多聚酶链式反应快速检测肺活检组织中的结核杆菌DNA

利用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）对３１例病理可疑诊断为结核的肺活检切片进行结核菌ＮＤＡ的检测，并与抗酸染色进行了比较。用蛋白酶Ｋ和冻融裂解法快提切片中ＤＮＡ。３１例中有２４例ＰＣＲ阳性，１４例抗酸染色阳性；其中１７例抗酸染色阴性经ＰＣＲ检出１２例阳性，１４例抗酸染色阳性ＰＣＲ检出１２例阳性。ＰＣＲ检测阳性率明显高于抗酸染色（Ｐ＜０．０１）。说明ＰＣＲ用于肺活检组织诊断结核是一快速、敏感性较高、特异性较强的技术。此外，对影响ＰＣＲ结果的因素进行了分析。     

石蜡包埋组织中结核菌DNA与抗酸菌L型检测意义的探讨

３５例病理及临床证实结核和１０例正常胎儿石蜡包埋组织在进行了ＩＫ染色和ＰＣＲ检测发现：结核组３５例，ＩＫ染色：抗酸菌Ｌ型２８例（８０．８％），抗酸菌杆菌型２例，总阳性检出率为８５．７％（３０／３５）；ＰＣＲ检测；ＴＢ－ＤＮＡ阳性２９例（８５．７％）。两种方法的阳性检出率无显著性差异（Ｐ〉０．０５）。１０例正常胎儿对照两法检测均无１例阳性，提示：两法对石蜡包埋组织中的抗酸菌Ｌ型及杆菌型检测，都具有较     

PCR检测技术在结核病诊断中的价值

用ＰＣＲ技术对１７５例临床可疑结核病，但常规培养或抗酸染色阴性的病理标本中结核菌ＤＮＡ进行了检测。结果发现有２２．３％（３９／１７５）的样本结核菌ＤＮＡ阳性。结果提示，ＰＣＲ技术在检测结核菌ＤＮＡ中具有简便、快速和灵敏的特点，其阳性结果说明被测样品中有结核菌的存在，对结核病的确诊有重要辅助意义。     

用聚合酶链反应和地高辛系统检测t（14;18）

探索聚合酶链反应（ＰＣＲ）和地高辛系统检测ｔ（１４；１８）的特异性和敏感性，方法用该法检测了不同来源ＤＮＡ标本中的ｔ（１４；１８）。结果３株阳性对照细胞系，１４例滤泡性非何灰金淋巴瘤（ＦＮＨＬ）中１３例，４例弥漫性非何杰金淋巴瘤（ＤＮＨＬ）中２例的ＤＮＡ内检出ｂｃｌ－２ＪＨ基因；阴性对照细胞系，正常人和其他肿瘤ＤＮＡ中均未检出ｔ（１４；１８），ＤＮＡ序列测定结果亦证实检出的阳性片段确实为ｂｃｌ－２     

三种方法在检测Leber‘s视神经萎缩mt—DNA突变的比较

比较ＭＳＰ－ＰＣＲ、ＳＳＣＰ、ＲＦＬＰ在检测Ｌｅｒｂｅｒ’ｓ视神经萎缩（ＬＨＯＮ）线粒体ＤＮＡ（ｍｔ－ＤＮＡ）１１７７８突变中的优缺点。７７例受试者，分别用ＭＳＰ－ＰＣＲ、ＳＳＣＰ、ＲＦＬＰ法检测ｍｔ－ＤＮＡ１１７７８突变。被ＭＳＰ－ＰＣＲ检出的４８例阳性者同时也被ＳＳＣＰ检出，另外ＳＳＣＰ还检出６例杂合性突变；ＭＳＰ－ＰＣＲ和ＳＳＣＰ检测阳性的９例患者，再用ＲＦＬＰ（ＭａｅⅢ）检测也得出一致结果     

聚合酶链反应检测幽门螺杆菌

本文应用与幽门螺杆菌染色体ＤＮＡ高保守区序列互补的引物对，建立聚合链反应检测技术，对２８种非ＨＰ菌及１６株ＨＰ进行检测，特异性１００％，敏感性达到能检出１ｐｇ染色体ＤＮＡ（相当于１００个菌细胞）水平，对３６例接受胃镜检查病人的胃活检组织进行检测，ＨＰ阳性率４７．２％（１７／３６），而对照方法中细菌培养ＨＰ阳性率３３．３％（１２／３６），快速尿素酶试验ＨＰ阳性４１．６％（１５／３６）。结果提示ＰＣＲ     

PCR技术在儿科支原体肺炎诊断中的应用

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和间接血凝法（ＩＨＡ）对６５３例肺炎患儿及２００例健康婴幼儿进行下呼吸道分泌物ＭＰ ＤＮＡ及血清抗ＭＰ－ＩｇＭ检测。结果表明：ＭＰ ＤＮＡ阳性１０７例，阳性率１６．４％；抗ＭＰ－ＩｇＭ阳性１２３例，阳性率１８．８％两者同时阳性２３例，占阳性病例的１０％。ＭＰ阳性病例数共２０７例，占肺炎病例数的３１．７％。本实验结果提示应用ＰＣＲ技术对小儿ＭＰ肺炎的早期诊断具有特异、快速、     

常规胃镜清洗消毒方法对HP的清除效果

为了解目前常规清洗消毒胃镜方法─—三步法对幽门螺杆菌（ＨＰ）清除效果,采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）及ＨＰ培养法对４２例患者胃镜检查完,清洗消毒前后的胃镜活检通道冲洗液进行了检测,结果３１例（７３．８％）为ＨＰ感染者,ＰＣＲ检测清洗消毒前冲洗液有２６份（８３．９％）为阳性,清洗消毒后仍有９份（３４．６％）为阳性;而培养在清洗消毒前有１２份（３８．７％）为阳性,清洗消毒后均为阴性。另有２例患者胃窦粘膜组织Ｗａｒｔｈｉｎ－Ｓｌａｒｒｙ（Ｗ．Ｓ）染色ＨＰ为阴性者,胃镜检查后,其清洗消毒前冲洗液ＰＣＲ检测为阳性,清洗消毒后均为阴性。提示：目前胃镜清洗消毒方法对ＨＰ的灭活是有效的,但仍有ＨＰ的菌体或ＤＮＡ片段残留,还应该加强对胃镜的冲洗。     

细菌DNA的聚合酶链反应扩增及反相杂交初步分型

目的探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）加反相杂交技术在细菌ＤＮＡ检测中的应用。方法以１６ＳｒＲＮＡ基因为靶序列，设计引物及寡核苷酸探针，采用ＰＣＲ法加反相杂交检测标准菌株及临床标本的细菌ＤＮＡ。结果对２４株不同标准菌株进行ＰＣＲ扩增，均出现３７１ｂｐ长度的ＤＮＡ片段，敏感性试验可检测出１０－１２ｇ的细菌ＤＮＡ，与人类基因组ＤＮＡ、真菌及病毒无交叉反应；２２例血培养阳性标本及４例脑脊液培养阳性标本均扩增出３７１ｂｐ长度ＤＮＡ条带，反相杂交法区分革兰阳性／阴性细菌与培养结果相符。结论１６ＳｒＲＮＡ基因ＰＣＲ加反相杂交技术检测细菌ＤＮＡ，具有特异、敏感、快速、准确的特点，为细菌感染的临床诊断提供了科学的依据     

石蜡包埋尖锐疣组织中人类乳头瘤病毒（HPV）的PCR技术检测

以ＰＣＲ技术检测石蜡包埋尖锐湿疣组织标本中ＨＰＶ－ＤＮＡ。实验结果：３０例具有典型病理特征标本和１４例病理特征不典型的标本均发现ＨＰＶ－ＤＮＡ６型中或／和１１型；２例诊断为假性湿疣的标本有１例检出ＨＰＶ６型ＤＮＡ；３例生殖道鳞癌有２例检出１６例ＨＰＶ－ＤＮＡ；２例正常组织未检出ＨＰＶ－ＤＮＡ。这一结果表明用石蜡包埋标本在进行ＰＣＲ研究中有特别用途，ＰＣＲ可对尖锐湿疣的诊断提供直接，快速和准确的依据     

乙型肝炎病毒感染性病人及携带者的HBV DNA诊断研究

核酸分子杂交技术，能直接从血清中检出１０－１Ｐｇ的ＨＢＶＤＮＡ，最近发展起来的聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术能检出１０－３Ｐｇ的ＨＢＶＤＮＡ。本文所介绍的ＰＣＲ与染色技术的结合于１９９７年８月检测４１６人ＨＢＶＤＮＡ，并与溴化乙锭（ＥＢ）染色进行对比分...     

双带PCR提高检测血清HBV-DNA质量的意义

应用双带ＰＣＲ方法（ＤＢ－ＰＣＲ）检测了２４０份血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ，该方法能直接观察和判断假阴性和假阳性结果，提高了检测的准确性。与国内其它ＰＣＲ试剂比较，符合率分别为９４．０５％（ＤＢ－ＰＣＲ／华美产品），和９５．２８％（ＤＢ－ＰＣＲ／长城产品）。ＨＢｅＡｇ阳性的血清，经ＤＢ－ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者达９３．５５％（２９／３１）。ＰＣＲ产物Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ后能与ＨＢＶ－ＤＮＡ探针杂交，证明了该方法的特异性。     

微孔板杂交法检测结核分枝杆菌的初步临床应用

目的：对ＰＣＲ－微孔板杂交法的临床应用进行评价。方法：取临床标本２６８例分别进行抗酸染色、培养、ＰＣＲ扩增产物电泳、ＰＣＲ微孔板杂交四种方法的比较。结果：在２１６份临床高度怀疑有结核分枝杆菌感染的患者标本中,ＰＣＲ－微孔板杂交法检测阳阳性为９８例,其检出率高于ＰＣＲ－电泳法（９１／２１８）、培养法（８１／２１８）和抗酸染色法（５６／２１８）,５０份临床证实无结核分枝杆菌感染的病人标本,四种方法均未     

FQ-PCR检测肠黏膜结核杆菌DNA对肠结核的诊断价值

目的建立一种实时定量检测结核分枝杆菌（MTB）插入序列IS6110 DNA的方法,探讨其在肠结核（ITB）诊断中的价值。方法采用FQ-PCR技术对36例内镜活检ITB标本（30例石蜡、6例新鲜组织）、36例Crohn’s disease标本（16例石蜡手术标本,15例石蜡内镜活检标本,5例新鲜内镜活检组织）及34例阴性对照标本进行IS6110 DNA的实时定量检测,并比较上述标本抗酸染色结果。结果13例ITB抗酸染色阳性,CD无1例阳性,抗酸染色对ITB诊断的敏感性36.11%。MTBIS6110DNA检测结果：23例ITB（63.89%）阳性,6例CD（16.67%）阳性,另有1例阳性为升结肠腺癌癌旁正常组织。MTBIS6110 DNA在ITB与CD中的阳性率差异有统计学意义（P〈0.05）。FQ-PCR对ITB诊断的敏感性为63.89%,特异性83.33%。FQ-PCR敏感性显著高于抗酸染色（P〈0.05）。MTBIS6110 DNA阳性的ITB标本其定量结果范围为2.44×10^-4-2.26×10^1拷贝/细胞。结论FQ-PCR检测MTBIS6110 DNA是一种快速有效的ITB诊断方法,其定量范围广,检测灵敏度高。对活检组织少、病理改变不典型、抗酸染色阴性组织的诊断和鉴别诊断尤有意义。     

PCR检测血清中HBVDNA

ＰＣＲ检测血清中ＨＢＶＤＮＡ罗仁福，陈秀珍（内江市二医院，四川内江６４１００３）笔者建立的ＰＣＲ方法可检出血清中ｌｆｇＨＢＶＤＮＡ，应用这一新技术检测了一批慢性肝炎及肝癌病人血清中的ＨＢＶＤＮＡ，并观察了其临床意义。１材料和方法１．１１２例临床诊断为...     

PCR扩增血液中结核杆菌DNA的研究

ＰＣＲ扩增血液中结核杆菌ＤＮＡ的研究东台市人民医院（２２４２００）尹洪波，刘国栋作者应用ＰＣＲ技术检测３８例血液中的结核杆菌，并进行临床分析。材料和方法一、研究对象均排除ＨＩＶ和肺外结核病３８例，其中１６例活动型肺结核分为Ａ组１２例，为痰涂片阳性未治...     

TthDNA聚合酶在丙型肝炎病毒RNA检测中的应用

用ＴｔｈＤＮＡ聚合酶行逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增丙型肝炎病毒（ＨＶＣ）５’端非编码序列，对２６２例肝炎患者血清进行ＨＣＶＲＮＡ测定，结果ＨＣＶＲＮＡ阳性者５３例，阳性率２０．２％。凡阳性者用酶联免疫吸附法测其抗ＨＣＶＩｇＧ，其中３０例测到抗ＨＣＶ，阳性重叠率５６％（３０／５３）；ＨＣＶＲＮＡ阳性中的１５例同时用成髓细胞瘤病毒酶行传统逆转录。套式聚合酶链反应检测对照，１４例阳性，符合率达９３．３％（１４／１５）。ＴｔｈＤＮＡ聚合酶用于ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ５’端非编码序列片段具有敏感性高、特异性强、稳定性好的优点。     

常规胃镜清洗消毒方法对HP的清除效果

为了解目前常规清洗消毒胃镜方法－－三步法对幽门螺杆杆菌（ＨＰ）清除效果,采用聚合酶锭反应（ＰＣＲ）及ＨＰ增减法对４２例患者胃镜检查完,清洗消毒前后在胃镜活检通道冲洗液进行了检测,结果３１例（７３．８％）为ＨＰ感染者,ＰＣＲ检查清洗消毒前冲洗液有２６份（８３．９％）为阳性,清洗消毒后仍有９份（３４．６％）为阳性;而增减清洗消毒前有１２份（３８．７％）为阳性清洗消毒后均为阴性。另有２例２胃窦膜组织Ｗａ     

p16基因异常与慢性粒细胞白血病关系的研究

我们采用半定量多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）和ＰＣＲ单链构象多态性（ＳＳＣＰ）检测了４８例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）患者ｐ１６基因纯合缺失和点突变，以期从分子生物学水平探讨ｐ１６基因分子生物学异常与ＣＭＬ的关系。对象和方法１　对象　１２名正常人，男性７名，女性５名，平均年龄３１．６岁。４８例ＣＭＬ患者，其中慢性期２０例，急粒变１６例，急淋变１２例（所有病例原始淋巴细胞＋幼稚淋巴细胞≥０．２０，组织化学染色都表现为糖原染色过碘酸反应强阳性，ＰＯＸ阴性），男性３３例，女性１５例，平均年龄３３．６岁。Ｋ…     

聚合酶链反应-微孔板杂交技术用于结核分枝杆菌的检测

目的建立结核分枝杆菌的ＰＣＲ酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）方法，使ＰＣＲ结果判定更加客观。方法我们使用玻璃粉吸附提纯模板ＤＮＡ，将ＰＣＲ引物５′端标记生物素，用ＰＣＲ产物与微孔板中预先包被的克隆靶基因杂交，然后用酶标链霉亲和素与杂交体中的生物素结合，最后用酶底物与所标记酶进行显色反应，通过测定其吸光度来判断结果。结果所建立的ＰＣＲＥＬＩＳＡ检测法可提高检测的灵敏度和特异性。对５０份来自结核病人高度怀疑有结核分枝杆菌的标本检测表明，ＰＣＲＥＬＩＳＡ检出２２份阳性，比抗酸染色法（７／５０）、培养法（１３／５０）和ＰＣＲ电泳法（１８／５０）检出率高，而２０份证实无结核分枝杆菌的标本，几种方法检查均为阴性。结论该法可敏感、特异和客观地检测临床标本中的结核分枝杆菌。