一种由非01群霍乱弧菌引起的新型霍乱──0139霍乱简介

一种由非０１群霍乱弧菌引起的新型霍乱──０１３９霍乱简介北京医科大学魏承毓引言人类历史上发生的霍乱，无论前六次（１８１７～１９２３）流行的古典霍乱，还是第七次（１９６１年至今）流行的埃尔托霍乱都是由０１群霍乱弧菌（分别为古典生物型和埃尔托生物型）引起...     

实时荧光定量PCR检测0139群霍乱弧菌研究

目的:利用荧光定量PCR技术,建立一种快速、准确、特异检测0139群霍乱弧菌的定量方法.方法:选取0139群霍乱弧菌糖基转移酶基因(LPSgt)作为检测的靶基因,设计引物和TaqMan探针,探针的两端均进行荧光标记.对PcR扩增体系进行优化,进一步评价实时荧光定量PCR方法的特异性、灵敏度、重复性后,对收集的临床样本进行鉴定.结果:本文所建立的实时荧光定量PCR方法可准确、特异的检测和鉴定0139群霍乱弧菌,其他菌株均无阳性结果产生;该方法的灵敏度可达到10 cfu/ml;定量检测的批间和批内的变异系数均小于5%;对85例临床样本进行评价,结果获得9例0139群霍乱弧菌阳性,与常规培养法结果完全一致.结论:本文建立的检测0139群霍乱弧菌实时荧光定量PCR方法快速、准确,结果可靠,实用性强,可对结果进行定量分析,为0139群霍乱弧菌的实验室诊断和现场流行病学调查提供了较好的分析手段.     

外膜蛋白（ompw）引物扩增技术在非01群霍乱检测中的应用

[目的]采用霍乱弧菌外膜蛋白合成一对引物，建立一种灵敏、特异的PCR方法检测非01群霍乱弧菌。[方法]在实验室对42株来自外环境和病人中分离出的非01群霍乱弧菌采用PCR技术作了效果观察，并以大肠、痢疾、沙门菌等作为阴性对照其敏感性和特异性进行了验证。[结果]42株非01群霍乱弧菌采用外膜蛋白引物行PCR扩增，阳性率为100％，扩增片段为588bp，阴性对照扩增均为阴性。[结论]霍乱弧菌外膜蛋白引物快速检测非01群霍乱弧菌提供了一种有用的检测手段。     

1984-2002年重庆市59株O_1群霍乱临床分离株耐药性及分子分型研究

目的分析重庆市1984-2002年O1群霍乱临床分离株的耐药性和菌株的相关性。方法对59株O1群霍乱临床分离株(小川型20株,稻叶型39株)采用K-B法检测对16种抗菌药物的敏感性,用NotI酶切基因组DNA,经脉冲场凝胶电泳(PFGE)获得电泳图谱,利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析。结果重庆地区O1群霍乱弧菌对复方新诺明耐药、痢特灵和链霉素的耐药严重,耐药率分别为28.81%(17/59)、61.02%(36/59)和30.51%(18/59),人群分离株对丁胺卡那、庆大霉素、妥布霉素、氨苄西林、新霉素和强力霉素敏感,未发现耐药菌株。21株小川型和40株稻叶型O1群霍乱弧菌被分为13种PFGE型18个亚型,从患者分离到的59株O1群霍乱弧菌的相似性值约在88%～100%。结论未发现重庆市O1群霍乱弧菌人群分离株的耐药性有明显改变,小川型和稻叶型的耐药性不同。重庆市O1群霍乱弧菌人群分离株同源性较高,可能为来自同一来源的流行菌株。     

PCR快速测定法在检测海河水体非01群霍乱弧菌中的应用

目的：合成一对霍乱弧菌外膜蛋白引物，采用PCR技术对海河水系非01群霍乱弧菌感染状况进行了检测。方法：在海河水系5处水点采集水样102份，以PCR技术和常规分离培养进行了比较，以非01群霍乱弧菌Vbo35型，志贺痢疾，伤寒，大肠杆菌作为PCR扩增时的阴，阳性对照，结果：102份水样PCR检测总阳性率为52％，扩增片段588bp，与常规分离培养比较，符合率为100％，结论：霍乱弧菌外膜蛋白引物快速检测 海河水系非01群霍乱弧菌敏感性高，特异性强，可提高检测速度4－5倍，为非01群霍乱的防治提供了一种有用的检测手段。     

O139血清群霍乱研究概况

近10年来,一种新发现的传染病-O139血清群霍乱肆虐南亚,并波及亚、欧、美、非、澳五大洲的数十个国家和地区。该病是由O139霍乱弧菌引起的急性肠道传染病,以喷射性呕吐、多次无痛或痛性水样腹泻为主要症状体征。该病传播快、发病急、病死率高,被WHO列为近20年来新发现的传染病之一。本文就该病的病原学特点、临床表现、分子生物学特性、流行病学特征及防治对策等方面的研究概况作一扼要综述。     

霍乱疫情分离株流行菌型及耐药性分析

目的了解霍乱疫情分离株的流行菌型及其耐药性,为霍乱疫情的快速有效控制和临床治疗提供科学依据。方法对2008年6月海南省某地霍乱疫情采集的6株霍乱弧菌分离株进行血清学分型、噬菌体-生物分型、霍乱毒素基因检测、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型和药物敏感性试验。结果 6株菌均属埃尔托生物型霍乱弧菌,除1株为O1群小川型霍乱弧菌流行株(1c),其余5株均为O1群稻叶型霍乱弧菌流行株(1c);6株菌均具有霍乱毒素基因;PFGE分型为2个型,但聚类图谱分析相似性为100%;6株菌均对链霉素、复方新诺明、磺胺异噁唑、多粘菌素B耐药;对诺氟沙星、头孢噻肟、头孢噻吩等9种抗生素均敏感;结论该起霍乱疫情的流行菌型为O1群埃尔托霍乱弧菌稻叶型流行株(1c);诺氟沙星、头孢噻肟、头孢噻吩等可作为病例和带菌者治疗的指导用药,链霉素、复方新诺明、磺胺异噁唑、多粘菌素B则不宜使用。     

120株副溶血性弧菌的血清群和耐药性分析

目的:通过对副溶血性弧菌食物中毒菌株的血清群、耐药性检测,了解浙江省各类副溶血性弧菌主要血清群及耐药状况,为预防副溶血性弧菌食源性疾病发生,为指导临床合理用药提供依据。方法:用VITEK全自动微生物分析系统进行耐药性鉴定;血清学检测采用玻片凝集法。结果:我省副溶血性弧菌血清群主要为O3群、O4群、O1群、O5群。不同来源菌株间的血清型差异较大。从门诊病人和食物中毒事件中分离的菌株主要为O3群、O4群、O5群,从食品中分离的菌株主要为O1群、O10群、O2群、O11群。对头孢呋辛新酯、头孢呋辛、头孢噻吩和头孢唑啉有极高的耐药率,均在50%以上;对胺苄西林、羧卡西林、阿莫西林/克拉维酸的耐药性分别为49.17%、43.33%、32.50%;对头孢曲松、环丙沙星、庆大霉素、米若环素、萘啶酸、呋喃妥因、诺氟沙星、氧氟沙星、替卡西林/棒酸、妥布霉素、复方新诺明11种抗生素完全敏感。结论:要重点防治由O3群、O4群血清型的耐7种抗生素的超级耐药株引起的副溶血性弧菌食源性疾病或食物中毒。     

霍乱弧菌分型方法及其在流行病学研究中的应用

霍乱弧菌的表型分型包括：Ｏ血清分型、噬菌体分型、多位点酶电泳和耐药谱等。基因分型包括：毒力基因分型、质粒分型、脉冲场凝胶电泳分型、基因探针分型、任意引物ＰＣＲ分型和基因序列分析等方法。上述方法已广泛用于霍乱弧菌的流行病学研究。包括霍乱弧菌流行株的检测、霍乱流行规律、Ｏ１３９群的起源、霍乱的传播途径和耐药机理等研究。     

十株产色素非O1群霍乱弧菌的发现与研究

目的研究产色素非Ｏ１群霍乱弧菌在水源水中的分布、生物学性状及其致病性。方法在本地主要饮用水源设点、采样、培养致病性弧菌。分离、鉴定该菌过程中用营养琼脂斜面代替双糖铁琼脂取得良好效果。结果１９９４～１９９７年在水源水中相继检出１０株产色素的革兰阴性弧状菌，经形态学、培养特性、生化学、血清学的系统鉴定，均符合非Ｏ１群霍乱弧菌的定义，动物实验等显示其有较强毒力。结论因该菌在碱性胆盐琼脂、营养琼脂斜面和血琼脂上培育后能产生水溶性褐色色素，故命名为产色素非Ｏ１群霍乱弧菌     

Taq-Man实时荧光定量PCR同时检测O1和O139群霍乱弧菌

目的针对霍乱弧菌血清群各自编码O抗原的特异性基因建立能够快速、准确地同时检测O1和O139群霍乱弧菌的荧光PCR检测方法,并克服常用PCR检测方法中经常出现的假阳性现象。方法分别以rfbM和wbfR基因作为O1和O139群霍乱弧菌的模板设计引物和探针,通过优化反应条件建立了能够同时检测O1群和O139群霍乱弧菌的二联实时荧光定量PCR方法(FQ-PCR)。对该方法的特异性、灵敏度进行评估,并对10份模拟食品样品和133份临床样品进行了检测。结果特异性试验表明,该方法能选择性检测O1和O139群霍乱弧菌,能有效地避免O141群霍乱弧菌和拟态弧菌的假阳性,特异性为100%;灵敏度试验表明,O1群霍乱弧菌和O139群霍乱弧菌检出限分别为92cfu/ml和116cfu/ml;另外,试验建立的检测方法对模拟样品和临床样品检测结果与国标法的检测结果完全一致,符合率为100%。结论该实时荧光PCR检测方法能够同时检测O1和O139群霍乱弧菌,而且特异性好、灵敏度高,能有效克服假阳性,适用于基层疾病控制、口岸检疫单位日常疫情监测和临床诊断。     

一起食源性O139群霍乱弧菌引起暴发疫情调查及其扑疫措施

目的分析某镇一起食源性O139群霍乱弧菌引起暴发疫情发生的原因、流行病学特征及扑疫措施,为政府制定相关政策和进一步采取防制措施提供科学依据。方法采用流行病学个案调查方法对此起疫情的所有就餐者开展调查。结果经流行病学调查、病原体检测和临床表现证实,此起疫情系宴席聚餐中鲜活甲鱼所携带的O139群霍乱弧菌污染食品所致,通过启动突发性公共卫生事件应急机制,迅速采取控制措施,此起疫情迅速得到控制,无二代病例和死亡病例。结论加强农村食品卫生安全管理,严格餐饮许可制度,广泛开展健康教育与健康促进工作,提高农村居民自我防病防疫意识,对防止食源性肠道传染病暴发疫情再发生具有重要意义。     

O139群霍乱弧菌L型变异和诱导实验的观察及致病性的探讨

[目的]探讨O139群霍乱弧菌L型变异及其与ElTor型的R型血清的关系。[方法]2002～2005年,我们采用酚肉汤传代、抗生素、胆盐和蒸馏水等实验室诱导方法进行观察。[结果]发现O139群霍乱弧菌6菌株经上述方法诱导可发生L型变异,其菌落特征和菌体形态均与L型的描述相符。[结论]实验结果证实O139群霍乱弧菌可诱导成L型,通过与O1群的R型血清凝集状况,表明其L型菌株未见到抗原的完全消失,其变异过程与ElTor弧菌相似,关系密切,推测自然界中亦存在O139群霍乱弧菌L型,且仍具有致病性。     

广东省2009-2014年霍乱弧菌耐药监测分析

目的 了解广东省2009-2014年霍乱弧菌耐药情况,为霍乱临床合理用药和防治提供科学依据。方法 采用WHO推荐的改良K-B纸片扩散法,对在广东省2009-2014年收集的253株霍乱弧菌进行12种抗菌药物的药敏试验。结果 广东省2009-2014年共收集分离霍乱弧菌O1群189株(小川型72株,稻叶型117株),O139群26株,非O1/O139群38株;药敏结果显示,253株霍乱弧菌对头孢噻肟(CTX)和头孢曲松(CRO)均100% 敏感,对诺氟沙星(NOR)、环丙沙星(CIP)、阿米卡星(AMK)的敏感率分别为98.8% 、98.4% 、98.0%;O1群小川型、O1群稻叶型、O139群、非O1/O139群霍乱弧菌比较,不同血清型霍乱弧菌对萘啶酸(NAL)、四环素(TCY)、多西环素(DOX)、复方新诺明(SXT)、氨苄西林(AMP)、阿莫西林(AMX)、氯霉素(CHL)等抗生素的耐药率差异均有统计学意义(均P<0.05);多重耐药分析结果显示,37.5% 的菌株同时对≥3种抗生素耐受,其中有12株O1群稻叶型菌株同时对≥6种抗生素耐受,有3株O1群小川型和1株非O1/O139群菌株同时对6种抗生素耐受,有2株O139群菌株同时对4种抗生素耐受。结论 CTX、CRO、NOR、CIP、AMK对霍乱弧菌的敏感率较高;非O1/O139群霍乱弧菌感染比例增高且部分菌株表现出多重耐药现象,应加强此类菌株的耐药监测。     

杭州市O139群霍乱弧菌耐药变迁及毒力基因携带

目的 研究杭州市1994～2003年分离的O139群霍乱弧菌耐药性变迁以及携带ctxA、tcpA毒力基因的情况。方法 运用K—B法和PCR，检测90株O139群霍乱弧菌对抗生索的敏感性以及是否携带ctxA、tcpA毒力基因。结果 90株O139群霍乱弧菌中无丁胺卡那耐药的菌株，13株对诺氟沙星和环丙沙星耐药；对氨苄青霉索、复方新诺明分别有5年和6年的耐药率为100％；2002、2003年耐药谱增加到7种。87．87％的O139群霍乱弧菌同时携带ctxA、tepA毒力基因。结论10年来分离自杭州的O139群霍乱弧菌的耐药情况日益严重；O139群霍乱弧菌是否携带ctxA、tcpA毒力基因在对抗生素敏感性方面差异有统计学意义。     

8株霍乱弧菌耐药状况及RAPD同源性分析

目的分析蚌埠市2010年霍乱弧菌对抗生素的敏感性和同源性,为霍乱防控提高依据。方法选取2010年安徽省蚌埠市O1/O139群霍乱病例分离株8株,采用WHO推荐的改良Kirby—Bauer纸片法,分析霍乱弧菌对15种抗生素在体外的药物敏感性;应用随机引物扩增多态性(RAPD)技术对其作分子流行病学分型和同源性分析。结果所有O1/O139群霍乱弧菌对氨苄西林、头孢唑啉、丁胺卡那、庆大霉素、舒普生、氧哌嗪青霉素、头孢曲松、亚胺培南均100%敏感,对复方新诺明、四环素、强力霉素均100%耐药。O139群霍乱弧菌在氯霉素、诺氟沙星、环丙沙星等的敏感度上与O1群霍乱弧菌有一定的差异。根据随机扩增多态DNA聚类分析可以将检出的O1/O139群霍乱弧菌分为2个型别。结论 O139群霍乱弧菌耐药率较O1群霍乱弧菌高,应根据不同菌型选择相应的抗生素药物进行治疗。分离的O1群霍乱弧菌有同源性。     

萍乡地区O139群霍乱弧菌TcpA基因序列分析

目的　探讨O13 9群霍乱JX株的TcpA基因序列 ,分析该株基因的特点。方法　采用PCR扩增技术 ,检测含O13 9群霍乱标本 ,对TcpA基因阳性者进行核苷酸序列测定 ,分析基因变异情况。结果　发现阳性标本中 ,对其中 1株进行了TcpA基因序列测定 ,该序列与TcpAET(O13 9株 )同源性为 10 0 % ,与EVC序列同源性为 96%。结论　本株与O1群 (EVC)遗传关系最近 ,对萍乡地区霍乱防治具有重要意义。     

Purification and partial characterization of fimbriae of Vibrio cholerae O1

Fimbriae of Vibrio cholerae O1 were purified from a strain of the classical biotype, Inaba serotype (Bgd 17), and a strain of the El Tor biotype, Ogawa serotype (K23), grown on TCG agar medium by the following procedure; homogenization of the cell suspension to detach fimbriae, ultracentrifugation to remove remaining cells and their debris, concentration of the supernatant containing fimbriae with ultrafiltration, and 20 to 40% sucrose linear gradient centrifugation of the concentrated material. The fimbriae in both preparations were flexible, long fibres readily distinguishable under the electron microscope from those of CFA/I, CFA/II seen in ETEC strains. Their structural subunit was a protein of 16 kdaltons. Fimbriae isolated from both serotypes and biotypes shared antigenic determinants.