line

Objective:To observe the reversion of multi-drug resistance by proteasome inhibitor bortezomib in K562/DNR cell line and to analyze the possible mechanism of reversion of multidrug-resistance.Methods:MTT method was used to determine the drug resistance of K562/DNR cells and the cellular toxicity of bortezomib.K562/DNR cells were cultured for 12 hours,24 hours and 36 hours with 100 μg/ml DNR only or plus 4 μg/L bortezomib.The expressions of NF-κB,IκB and P-gp of K562/DNR were detected with Western blot method,the activity of NF-κB was tested by ELISA method and the apoptosis rate was observed in each group respectively.Results:The IC50 of DNR on cells of K562/S and K562/DNR groups were 1.16 μg/ml and 50.43 μg/mL,respectively.The drug-resistant fold was 43.47.The IC10 of PS-341 on Cell strain K562/DNR was 4 μg/L.Therefore,4 μg/L was selected as the concentration for PS-341 to reverse drug-resistance in this study.DNR induced down-regulation of IκB expression,up-regulation of NF-κB and P-gp expression.After treatment with PS-341,a proteasome inhibitor,the IκB degradation was inhibited,IκB expression increased,NF-κB and P-gp expression decreased in a time dependent manner.Compared to DNR group,the NF-κB p65 activity of DNR+PS-341 group was decreased.Compared to corresponding DNR group,DNR induced apoptosis rate increases after addition of PS-341 in a time dependent manner.Conclusion:Proteasome inhibitor bortezomib can convert the leukemia cell drug resistance.The mechanism may be that bortezomib decreases the degradation of IκB and the expression of NF-κB and P-gp,therefore induces the apoptosis of multi-drug resistant cells.     

喷他脒增强K562细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导凋亡敏感性

背景与目的：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）是一种理想的抗肿瘤药物，但许多肿瘤细胞常对TRAIL。诱导凋亡耐受。本研究探讨了喷他脒增强白血病K562细胞对TRAIL。诱导凋亡敏感性方法：利用光镜彤态学和Annexin V FITC／PI双标记凋亡细胞的流式细胞仪（FACS）测定两种方法观察喷他脒预处胛K562细胞并继用TRAIL后凋亡的发生，应用蛋白印迹方法观察此过程中半胱氯酸一天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-3，-8和聚ADP核糖聚合酶（PARP）等3种蛋白的蛋白剪切与X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）蛋白表达的改变，结果：在10μg／ml喷他脒作用K562细胞20h，K562细胞未发生凋亡，继用200ng／ml TRAIL。作用4h后，光镜和Annexin V FITC／PI双标记流式细胞仪方法均观察到细胞发生明显凋亡，井出现了Caspase-3，-8和PARP蛋白剪切．两者单独作用则无明显细胞凋亡发生．另外，喷他脒明显降低了XlAP表达结论：喷他眯联合TRAIL可能成为肿瘤治疗的一种新策略。     

硼替佐米对伊马替尼耐药细胞株K562/G01增殖抑制和诱导凋亡作用的研究

Objective To explore the effect of proteasome inhibitor bortezomib (BOR) on proliferation inhibition and apoptosis in imatinib-resistant chronic myeloid leukemia cell line K562/G01. Methods MTT assay was used to observe the effect of growth inhibitory of cells; flow cytometry was used to detect cell cycle and apoptosis. Results K562/G01 cells was not sensitive to imatinib,1C50 values of imatinib to K562 and K562/G01 cells was (20.09±1.38) and (0.54±0.13) μmol/L,respectively; BOR could inhibit proliferation in K562/G01 cell,peaked at 48 h,and IC50 value of BOR to K562/G01 was (23.10±2.71) nmol/L. G2/M phase cell cycle arrest and significant apoptosis peak could be seen by flow cytometry with increased in the concentration and action time of BOR. Conclusion BOR can inhibit proliferation and induce apoptosis in imatinib-resistant K562/G01 cell,the mechanism may be related to cell cycle G2/M phase arrest.     

异土木香内酯通过bcr-abl-STAT5信号通路抑制慢性粒细胞白血病耐药细胞K562/A02增殖

目的 探讨异土木香内酯对慢性粒细胞白血病耐药细胞K562/A02增殖的抑制作用及其机制.方法6.25、12.5、25、50、100μmol/L的异土木香内酯作用于K562/A02细胞24、48 h,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测其对K562/A02细胞的增殖抑制效果;10、15、20μmol/L异土木香内酯作用于K562/A02细胞24 h,流式细胞术检测细胞周期及凋亡;Western blot法检测增殖相关蛋白表达水平.多组间比较采用单因素方差分析.结果异土木香内酯能够显著抑制K562/A02细胞增殖,并呈浓度依赖性(P<0.05),作用24 h的半数抑制浓度(IC50)值为(15.00±1.03)μmol/L;阴性对照组及10、15、20μmol/L异土木香内酯作用后K562/A02细胞凋亡率分别为(2.71±0.52)%、(19.10±1.55)%、(27.61±2.32)%和(32.01±3.01)%,呈浓度依赖性(F=33.901,P<0.05);S期细胞比例分别为(57.80±2.11)%、(68.62±2.89)%、(78.44±3.51)%和(80.61±2.90)%,呈浓度依赖性(F=51.328,P<0.05).异土木香内酯明显降低bcl-2、p-bcr-abl、p-STAT5、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)和细胞周期蛋白A(cyclin A)的表达(P<0.05),上调细胞色素C、Bax和p21的表达(P<0.05).结论异土木香内酯能够通过bcr-abl-STAT5信号通路抑制K562/A02细胞增殖.     

EDAG在白血病细胞系K562中的细胞内自激因子作用

目的为肿瘤细胞自律性生长的细胞内自激因子假设提供实验证据。方法将新发现的造血相关核蛋白EDAG基因转染人白血病细胞系K562,比较过表达EDAG对K562细胞的增生能力,以及对细胞的造血调控、凋亡及细胞周期相关蛋白表达的影响。结果在无血清培养条件下,过表达EDAG的K562细胞的增生能力明显高于两组对照细胞,并且有c—myb和bcl-2mRNA表达的显著上调。结论过表达的EDAG可以起细胞内自激因子作用。为核蛋白异常表达可以起细胞内自激因子作用提供了实验证据。     

维生素E琥珀酸酯诱导耐药白血病K562/ADM细胞凋亡的研究

目的:研究维生素E 琥珀酸酯(vitamin E succinate , VES)对多药耐药白血病K562/ADM细胞的诱导凋亡作用及分子机制。方法: 以体外培养的K562/ADM细胞为研究对象,采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT) 比色法检测细胞增殖活性, Wright Giemsa染色、DNA凝胶电泳和流式细胞术(flowcytometry, FCM)检测细胞凋亡;FCM测定细胞Fas、Bcl-2 和p53 蛋白表达水平。结果:VES可显著抑制K562/ADM细胞的生长及增殖,P= 0 .004。光镜下可见K562/ADM细胞呈典型凋亡的形态学改变。DNA凝胶电泳显示典型的凋亡DNA梯形条带。FCM细胞周期分析显示,G1 期阻滞,亚G1 期细胞比例增高,P=0 .005;Fas蛋白表达明显上调,P=0. 002;Bcl -2蛋白表达下调,P=0. 000;p53蛋白表达无明显变化。结论:VES可诱导K562/ADM细胞凋亡,作用机制可能与其上调Fas表达和下调Bcl 2表达有关。     

P13-K抑制剂LY294002逆转P-gP介导的白血病和胃癌细胞耐药

背景与目的：磷脂酰肌醇3-激酶／蛋白激酶B[phosphatidylinositol-3-kinase（P13-K）／proteinkinaseB（Akt）,P13-K／Aktl通路是调控细胞生存的重要信号转导通路之一。本研究旨在探讨P13-K抑制剂LY294002对P-gP过表达的人类白血病K562／DNR和胃癌SGC7901／ADR细胞多药耐药性的逆转作用。方法：将细胞分为单纯药物组和LY294002预处理组,单纯药物组分别以柔红霉素（daunorubicin,DNR）、阿霉素（adriamycin,ADR）、长春新碱（vincristine,VCR）和依托泊甙（etoposide,VP-16）处理,LY294002预处理组在加药前以LY294002进行预处理。用台盼蓝拒染法及MTT法检测药物敏感性及LY294002对细胞耐药性的影响。Westernblot检测K562／DNR和SGC7901／ADR细胞中P．gP及p-Akt的表达。流式细胞术检测细胞内药物浓度。结果：2．5μmol／LLY294002预处理显著降低DNR、ADR、VCR和VP-16对K562／DNR细胞的IC50,相对逆转效率分别为72．4％、64．9％、60．4％和52．8％。此外,LY294002部分逆转SGC7901／ADR对ADR的耐药性,相对逆转效率为31．0％。LY294002预处理可部分抑制p-Akt和P-gP的表达。随着处理时间的延长．K562／DNR、SGC7901／ADR细胞内DNR、ADR的蓄积效应有增强的趋势。结论：LY294002通过抑制P13-K／Akt信号转导通路,部分逆转P-gp介导的白血病和胃癌细胞的多药耐药。