马鹿角对秀丽隐杆线虫衰老的影响及抗氧化机制研究

目的:探究马鹿角水提物对秀丽隐杆线虫衰老的影响及可能的抗氧化作用机制。方法:将秀丽隐杆线虫随机分为正常对照组和鹿角水提物1 mg/ml组。观察马鹿角水提物处理后野生型线虫(N2)和突变体线虫(eat-2、daf-2、clk-1)氧化应激条件下存活时间以及野生型线虫(N2)的运动能力、生殖能力和寿命,通过qPCR测定相关抗氧化基因的表达水平。结果:与空白对照组比较,马鹿角水提物1 mg/ml组线虫(N2、eat-2、daf-2)氧化应激条件下的存活时间明显延长(P0.05或P0.01),野生型线虫(N2)的运动能力和生殖能力明显提高(P0.05),但线粒体信号通路突变体线虫clk-1氧化应激条件下的存活时间和寿命无显著差异(P0.01),N2线虫基因gst-4、gst-7、sod-3和hsp16.2表达水平显著增高(P0.01)。结论:马鹿角水提物具有显著的体内抗氧化生物活性,能够延缓线虫衰老,其作用机理可能为通过激活线粒体信号通路,上调相关抗氧化基因表达水平,增强线虫抗氧化应激能力,延缓线虫衰老。     

生、酒黄精水煎液延缓秀丽隐杆线虫衰老研究

目的 研究生、酒黄精水煎液延缓秀丽隐杆线虫衰老的活性差异以及作用机制。方法 将秀丽隐杆线虫暴露于适宜浓度的生、酒黄精水煎液中,通过测定线虫的寿命、脂褐素和咽泵率等,探究生、酒黄精水煎液延缓线虫衰老的活性差异,通过daf-16转基因线虫实验,探究黄精水煎液延缓线虫衰老的作用机制。结果 在16 mg/mL浓度下,酒黄精水煎液能显著延长线虫的寿命,降低线虫体内的脂褐素,提高线虫的咽泵和运动频率,同时生、酒黄精水煎液均能增强线虫抗氧化应激和热应激的能力,降低线虫体内ROS的积累,促进daf-16的入核表达,酒黄精水煎液能延长daf-16的寿命。结论 酒黄精水煎液延缓线虫衰老作用优于生黄精水煎液,从抗衰老角度阐释了黄精炮制增效的科学内涵,同时为研究黄精延缓线虫衰老作用机制奠定了基础。     

六味地黄丸方对秀丽隐杆线虫寿命及daf-2 mRNA、daf-16 mRNA表达的影响

目的：观察六味地黄丸方对秀丽隐杆线虫寿命、生殖力、运动能力的影响并探讨其可能的分子机制。方法：秀丽隐杆线虫分为空白对照组、六味地黄丸方高、中、低剂量组（160、80、40mg?mL^-1）。寿命实验观察各组线虫平均寿命;生殖能力测试中,计数各组总子代数目;运动能力实验测试各组线虫20s内身体弯曲的次数。实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）方法检测空白组和六味地黄丸方中剂量组的daf-2 mRNA、daf-16 mRNA表达变化。结果：与空白组比较,六味地黄丸方中、低剂量组均能延长线虫的平均寿命（P<0.01）,以中剂量组更为显著,并可明显提高线虫生殖高峰期及末期的生殖能力。与空白组比较,各剂量组均使线虫运动能力明显减缓（P<0.01）;用药组daf-2 mRNA表达明显下调（P<0.05）;daf-16 mRNA表达明显上调（P<0.05）。结论：六味地黄丸方能明显延长秀丽隐杆线虫寿命,其机制可能与下调daf-2基因和上调daf-16基因表达有关。     

知母须根总皂苷纯化工艺及其延长秀丽隐杆线虫寿命的作用机制研究

目的考察知母须根总皂苷富集纯化的最佳工艺,并对其延长秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans,C.elegans)寿命的作用及机制进行研究。方法以知母须根总皂苷得率、总皂苷含量等为指标,考察大孔树脂型号、上样液浓度、吸附流速、上样体积、洗脱溶剂浓度及体积对富集结果的影响。以秀丽隐杆线虫为实验模型,以0.5、1.0、2.0 mg·mL~(-1)知母须根总皂苷进行干预,测定秀丽隐杆线虫寿命、后代数目、运动能力;采用qPCR法测定知母须根总皂苷(1.0 mg·mL~(-1))干预后秀丽隐杆线虫体内daf-16、daf-2、sod-3、ctl-2等基因的表达情况。结果最佳树脂型号为AB-8,上样液浓度为0.2 g·mL~(-1),吸附流速及洗脱流速均为1.0 mL·min~(-1),洗脱剂为70%乙醇,洗脱体积为3倍柱体积,所富集的总皂苷纯度50%。与空白对照组比较,1.0 mg·mL~(-1)浓度的知母须根总皂苷可显著延长秀丽隐杆线虫的平均寿命,提高线虫的半数致死天数(P0.05)、产卵数目及运动频率(P0.01);显著提高线虫体内sod-3、daf-16和ctl-2基因的表达量(P0.01,P0.001),降低daf-2基因的表达量(P0.05)。结论优选的工艺稳定可行,可用于知母须根总皂苷的富集纯化;知母须根总皂苷能延长秀丽隐杆线虫的寿命,其机制可能与Insulin/IGF-1信号通路有关。     

不同生长阶段线虫衰老相关基因的表达变化及川芎提取物的调控作用

目的:观察不同生长阶段秀丽隐杆线虫衰老相关基因的表达变化及川芎提取物(CXE)的调控作用。方法:按生长阶段不同分设2,6 d 2个时间点,采用实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法检测上述时间点对照组和用药组的衰老相关基因表达情况,以2-ΔΔCT法比较分析其基因表达变化的差异及CXE的调控作用。结果:与2 d对照组比较,6 d对照组线虫的age-1,daf-2,let-363基因表达上调(P0.05),而ins-18,let-60,sir-2.1,sod-3基因表达下调(P0.05);与用药2 d组比较,用药6 d组age-1,daf-2,let-363基因表达显著下调(P0.01),ins-18,let-60,sir-2.1,sod-3基因表达显著上调(P0.01)。结论:age-1,daf-2,let-363基因进入衰老期后表达量增加,显示促进衰老作用;而ins-18,let-60,sir-2.1,sod-3进入衰老期后表达量下降,显示延缓衰老的作用。CXE主要通过抑制胰岛素信号通路和限食等通路的衰老基因表达,促进长寿基因表达发挥延寿作用。     

补肾化痰复方对秀丽线虫神经保护的影响

目的观察补肾化痰复方对秀丽线虫是否具有神经保护作用,进而探讨各组复方神经保护作用可能的机制。方法实验对象为秀丽线虫,实验分空白对照组、阳性药组和补肾化痰复方组(生慧汤组、地黄丸组)。通过CL4176的瘫痪缓解实验进行补肾化痰复方有效药物浓度筛选;由寿命实验、繁殖能力实验对药物延缓衰老作用进行评价,并开展百草枯氧化胁迫实验和活性氧水平检测评估药物抗氧化作用水平,采用实时荧光定量PCR技术检测skn-1 mRNA、hsp-16. 2mRNA、hsp60 mRNA表达,探讨该复方可能的作用靶点。结果补肾化痰复方各组药物能明显缓解Aβ毒性作用,具有神经保护作用,在延长秀丽线虫寿命的同时,还可增强其生殖能力;实时荧光定量PCR结果显示生慧汤组、地黄丸组均能使skn-1mRNA表达上调(P 0. 001),且生慧汤组作用更为显著,而对hsp-16. 2 mRNA、hsp60 mRNA表达无显著影响。结论补肾化痰复方生慧汤和六味地黄丸加二陈汤对秀丽线虫能在延缓衰老的同时缓解Aβ毒性,其机制可能与上调抗氧化相关基因skn-1 mRNA表达有关。     

川芎提取物对线虫寿命的影响及分子机制研究

目的:观察川芎提取物(CXE)对秀丽隐杆线虫寿命的影响并探讨其分子机制。方法:寿命实验设对照组和CXE4个用药组(12.5,25,50,100 mg.L-1),观察CXE对线虫平均寿命、最大寿命的影响;选用延寿效果最佳浓度的CXE(25 mg.L-1)培养线虫10 d后,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测分析对照组和用药组衰老相关基因的表达变化。结果:与对照组相比,25,50,100 mg.L-1CXE均能显著延长线虫的平均寿命(分别为15.7%,9.1%,6.2%,P0.01)和最大寿命(分别为15.0%,6.8%,6.6%,P0.01)。用药组hsp-70,skn-1基因表达明显上调(P0.01),而akt-2,tub-1基因表达显著下调(P0.01)。结论:川芎提取物能明显延长线虫寿命,其机制与调控Insu lin/IGF-1信号通路、限食通路部分基因表达有关。     

福苓方对秀丽隐杆线虫寿命的影响

目的:通过观察福苓方对秀丽隐杆线虫寿命的影响,研究其延缓衰老的效果。方法:秀丽隐杆线虫分为空白组和福苓方高、中、低剂量组,通过寿命试验观察福苓方对线虫寿命影响,利用生殖力测试观察药物对线虫生殖力影响,急性热应激、氧化应激试验观察线虫在应激状态下寿命的改变,探讨该复方的作用机制。结果:各组的平均寿命分别为(19.96±1.48),(36.03±1.76),(28.47±1.01),(19.39±0.61)d,最大寿命依次为(21.01±1.36),(37.71±2.38),(29.19±3.12),(22.00±2.01)d。与空白组相比,福苓方高、中剂量组均能显著延长线虫的平均寿命、最大寿命及在氧化应激、热应激环境下寿命。福苓方组线虫总子代数目与空白组相比差异无统计学意义。结论:福苓方可延缓线虫衰老,其作用机制可能与该方能提高线虫的抗压力应激能力有关。     

基于~1H-NMR代谢组学的黄芪甲苷对秀丽隐杆线虫寿命的延长作用研究

目的研究黄芪甲苷(AS-IV)对秀丽隐杆线虫寿命的影响,并探索其在干预秀丽隐杆线虫衰老过程中代谢物的变化规律。方法分别收集对照组、衰老模型组和AS-IV组秀丽隐杆线虫样本,采用~1H-NMR代谢组学技术及多元统计分析方法研究秀丽隐杆线虫组织内源性代谢产物的变化。结果 5μmol/L的AS-IV可以显著升高衰老线虫组织中8种氨基酸的含量,包括异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、琥珀酸、牛磺酸和苏氨酸,同时可降低葡萄糖的含量。结论 5μmol/L的AS-IV能够通过干预机体氨基酸代谢、能量代谢等发挥延缓衰老的作用。代谢组学方法为进一步研究AS-IV延缓衰老的作用机制提供了科学依据。     

地黄花对秀丽线虫寿命的影响

目的探讨地黄花对秀丽线虫寿命的干预效果与机制。方法将秀丽线虫分为对照组和地黄花脂肪油、地黄花多糖及地黄花水提醇沉上清液各药物干预组,观察在各组药物干预下秀丽线虫在急行热应激和慢性氧化应激条件下,其生存时间的变化,并比较各组药物对秀丽线虫生殖能力和延缓寿命的作用效果,同时对抗氧化相关指标超氧化物歧化酶(SOD)进行检测。结果与空白对照组相比地黄花各部位均能延长秀丽线虫在热应激和氧化应激条件下生存时间,延长正常培养条件下秀丽线虫平均生存时间及提高秀丽线虫体内SOD活性,其中地黄花水提醇沉上清液部位效果最为显著。地黄花各部位对线虫生殖能力均无明显影响。结论地黄花能延长秀丽线虫的寿命,地黄花水提醇沉上清液部位效果最佳,其作用机制可能与提高机体SOD活性,增强应激能力有关。     

补肾抗衰片对实验性动脉粥样硬化家兔海马氧化应激的影响

目的:探讨补肾抗衰片对家兔动脉粥样硬化病变后海马组织氧化应激的影响。方法:将56只日本大耳白兔随机分为正常组8只,实验组48只,正常组给予普通饲料,实验组建立动脉粥样硬化模型,在第8周时,实验组随机分为模型组、补肾抗衰片干预组、辛伐他汀干预组。各组分别于给药16周后处死,无菌条件下取脑,用Q-PCR法检海马HO-1mRNA的表达,ELISA法检测海马组织SOD、GSH-Px活性和MDA含量以及血清中SOD、MDA的水平。结果:家兔海马HO-1 mRNA基因在各组均有表达,与正常组相比,模型组海马HO-1 mRNA表达差异无统计学意义,但模型组经辛伐他汀和补肾抗衰片干预后,海马HO-1 mRNA表达均升高,差异具有显著的统计学意义(P<0.05)。ELISA法显示海马组织SOD、MDA、GSH-Px以及血清SOD、MDA的含量各组比较均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:中药复方制剂补肾抗衰片在动脉粥样硬化所致脑损伤中具有重要的抗氧化作用,其保护机制可能是通过调控HO-1mRNA基因的表达以及影响SOD、GSH-Px酶的活性,同时清除脂质氧化终产物MDA而实现的。     

动脉粥样硬化家兔蛋白质硝基化修饰及补肾抗衰片干预研究

目的：研究补肾抗衰片对家兔动脉粥样硬化（AS）病变后血管组织蛋白质硝基化修饰的影响。方法：56只日本大耳白兔随机分为正常组（NOR）、模型组（CHOL）、补肾抗衰片组（BSKS,1 g·kg^-1·d^-1）、辛伐他汀组（SIMVA,5 mg·kg^-1·d^-1）;各组分别于给药前、给药后8,12,16周采血,最后1次采血后处死动物,无菌条件下取主动脉,检测血清环氧合酶-2（COX-2） 活性以及一氧化氮（NO）、3-硝基酪氨酸（3-NT）水平,检测主动脉诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA、p38 MAPK mRNA的表达,p38 MAPK阳性面积以及eNOS蛋白水平。结果：与正常组比较,动脉粥样硬化造模的不同时期都可检测到 iNOS表达和蛋白质酪氨酸的硝基化,模型组内膜明显增厚、纤维帽较薄,斑块内有大量脂质沉积,血清3-NT水平明显升高,补肾抗衰片干预后,血清3-NT水平下降,NO水平明显升高,而COX-2活性没有明显变化;免疫组化染色发现,主动脉p38 MAPK mRNA,iNOS mRNA基因在正常组仅有少量表达,AS病变组p38 MAPK mRNA,iNOS mRNA表达增加;与模型组比较,补肾抗衰片也明显降低了家兔p38 MAPK水平;p38 MAPK mRNA,iNOS mRNA基因表达明显下降,辛伐他汀也有类似的抑制硝基化效应。结论：动脉粥样硬化时,组织蛋白质酪氨酸发生硝基化损伤,中药复方制剂补肾抗衰片在AS病变中具有重要的抗硝基化作用,其保护机制可能是通过调控p38 MAPK mRNA,iNOS mRNA基因的表达以及影响iNOS/NO-COX-2通路中相关酶的活性,同时补肾抗衰片可能通过对抗硝基化反应稳定动脉粥样硬化斑块。     

补肾健脾活血汤治疗隐匿性肾小球肾炎疗效观察

目的:探讨自拟补肾健脾活血汤对隐匿性肾小球肾炎的影响。方法:82例隐匿性肾小球肾炎患者随机分成两组:对照组进行常规治疗,治疗组在常规治疗的基础上加用补肾健脾活血汤。然后进行疗效观察,并通过实验室检查评价补肾健脾活血汤对24h尿蛋白定量(24hUPQ)和尿红细胞计数的影响。结果:治疗组明显优于对照组(P<0.05);其24hUPQ和尿红细胞计数实验室检查指标,治疗组与治疗前比较有统计学差异(P<0.05)。结论:补肾健脾活血汤可降低24hUPQ和尿红细胞计数,治疗隐匿性肾小球肾炎疗效显著。     

补肾活血方药对CAA患者骨髓单个核细胞C-met SF基因表达的影响

目的:探讨补肾活血方药对慢性再生障碍性贫血(CAA)患者骨髓造血细胞C-met SF基因表达的影响。方法:60例CAA病人随机分为治疗组和对照组,治疗组给予补肾活血中药汤剂,每日1剂,分2次口服;对照组给予再障生血片,5片,每日3次,口服,疗程为3个月,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测CAA患者治疗前后骨髓单个核细胞C-met SFmRNA基因含量的变化。结果:CAA患者骨髓单个核细胞C-met SF mRNA表达水平高于正常对照组,治疗后C-met SF mRNA表达水平有不同程度下降,并且补肾活血方药对C-met SF表达水平的下调程度优于再障生血片组(P<0.05)。结论:CAA患者骨髓C-met SF的基因表达存在异常;补肾活血方药可能通过调节骨髓C-met SF基因的表达而改善CAA的骨髓造血功能,促进骨髓造血功能恢复。     

补肾调冲止血汤联合抗生素治疗炎症性血精症的临床研究

目的:探讨及评价补肾调冲止血汤联合抗生素治疗炎症性血精症的疗效。方法:60例炎症性血精症患者随机分为试验组(中西医结合治疗组)、对照组(抗生素治疗组),每组各30例。两组均治疗3个月,随访6-18个月。结果:试验组血精消失28例(93.33%),对照组血精消失16例(53.33%)。试验组有2例复发(复发率7.14%),再次予以试验组药物治疗,血精全部消失(再次治疗成功率100.00%)。对照组5例复发(复发率31.25%),再次予以对照组药物治疗,血精消失2例(再次治疗成功率40.00%)。两组治愈率、复发率及再次治疗成功率比较差异有统计学意义(P0.01)。试验组取得了更高的临床治愈率、更低的复发率及更高的再次治疗成功率。结论:补肾调冲止血汤联合抗生素为治疗炎症性血精症的有效方法。     

补肾法对去势兔动脉粥样硬化原代培养平滑肌细胞凋亡及血小板源生长因子A mRNA等表达的影响

目的:观察补肾煎对去势兔动脉粥样硬化原代培养平滑肌细胞凋亡及血小板源生长因子A(PDGF-A) mRNA与单核细胞趋化蛋白1(MCP-1) mRNA表达的影响.方法:新西兰雌兔随机分为A组(卵巢切除)、B组(未切除卵巢)、C组(卵巢切除 补肾煎),均予高脂饮食并注射胎牛血清蛋白,造成动脉粥样硬化模型.同时C组予补肾煎,12周后检测相关指标.结果:C组培养平滑肌细胞凋亡率高于A组、B组, PDGF-A mRNA 及MCP-1 mRNA在A组、C组的表达明显高于B组(P＜0.01),而在C组的表达又显著低于A组(P＜0.01).结论:补肾煎可能通过增加血管平滑肌细胞的凋亡、降低PDGF-A mRNA及MCP-1 mRNA的表达而减轻去势兔动脉粥样硬化的形成.     

补肾活血方对原发性免疫性血小板减少症小鼠肠道免疫及淋巴细胞周期的影响

目的:通过研究补肾活血方对原发性免疫性血小板减少症(ITP)模型小鼠免疫系统的影响,探讨补肾活血方治疗ITP的效果及作用机制。方法:建立ITP小鼠模型,ELISA法检测小鼠肠黏液中免疫球蛋白的含量及小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞P53蛋白表达的变化;流式细胞仪检测小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞周期及淋巴细胞凋亡率的变化。结果:补肾活血方能够显著下调小鼠肠黏液中免疫球蛋白含量(P<0.05);下调P53蛋白表达,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01);显著升高G0/G1期淋巴细胞比例(P<0.05),降低S期淋巴细胞比例(P<0.05),降低淋巴细胞凋亡率(P<0.05),对淋巴细胞周期异常分布及异常凋亡有一定的改善作用。结论:补肾活血方对ITP小鼠有明显的治疗作用,其作用机制主要表现为下调ITP小鼠IgG、SIgA含量及淋巴细胞P53蛋白表达、改善ITP小鼠淋巴细胞周期异常分布、降低淋巴细胞凋亡率等,其具体机制有待进一步的研究探索。     

活血补肾方及其拆方对退变腰椎间盘细胞Fas表达和凋亡率的影响

目的:观察活血补肾方及其拆方对退变腰椎间盘细胞Fas表达和凋亡率的影响.方法:采用纤维环针刺法复制腰椎间盘退变动物模型.造模成功后,将50只新西兰大白兔随机分为活血补肾方、活血方、补肾方、吲哚美辛及模型对照组5组,给药6周.采用流式细胞仪检测椎间盘细胞凋亡率,免疫组化法检测椎间盘细胞Fas表达情况.结果:活血补贤方及其...     

活血补肾方及其拆方对退变腰椎间盘IL-1β、TNF-α mRNA表达的影响

目的:观察活血补肾方及其拆方对退变椎间盘组织IL-1β、TNF-α mRNA表达的影响。方法:采用纤维环针刺法复制腰椎间盘退变动物模型。造模成功后,将50只新西兰大白兔随机分为活血补肾方、活血方、补肾方、吲哚美辛及模型对照组5组,给药6周。采用逆转录聚合酶链反应检测IL-1β和TNFαmRNA表达情况。结果:与模型组比较,活血补肾方、补肾方、活血方和吲哚美辛组IL-1β、TNFα mRNA的表达均下调(P<0.01)。结论:活血补肾方具有抑制IL-1β、TNFα mRNA表达的作用,这可能是活血补肾方减轻退变椎间盘炎症反应,减缓椎间盘退变,治疗椎间盘源性腰痛的机理之一。