华蟾素诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡及其作用机制

为了观察华蟾素体外抑制肝癌细胞株HepG₂增殖、诱导细胞凋亡作用及其机制, 将不同浓度华蟾素作用于HepG₂细胞。采用MTT法观察华蟾素对HepG₂细胞的增殖抑制作用; 用Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡的形态学改变; 以流式细胞术观察细胞的凋亡率和细胞周期的变化; 以实时荧光定量PCR技术 (real time-PCR) 和蛋白免疫印迹 (Western blotting) 法检测细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax及p53 mRNA水平和蛋白水平的表达情况。结果表明, 华蟾素对体外培养的肝癌HepG₂细胞有抑制增殖作用, 且具有剂量、时间相关性; 华蟾素可致HepG₂细胞阻滞于G₂/M期, 细胞凋亡率随药物浓度增加亦呈增长趋势; 细胞凋亡相关因子Bax及p53 mRNA和蛋白表达上调, Bcl-2的mRNA和蛋白表达下调。因此, 华蟾素可抑制肝癌细胞株HepG₂的增殖, 诱导肝癌HepG₂细胞凋亡, 其机制可能与调节凋亡相关因子Bcl-2、Bax及p53的表达有关。     

灵芝多糖诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的研究

目的：研究灵芝多糖（GLPS）与化疗药氟尿嘧啶联合使用诱导人肝癌细胞HepG2凋亡作用。方法：MTT法测定细胞毒作用,流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法测定Caspase-3、Caspase-8酶活性,Western—Blotting法检测细胞色素C、Caspase-3、Caspase-8蛋白表达情况。结果：灵芝多糖与氟尿嘧啶联合使用具有显著的细胞毒作用;流式细胞术检测,随着GLPS浓度增加,细胞凋亡率升高,Caspase-3、Caspase-8酶活性亦增强;Western-Blotting检测发现GLPS作用后细胞色素C、Caspase-3、Caspase-8蛋白表达不同程度增加。结论：灵芝多糖与氟尿嘧啶联合使用可通过引起细胞色素C的释放,活化Caspase诱导肝癌细胞凋亡。     

熊去氧胆酸选择性诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡探讨

目的 探讨熊去氧胆酸（UDCA）对人肝癌细胞株HepG2、肝细胞株QSG-7701增殖、凋亡及对Survivin、Caspase-3表达的影响.方法 UDCA孵育两种细胞后,分别采用MTT法、流式细胞仪、电镜、免疫组化法等观测相关指标.结果 UDCA能抑制HepG2增殖,诱导其凋亡,并具有浓度、时间依赖性.随着Survivin表达下调,Caspase-3表达上调（r=-0.9853,P＜0.01）、细胞增殖抑制（r=0.9789,P＜0.05）、凋亡指数增加（r=-0.9632,P＜0.05）.肝细胞株QSG-7701中无Survivin表达.UDCA对肝细胞株QSG-7701增殖、凋亡无明显影响.结论 UDCA可能通过干预Survivin的表达,选择性地诱导肝癌细胞株HepG2凋亡.     

杨梅素作用于人肝癌HepG-2细胞凋亡信号转导途径的研究

目的研究杨梅素对肝癌HepG-2细胞凋亡的影响。方法 MTT法和SRB法分析杨梅素对肝癌HepG-2细胞增殖的影响,透射电镜和流式细胞仪分别观察杨梅素诱导HepG-2细胞凋亡作用,Western blot检测相关蛋白表达水平变化,分析杨梅素诱导HepG-2细胞凋亡机制。结果杨梅素以剂量依赖方式抑制肝癌HepG-2细胞的生长,IC50值为207.99μmol·L-1;杨梅素不同剂量组作用72 h后,HepG-2细胞表现出明显的凋亡特征,且HepG-2细胞G2/M期比例上升。HepG-2细胞中p-AKT,p-ERK和p-BAD蛋白随着剂量的增加表达水平均下降,AKT和ERK蛋白表达无明显改变。结论杨梅素可抑制HepG-2细胞增殖并诱导其凋亡,在一定浓度范围内呈剂量效应关系,并可将HepG-2细胞阻滞于G2/M期;通过下调p-AKT,p-ERK和p-BAD蛋白表达而起促凋亡作用。     

三氧化二砷联合顺铂诱导人肝癌HepG2细胞株凋亡机制研究

研究发现,三氧化二砷（As2O3）对肿瘤具有明显的选择性,现已将单药As2O3注射液用于临床,在白血病治疗中取得了良好的疗效。顺铂（CDDP）属于细胞周期非特异性抗癌药物,为临床一线抗肝癌化疗药。但其抗肝癌的主要机制仍未明确,为探讨As2O3联合CDDP诱导肝癌凋亡的机制,进行了以下实验研究,现报告如下。     

吴茱萸碱对人肝癌细胞HepG2的生长抑制及诱导凋亡作用

目的探讨吴茱萸碱对人肝癌细胞HepG2的生长抑制、诱导凋亡和对细胞周期的影响。方法体外试验MIT法测存活率,DAPI染色观察细胞凋亡形态,流式细胞术、彗星电泳技术分析药物对DNA作用。结果吴茱萸碱能抑制人肝癌细胞HepG2的生长。用64、16、4、1、0.25μmol.L-1浓度的吴茱萸碱处理HepG2细胞72 h的抑制率分别为74.0%、69.0%、60.5%、44.0%、16.4%。DAPI染色后吴茱萸碱组癌细胞均表现出较为典型的细胞凋亡特征。流式细胞仪检测1μmol.L-1吴茱萸碱作用24和36 h出现亚二倍体凋亡峰,细胞周期阻滞于G2/M期。凋亡率对照组为4%,1μmol.L-1吴茱萸碱作用12、24、36 h的凋亡率分别为4.4%、18.0%、30.3%。彗星电泳显示1μmol.L-1吴茱萸碱作用24和48 h后,细胞后面形成长的拖尾,平均光密度值较阴性对照组降低,彗星尾距较阴性对照组增加,且二者的改变与作用时间相关。结论吴茱萸碱能抑制人肝癌细胞HepG2的生长及诱导其凋亡。     

二氢杨梅素诱导喉癌Hep-2细胞凋亡的机制研究

目的 研究CXC趋化因子受体4(CXCR4)在二氢杨梅素诱导喉癌Hep-2细胞凋亡中的作用。方法 喉癌Hep-2细胞分成对照组(0μg·mL^-1二氢杨梅素)、低剂量实验组(20μg·mL^-1二氢杨梅素)、中剂量实验组(40μg·mL^-1二氢杨梅素)、高剂量实验组(80μg·mL^-1二氢杨梅素)、高剂量实验+Vector组(80μg·mL^-1二氢杨梅素+pcDNA3.1)、高剂量实验+CXCR4组(80μg·mL^-1二氢杨梅素+pcDNA3.1-CXCR4)。以蛋白质印迹法检测CXCR4、剪切的胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)、糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)蛋白表达,以噻唑蓝(MTT)方法检测细胞存活率,以流式细胞术测定细胞凋亡。结果 对照组、低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组、高剂量实验+Vector组、高剂量实验+CXCR4组喉癌细胞中CXCR4蛋白表达水平分别为0.58±0.04,0...     

硼酸钠活化p53诱导人肝癌细胞HepG2凋亡

目的观察硼酸钠(Borax)对人肝癌细胞株Hep G2的生长抑制和诱导凋亡的作用,并初步探讨其作用机制。方法采用MTT法检测不同浓度硼酸钠对Hep G2活力的影响,DAPI染色荧光显微镜及Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术检测硼酸钠诱导细胞凋亡的情况。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测硼酸钠对肿瘤抑制因子p53及其下游基因Bcl-2、Bax、Noxa、Puma mRNA表达的影响。结果与对照组比较,硼酸钠各剂量组均能抑制Hep G2的活力(P<0.01);硼酸钠诱导Hep G2细胞凋亡,不同浓度硼酸钠(0、1.0、2.0、4.0 mmol/L)处理24 h后,晚期凋亡细胞百分比从2.57%分别增加至8.13%、10.4%、15.24%,差异有统计学意义(P<0.01);硼酸钠(4.0 mmol/L)分别作用6、12、24 h后,均可不同程度上调肿瘤抑制因子p53及促凋亡基因Bax、Noxa、Puma mRNA表达,抑制抗凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达,差异有统计学意义(P<0.01)。结论硼酸钠抑制人肝癌细胞Hep G2的生长活性并诱导凋亡,其机制与p53的活化及其下游Bax、Noxa、Puma基因表达上调,以及Bcl-2表达下调有关。     

杨梅素诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡及凋亡通路的研究

目的研究杨梅素体外对人宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡及凋亡通路的影响。方法体外培养人宫颈癌HeLa细胞,MTT和SRB法检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡,计算机分析细胞周期;Western Blot法检测caspase-3、caspase-9和survivin含量。结果杨梅素对HeLa细胞的体外增殖具有抑制作用,并具有浓度和时间依耐性;杨梅素体外诱导HeLa细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在S期;杨梅素促进caspase-3和caspase-9蛋白表达,抑制survivin蛋白表达。结论杨梅素可抑制HeLa细胞的增殖,诱导其凋亡,其凋亡途径同时涉及细胞内途径和细胞外途径。     

齐墩果酸诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其作用机制研究

目的探讨齐墩果酸对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用和诱导凋亡作用,并考察其作用机制。方法采用MTT法检测齐墩果酸对HepG2细胞增殖的影响,吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双重染色法进行细胞形态学观察,流式细胞仪检测细胞凋亡、活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位(MMP)的变化。结果随着齐墩果酸浓度的升高,抑制率显著增加,呈现明显的时间与剂量相关性;齐墩果酸在25.0、50.0、100.0μmol/L作用12 h时,细胞形态学发生改变,细胞的总凋亡率随着齐墩果酸浓度的增加而升高,细胞中ROS水平随着齐墩果酸浓度的增加而升高,细胞内的MMP水平随着齐墩果酸浓度的增加而降低。结论齐墩果酸通过调节ROS和MMP体外抑制人肝癌HepG2细胞的增殖和诱导其凋亡     

吡非尼酮对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响(“豪森杯”优秀论文三等奖)

目的：研究吡非尼酮（pirfenidone,PF）对人肝癌细胞系HepG2增殖和凋亡的影响。方法：CCK-8法测定不同浓度PF对HepG2细胞增殖活性的影响;Hoechst 33258荧光染色法观察PF处理后HepG2细胞形态的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：PF对HepG2细胞具有显著增殖抑制作用,并呈浓度和时间依赖性;Hoechst 33258染色可见PF处理后细胞出现典型的凋亡形态学变化;流式细胞仪检测结果显示,与空白组比较,PF处理后的HepG2细胞凋亡率显著增加（P﹤0.01）。结论：PF对人肝癌细胞系HepG2细胞增殖具有抑制作用,且与诱导HepG2细胞凋亡有关。     

Osthole induces G2/M cell cycle arrest and apoptosis in human hepatocellular carcinoma HepG2 cells

Context: Osthole [7-methoxy-8-(3-methyl-2-butenyl) coumarin] isolated from the fruit of Cnidium monnieri (L.) Cuss, one of the commonly used Chinese medicines listed in the Shennong’s Classic of Materia Medica in the Han Dynasty, had remarkable antiproliferative activity against human hepatocellular carcinoma HepG2 cells in culture.

Objectives: This study evaluated the effects of osthole on cell growth, nuclear morphology, cell cycle distribution, and expression of apoptosis-related proteins in HepG2 cells.

Materials and methods: Cytotoxic activity of osthole was determined by the MTT assay at various concentrations ranging from 0.004 to 1.0?µmol/ml in HepG2 cells. Cell morphology was assessed by Hoechst staining and fluorescence microscopy. Apoptosis and cell-cycle distribution was determined by annexin V staining and flow cytometry. Apoptotic protein levels were assessed by Western blot.

Results: Osthole exhibited significant inhibition of the survival of HepG2 cells and the half inhibitory concentration (IC₅₀) values were 0.186, 0.158 and 0.123?µmol/ml at 24, 48 and 72?h, respectively. Cells treated with osthole at concentrations of 0, 0.004, 0.02, 0.1 and 0.5?μmol/ml showed a statistically significant increase in the G2/M fraction accompanied by a decrease in the G0/G1 fraction. The increase of apoptosis induced by osthole was correlated with down-regulation expression of anti-apoptotic Bcl-2 protein and up-regulation expression of pro-apoptotic Bax and p53 proteins.

Conclusion: Osthole had significant growth inhibitory activity and the pro-apoptotic effect of osthole is mediated through the activation of caspases and mitochondria in HepG2 cells. Results suggest that osthole has promising therapeutic potential against hepatocellular carcinoma.     

姜黄素对肝癌HepG2和Bel-7404细胞增殖的抑制作用

目的研究姜黄素对人肝癌HepG2和Bel-7404细胞增殖的影响。方法不同浓度的姜黄素(2.5,10.0,25.0,50.0,100.0μg/mL),0.2%二甲基亚砜的RPMI 1640培养基加细胞为空白对照,2μg/mL顺铂为阳性对照。MTT法检测肝癌HepG2和Bel-7404细胞的增殖。结果姜黄素对肝癌细胞HepG2和Bel-7404的增殖抑制有量效关系,并呈时间依赖性。在相同作用时间下,姜黄素组、顺铂组对肝癌细胞HepG2和Bel-7404增殖有明显的抑制作用,与空白对照组比较均有显著性差异(P<0.05)。与空白对照组比较,2.5,10.0μg/mL姜黄素对肝癌细胞HepG2和Bel-7404的增殖没有明显的抑制作用(P>0.05),而25.0,50.0,100.0μg/mL姜黄素以及顺铂组对肝癌细胞HepG2和Bel-7404的增殖均有明显的抑制作用(P<0.05)。结论姜黄素可以明显的抑制肝癌细胞HepG2和Bel-7404的生长,且存在剂量-时间的关系。     

尼美舒利与阿霉素联合应用对肝癌HepG_2细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨尼美舒利(n im esu lide,NIM)联合阿霉素(adriamyc in,ADM)对人肝癌细胞株HepG2的增殖抑制及诱导凋亡作用。方法采用MTT比色法检测药物的生长抑制作用,应用金正均法判断两药的相互作用,吖啶橙荧光染色观察细胞的形态学改变,流式细胞仪(flow cytom etry,FCM)检测细胞凋亡率。结果MTT结果显示NIM(25、50、100μmol.L-1)与ADM(0.156,0.313,0.625 mg.L-1)联合应用对人肝癌细胞株HepG2的增殖抑制均有不同程度的协同作用(q>1.15),联合用药组与ADM各单药组相比差异有显著性(P<0.01)。吖啶橙荧光染色可见典型的凋亡形态学特征。FCM检测凋亡显示NIM 100μmol.L-1和ADM2.5 mg.L-1单独及联合应用48 h后DNA直方图上均出现典型的亚二倍体“凋亡峰”,联合用药组凋亡率(19.6%)明显高于各单独用药组(2.48%和10.6%)。结论NIM与ADM联合应用具有协同抑制人肝癌细胞株HepG2细胞增殖与诱导其凋亡作用。     

微小RNA-21对肝癌患者的HepG2细胞增殖的调控作用

目的研究微小RNA-21(miR-21)在肝癌HepG2细胞中对增殖的作用并探讨相关的机制。方法收集2012年至2015年本院收治的98例肝癌患者,分离其肝癌组织和癌旁组织,用免疫组化法检测丝裂原激活蛋白激酶激酶3(MAP2K3)的表达情况;肝癌细胞系HepG分为mimic-miR-21组与miR-21抑制药组,分别转染mimic-miR-21与miR-21抑制药。转染48 h后,以3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲酯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑法检测在24,48,72 h的HepG2细胞的增殖情况,用实时定量聚合酶链式反应(qPCR)法检测HepG2细胞中miR-21和MAP2K3 mRNA的表达水平,以免疫印迹法检测MAP2K3的表达水平。结果 MAP2K3在肝癌组织与癌旁组织中的表达强度分别为1382±105,5872±289;HepG2细胞转入mimicmiR-21与miR-21抑制药24 h后,mimic-miR-21组与miR-21抑制药组的miR-21 mRNA表达量分别为6.45±1.21,0.43±0.12。mimic-miR-21与miR-21抑制药组的增殖活性在24,48,72 h分别是(100±12)%,(60±18)%;(138±12)%,(45±8)%;(146±9)%,(38±6)%,以上指标组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。HepG2细胞转入mimic-miR-21与miR-21抑制药24h后,mimic-miR-21组与miR-21抑制药组的MAP2K3在RNA表达水平分别为0.17±0.03,0.97±0.09,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 miR-21可通过抑制MAP2K3的表达从而促进肝癌HepG2细胞增殖。     

不同浓度依托咪酯诱导人肝癌HepG2细胞体外凋亡的研究

目的探讨不同浓度的依托咪酯是否具有直接诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的作用,寻找依托咪酯临床治疗的新途径。方法人肝癌细胞株HepG2体外扩增培养备用,选取不同浓度的依托咪酯E1、E2、E3和对照组（空白）,分别培养12h、24h、48h后观察。结果与空白对照组相比,培养12h、24h、48h后E1组、E2组人肝癌细胞株HepG2细胞凋亡率无明显差异（P〉0．05）,E3组凋亡率不断增加,具有显著性差异（P〈0．05）;随着培养时间的延长及浓度的不断增加,E1与E2组对比人肝癌细胞株HepG2细胞凋亡率无明显差异（t=1．732,P〉0．05）,E1与E3组对比人肝癌细胞株HepG2细胞凋亡率具有显著性差异（t=1．864,P〈0．05）,E2与E3组对比人肝癌细胞株HepG2细胞凋亡率具有明显差异（f=1．691,P〈0．05）。结论依托咪酯在临床安全有效的浓度下不直接诱导人肝癌HepG2细胞的体外凋亡,浓度及时间达到一定峰值时可具有直接诱导人肝癌HepG2细胞体外凋亡的作用。     

甲基莲心碱对HepG2细胞增殖及凋亡的影响

摘 要 目的：研究甲基莲心碱对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法: 采用CCK 8法观察甲基莲心碱对人肝癌细胞HepG2细胞生长增殖的影响;Hoechst33258染色观察甲基莲心碱作用HepG2细胞后细胞形态的变化;测定乳酸脱氢酶 (LDH)释放率观察HepG2细胞受损程度;Annexin V PI双染测定甲基莲心碱对HepG2细胞凋亡率的影响;PI/RNase单染检测不同浓度的甲基莲心碱对其凋亡周期的影响。结果: 甲基莲心碱对体外培养的人肝癌HepG2细胞的生长具有抑制作用,且呈剂量、时间依赖性;细胞膜的受损程度随着药物剂量的增大逐步提高;Hoechst33258及流式结果表示,甲基莲心碱可使HepG2细胞阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率随药物浓度的增大亦呈增长趋势。结论: 甲基莲心碱可显著抑制肝癌HepG2细胞的生长增殖,并在一定的范围内呈剂量、时间依赖性,诱导其阻滞于G0/G1期,发生晚期凋亡。     

腺苷体外对人肝癌HepG2细胞凋亡的诱导作用及其作用机制

目的研究腺苷及其代谢途径对人肝癌HepG2细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法将腺苷2.0mmol.L-1作用于HepG2细胞24和48h,采用流式细胞术(FCM)测定细胞周期及凋亡率;观察腺苷膜转运体抑制剂双嘧达莫、腺苷脱氨酶抑制剂红-9-(2-羟基-3-壬烷基)腺嘌呤(EHNA)和腺苷激酶抑制剂5′-氨基5′-脱氧腺苷(AMDA)对腺苷抑制细胞存活的影响,应用MTT法测定细胞存活率;应用Western蛋白印迹法检测P53和Bcl-2蛋白的表达。结果腺苷与HepG2细胞作用24和48h,HepG2细胞出现特征性的亚二倍体凋亡峰,细胞凋亡百分率分别由对照组的(1.2±0.4)%和(4.1±1.6)%增加到(24.3±4.8)%和(38.6±7.4)%,细胞周期阻滞于G0/G1期。腺苷与HepG2细胞作用24h明显抑制细胞存活,P53表达明显增强,Bcl-2表达降低。预先分别给予双嘧达莫,AMDA和AMDA+双嘧达莫处理后,各处理组HepG2细胞存活率较腺苷组升高,细胞凋亡百分率和P53表达降低,Bcl-2表达无明显变化;EHNA预处理组细胞存活率、细胞凋亡百分率、P53和Bcl-2表达与腺苷组比较均无明显变化。结论腺苷可诱导HepG2细胞凋亡,腺苷在胞内可能通过腺苷激酶而不是通过转氨酶的代谢途径参与诱导细胞凋亡的过程。腺苷对HepG2细胞凋亡的诱导作用还可能与其增加P53蛋白表达有关。     

人参皂苷CK对人肝癌细胞HepG2迁移及侵袭的影响

目的探讨人参皂苷CK对人肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其可能机制。方法取对数生长期的Hep G2细胞,用不同浓度人参皂苷CK(0、10、20、40、80μmol·L^-1)处理,MTT法检测人参皂苷CK对细胞增殖的影响;细胞划痕实验、Transwell实验检测人参皂苷CK对肝癌细胞迁移、侵袭的影响;Western blot检测人参皂苷CK对Hep G2细胞中E-cadherin、N-cadherin及信号分子p-ERK、ERK、p-Akt、Akt水平的影响。结果 MTT检测结果显示,人参皂苷CK对肝癌Hep G2细胞生长有抑制作用;划痕和Transwell实验结果显示,人参皂苷CK可抑制Hep G2细胞的迁移和侵袭;Western blot结果显示人参皂苷CK可降低N-cadherin表达,明显升高E-cadherin表达水平,同时抑制ERK和Akt信号的磷酸化。结论人参皂苷CK可抑制肝癌细胞的迁移和侵袭过程,可能与抑制ERK和Akt信号有关。