AnnexinI在α粒子转化细胞及肺癌组织中高表达

目的 探讨ＡｎｎｅｘｉｎⅠ表达与肺癌及细胞转化的关系。方法：Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹检测永生化人支气管上皮ＢＥＰ２Ｄ细胞及α粒子照射转化后ＢＥＰ２Ｄ细胞中ＡｎｎｅｘｉｎⅠ在ｍＲＮＡ和蛋白质水平的表达,细胞免疫化学检测Ａｎｎｅｘｉｎ Ⅰ在ＢＥＰ２Ｄ细胞中的分布。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测肺癌病人正常组织与肿瘤组织中ＡｎｎｅｘｉｎⅠ蛋白质的表达。结果 Ａｎｎｅｘｉｎ在α粒子照射转化后ＢＥＰ     

吴茱萸碱逆转人肺癌细胞株Ａ５４９／ＤＤＰ耐药机理的实验研究

目的　观察吴茱萸碱逆转人肺腺癌耐药株Ａ５４９／ＤＤＰ细胞耐药性的效果并探讨其与阻断ＮＦ κＢ信号传导通路的相关性。方法　采用ＭＴＴ法检测单用吴茱萸碱、顺铂（ＤＤＰ）以及两药联用在不同时间对Ａ５４９／ＤＤＰ细胞的增殖影响,计算ＩＣ５０及耐药逆转倍数。流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况。ＲＴ ＰＣＲ检测各组ＭＤＲ１、ＮＦ κＢ、Ｂｃｌ-２、ＭＭＰ-２和ＶＥＧＦ的ｍＲＮＡ表达。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测各组细胞的ｐＩκＢ-α、pＩＫＫα蛋白表达水平。结果　吴茱萸碱０.１２５ｍｇ／Ｌ、０.２５ｍｇ／Ｌ针对Ａ５４９／ＤＤＰ细胞对ＤＤＰ的耐药逆转倍数分别为３.６６８和１1.４８。ＲＴ ＰＣＲ显示在吴茱萸碱作用下检测基因的ｍＲＮＡ表达随着吴茱萸碱浓度的增加和时间的延长其表达逐渐下降。当吴茱萸碱与ＤＤＰ联用时,可明显提高Ａ５４９／ＤＤＰ细胞对化疗药的敏感性,凋亡细胞显著增加（Ｐ＜０.０５）。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法结果提示Ａ５４９／ＤＤＰ细胞中ｐＩκＢ-α的表达水平随着吴茱萸碱作用时间的延长逐渐下降,ｐＩＫＫα表达则无显著变化。结论　吴茱萸碱可以通过抑制ＩκＢ-α的磷酸化阻断ＮＦ-κＢ信号通路,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖,增加耐药细胞对ＤＤＰ的敏感性。     

AnnexinI基因转染对BEP2D细胞生长的影响

研究ＡｎｎｅｘｉｎⅠ基因ｃＤＮＡ转染对生化人支气管细胞系ＢＥＰ２Ｄ生长的影响。方法：ｐＴ７Ｔ３Ｄ质粒经ＮｏｔⅠ和ＸｈｏⅠ双酶切获得 人ＡｎｎｅｘｉｎⅠ基因ｃＤＮＡ片段，亚克隆至真核表达载体ｐＣＩ－ｎｅｏ，构建人ＡｎｎｅｘｉｎⅠ基因真核表达载体ｐＣＩ－ＡＸＩ。通过采用脂质体介导转染技术，将ＡｎｎｅｘｉｎⅠ的真核表达重组质粒和空载体质粒分别导入永生化人支气管管细胞系ＢＥＰ２Ｄ；合成ＡｎｎｅｘｉⅠ反应寡     

^238Puα粒子诱发人支气管上皮细胞BEP2D转化的初步研究

目的 建立氡及其子体诱发细胞转化的模型,模拟氡致肺癌的过程,方法 利用＾２３８ＰｕＯ２释放的α粒子,照射体外培养的人支气管上皮细胞系ＢＥＰ２Ｄ,诱发转化。结果１．５Ｇｙ单次照射的Ｒ１５Ｈ细胞在连续培养２２周后获得了转化,转化细胞逐步发生生长动力学和形态学的改变,生长失去接触抑制,ＣｏｎＡ凝集现象明显,获得对血清诱导末端分化的抗性和锚着独立性生长能力,与对照细胞相比均有统计学意义上的增强,结论：从ＢＥＰ２Ｄ到α粒子转化的Ｒ１５Ｈ细胞能够在一定程度上模拟体内肿瘤的发生发展过程,可以为深入了解肺支气管肿瘤发生多阶段过程中的细胞和分子机理提供研究模型。     

人胃癌细胞株ＳＧＣ-７９０１体外乏氧环境ＨＩＦ-１α、ＶＥＧＦ-Ａ和ＶＥＧＦ-Ｄ基因表达变化

目的：观察乏氧干预对人胃癌细胞ＳＧＣ-７９０１乏氧诱导因子-１α（ＨＩＦ-１α）、血管内皮生长因子-Ａ（ＶＥＧＦ-Ａ）和血管内皮生长因子 Ｄ（ＶＥＧＦ-Ｄ）表达的影响,以及乏氧诱导因子-１α和血管内皮生长因子表达的相关性。方法：将人胃癌细胞ＳＧＣ-７９０１体外培养并乏氧干预０、４、１６、２４ｈ,以反转录 聚合酶链式反应（ＲＴ-ＰＣＲ）方法检测４组ＨＩＦ-１α、ＶＥＧＦ-Ａ、ＶＥＧＦ-ＤｍＲＮＡ的表达情况;免疫印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）检测４组ＨＩＦ-１α、ＶＥＧＦ-Ａ、ＶＥＧＦ-Ｄ蛋白表达情况。结果：与０ｈ相比,４ｈＨＩＦ-１αｍＲＮＡ转录处于下降水平（Ｐ＜０.０５）,１６ｈＨＩＦ-１αｍＲＮＡ转录上升（Ｐ＜０.０５）,２４ｈ转录达到最高水平（Ｐ＜０.０５）。ＶＥＧＦ-ＡｍＲＮＡ和ＶＥＧＦ-ＤｍＲＮＡ表达量均随时间的延长逐渐增加（Ｐ＜０.５）。ＨＩＦ-１α、ＶＥＧＦ-Ａ、ＶＥＧＦ-Ｄ蛋白表达量随乏氧时间的延长逐渐增加（Ｐ＜０.０５）。结论：胃癌细胞株ＳＧＣ-７９０１乏氧环境中,ＨＩＦ-１α、ＶＥＧＦ-Ａ和ＶＥＧＦ-Ｄ的ｍＲＮＡ与蛋白表达均明显增加。     

肝癌组织多聚ADP核糖基化增加

日本Ｎｏｍｕｒａ等报告，肝细胞癌（ＨＣＣ）组织中多聚二磷酸腺苷中国肿瘤２０００年第９卷第８期（ＡＤＰ）核糖基化和多聚（ＡＤＰ核糖）聚合酶（ＰＡＲＰ）表达增加。５例ＨＣＣ患者在手术切除时取肿瘤组织和邻近非肿瘤组织，用３２Ｐ标记的辅酶Ⅰ使组织匀浆发生ＡＤＰ核糖基化。用十二烷硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分离ＡＤＰ核糖基化蛋白质，然后作放射自显影。ＰＡＲＰ的表达还用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹进行评估。 结果显示，人ＨＣＣ组织中有数种蛋白质发生ＡＤＰ核糖基化，特别是肿瘤组织内一种 １１６ｋＤａ蛋白质的放射性标记比邻近非…     

高氧刺激下ＰＡＣ１诱导乳腺癌细胞凋亡的机制探讨

目的　初步探讨高氧刺激下ＰＡＣ１对人乳腺癌细胞株ＭＤＡ-ＭＢ４３５的凋亡诱导作用及其机制。方法　通过脂质体法转染目的质粒ｐｃＤＮＡ３.１（＋）／ＰＡＣ１进入人乳腺癌细胞株ＭＤＡ ＭＢ４３５,筛选稳定表达ＰＡＣ１的细胞克隆,并使用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ法鉴定高表达ＰＡＣ１的ＭＢ４３５细胞克隆。应用台盼蓝染色法检测不同细胞在Ｈ２Ｏ２处理后的存活率变化,同时进一步使用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ法检测ＭＢ４３５／ＰＡＣ１细胞克隆经Ｈ２Ｏ２处理后其ＥＲＫ１／２磷酸化的水平。结果　在细胞克隆ＭＢ４３５／ＰＡＣ１-Ｃ２和ＭＢ４３５／ＰＡＣ１-Ｃ６中均有高水平的ＰＡＣ１表达,这些高表达ＰＡＣ１的肿瘤细胞经高氧化合物Ｈ２Ｏ２刺激后细胞存活率相对于对照组均明显降低（Ｐ＜０.０１）,而且ＰＡＣ１的高表达可以引起细胞内ＭＡＰＫ激酶ＥＲＫ１／２的活性受到抑制,使磷酸化水平降低。结论　ＰＡＣ１可以通过抑制ＥＲＫ１／２的磷酸化水平而介导细胞对高氧刺激的反应,从而诱导细胞发生凋亡。     

Bcl—2基因在人肺癌组织中的转录表达研究

目的 探讨Ｂｃｌ－２基因转录表达与肺癌发生、发展的关系。方法 采用ｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交方法检测３１例肺癌癌组织、癌旁组织、远癌肺组织和１３例肺良性病变组织Ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ表达水平。结果 （１）肺癌组织中Ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ表达水平（１７９．９１±２５．０２）明显高于远癌肺组织（１３３．７０±２０．４５）和肺良性病变组织（１３２．５３±１３．８５）（Ｐ〈０．０１）；（２）低分化肺癌组织（１９３     

硒对照射后大鼠肺胶原mRNA影响的定量研究

为寻找防治放射性肺纤维化的措施，使用α１（Ⅰ）和α１（Ⅲ）型胶原ｃＤＮＡ探针，采用斑胶点杂交技术观察了富硒螺旋藻对大鼠胸部照射后肺组织胶原ｍＲＮＡ合成的影响。图像分析仪定量测试斑点杂交结果的积分光密度显示，单纯照射可使肺组织胶原ｍＲＮＡ合成增多，应用富硒螺旋藻使照射后肺组织胶原ｍＲＮＡ合成减少，本实验初步结果表明富硒螺旋藻对大鼠肺胶原ｍＲＮＡ合成可能有一定程度抑制作用     

Northern印迹杂交分析nm23基因在人肺癌中的表达研究

目的探讨ｎｍ２３基因表达在人肺癌中的作用。方法通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交,检测４０例人肺癌组织和１９例非癌肺组织的ｎｍ２３Ｈ１和ｎｍ２３Ｈ２ｍＲＮＡ表达,采用地高辛标记和检测系统显示杂交信号,并分析ｍＲＮＡ表达与肺癌临床特征的关系。结果低分化鳞癌的ｎｍ２３Ｈ２ｍＲＮＡ表达较中高分化鳞癌显著降低（Ｐ＜０．０１）,小细胞肺癌的ｎｍ２３Ｈ１和ｎｍ２３Ｈ２ｍＲＮＡ表达较肺鳞癌明显降低。但在有或无淋巴结转移的原发癌灶组织间,以及肺癌的临床分期间,ｎｍ２３基因ｍＲＮＡ表达差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论ｎｍ２３基因ｍＲＮＡ表达与肺癌的组织分化有关,未发现其在肺癌中的癌转移抑制作用。     

人非小细胞肺癌组织p73基因转录表达研究

目的 探讨Ｐ７３基因转录表达与肺癌发生、发展的关系。方法 采用逆转录多聚酶链反应技术（ＲＴ－ＰＣＲ）检测３２例非小细胞肺组织、癌组织和７例肺良性病变组织,及其对应正常肺组织Ｐ７３ｍ,ＲＮＡ的表达。结果 ３２例肺癌组织中２８例Ｐ７３表达明显升高,肺７癌组织Ｐ７３ｍＲＮＡ阳性表达率明显高于癌旁肺组织和肺良性病变组织（Ｐ〈０．０１）。肺癌组织强Ｐ７３ｍＲＮＡ阳性表达率型、细胞分化程度和Ｐ－ＴＮＭ分期无明     

EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞系中通过TRAF2活化NF-kB

目的：为了探讨ＥＢ病毒（ＥＢＶ）中ＬＭＰ１的致瘤机制,对鼻咽癌ＬＭＰ１激活重要的核转录因子ＮＦ－_ＫＢ的机制进行了研究。方法：①以ＬＭＰ１阴性的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ２及表达载体（ｐＳＧ５）的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ２－ｐＳＧＳ为对照,采用免疫共沉淀－Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ方法在稳定表达ＬＭＰ１的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ２－ＬＭＰ１中证实ＬＭＰ１与ＴＲＡＦ２是否直接结合形成免疫共沉淀复合物;②在ＨＮＥ２－ＬＭＰ１细胞系导入ＴＲＡＦ２表达质粒或不同剂量ＴＲＡＦ２显性负性突变体（ＴＲＡＦ２Ａ６－ ８６）表达质粒,以 ＮＦ－ｋＢ报道基因方法确定 ＬＭＰ1是否通过 ＴＲＡＦ2活化 ＮＦ－ｋＢ ;③将ＬＭＰ１（１－２３１）（ＣＴＡＲ２缺失区）或ＬＭＰ１△１８７－３５１（ＣＴＡＲＩ缺失区）及不同剂量ＴＲＡＦ２Ａ６－８６瞬时导入ＨＮＥ２中以证实ＬＭＰ１ ＣＴＡＲ１或ＣＴＡＲ２是否介导了这种效应;④以转染或未转染ＴＲＡＦ２６－８６的ＨＮＥ２－ＬＭＰ１细胞系为材料,应用免疫共沉淀－Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ方法,确定ＴＲＡＦ２△６－８６是否竞争性抑制ＴＲＡＦ２与ＬＭＰ１结合。结果：①在ＨＮＥ２－ＬＭＰ１中ＬＭＰ１与ＴＲＡＦ２形成复合物     

Bcl-2基因及其家族Bax,Bcl-Xl和Fas/Apo-l,P16的检测在急性白血病中的临床意义

目的：为了解白血病凋亡正、负反馈网络中的问题与临床的关系，研究了抑制凋亡的基因Ｂｃｌ２及其家族Ｂａｘ，ＢｃｌＸｌ以及诱导凋亡的基因Ｆａｓ／Ａｐｏ１，Ｐ１６。方法：采用细胞免疫组化，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ，以及ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ的方法。结果：发现在ＡＭＬ组和ＡＬＬ组，Ｂｃｌ２抗原表达均明显高于正常（Ｐ＜００１），回顾性分析ＡＭＬＣＲ组其明显低于ＮＲ组（Ｐ＜００１）。蛋白印迹ＣＲ组Ｂｃｌ２表达虽然降低，但和ＮＲ组比较无统计学意义（Ｐ＞００５）。Ｂｃｌ２ｍＲＮＡ的表达ＣＲ组明显低于ＮＲ组（Ｐ＜０．０１）。Ｂａｘ的表达在免疫组化中白血病明显低于正常（Ｐ＜００１），但在ＣＲ组与ＮＲ组，免疫组化，蛋白印迹，ＢａｘｍＲＮＡ的表达，均无差异（Ｐ＞００５）。但ＢｃｌＸｌｍＲＮＡ的表达两组间有明显差异（Ｐ＜００１）。Ｆａｓ／Ａｐｏ１的表达为白血病组低于正常（Ｐ＜００１），但在ＣＲ与ＮＲ组中，免疫组化与蛋白印迹分析均无统计差异（Ｐ＞００５）。Ｐ１６的表达为白血病组低于正常组（Ｐ＜００１），但在ＣＲ组与ＮＲ组中无统计学意义（Ｐ＞００５）。结论：Ｂｃｌ２抗原以及Ｂｃｌ２ｍＲＮＡ，Ｂｃｌ     

芳香化酶mRNA在肺癌组织中表达的初步研究

目的 探讨芳香化酶Ｐ４５０ ｍＲＮＡ在肺癌组织中的表达及其定位分布情况。方法 以芳香化酶ｃＲＮＡ作探针,采用原位杂交检测２３例肺癌及其相对应的癌旁组织和７例肺良性疾病及其相应正常肺组织中芳香化酶ｍＲＮＡ的表达。结果 １１例肺鳞癌、６例腺癌和２例腺鳞癌芳香化酶ｍＲＮＡ表达均为阳性,而３例小细胞肺癌和１例肺泡细胞癌均为弱阳性。阳性信号主要位于癌细胞的胞浆和胸核内,肿瘤的间质细胞和血管内皮细胞也有少量表     

核酶对肝癌耐药细胞株BEL—7402／DOX耐药性的逆转作用

为逆转多药耐药ｍｄｒ－１基因产物Ｐ－ｇｐ蛋白所介导的肿瘤细胞对多种化疗药物的耐受性，作者设计合成了一种能切割ｍｄｒ－１ｍＲＮＡ第１９６密码子ＧＵＣ序列的锤头状核酶（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ），并定向克隆于逆转录病毒载体。经ＰＡ３１７包装后，病毒上清感染ＢＥＬ－７４０２／ＤＯＸ细胞株。经Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交证实，ＰＡ３１７及转化的ＢＥＬ－７４０２／ＤＯＸ细胞中均有病毒的高表达，ＲＴ－ＰＣＲ结果表明，转化细胞中ｍｄｒ－１ｍＲＮＡ与未转化细胞相比明显减少甚至不能扩增出来，流式细胞技术检测发现转化细胞表面Ｐ－ｇｐ的表达与非转化细胞相比明显下降。ＭＴＴ法检测发现转化细胞对多种化疗药物重新产生较高的敏感性。结果提示，此Ｒｉｂｏｚｙｍｅ转化ＢＥＬ－７４０２／ＤＯＸ细胞后能有效抑制ｍｄｒ－１基因的表达，使已产生耐药的肝癌细胞的多药耐药表型发生逆转。     

人食管癌相关基因大肠杆菌中的表达

目的 研究食管癌相关基因－１（ＥＣＲＧ－１）的编码蛋白质在大肠杆菌中的表达,进一步制备抗ＥＣＲＧ－１编码蛋白质的多克隆抗体。方法 用逆转录多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法克隆ＥＣＲＧ－１基因蛋白编码序列。构建该基因的表达质粒,在大肠杆菌中诱导表达,以Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ鉴定。用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳）纯化的蛋白免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠制备多抗。结果 ＲＴ－ＰＣＲ所分离的ＥＣＧＥ     

肺腺癌及鳞癌MDR1-mRNA和MRP-mRNA表达的研究

观察３０例肺癌组织及癌肺组织ＭＤＲ１－ｍＲＮＡ及ＭＲＰ－ｍＲＮＡ的表达。方法：ＲＴ－ＰＣＲ方法。结果：ＭＤＲ１－ｍＲＮＡ在肺癌组织及癌旁肺组织的表达阳性率分别为４０．０％及１６．６７％（Ｐ＝０．０４５）,ＭＤＲ１－ｍＲＮＡ的表达与细胞分化程度,临床分期及病理类型无关;ＭＲＰ－ｍＲＮＡ在肺癌主癌旁肺组织的表达分别为４３．３３％及２６．６７％,ＭＲＰ＝ｍＲＮＡ的表达与细胞分化程度有关,低分者ＭＲＰ的表     

肺癌鲎凝集素受体的研究

应用胶体金标记鲎凝集素（Ｌｉｍｕｌｕｓｐｏｌｙｐｈｅｍｕｓａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ，ＬＰＡ）标记４例正常肺组织和５４例肺癌组织，各例还用生物素化蓖麻（ＲＣＡ）、菜豆（ＰＨＡ）、双花藕豆（ＤＢＡ）和麦胚凝集（ＷＧＡ）作为对照标记。结果表明：１．ＬＰＡ受体在正常肺组织中选择性分布在大支气管上皮杯状细胞和粘膜下浆液性细胞，在非小细胞癌中的阳性率为５７．１％（２０／３５），小细胞癌、类癌中的阳性率为６３．２％（１２／１９）；２．与ＲＣＡ、ＰＨＡ、ＤＢＡ和ＷＧＡ受体表达相比，ＬＰＡ受体表达可能与肺癌发生的关系更密切，ＬＰＡ受体在肺癌中的阳性率较ＲＣＡ、ＰＨＡ、ＤＢＡ和ＷＧＡ受体表达阳性率高，而且在小细胞癌和类癌中阳性率相差均有显著性意义（Ｐ＜０．０５）。     

EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞系中通过TRAF2活化NF—kB

目的 为了探讨ＥＢ病毒（ＥＢＶ）中ＬＭＰ１的致瘤机制,对鼻咽癌ＬＭＰ１激活重要的核转录因子ＮＦ－ｋＢ的机制进行了研究。方法：①以ＬＭＰ１阴性的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ２及表达载体（ｐＳＧ５）的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ２－ｐＳＧ５为对照,采用免疫共沉淀－Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ方法在稳定表达ＬＭＰ１的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ２－ＬＭＰ１中证实ＬＭＰ１与ＴＲＡＦ２是否直接形成免疫共沉淀复合物;②在ＨＮＥ２－ＬＭ     

凋亡相关基因产物Fas／APO—1和Bcl—2蛋白在肺癌组织中的表达及意义

目的 探讨凋亡相关基因Ｆａｓ／ＡＰＯ－１和Ｂｃｌ－２在肺癌发生发展中的作用。方法采用免疫组织化学方法对６５例肺癌组织中４６例远离肺癌正常肺癌组织Ｆａｓ／ＡＰＯ－１和Ｂｃｌ－２蛋白的表达进行检测。结果 肺癌组织Ｆａｓ／ＡＰＯ－１蛋白阳性表达率（５６．９２％）明显低于正常肺组织的阳性表达率（８２．６１％）（Ｐ〈０．０１）,而Ｂｃｌ－２蛋白阳性表达率（４６。１５％）明显高于正常肺组织的阳性表达率（６．５