柚皮苷对破骨细胞分化的影响

目的: 探讨骨碎补单体成分柚皮苷对小鼠单核细胞RAW264.7诱导分化为破骨细胞的影响. 方法: 通过100 μg·L^-1核因子κB受体活化因子配基(RANKL)诱导RAW264.7细胞株分化为成熟破骨细胞,经TRAP特异性染色和骨吸收陷窝对破骨细胞进行鉴定.采用MTT法筛选抑制破骨细胞最强的浓度.在诱导过程中,采用筛选后含柚皮苷的培养基,诱导5 d后,通过TRAP阳性细胞计数和骨吸收面积分析来观察柚皮苷对破骨细胞的形成和骨吸收功能情况;流式细胞术检测柚皮苷对破骨细胞增殖的影响,RT-PCR检测柚皮苷对破骨细胞分化过程中核因子κB 受体活化因子(RANK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、基质金属蛋白酶 9(MMP-9)、活化T细胞核因子1(NFATc1)与C-fos mRNA表达的影响. 结果: 采用100 μg·L^-1的RANKL可成功诱导成熟的、有功能的破骨细胞.柚皮苷可以抑制破骨细胞的分化和骨吸收功能;抑制破骨细胞的增殖活性;柚皮苷可明显下调破骨细胞分化过程中的RANK,TRAP,MMP-9,NFATc1 mRNA的表达,上调C-fos mRNA表达. 结论: 柚皮苷可抑制破骨细胞分化、增殖和骨吸收功能,其机制可能是通过抑制破骨细胞分化过程中特异性基因表达实现的.     

土贝母苷甲抗肿瘤作用机制研究进展

天然化合物是抗癌药物的重要来源。土贝母苷甲(TBMSⅠ)是土贝母的主要药理活性成分,大量实验研究证实TBMSⅠ在体内外不同的致癌阶段都具有抗癌活性。TBMSⅠ通过多种信号通路抑制癌细胞的生长和增殖,诱导细胞周期阻滞、凋亡、分化、自噬,抑制血管生成、侵袭和转移。TBMSⅠ联合化疗药治疗还可增强耐药癌细胞的敏感性。现就TBMSⅠ在各肿瘤系统中的抗肿瘤作用的临床前研究及其分子机制进行综述和分析,并对其在肿瘤防治中的应用前景进行展望。TBMSⅠ作为相关候选药物的潜力可以被适当地开发和设计成一种有效的抗癌药物。     

青蒿素及其衍生物对破骨细胞分化作用的比较分析

目的:比较青蒿素及其衍生物双氢青蒿素、蒿甲醚和青蒿琥酯对破骨细胞诱导分化能力以及相关通路的调控作用。方法:经核转录因子-κB(NK-κB)受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)诱导小鼠骨髓巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMMs)向破骨细胞分化,给予不同浓度的青蒿素、双氢青蒿素、蒿甲醚和青蒿琥酯作用后,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色观察TRAP阳性多核细胞的形成,实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测TRAP,基质金属蛋白酶-9(MMP-9),组织蛋白酶-K(cathepsin K,Cts-K)mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)及p65蛋白表达。结果:RANKL可成功诱导出TRAP阳性的多核细胞,提高破骨细胞主要调控因子TRAP,MMP-9和Cts-K mRNA以及TRAF6和p65蛋白表达水平。青蒿素、双氢青蒿素、蒿甲醚和青蒿琥酯均可显著降低RANKL诱导后异常增加的破骨细胞数、破骨细胞核数和破骨细胞直径(P0.05,P0.01),青蒿素可明显降低TRAP mRNA表达水平(P0.01),双氢青蒿素、蒿甲醚和青蒿琥酯可显著下调TRAP,MMP-9和Cts-K mRNA表达水平(均P0.01),以蒿甲醚及青蒿琥酯作用较佳;此外,青蒿素及其衍生物也可以明显抑制RANKL诱导后异常增高的TRAF6和p65蛋白表达,其中青蒿琥酯的作用最显著(P0.01)。结论:青蒿素及其衍生物均具有抑制由RANKL诱导的小鼠BMMs向破骨细胞分化的作用,且相关作用可能与下调TRAP,MMP-9和Cts-K基因表达,抑制破骨细胞分化通路主要因子TRAF6/NF-κB的活化有关;相同浓度下蒿甲醚和青蒿琥酯的作用比青蒿素和双氢青蒿素略强。     

紫菀酮对体外破骨细胞分化和活性的影响及作用机制研究

目的:探讨紫菀酮对体外破骨细胞分化和活性的影响及作用机制。方法:(1)分析紫菀酮对核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand, RANKL)诱导Raw 264.7细胞向破骨细胞分化的影响。将Raw 264.7细胞分为空白对照组、阳性对照组、紫菀酮1μmol·L^-1干预组、紫菀酮2.5μmol·L^-1干预组、紫菀酮5μmol·L^-1干预组和紫菀酮10μmol·L^-1干预组，空白对照组加入完全培养基，阳性对照组加入含25 ng·mL^-1RANKL的完全培养基，其余各组分别加入含有相应浓度紫菀酮及25 ng·mL^-1RANKL的完全培养基，培养5 d后进行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase, TRAP)染色，统计各组破骨细胞数；(2)分析紫菀酮对Raw 264.7细胞活力的影响。将Raw 264.7细胞分为空白对照组、紫菀酮1μ...     

中医药基于核因子κB信号通路调控破骨细胞分化的研究进展

中医药治疗骨相关疾病疗效显著,其分子生物学机制研究也成为热点,破骨细胞分化异常导致一系列骨相关疾病发生,中医药通过核因子κB(NF-κB)信号通路调控破骨细胞分化的研究取得不少进展。本文对中医药基于NF-κB信号通路的调控破骨细胞分化的研究现状进行归纳总结,阐明分子生物学机制,指出目前研究不足及未来研究方向,为中医药治疗骨相关疾病拓展思维。     

注射用土贝母苷甲肺靶向制剂的体外释药研究

目的:探讨土贝母苷甲肺靶向微粒的体外释药机理。方法:采用动态透析技术考察制剂的体外释药规律。结果:体外释放试验表明,土贝母苷甲原料药及原料药与载体材料聚乳酸-羟基乙酸共聚物的简单混合物的体外释放均较符合一级动力学方程,而土贝母苷甲聚乳酸-羟基乙酸共聚物载药肺靶向微球的体外释放则均较符合Weibull方程,t1/2明显延长,缓释作用明显。     

土贝母苷甲靶向制剂的研究

靶向制剂可以提高靶组织的药理作用并降低全身的不良反应 ,为第 4代的药物剂型。针对中药土贝母的抗肿瘤成分——土贝母苷甲有效但毒性较大的问题 ,进行靶向制剂的实验研究 ,以达到减毒增效的目的     

淫羊藿素与RANKL蛋白靶点结合抑制破骨细胞分化抗骨质疏松作用研究

目的探讨淫羊藿素(IT)与核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)蛋白靶点结合能力,并阐明其抗骨质疏松作用机制。方法采用分子对接技术模拟并预测RANKL与IT的相互作用,并通过切除大鼠双侧卵巢制备骨质疏松模型,评价IT对模型大鼠体质量、骨吸收血清指标碱性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸盐酸性磷酸酶-5b(TRACP-5b)、骨密度(BMD)以及骨组织形态的调节作用。结果 IT可与靶蛋白RANKL发生稳定对接,IT组大鼠体质量较模型组显著降低(P0.05),IT能显著降低模型大鼠血清ALP、TRACP-5b水平(P0.01),显著降低模型大鼠股骨表面积与体积比值(BS/BV)、骨小梁分离度(Tb.Sp)值(P0.01),显著增加BMD、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th N)、骨小梁数目(Tb.N)值(P0.01)。结论 IT能通过与RANKL蛋白靶点结合,抑制破骨细胞分化并发挥抗骨质疏松作用。     

牛膝中三萜皂苷抑制破骨细胞分化作用的研究

目的：通过牛膝中三萜皂苷类成分对破骨细胞分化的影响,探讨牛膝防治骨质疏松症的作用机理。方法：建立破骨细胞分化体外实验模型,在甲状旁腺素（PTH）的诱导下,骨髓细胞分化形成TRAP阳性破骨样细胞。在细胞培养过程中,分别加入2、20、200μM的各组三萜皂苷样品进行干预,考察每组样品对破骨细胞形成的影响。结果：考察的7个三萜皂苷类成分均能不同程度地抑制破骨细胞分化,其中竹节参苷IVa和木鳖子皂苷Ib抑制作用最强,且其抑制作用具有可逆性。结论：牛膝中三萜皂苷类成分可有效抑制破骨细胞形成,提示其可能作为骨吸收抑制剂用于防治骨质疏松症。     

芒果苷对脂多糖诱导慢性炎症的抗炎作用

目的:探讨芒果苷对脂多糖(LPS)诱导慢性炎症的抗炎作用及其机制。方法:90只SD大鼠随机分为正常组、模型组、泼尼松5 mg/kg组与芒果苷200、100、50 mg/kg组。以LPS间断尾静脉注射建立慢性炎症模型,进行大鼠全血白细胞计数,ELISA测定血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1),RT-PCR检测白细胞核转录因子κB(NF-κB)基因表达。结果:与模型组比较,芒果苷200 mg/kg组全血白细胞总数与血清hs-CRP、TNF-α、IL-6、sICAM-1水平明显降低(P<0.05),白细胞NF-κB基因表达下调(P<0.05)。结论:芒果苷可显著抑制LPS诱导的慢性炎症,其作用机制与其下调白细胞NF-κB基因表达而降低炎症因子水平有关。     

高效液相制备色谱制备土贝母中土贝母苷甲、乙、丙对照品的研究

目的研究高效液相制备色谱从土贝母中制备土贝母苷甲、乙、丙对照品。方法采用大孔吸附树脂和制备液相色谱等多种方法进行分离纯化,并根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果分离得到3个化合物,分别鉴定为土贝母苷甲、土贝母苷乙、土贝母苷丙,收率分别为0.58%、0.13%、0.13%,HPLC归一化法测得质量分数均大于98%。结论本方法上样量大,重现性好,收率高,适合土贝母苷甲、乙、丙的大量制备生产。     

土贝母苷甲对人鼻咽癌上皮细胞丝裂原活化蛋白激酶活性的影响

目的研究土贝母苷甲（tubeimoside1，苷甲）对人低分化鼻咽癌上皮细胞株（CNE-2Z）丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen Activated Protein Kinase，MAPK）活性的影响。方法采用放射自显影、液闪和蛋白质免疫印迹法检测MAPK的活性。结果三种实验方法得到的结果一致表明，苷甲有快速激活MAPK的效果。结论激活MAPK信号转导通路可能是苷甲诱导肿瘤细胞凋亡的途径之一。     

白芍总苷对巨噬细胞核转录因子-κB活化的影响及其机制研究

目的:研究白芍总苷(TGP)对核转录因子-κB(NF-κB)活化的调节作用及其机制。方法:不同剂量(10,30,100,300μg.mL^-1)的TGP作用于大鼠腹腔巨噬细胞2 h后,加入脂多糖(LPS)刺激20 min或1 h,Westernblot方法分别观察NF-κB抑制蛋白IκBα在胞浆中的含量及NF-κB亚基p65在胞核中的含量,同时检测NF-κB与DNA的结合活性。结果:TGP显著增加了LPS刺激后的巨噬细胞胞浆中IκBα蛋白的含量,同时显著减少了胞核中NF-κB p65蛋白含量,并对LPS诱导的NF-κB与DNA的结合活性也有明显抑制作用。结论:TGP可抑制LPS诱导的巨噬细胞NF-κB的活化,其机制与TGP抑制IκBα蛋白的降解,阻遏NF-κB p65蛋白的核转移和抑制NF-κB与DNA的结合密切相关。     

淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素联合作用对牙周炎大鼠牙周组织中RANKL和OPG表达的影响

目的研究淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素联合作用对牙周炎大鼠牙周组织中RANKL表达的影响。方法牙周组织局部注射大肠杆菌内毒素制造牙周炎动物模型,将淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素联合作用于实验动物,用原位杂交法检测用药前后牙周组织中RANKL的表达。结果空白对照组大鼠牙周组织中RANKL表达上升(P<0.01),OPG表达降低(P<0.05),RANKL/OPG比值上升(P<0.01);实验组RANKL表达量明显较空白对照组低(P<0.05),虽然OPG表达量与空白对照组相比无统计学意义(P>0.05),但RANKL/OPG比值明显低于空白对照组(P<0.05)。结论淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素联合作用能够抑制牙周炎大鼠牙周组织中RANKL的表达。     

从ERα/RANK通路探讨淫羊藿苷抑制破骨细胞分化作用

目的:通过检测淫羊藿苷对破骨细胞诱导分化过程中雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα),核转录因子-κB受体(receptor activator of nuclear factor-κB,RANK)mRNA表达的影响,探讨淫羊藿苷抑制破骨细胞分化作用机制。方法:50μg·L~(-1)核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)体外诱导RAW264.7细胞分化成破骨细胞,利用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色和骨吸收陷窝对破骨细胞进行鉴定。用不同浓度的淫羊藿苷(1×10-5,1×10-6,1×10-7mol·L~(-1))分别处理5 d和9 d后,进行TRAP染色和骨吸收陷窝分析,处理6 d后,利用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9),组织蛋白酶K(cathepsin-K,CK),TRAP,ERα,RANK mRNA表达水平,用雌激素受体阻断剂ICI182780阻断雌激素受体通路验证淫羊藿苷对ERα/RANK通路的调节作用。结果:与RANKL诱导组比较,淫羊藿苷可以显著抑制破骨细胞形成数量和骨吸收陷窝数(P0.05,P0.01),同时显著下调破骨细胞MMP-9,CK,TRAP,RANK mRNA表达水平(P0.05,P0.01),上调ERαmRNA表达水平(P0.05)。ICI182780可抑制淫羊藿苷上调破骨细胞的ERαmRNA表达水平和下调RANK mRNA表达水平的作用(P0.05)。结论:淫羊藿苷能抑制RANKL诱导RAW264.7向破骨细胞分化和骨吸收活性,该作用可能通过上调破骨细胞的ERαmRNA表达进而下调RANK mRNA表达实现的。     

基于NF-κB通路的芒果苷干预脂多糖诱导的细胞炎症作用机制研究

目的研究芒果苷对小鼠巨噬细胞RAW 264.7的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法采用脂多糖(LPS)诱导RAW 264.7细胞炎症模型。实验分四步:(1)细胞存活率实验分5组,即:空白组、LPS组、LPS+不同浓度(50、100、150μg/mL)芒果苷组。MTT法检测细胞存活率。(2)一氧化氮(NO)、白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白介素6(IL-6)分泌实验分6组,即:空白组、LPS组、LPS和不同浓度芒果苷(50、100、150μg/mL)组、LPS+BAY 11-7082[核因子κB(NF-κB)抑制剂]组。Griess法检测NO分泌量,ELISA法检测IL-1β、TNF-α及IL-6分泌量。(3)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)与环氧化酶-2(COX-2)mRNA及蛋白表达实验分组同细胞存活率实验。实时荧光定量PCR检测iNOS及COX-2 mRNA水平变化,Western blot检测iNOS及COX-2蛋白表达水平。(4)细胞质、细胞核中NF-κB表达实验分3组,即:空白组、LPS组、LPS+150μg/mL(终末浓度)芒果苷共处理组, Western blot检测细胞质、细胞核中NF-κB p65蛋白表达量。结果 (1)与空白组比较,LPS组显著降低RAW264.7细胞存活率(P0.05);与LPS组比较,50～150μg/mL芒果苷预处理对RAW264.7细胞增殖无显著影响(P0.05)。(2)与空白组比较,LPS组NO、IL-1β、TNF-α、IL-6分泌量显著升高(P0.05);与LPS组比较,除50μg/mL芒果苷预处理组NO、TNF-α分泌量无显著变化外(P0.05),其余各组NO、IL-1β、TNF-α、IL-6分泌量均显著降低(P0.05)。(3)与空白组比较,LPS组iNOS、COX-2 mRNA及蛋白表达量均显著升高(P0.05);与LPS组比较,50～150μg/mL芒果苷预处理组iNOS、COX-2 mRNA及蛋白表达显著下降(P0.05)。(4)与空白组比较,LPS组细胞质中NF-κB p65蛋白量减少,细胞核中则增多(P0.05);与LPS组比较,150μg/mL芒果苷预处理组细胞质中NF-κB p65蛋白量升高,细胞核中蛋白量减少(P0.05)。结论芒果苷可能通过抑制NF-κB信号通路,而抑制iNOS、COX-2表达及相关炎症因子的分泌,干预LPS诱导的RAW264.7细胞炎症。     

风湿清对RANKL诱导的RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响

目的:通过观察风湿清(Fengshiqing,FSQ)含药血清对RAW264.7细胞向破骨细胞分化及细胞分泌骨免疫相关因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素-17(IL-17)的影响,初步探讨FSQ缓解类风湿性关节炎(RA)骨破坏的机制。方法:5%,10%,15%3个不同体积分数的FSQ含药血清与核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κBligand,RANKL)诱导的RAW264.7共孵育6 d,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察TRAP阳性多核细胞的形成;FSQ含药血清(5%,10%,15%)与白介素-1β(IL-1β)诱导的RAW264.7细胞共孵育24 h后收集细胞上清液,ELISA方法检测TNF-α和IL-17的含量。结果:RANKL诱导RAW264.7细胞形成TRAP阳性多核细胞,IL-1β诱导TNF-α和IL-17在RAW264.7细胞中异常高表达,5%～15%FSQ含药血清能剂量依赖地降低TRAP阳性细胞数;10%和15%的FSQ含药血清能显著抑制TNF-α(P<0.05)以及IL-17(P<0.01)的表达量。结论:FSQ能抑制破骨前体细胞向破骨细胞分化,降低TNF-α和IL-17在RAW264.7细胞中的异常高表达,这可能是FSQ抑制骨破坏治疗RA的作用机制之一。     

土贝母苷甲在人宫颈癌HeLa细胞内对线粒体的影响

目的:探讨线粒体在土贝母苷甲(TBMS1)诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡过程中的作用。方法:流式细胞仪测定线粒体膜电位(ΔΨm)、琼脂糖凝胶电泳分析DNA断裂片和蛋白质免疫印迹法检测细胞色素c(cyt c)的表达。结果:TBMS1引起人宫颈癌HeLa细胞凋亡,使得ΔΨm下降,释放入胞质的cyt c增加,并具有时间、剂量依赖性;TBMS1还可直接作用于分离的鼠肝脏线粒体,使之释放cyt c;TBMS1的这种作用部分能够被线粒体膜保护剂环孢菌素A(CsA)阻断。结论:线粒体途径是TBMS1诱导的HeLa细胞凋亡的途径之一。     

积雪草苷对膝骨关节炎大鼠软骨损伤的影响及机制研究

目的:探讨积雪草苷(ASS)对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨损伤和骨保护素(OPG)/核因子κB受体活化因子(RANK)/RANK配体(RANKL)信号通路的影响。方法:采用前交叉韧带切断术(ACLT)加内侧半月板切除术(MMx)诱导建立膝骨关节炎大鼠模型,建模后分为KOA组、ASS低剂量组(ASS-L组,16 mg/kg)、ASS高剂量组(ASS-H组,32 mg/kg)、ASS+si-NC组(32 mg/kg ASS+100 ng LV-si-NC载体)、ASS+si-OPG组(32 mg/kg ASS+100 ng LV-si-OPG载体),另设假手术(Sham)组,每组12只。给予相应的药物干预2周后,通过机械缩爪阈值(PWT)和热缩爪潜伏期(PWL)评估大鼠疼痛行为,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清炎性细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,苏木精-伊红(HE)和番红O/固绿染色观察关节软骨组织病理学变化,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测软骨组织基质金属蛋白酶(MMP-13)、Ⅱ型胶原蛋白(COL2A1)、聚集蛋白聚糖(Agg...     

大蒜素调控RANK表达对破骨细胞分化成熟的影响

目的 研究大蒜素调控核因子κB受体活化因子（RANK）对破骨细胞分化成熟的影响。方法 诱导小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）分化破骨细胞，分为对照组及实验组，两组采用30 ng/mL巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）及60 ng/mL RANKL培养，实验组第1、3、7天进行大蒜素（20 μg/mL）干预。采用CCK-8检测两组细胞的增殖情况，通过抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色及定量检测TRAP酶活性，通过RT-PCR检测RANK mRNA表达量。结果 与本组第1天比较，两组第3天破骨细胞增殖均降低（P<0.01），TRAP酶活性增加（P<0.01），实验组第3天RANK mRNA表达降低（P<0.05）;与本组第3天比较，第7天两组破骨细胞增殖能力增高（P<0.01）。与对照组比较，实验组第1天RANK mRNA表达更高（P<0.05），第3、7天破骨细胞增殖能力及RANK mRNA表达降低（P<0.05，P<0.01），第7天TRAP酶活性降低（P<0.01）。结论 大蒜素对破骨细胞分化成熟具有显著抑制作用，其对破骨细胞胞的增殖、RANK mRNA表达、破骨细胞活性作用均有抑制作用，且呈时间依赖性。