丙戊酸钠联合顺铂对HO-8910细胞增殖的影响及机制

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)联合顺铂(DDP)对体外培养的人卵巢癌细胞HO-8910细胞增殖抑制和凋亡作用及机制。方法:3 mM浓度的VPA、1μg/m l的DDP及VPA联合DDP分别处理人卵巢癌细胞株HO-8910不同时间(24、48、72 h)后,采用MTT法检测细胞的增殖活性;Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡形态学改变;RT-PCR检测p53基因mRNA水平表达变化;W estern b lot法检测p53及Stat3蛋白表达变化。结果:VPA对卵巢癌HO-8910细胞株有生长抑制作用,且VPA联合DDP优于单独用药(P<0.05);Hochest 33258荧光染色结果显示,用药后细胞呈现明显的核碎裂、核固缩等典型凋亡改变,VPA联合DDP组细胞凋亡改变较单独用药组明显(P<0.05);RT-PCR检测显示VPA单独用药及联合DDP用药均能提高p53基因的mRNA表达水平;W estern b lot结果显示VPA联合DDP显著增强卵巢癌HO-8910细胞中p53蛋白表达,降低Stat3蛋白的表达,联合用药组效果更明显。结论:VPA单独用药在体外可有效杀伤卵巢癌HO-8910细胞株,与DDP联合应用具有明显的协同作用,推测其可能的作用机制是诱导p53表达水平上调及Stat3表达水平下调。     

紫杉醇诱导卵巢癌细胞凋亡及细胞周期改变的研究

目的研究紫杉醇能否诱导卵巢癌HO-8910细胞凋亡,以及凋亡诱导与细胞周期改变的关系。方法紫杉醇不同浓度、不同作用时间分别处理HO-8910细胞,在光镜和电镜下观察紫杉醇作用后细胞形态变化,流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期的改变。结果荧光染色及电镜观察到典型的凋亡细胞形态,流式细胞仪DNA含量分析,癌细胞在紫杉醇作用下,首先表现为G2/M期阻滞。但只有出现G2/M期明显阻滞后,经过一定时间才出现凋亡。结论紫杉醇能够诱导HO-8910细胞凋亡,紫杉醇诱导HO-8910细胞凋亡与细胞分裂期阻滞密切相关,这一作用机制将为临床治疗提供理论依据。     

NDRG2与卵巢癌细胞增殖及化疗耐药的相关性研究

目的研究负载人NDRG2 2种亚型(长短2种亚型分别命名为NDRG2L、NDRG2S)基因对HO-8910细胞裸鼠皮下成瘤的作用;探讨NDRG2对顺铂(DDP)诱导卵巢癌HO-8910细胞凋亡的作用。方法实验组与空载体组卵巢癌HO-8910细胞接种裸鼠皮下,观察裸鼠成瘤情况;DDP处理携带人NDRG2基因的卵巢癌细胞株HO-8910,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 NDRG2促进HO-8910细胞裸鼠皮下成瘤;NDRG2促进HO-8910细胞株抗顺铂(DDP)诱导的细胞凋亡。结论通过检测负载NDRG2的HO-8910细胞裸鼠体内荷瘤试验,进一步证实NDRG2可以明显促进卵巢癌HO-8910细胞的增殖;通过检测转染NDRG2及空载体组卵巢癌细胞在DDP作用下的细胞凋亡情况,提示NDRG2基因可能通过减少DDP诱导的细胞凋亡而诱发化疗耐药。     

薯蓣皂甙元诱导人卵巢癌细胞系HO-8910凋亡及对Survivin基因表达的影响

目的观察薯蓣皂甙元对人卵巢癌细胞系HO-8910凋亡的诱导作用,并探讨其凋亡机制与survivin基因的关系。方法通过MTT法,流式细胞仪等方法研究薯蓣皂甙元对人卵巢癌细胞系HO-8910的诱导凋亡作用,运用RT-PCR分析薯蓣皂甙元对HO-8910细胞survivin表达的影响。结果薯蓣皂甙元在浓度为12.5μg/m l至100μg/m l,作用HO-8910细胞24、48、72 h可以明显抑制HO-8910细胞增殖,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),且呈时间剂量依赖性。在浓度为25μg/m l及50μg/m l时,流式细胞仪可以检测到明显的凋亡峰,且HO-8910细胞表达Survivin基因较用药前明显下降。结论薯蓣皂甙元可以诱导HO-8910细胞凋亡,其机制可能与抑制survivin表达有关。     

白花蛇舌草对人卵巢癌细胞HO-8910PM恶性生物学行为的影响

目的 分析白花蛇舌草对人卵巢癌细胞HO-8910PM恶性生物学行为的影响。方法 人卵巢癌细胞HO-8910PM培养,分为空白对照组、白花蛇舌草25 mg/ml组、白花蛇舌草50 mg/ml组及白花蛇舌草100 mg/ml组;分别采用噻唑蓝还原法(MTT法)细胞增殖、流式细胞仪测定细胞凋亡及细胞周期、Transwell小室实验检测细胞迁移能力。结果 白花蛇舌草100 mg/ml组、50 mg/ml组、25 mg/ml组及空白对照组48 h时的OD值低于24 h时,抑制率则高于24 h时;其中白花蛇舌草100 mg/ml组24 h、48 h时的OD值低于白花蛇舌草50 mg/ml组、白花蛇舌草25 mg/ml组、空白对照组,抑制率高于白花蛇舌草50 mg/ml组、白花蛇舌草25 mg/ml组;白花蛇舌草100 mg/ml组细胞凋亡率高于白花蛇舌草50 mg/ml组、白花蛇舌草25 mg/ml组;白花蛇舌草50 mg/ml组人卵巢癌细胞HO-8910PM细胞凋亡率高于白花蛇舌草25 mg/ml组。白花蛇舌草100 mg/ml组G0/G1期百分比高于白花蛇舌草50 mg/ml组、白花蛇舌草25...     

达沙替尼联合卡铂对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨达沙替尼单独及联合卡铂应用对人卵巢癌OVCAR3、HO8910细胞生长的影响及可能的分子机制。方法:MTT法检测达沙替尼联合卡铂对人卵巢癌OVCAR3、HO8910细胞增殖的抑制率;采用流式细胞仪检测达沙替尼联合卡铂处理OVCAR3、HO8910细胞的凋亡率。Western blot检测EphA2蛋白表达变化。结果:达沙替尼单独及联合卡铂应用均可显著抑制人卵巢癌OVCAR3、HO8910细胞的增殖,其作用呈现剂量依赖性,且两药联合作用时抑制率显著增高(P<0.05),显示两药有协同作用;流式细胞术检测显示达沙替尼能使卵巢癌OVCAR3、HO8910细胞凋亡率随用药浓度增加而增加。结论:体外人卵巢癌OVCAR3、HO8 910细胞对达沙替尼联合卡铂具有药物敏感性;EphA2蛋白的表达可能是达沙替尼联合卡铂诱导卵巢癌细胞的机制。     

沉默CDK6对人卵巢癌细胞增殖和粘附的影响

目的探讨沉默周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)基因对人卵巢癌HO-8910细胞增殖和粘附能力的影响。方法设计合成5条特异性CDK6 shRNA转染HO-8910细胞,检测转染前后细胞内CDK6 mRNA的表达变化;选出抑制作用最强的CDK6-shRNA转染HO-8910细胞,用MTT法检测转染前后HO-8910细胞增殖和粘附能力的变化。结果CDK6 shRNA-608表达载体明显抑制了HO-8910细胞中CDK6基因mRNA的表达,转染48 h后,细胞的增殖能力和粘附能力明显下降,与无关序列组和空白对照组比,差异显著(P<0.05)。结论沉默CDK6基因可抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖和粘附能力。     

黄芩提取物联合顺铂对人卵巢癌细胞株SKOV-3凋亡的研究

目的:探讨黄芩提取物(Scutellaria Baicalensis)与顺铂(cisplatin,DDP)联合应用对卵巢癌细胞系SKOV-3增殖及凋亡的影响。方法:采用MTT比色法检测S.Baicalensis与DDP联合应用对SKOV-3细胞增殖的影响,吖啶橙染色观察诱导细胞凋亡情况,流式细胞仪分析细胞周期及凋亡并计算细胞平均凋亡率,Westernblot技术观察细胞内p53、ERK1/2、p-STAT3的表达。结果:300μg/mlS.Baicalensis联合5μg/ml DDP给药:①48h后可使肿瘤细胞抑制率由单独应用DDP的15.8%提高到37.3%;②吖啶橙荧光染色可见细胞呈现明显凋亡形态,其凋亡率与10μg/ml DDP组相当;③流式细胞检测结果显示,可使细胞凋亡率从15.1%提高到42.2%(P<0.05);④westernblot结果显示,p53、ERK1/2、p-STAT3表达较5μg/ml DDP组单独给药组降低(P<0.05)。结论:S.Baicalensis与DDP联合应用增强对卵巢癌细胞株SKOV-3的致凋亡效应,联合应用可达到减毒增效的效果。     

紫杉醇联合顺铂对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药性的逆转作用

目的:探讨紫杉醇联合顺铂对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药性的逆转作用。方法:取对数生长期SK-OV3/DDP细胞进行实验。实验分为顺铂组、紫杉醇组、联合组和空白对照组。顺铂组细胞给予顺铂15μg/ml;紫杉醇组细胞给予紫杉醇3.13μg/ml;联合组细胞给予顺铂15μg/ml+紫杉醇3.13μg/ml;空白对照组细胞不给予任何药品。所有细胞均培养48 h后进行实验。采用MTT法检测细胞的生长抑制率。采用流式细胞术检测各组细胞的细胞周期和凋亡率。结果:顺铂组细胞生长抑制率与空白对照组无明显增加(P<0.05),证实SKOV3/DDP对顺铂的耐药,紫杉醇组和联合组细胞生长抑制率较空白对照组和顺铂组明显增加(P﹤0.05),联合组细胞生长抑制率最高,较紫杉醇组增加更为明显(P﹤0.05)。顺铂组与空白对照组细胞多被阻滞于G1和S期,紫杉醇及联合组细胞多被阻滞于G2/M期,联合组作用较紫杉醇组更加明显(P﹤0.05)。顺铂组细胞凋亡率与空白对照组无明显差异(P>0.05),紫杉醇组和联合组细胞凋亡率较空白对照组和顺铂组明显增加(P﹤0.05),联合组细胞凋亡率最高,较紫杉醇组增加更为明显(P﹤0.05)。结论:紫杉醇联合顺铂可明显逆转卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP对顺铂的耐药性。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合顺铂对宫颈癌细胞凋亡作用的体外研究

目的:观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂(SAHA)联合顺铂(DDP)对宫颈癌SiHa细胞生长抑制和促凋亡的效果。方法:以1μmol/L SAHA、2μmol/L SAHA、4μmol/L SAHA和1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml DDP分别组成单药组和不同SA-HA+DDP联合用药组,分别应用MTT方法检测细胞增殖抑制率,应用流式细胞术检测SiHa细胞早期凋亡的情况。结果:联合用药组肿瘤细胞大量坏死明显,对细胞增殖的抑制率明显高于相应单药组(P<0.05);SAHA与中低剂量的DDP联合给药表现为协同作用,而与较高剂量的DDP联合用药表现为单纯相加作用;联合作用较二者单独用药细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。结论:SAHA对宫颈癌细胞具有抑制增殖和促进凋亡的作用,SAHA联合DDP有协同增敏作用。     

地塞米松对顺铂诱导卵巢癌细胞株凋亡的拮抗作用

目的:探讨地塞米松(DEX)对顺铂(DDP)诱导卵巢癌细胞株凋亡的影响。方法:应用MTT比色法检测细胞活性,利用免疫组织化学法检测凋亡相关基因bcl-xl和caspase3的表达。结果:0.001~1μM浓度范围内的地塞米松对顺铂诱导人卵巢癌细胞株HO-8910的凋亡有抑制作用(P<0.05),提高DDP浓度能拮抗该效应;并能上调抗凋亡蛋白bcl-xl的表达,降低caspase3的表达活性(P<0.05)。结论:顺铂治疗卵巢癌前用地塞米松进行预处理后可拮抗顺铂的抗肿瘤作用,bcl-xl抗凋亡通路参与该作用。     

重组人乳铁蛋白对不同卵巢癌细胞株增殖影响的实验研究

目的:探讨重组人乳铁蛋白(rhLF)对体外培养的3株人卵巢癌细胞的影响。方法:体外培养SKOV3、HO-8910、HO-8910PM,用MTT法评价rhLF对三者的生长抑制作用。结果:重组人乳铁蛋白对3株细胞均有抑制作用并呈剂量依赖关系,对SKOV3的抑制较另两株显著,不同浓度的rhLF对SKOV3增殖的抑制率达40.95%、62.03%、72.63%,实验对照组细胞无明显的抑制效果。结论:重组人乳铁蛋白可以有效抑制卵巢癌细胞的体外增殖,为其作为新的肿瘤生物治疗剂奠定了理论基础。     

体外培养人卵巢癌细胞株SKOV-3、SKOV-3/DDP并探讨卵巢癌顺铂耐药机制

目的:通过对人卵巢癌细胞株SKOV-3、SKOV-3/DDP体外培养,探讨卵巢癌顺铂耐药机制。方法:用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞仪测定SKOV-3、SKOV-3/DDP细胞顺铂耐药指数及细胞周期变化,并分析细胞内Bcl-2蛋白及细胞膜上Fas、Fas-L表达情况。结果:相对于SKOV-3细胞;SKOV-3/DDP细胞顺铂耐药指数约为4倍,其细胞周期主要分布于G0/G1期、S期,细胞内Bcl-2蛋白表达及细胞膜Fas、Fas-L水平明显升高。结论:细胞主要分布于潜伏期、细胞内凋亡抑制蛋白Bcl-2水平升高及细胞膜Fas、Fas-L表达增加,可能是卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV-3/DDP顺铂耐药的部分机理。     

Pin1抑制剂对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究Pin1抑制剂(Juglone)对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响,探讨Juglone的抗肿瘤作用。方法:体外培养人宫颈癌细胞SiHa,采用MTT试验观察细胞生长抑制状况,流式细胞仪检测细胞周期阻滞以及Hoechst33258检测细胞凋亡情况。结果:MTT试验表明,Juglone对宫颈癌SiHa细胞生长有明显的抑制作用,且随着作用浓度和作用时间的增加,抑制作用增强。流式细胞仪检测表明,Juglone药物(50μmol/L)培养12、24、48 h后,G2/M期细胞比例数明显增加,而S期细胞比例数却较对照组降低。Hoechst33258实验组可见凋亡细胞。结论:Juglone可能通过体外抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡途径抑制宫颈癌的发展。     

人生长激素对结肠癌细胞株细胞周期动力学的影响

目的：了解人生长激素（ｈＧＨ）对于结肠癌细胞有无促增殖和分化作用。方法：取对数生长期的人结肠癌细胞株ＬＯＶＯ,以顺铂和（或）不同浓度的ｈＧＨ体外培养,２４ｈ后以流式细胞增殖周期及细胞凋亡等指标。结果：同时加顺铂和ｈＧＨ培养细胞,癌细胞群在Ｇ２－Ｍ期发生阻滞,细胞凋亡率增加,Ｓ期细胞数率非常显著地降低;加ｈＧＨ１００ｎｇ／ｍｌ组Ｇ０－Ｇ１期九率降低,Ｓ期百分率增高。结论：ＬＯＶＯ细胞表面可能有ｈＧＨ     

中链脂肪酸复合物和亚油酸对卵巢癌多细胞球体化疗效果的影响

目的观察中链脂肪酸复合物（MCFA）和亚油酸（LA）对卵巢癌多细胞球体（MCS）化疗效果的影响。方法分别用含有MCFA和LA的培养液培养卵巢癌MCS，观察在化疗药物顺铂（DDP）作用下，MCS细胞抑制率和细胞周期各时相细胞数量的变化情况。结果当DDP浓度为10μmol/L时，MCFA组（51．60％）和LA组（42．97％）的细胞抑制率均明显高于对照组（30．27％）（P〈0．01），其中MCFA组抑制率也明显高于LA组（P〈0．05）。当两种脂肪酸分别与DDP（10μmol/L）合用时，MCFA＋DDP组和LA＋DDP组处于GO／GI期的细胞数量均明显高于其他组（P〈0．05），且MCFA＋DDP组也明显高于LA＋DDP组[（70．2±5．3）％伪．（68．3±4．5）％，P〈0．05]。结论MCFA和LA都可增强DDP的化疗效果，其中MCFA的作用更强。MCFA和LA的协同作用可能与其阻滞卵巢癌MCS细胞的增殖和抑制癌细胞生长有关。     

大鼠骨髓间充质干细胞体外生长增殖特点的实验研究

目的 了解应用全骨髓贴壁法分离的大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)的生长、增殖特点,以及接种密度、培养时间对细胞增殖的影响,为预防和治疗机体退行性疾病等提供多潜能的种子细胞.方法 通过全骨髓贴壁法分离SD大鼠BMSCs,在体外条件下培养,应用倒置显微镜观察细胞形态学特征及流式细胞仪鉴定、检测大鼠BMSCs表面标志抗原,并通过分析对接种于96孔板不同接种密度(2×103、5×103、1×104个细胞/ml)连续培养10 d细胞生长曲线的特点,研究接种密度和培养时间对BMSCs生长、增殖的影响.结果 流式细胞仪分析CD29细胞阳性率为97.68%(7607/7788),CD34、CD45细胞阳性率分别为7.93%(661/8340)、2.76%(215/7788),符合BMSCs表面标记物表达特征.通过换液及消化传代,3代以上的BMSCs较为均一纯化,呈典型的旋涡或放射状生长,约传代至7～10代时出现细胞衰老并衰老细胞逐渐增多;中等密度(5×103个细胞/ml)接种细胞的生长曲线呈较典型的S形曲线.第1、2天为潜伏期;第3～5天为对数生长期;第6天细胞数目进入平台期;第8～10天细胞数量稍有下降.结论 全骨髓贴壁法是获得BMSCs较为简便有效的方法,且中等量接种密度更有利于细胞增殖,可获得更多的种子细胞.