亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与不明原因的重复性自然流产的相关性研究

目的 :探讨同型半胱氨酸代谢酶基因亚甲基四氢叶酸还原酶 (MTHFR)基因多态性C6 77T、A12 98C及其联合基因型与不明原因重复性流产 (URSA)的关系。方法 :运用聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性技术检测MTHFRC6 77T、A12 98C基因多态性。结果 :①患者组C/C基因型频率显著低于正常对照组者 ,总的突变T等位基因频率显著高于对照组者。MTHFRC6 77T基因型分布与不同年龄、地区、流产时间、流产性质无关 ,与流产次数显著相关。URSA组MTHFRA12 98C三种基因型频率与对照组相比差异无显著性 ,与患者不同临床特征无明显关联。A12 98C杂合子联合C6 77T杂合子基因型发生URSA的危险性无显著增高。结论 :MTHFRC6 77T基因多态性是URSA发病的遗传风险因素 ,而A12 98C基因多态性不是URSA发病的危险因素。     

TLR4启动子遗传变异及环境交互与不明原因复发性流产易感性的关系

目的:研究TLR4启动子区二个位点rs10983755及ss77136219的A→G多态性变异及环境因素交互与南方女性不明原因复发性流产(URSA)易感性的关系。方法:将240例健康对照组与183例URSA患者外周血DNA进行TLR4-ss77136219及TLR4-rs10983755二个位点的基因分型,分成-AA/AG/GG3种,比较不同基因型在URSA组及对照组发病率的差异;同时进行环境致病因素的多中心问卷调查,建立Logistic多元回归模型,计算以上基因变异及环境因素交互与URSA发病的易感性关系。结果:TLR4-ss77136219A>G变异与URSA易感性相关,GG及GA基因型为URSA的易感基因型,且该位点变异与年龄≥30岁之间存在着基因-环境交互作用。结论:TLR4-ss77136219-GG/GA基因型与URSA发病易感性相关,而TLR4-ss77136219-AA基因型为URSA保护性基因型;且TLR4-ss77136219-GG/GA与年龄≥30岁之间存在协同作用,URSA是一种基因-环境多因素交互的复杂性疾病。     

转录因子FOXP3基因多态性与不明原因复发性自然流产的易感性研究

目的:基于不明原因复发性自然流产(URSA)的免疫耐受学说,探讨转录因子FOXP3基因多态性与URSA的易感性。方法:采用等位基因特异性扩增-聚合酶链反应(PCR-SSP)法检测FOXP3基因rs2232365A/G和rs5902434del/ATT多态性在146例URSA患者(URSA组)和112例健康体检者(对照组)中的基因型分布。结果:①rs2232365A/G的3种基因型在URSA组和对照组的分布差异具有统计学意义(P<0.05),且携带G等位基因明显增加URSA的风险(P=0.01,OR=1.61)。②rs59024343种基因型在两组的分布差异无统计学意义(χ2=4.62,P=0.10),但等位基因del缺失型频率URSA组较对照组高(χ2=4.40,P=0.036)。③单倍体型分析:G/del单体型明显增加URSA的发病风险(P=0.02,OR=1.53),而A/ATT单体型则对URSA的发病具有保护作用(P=0.02,OR=0.63)。结论:转录因子FOXP3基因启动子区rs2232365和rs5902434多态性与URSA的遗传易感性有关,携带G和del等位基因明显增加URSA的发病风险。     

原因不明复发性流产患者血中亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T和A1298C位点突变的研究

目的　探讨 5 ,10 亚甲基四氢叶酸还原酶基因C6 77T和A12 98C位点突变与原因不明复发性流产 (unexplainedrecurrentspontaneousabortion ,URSA)易感因素的相关性。 方法　采用PCR-限制性片段长度多态性方法 ,检测 14 7例原因不明复发性流产患者 (URSA组 )和 82例有正常妊娠史的妇女 (对照组 )血中亚甲基四氢叶酸还原酶基因C6 77T和A12 98C位点突变。结果　 ( 1)C6 77T的 3种基因型在URSA组和对照组总体分布存在显著性差异 (P =0 0 12 ) ,其中URSA组 :基因型CC占 33 3% ,CT占 5 3 1% ,TT占 13 6 % ,对照组 :基因型CC占 5 2 4 % ,CT占 5 1 5 % ,TT占 6 1%。两组 6 77CC基因表达差异有显著性 (P =0 0 0 5 ) ,URSA组C和T等位基因分别为 4 0 1%、5 9 9% ,两组基因分布情况比较 ,差异有显著性 (P <0 0 0 5 ) ;( 2 )A12 98C的 3种基因型在URSA组和对照组中总体分布情况比较 ,差异无显著性 ,12 98AA/AC/CC基因型和A/C等位基因频率比较 ,差异无显著性 (P >0 0 0 5 ) ;( 3)C6 77T/A12 98C连锁基因分析显示 ,8种连锁基因型中 ,URSA组 6 77CC/ 12 98AA表达频率显著降低 ,而 6 77(CT TT) / 12 98CC仅在URSA组中表达。结论　URSA与亚甲基四氢叶酸还原酶基因C6 77T和A12 98C位点突变有关。     

人CYP17基因启动子5'上游-34碱基处T→C突变与复发性流产

目的:探讨人类CYP17基因启动子5'上游-34碱基处T→C突变与复发性流产的关系,以期为预防和治疗该病易感人群提供新思路。方法:采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,针对CYP17基因启动子5'上游-34碱基处的多态性,检测96例患有原因不明复发性流产患者(病例组)和102例有生育史的健康女性(对照组),并用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染法进一步验证,且采用测序方法证实实验结果。结果:病例组和对照组CYP17基因启动子5'上游-34碱基处T和C的分布差异有统计学意义(χ2=8.188,P0.05),CYP17基因各基因型分布差异有统计学意义(χ2=10.096,P0.05)。杂合突变(T/C)基因型和纯合突变(C/C)基因型患复发性流产的危险度较野生(T/T)基因型分别提高了0.424和0.271倍。结论:人CYP17基因启动子5'上游-34碱基处T→C突变与中国东北地区人群复发性流产有关,C等位基因可能是复发性流产的遗传易感因素之一。     

Treg和Th17在原因不明性复发性流产发病中作用的探讨

目的:探讨原因不明性复发性流产(URSA)患者和正常孕妇间Treg和Th17细胞因子的表达差异。方法:选择URSA患者20例为研究组,正常早孕妇女20例为正常对照组,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测两组蜕膜组织及外周血中Foxp3、ROR-γt、IL-17A及EBi3 mRNA的表达,酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清中IL-17A及IL-35的含量。结果:URSA组蜕膜及外周血中Th17因子(ROR-γt、IL-17A)的表达均显著高于正常对照组(P=0.000),而Treg因子(Foxp3、EBi3)的表达均显著低于正常对照组(P=0.000)。两组蜕膜中各因子表达量均显著高于外周血(P<0.05)。正常孕妇组蜕膜中Foxp3、ROR-γt、EBi3 mRNA的表达与外周血中的表达显著相关(P=0.000、0.007、0.000,r=0.901、0.612、0.943);URSA组仅ROR-γt mRNA在蜕膜及外周血的表达存在相关性(P=0.012),且相关系数不佳(r=0.548<0.75)。URSA组、正常对照组血清中IL-17A含量分别为(16.120±4.155)pg/ml、(5.460±2.036)pg/ml,IL-35含量分别为(11.525±2.262)pg/ml、(31.515±3.473)pg/ml,差异显著。结论:Treg和Th17细胞因子在URSA患者和正常孕妇间存在显著差异,表明Treg和Th17细胞比例失调可能在原因不明性复发性流产的发病中起一定作用。     

HLA-G 14bp基因多态性及HLA-G mRNA表达水平与原因不明复发性流产的关系

目的:探讨人类白细胞抗原G 14bp(HLA-G 14bp)基因缺失或插入多态性与原因不明复发性流产(URSA)的相关性,了解HLA-G mRNA在URSA患者中的表达水平和意义。方法:选择URSA患者39例(URSA组)和有1次以上正常分娩史并行人工流产的妇女52例(正常对照组)为研究对象,采用聚合酶链反应(PCR)检测14bp基因多态性和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组人群绒毛组织中HLA-G mRNA的相对表达量,并进行分析。结果:URSA组14bp基因杂合子(-14bp/+14bp)的基因频率(64.1%)明显高于正常对照组(42.3%)(χ2=6.511,P=0.039);而插入纯合子(+14bp/+14bp)的基因频率(7.7%)低于正常对照组(26.9%)(χ2=5.425,P=0.020);缺失纯合子(-14bp/-14bp)的基因频率(28.2%)与正常对照组(30.8%)比较,差异无统计学意义(χ2=0.070,P=0.791)。URSA组HLA-G mRNA表达水平(-3.018±1.005)明显低于正常对照组(-1.072±0.436)(t=9.681,P=0.000)。结...     

可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)与不明原因复发性流产的相关性研究

目的:探讨可溶性血管内皮生长因子受体(sFlt-1)与原因不明复发性流产(URSA)的相关性。方法:①采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定30例原因不明复发性流产胚胎停育患者(URSA组)和30例正常早孕孕妇(对照组)血清sFlt-1水平;②采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定各组孕妇绒毛组织sFlt-1mRNA表达水平。结果:复发性流产胚胎停育组与正常早孕对照组血清sFlt-1水平分别为13796.67±11917.08ng/L和3540.67±2989.80ng/L;复发性流产胚胎停育组与正常早孕对照组绒毛组织sFlt-1mRNA表达水平两组计量资料不符合正态分布,用Mann-Whitney秩和检验比较,RSA组sFlt-1mRNA均秩为41.37,正常组sFlt-1mRNA均秩为19.63,P<0.01,组间差异非常显著性意义(P<0.01)。结论:sFlt-1表达异常与复发性流产具有相关性,其表达水平升高可能参与RSA发生的病理生理过程。     

白细胞介素-10 592 C/A基因多态性与原因不明复发性流产的关系

目的:探讨白细胞介素-10(IL-10)基因启动子区592 C/A基因多态性与复发性流产(RSA)的关系.方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)及琼脂糖凝胶电泳法检测无血缘关系的298例浙江地区汉族人IL-10启动子区592 C/A基因多态性,其中142例RSA患者(RSA组)和156例健康志愿者(正常对照组).结果:在RSA组和正常对照组中IL-10592 C/A基因中C等位基因的分布频率分别为40.1%、51.0%;A等位基因的分布频率分别为59.9%、49.0%;CC基因型频率为17.6%、23.7%;CA基因型为45.1%、54.5%;AA型为37.3%、21.2%.两组人群的基因型和等位基因频率表达比较,差异有统计学意义(P<0.05).RSA组中AA基因型血清IL-10水平4.25±1.32 pg/ml低于CC基因型血清IL-10水平8.15±2.01 pg/ml,差异有高度统计学意义(P<0.001).结论:IL-10基因启动子区592C/A基因多态性可能与RSA发病有关,A等位基因的出现可能会减少血清IL-10的分泌.     

胸腺活化调节趋化因子17和CC趋化因子受体4与不明原因复发性流产的相关性研究

目的:探讨血清中胸腺活化调节趋化因子17(CCL17)与CC趋化因子受体4(CCR4)水平与不明原因复发性流产的关系。方法:选取健康早孕女性(HEP组)、健康未孕女性(HNP组)和不明原因复发性流产孕妇(URSA组)各50例,采用ELISA法测定血清中CCL17与CCR4浓度。结果:HEP组中CCL17、CCR4水平显著高于URSA组和HNP组,且差异具有统计学意义(P0.05);URSA组中的CCL17、CCR4水平高于HNP组,但差异无统计学意义(P0.05)。结论:不明原因复发性流产患者血清中CCL17与CCR4的水平较正常妊娠妇女显著降低,提示CCL17和CCR4与不明原因复发性流产的发生具有相关性,且有望成为判断不明原因复发性流产发生的新的参考指标。     

原因不明复发性流产患者细胞毒性T淋巴细胞抗原4基因第一外显子49位点A/G基因多态性研究

目的探讨细胞毒性T淋巴细胞抗原4（CTLA-4）基因第一外显子49位点A／G基因多态性与原因不明复发性流产（URSA）发病的相关性。方法采用PCR限制性片断长度多态性方法（PCR-RFLP）,检测168例URSA患者（URSA组）和117例有正常生育史的妇女（对照组）CTLA-4基因第一外显子49位点A／G多态性,并比较等位基因G／A、基因型AA／AG／GG、表型A＋（AA＋AG）／G＋（GG＋AG）分布频率的差异。结果URSA组等位基因G的出现频率为68．4％（230／336）,对照组为59．4％（139／234）,两组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;基因型GG的出现频率URSA组为48．8％（82／168）,对照组为33．3％（39／117）,两组比较,差异也有统计学意义（P〈0．05）;URSA组基因型AG、基因表型A＋（AA＋AG）的频率分别为39．3％（66／168）、51．2％（86／168）,对照组分别为52．1％（61／117）、66．7％（78／117）,两组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论CTLA-4基因第一外显子49位点A／G多态性与URSA的发生存在相关性,并可能参与流产发生的免疫病理过程。     

原因不明复发性流产患者蜕膜CD4~+CD25~+CD127~(dim/-) Treg细胞的表达频率和功能研究

目的:探讨原因不明复发性流产(URSA)患者母胎界面免疫耐受环境的变化。方法:留取URSA患者21例(URSA组)和30例正常早孕人流妇女(对照组)蜕膜组织,制备成单个核细胞悬液,流式细胞术分析CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞的表达频率;取两组蜕膜单个核细胞悬液各5例,用免疫磁珠分离法分离出CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞,流式细胞术分析CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞内IL-10和TGF-β的表达水平;体外增殖抑制试验分别检测用抗IL-10抗体和抗TGF-β抗体处理的CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞,和未用抗体处理的CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞对自身效应T细胞增殖的抑制作用。结果:URSA组蜕膜CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞的表达频率明显低于对照组(P=0.005);URSA组蜕膜CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞内IL-10和TGF-β表达频率均较对照组明显降低(P=0.04,P=0.01);URSA组CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞对自体效应性T细胞的增殖抑制作用显著低于对照组(P0.05),且抗IL-10抗体和抗TGF-β抗体可部分阻断蜕膜CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞的免疫抑制功能(P均0.05)。结论:URSA患者蜕膜CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞不仅表达频率降低,而且免疫抑制功能也减弱,且这种免疫抑制功能的减弱主要受IL-10和TGF-β介导,揭示CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞对URSA患者蜕膜局部免疫耐受环境产生影响。     

人类白细胞抗原基因多肽性与不明原因反复流产免疫治疗妊娠结局的初步探讨

目的:探讨人类白细胞抗原(HLA)基因多态性对不明原因反复流产(URSA)免疫治疗疗效的预测价值。方法:①采用酶联免疫法(ELISA)测定URSA患者免疫治疗前、免疫治疗一疗程后封闭抗体(BA),并随访阳性者与阴性者的妊娠率。②采用52例封闭抗体阴性的URSA患者进行主动免疫治疗,随机抽取32例于免疫治疗前用SSP-PCR方法测定患者免疫治疗前及妊娠后血浆内的HLA-A、B、DR及G的表达率。结果:①免疫治疗后BA阳性者及阴性者的妊娠成功率差异无统计学意义,P>0.05。②HLA-G*010401及HLA*1502的表达频率在再次流产者中明显高于成功妊娠者,组间比较差异均有统计学意义(分别为P<0.01,P<0.05)。结论:HLA基因的多态性与免疫治疗妊娠结局似乎有更好的相关性,其中HLA-G*010401、HlA-DRB1*1502与免疫治疗后妊娠结局关系密切,有可能成为有价值的预测指标。     

Foxp3基因多态性与原因不明复发性自然流产易感性的关系

目的 探讨转录因子Foxp3基因多态性与原因不明复发性自然流产(URSA)易感性的关系.方法 分别采用PCR-限制性片段长度多态性技术(针对Foxp3基因的rs3761548、rs2294021位点)和PCR-等位基因特异性扩增技术(针对rs2232365、rs5902434位点),检测146例URSA患者(URSA组...     

Foxp3在子宫内膜、正常早孕和原因不明复发性流产患者蜕膜上的表达

目的:探讨Foxp3在增生期、分泌期内膜和正常早孕、原因不明复发性流产(URSA)患者蜕膜的表达。方法:用免疫组化法观察15例增生期子宫内膜, 12例分泌期子宫内膜, 32例正常早孕和25例URSA患者蜕膜组织Foxp3的表达与分布。结果:增生期子宫内膜无Foxp3表达,分泌期内膜和蜕膜组织均有表达;分泌期内膜Foxp3的表达显著低于正常早孕组(P<0 .01)和URSA组(P<0. 05);URSA患者蜕膜Foxp3的表达显著低于正常早孕组(P<0 .01);Foxp3表达于胞浆,正常早孕组和分泌期内膜主要表达在腺上皮细胞,URSA患者主要表达在间质细胞。结论:Foxp3在分泌期子宫内膜和蜕膜组织的表达可能在胚泡植入和早期妊娠的维持中起重要作用,其表达水平降低可能与URSA的发生有关。