大鼠血清碱性磷酸酶活性,km值及其同工酶在四氯化碳中毒性肝损伤时的变化(摘要)

实验大鼠分为两组,每组各16只,病理组用CCI_4注射造成肝损伤,对照组不注射为正常大鼠,两组大鼠血清ALP活性、Km值及ALP同工酶进行了测定,结果发现:病理组ALP活性为324±90.4单位/升,Km为0.71±0.17mM,对照组ALP活性为228±49.8单位/升,Km为1.2±0.25mM,表明病理组ALP活性比对照组增高非常明显(P<0.001),而Km测减小非常显著(P<0.001)、ALP同工酶测定结果表明:正常大鼠血清ALP同工酶出现一条带位于β—球蛋白部位,根据大鼠肝,肠,骨等组织的ALP同工酶谱,认为正常大鼠血清ALP同工酶主要来自肠和骨,病理组血清ALP同工酶出现两条带,一条位于α2-球蛋白     

妊高征孕妇血清及新生儿脐血中ALP及其同工酶测定的观察

目的与方法对妊高征孕妇血清及新生儿脐血中碱性磷酸酶(ALP)及其同工酶进行检测.结果与结论 ALP总活力,胎盘型ALP同工酶随孕周的增加而增高,37～40w达高峰.重度妊高征时ALP总活力明显升高,而胎盘型同工酶明显降低,两者呈分离现象,重度妊高征时分离显著P<0.01.ALP及其胎盘型同工酶不仅可反映胎盘功能,同时也可以判断妊高征的严重度.而在新生儿脐血中无表达.     

碱性磷酸酶同工酶表达的基因基础

碱性磷酸酶(ALP)广泛分布于细菌和动植物界,在人体以肝、骨、肾、胎盘和小肠的活性最高,肺和嗜中性白细胞也有活性。ALP主要分布在细胞的质膜,在一些疾病时可释入血中,使血清ALP增高。正常组织表达的ALP同工酶ALP是一种糖蛋白。根据酶学和免疫学性质可将正常组织表达的ALP同工酶分为三类:①肝型ALP,包括肝、骨、肾、肺等的ALP.许多酶学性质是相同的,如对热失活敏感,易受L-同型精氨酸(L-HArg)和左     

同工酶在发育及肿瘤发生过程中的表达及其调控

同工酶的研究已有20多年的历史,发展非常迅速。目前已发现百多种同工酶,同工酶的研究遍及生物学各个领域。在肿瘤同工酶方面也有不少研究。但在同工酶基因调控方面的工作则不多。     

胎龄和CV标本纯度对孕早期产前诊断低磷酸酶症的价值

严重婴儿型低磷酸酶症是一种常染色体隐性遗传病,具有不同程度的骨畸形,这种畸形在新生儿期常是致命的。此病严重型伴有非常低的肝/骨/肾(LBK)碱性磷酸酶(ALP)同工酶水平,但肠和胎盘同工酶水平正常。过去对先天性低磷酸酶症的产前诊断是靠超声扫描和测定羊水ALP同工酶水平。曾报告首例受累胎儿的诊断是用绒毛标本和特异单克隆抗体测定ALP。在17周用超声图标准证实其诊断。但单克隆抗体亲和力低,需要采用扩增系统。故本文作者对此例受累胎儿是通过孕早期绒毛取样(CVS),测定     

新工艺制备纳米钛酸钙涂层及生物相容性评价

目的 :研究新型纳米钛酸钙(CaTiO_3)涂层钛合金材料的生物相容性。方法 :将钛板、羟基磷灰石涂层钛板和纳米CaTiO_3涂层钛板分为钛板组、涂层组、纳米组(各60例)。通过扫描电镜、X射线衍射对3组材料进行分析。将各组材料与成骨细胞(MC3T3-E1)共培养,通过免疫荧光染色、MTT法、碱性磷酸酶(ALP)含量测定评估材料表面细胞的存活、增殖及分化情况;通过电镜检测材料表面成骨细胞的钙化。结果 :涂层组、纳米组比钛板组有更高的活细胞数量、MTT值、ALP含量,有更好的细胞结构形态和钙化,而涂层组、纳米组无差异。结论 :该新型纳米CaTiO_3涂层材料有良好的生物相容性,为其将来临床植入体内提供了一定的实验依据。     

骨化三醇通过PI3K/AKT促进BMP9诱导的间充质干细胞成骨分化作用

目的研究骨化三醇(calcitriol)对骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化作用的影响。方法实验分为4组:对照组、calcitriol组、BMP9组、calcitriol联合BMP9组。通过PNPP法检测各组碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性;通过RT-PCR和Western blotting方法检测成骨分化标记物骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达变化,同时检测AKT和β-catenin磷酸化水平以及和ALP活性水平;茜素红染色检测矿化结节形成。此外,用原子力显微镜测试MSCs成骨分化过程中细胞形态及细胞弹性模量改变。结果 calcitriol单独作用对MSCs成骨分化过程无明显作用,但是calcitriol可以增强BMP9诱导MSCs的ALP、OCN、OPN表达和矿化结节形成。同时,calcitriol和BMP9作用均不影响细胞弹性模量数值。BMP9和calcitriol联合作用可以增强AKT和β-catenin磷酸化水平,而PI3K抑制剂应用以后可以抑制这种磷酸化变化,并抑制联合作用后的ALP活性。calcitriol作用以后不影响BMP9诱导的BMP/Smad信号通路。结论 calcitriol通过激活PI3K/AKT信号通路从而协同BMP9促进MSCs成骨分化。研究不同调控因子对MSCs成骨分化的作用及机制对于骨质疏松等疾病的治疗和骨组织工程的发展有一定意义。     

表面粗糙度对种植体钛片表面成骨细胞的影响

目的探讨种植体表面粗糙度对成骨细胞增殖、分化、功能及基因表达的影响。方法种植体钛片分为3组,表面粗糙度(Ra)分别为0.175μm(1组)、1.00μm(2组)及1.689μm(3组)。将人成骨肉瘤细胞系MG63细胞接种于3组材料表面,利用激光共聚焦显微镜观察细胞在各组钛材料表面黏附铺展形态,采用MTY法、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素活性检测评价成骨细胞在钛片表面黏附、增殖和分化水平,通过RT- PCR检测细胞内Cbfa1mRNA表达。结果Mg63在各组材料表面均生长良好,4h时各组细胞均附着,第2组细胞可见突起,24h时各组细胞均伸展,形态不规则。各组细胞在1、5、10d,第2组ALP及骨钙素(OC)活性均逐渐增高,在15d有所下降,在5、10d,ALP及OC活性显著高于其他两组(P<0.05)。第2组的Cbfal mRNA表达高于其他两组(P<0.01)。结论种植体表面适度粗化能够促进成骨细胞的功能,1.00μm是比较适宜的表面粗糙度。     

成骨细胞培养及冻存复苏后生物学特性比较

目的 :了解冻存复苏过程对保持成骨细胞生物学特性的影响。方法 :通过细胞组化、免疫组化以及图像分析等方法对冻存和非冻存 (新鲜制备 )的细胞在其形态及功能方面进行了比较。结果 :两组ALP染色、茜素红S法、V G法、免疫组化法的结果均差异无显著性 (P >0 0 5 )。但细胞存活率与冻存时间密切相关 ;随冻存时间延长 ,其存活率下降。结论 :两组细胞保持了某些相似的生物学行为 ,如细胞形态、生长过程、基质分泌等。冻存时间对保存的成骨细胞存活率有影响。     

阿霉素对兔肾ALP和Ca2+-ATP酶活性及NOS表达的影响

目的探讨阿霉素对肾损伤的毒性机制.方法用治疗剂量阿霉素静脉注射,建立兔阿霉素肾损伤模型作为模型组,静脉注射生理盐水作为对照组.取肾组织进行HE梁色;采用Gomori法、Padykula及Herman法和NADPH-d酶组织化学染色;进行图像发析,数据进行统计学检验;观察和比较两组动物肾组织中ALP、Ca2+-ATP酶和NOS酶的变化.结果病理学检查表明模型组肾组织受损伤,酶组织化学染色和图像分析显示ALP、Ca2+-ATP酶含量下降,而NOS表达上调,模型组与对照组相比,P＜0.01,具有显著性差异.结论治疗剂量阿霉素能够降低肾组织中ALP、Ca2+-ATP酶的活性和上调NOS的表达,可能是导致肾损伤的重要原因.     

siRNA沉默HLA-A2基因表达对人脐带间充质干细胞诱导成骨的影响

目的探讨RNAi技术下调人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)HLA-A2基因表达后,对HLA-A2基因诱导成骨的影响。方法利用HLA-A2靶向小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染hUCMSCs,实验组为转染的细胞,对照组为未转染细胞。免疫细胞化学染色、Western Blot法检测两组细胞HLA-A2的表达;用诱导剂(0.1μmol/L地塞米松、10mmol/Lβ-甘油磷酸钠、50mg/L维生素C)行成骨诱导分化,茜素红矿化结节染色计数;碱性磷酸酶(ALP)染色以及比色法检测ALP活性。结果免疫细胞化学染色显示,实验组HLA-A2表达为弱阳性,对照组HLA-A2表达为阳性;Western Blot法检测HLA-A2蛋白的表达量对照组明显高于实验组。茜素红矿化结节染色显示:两组细胞均出现红色结节的阳性染色,但无差异(P0.05);两组ALP染色细胞胞浆均呈蓝色阳性反应,ALP活性检测结果显示两组无差异(P0.05)。结论应用RNAi技术下调HLA-A2基因表达后,不影响人脐带间充质干细胞的成骨诱导。     

清热解毒与养阴增液法对内毒素脱毒相关分子HDL和ALP影响的研究

目的：探讨清热解毒和养阴增液法对内毒素脱毒相关分子高密度脂蛋白（HDL）、碱性磷酸酶（ALP）的影响。 方法： 给家兔耳缘静脉注射大肠杆菌内毒素复制内毒素血症模型，以清热解毒、养阴增液两种温病治法制剂进行治疗，观察各组动物血清白细胞介素1（IL-1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、HDL、ALP水平变化及肝、肾组织中ALP mRNA的表达水平。 结果： 清热解毒组血清IL-1、TNF-α水平显著低于模型组，伴随血清ALP活性及肝肾组织中ALP mRNA表达明显强于模型组；养阴增液组血清IL-1、TNF-α水平也明显低于模型组，而伴随的是血浆HDL水平明显高于模型组。 结论： 清热解毒和养阴增液两种温病治法制剂均能拮抗内毒素所致IL-1、TNF-α等炎性细胞因子的过度释放，但两者对内毒素脱毒相关分子的影响有别，前者可能主要通过促进ALP活性升高和上调肝肾组织ALP mRNA的表达而起作用，后者可能与提高血浆HDL水平有关。     

血清TBA、ALP联合测定在妊娠期肝内胆汁淤积症诊断中的意义

探讨血清TBA、ALP联合测定在妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）诊断中的临床应用价值,对60例正常孕妇及47例ICP孕妇,分别使用全自动生化分析仪和R IA法检测其血清TBA、ALP、CG含量。结果表明,ICP孕妇组血清TBA、ALP水平显著高于正常孕妇组,且与CG检测结果相关性较好（P〈0.05）。妊娠期妇女TBA、LAP水平是反映ICP的良好指标,与血清CG具有较好的相关性,并且其生化自动化检测方法相对于放射免疫测定CG更为简单、快捷,有利于临床实验室的广泛应用。     

血清PSA、ALP检测和核素骨显像诊断前列腺癌早期骨转移

目的:探讨早期明确前列腺癌骨转移的有效方法。方法:选择45例前列腺增生患者作为对照组,用化学发光免疫分析法检测PSA;酶法检测单脂磷酸水解酶(ALP即AKP);用SPECT对38例前列腺癌患者进行全身核素骨显像的同时,测定血清PSA、ALP。结果:有骨转移的Pca患者的血清PSA和ALP浓度明显高于无骨转移及前列腺增生(BHP)患者;骨显像阳性组和骨显像阴性组分别与前列腺增生组比较,PSA有极显著性意义(P<0. 001);ALP测定阳性组与增生组比较有显著性意义(P<0. 001),阴性组与增生组比较无显著性意义(P>0. 05)。结论:同时测定血清PSA和ALP有助于明确前列腺癌患者核素骨显像异常表现的病变性质。     

纤维蛋白凝胶复合bFGF对胚胎间充质干细胞增殖和ALP活性的影响

目的探讨大鼠胚胎间充质干细胞在纤维蛋白凝胶(FG)与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)复合培养后对细胞增殖和碱性磷酸酶(ALP)活性的作用,为将FG应用于组织工程奠定基础。方法实验分为4组:FG组,bFGF组,FG+bFGF组和对照组(采用无凝胶正常培养基培养)。无菌条件下分离培养大鼠胎肢细胞,采用组织块消化法获取胚胎间充质干细胞,取传至第3代细胞接种于以上培养基中,在不同时间点通过倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,荧光分光光度计测定细胞增殖指数,酶标仪分析细胞ALP活性,RTPCR检测ALP mRNA表达。结果 FG+bFGF组细胞培养至14d,细胞具有较长突起且连接成网,而对照组细胞呈纺锤形或立方形。各组细胞荧光强度随培养时间的延长逐渐增强,FG+bFGF组在21d时达到最高。FG+bFGF组培养7d、14d、21d ALP活性和ALP mRNA表达均较FG组或bFGF培养组高(0.05)。结论纤维蛋白凝胶复合bFGF可促进大鼠胚胎间充质干细胞增殖,明显增强碱性磷酸酶活性。     

益骨胶囊含药血清在共育体系中对大鼠成骨细胞增殖、ALP 活性及IL-11 mRNA表达的影响

目的：观察益骨胶囊含药血清在成骨-破骨细胞共育体系中对SD大鼠成骨细胞(OB)增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性及白细胞介素-11(IL- 11)mRNA表达的影响。方法：(1)取1d龄SD大鼠颅骨分离培养OB，取5 d龄 SD大鼠四肢股骨、胫骨分离培养破骨细胞(OC)，建立细胞上清相通但细胞间不相互混杂的平 面式成骨- 破骨细胞共育体系，实验分为两组(含药血清组和对照组)。 (2) MTT法检测OB增殖，氨基安替吡啉测酚法测定ALP活性，FQ-PCR法测定IL-11 mRNA相对表达量。结果：含药血清组中OB的A值、ALP活性、IL-11/β-actin比值均高于对照组(P<0.05) 。结论：益骨胶囊含药血清在共育体系中可促进OB增殖、增强OB ALP活 性，提高IL-11 mRNA的表达。     

低渗刺激对成骨样细胞MG63功能的影响

目的本试验拟通过研究低渗透压的静牵张作用,对成骨样细胞MG63的增殖能力、碱性磷酸酶活性以及[Ca2 ]i的影响,探讨该应力形式下成骨样细胞MG63的力学响应特征。方法采用人成骨肉瘤来源的成骨样细胞MG63作为细胞源进行细胞培养传代。用不同渗透压的低渗透液,对成骨样细胞MG63分别进行2 h、4 h、8h、12 h和24 h持续牵张作用后,用免疫组化法检测ALP表达的情况,用ALP试剂盒检测ALP活性的变化,用钙试剂盒检测[Ca2 ]i含量波动情况。结果成骨样细胞MG63的ALP免疫细胞化学染色为阳性。随着作用时间的延长,成骨样细胞MG63在277 mOsm和240 mOsm低渗透液的持续性膨胀作用下,其细胞的[Ca2 ]i、ALP活性缓慢增高,但240 mOsm组ALP活性始终低于对照组(p<0.01);而细胞在163 mOsm低渗液作用下,8 h时出现[Ca2 ]i急剧升高(11.383±0.111),ALP活性(0.326±0.002)明显高于其对照组(p<0.01)。结论结果提示不同水平的低渗膨胀对MG63的增殖分化、ALP活性以及Ca2 -ATPase都有一定的影响作用,且Ca2 内流与ALP活性之间存在一定的相关性。低渗膨胀法作为一种应力形式有一定的实验意义。     

差速贴壁法分离培养脂肪源间充质干细胞

目的:探讨差速贴壁法从大鼠腹股沟脂肪垫分离纯化脂肪源间充质干细胞(adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,ADMSCs)的可行性。方法:采用差速贴壁培养法分离ADMSCs,并与普通培养法得到的ADMSCs进行表面分子CD44阳性率对比。在第2代ADMSCs中加入条件培养基进行诱导,根据条件培养基的不同分成3组:①成骨诱导组:加入成骨培养基;②成脂诱导组:加入成脂培养基;③对照组:仅加入基础培养基。成骨诱导组和对照组进行碱性磷酸酶(ALP)检测,成脂诱导组和对照组进行油红O染色检测。结果:差速贴壁培养法获得CD44阳性率更高的ADMSCs。成骨诱导组的ALP大大高于对照组,成脂诱导组油红O染色阳性,对照组油红O染色均为阴性。结论:差速贴壁培养法从大鼠腹股沟脂肪垫中分离得到高纯度ADMSCs。     

亚精胺促进雌激素缺乏小鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化并抑制其成脂分化

目的研究亚精胺(SPD)对骨髓间充质干细胞(BMMSC)分化能力的影响。方法雌性C57/BL6J小鼠分为假手术(Sham)组、卵巢摘除术(OVX)组。术后2月,分离、培养OVX组和Sham组C57BL/6J小鼠的BMMSC。经Western blot法检测对比2组BMMSC的碱性磷酸酶(ALP)、runt相关转录因子2(Runx2)以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、脂蛋白脂解酶(LPL)的蛋白水平,茜素红染色对比2组BMMSC的矿化程度差异,油红O染色对比2组BMMSC脂滴数量差异。以SPD干预OVX组小鼠的BMMSC,Western blot法检测Runx2、ALP、PPARγ、LPL蛋白水平,反转录PCR检测Runx2、ALP、PPARγ、LPL mRNA水平;茜素红染色检测矿化结节及油红O染色检测脂滴数量。结果 OVX组小鼠来源的BMMSC成骨分化能力低于Sham组,成脂能力高于Sham组。经SPD干预后,OVX来源的BMMSC的成骨分化能力较未干预增强,成脂分化能力减弱。结论 SPD能够促进雌激素缺乏所致骨质疏松小鼠BMMSC的成骨分化并抑制其成脂分化。