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目的 观察吴茱萸碱逆转人肺腺癌耐药株A549/DDP细胞耐药性的效果并探讨其与阻断NF κB信号传导通路的相关性。方法 采用MTT法检测单用吴茱萸碱、顺铂(DDP)以及两药联用在不同时间对A549/DDP细胞的增殖影响,计算IC50及耐药逆转倍数。流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况。RT PCR检测各组MDR1、NF κB、Bcl-2、MMP-2和VEGF的mRNA表达。Westernblot法检测各组细胞的pIκB-α、pIKKα蛋白表达水平。结果 吴茱萸碱0.125mg/L、0.25mg/L针对A549/DDP细胞对DDP的耐药逆转倍数分别为3.668和11.48。RT PCR显示在吴茱萸碱作用下检测基因的mRNA表达随着吴茱萸碱浓度的增加和时间的延长其表达逐渐下降。当吴茱萸碱与DDP联用时,可明显提高A549/DDP细胞对化疗药的敏感性,凋亡细胞显著增加(P<0.05)。Westernblot法结果提示A549/DDP细胞中pIκB-α的表达水平随着吴茱萸碱作用时间的延长逐渐下降,pIKKα表达则无显著变化。结论 吴茱萸碱可以通过抑制IκB-α的磷酸化阻断NF-κB信号通路,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖,增加耐药细胞对DDP的敏感性。 相似文献
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^238Puα粒子诱发人支气管上皮细胞BEP2D转化的初步研究 总被引:5,自引:1,他引:4
目的 建立氡及其子体诱发细胞转化的模型,模拟氡致肺癌的过程,方法 利用^238PuO2释放的α粒子,照射体外培养的人支气管上皮细胞系BEP2D,诱发转化。结果1.5Gy单次照射的R15H细胞在连续培养22周后获得了转化,转化细胞逐步发生生长动力学和形态学的改变,生长失去接触抑制,ConA凝集现象明显,获得对血清诱导末端分化的抗性和锚着独立性生长能力,与对照细胞相比均有统计学意义上的增强,结论:从BEP2D到α粒子转化的R15H细胞能够在一定程度上模拟体内肿瘤的发生发展过程,可以为深入了解肺支气管肿瘤发生多阶段过程中的细胞和分子机理提供研究模型。 相似文献
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目的:观察乏氧干预对人胃癌细胞SGC-7901乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子-A(VEGF-A)和血管内皮生长因子 D(VEGF-D)表达的影响,以及乏氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子表达的相关性。方法:将人胃癌细胞SGC-7901体外培养并乏氧干预0、4、16、24h,以反转录 聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测4组HIF-1α、VEGF-A、VEGF-DmRNA的表达情况;免疫印迹(Westernblot)检测4组HIF-1α、VEGF-A、VEGF-D蛋白表达情况。结果:与0h相比,4hHIF-1αmRNA转录处于下降水平(P<0.05),16hHIF-1αmRNA转录上升(P<0.05),24h转录达到最高水平(P<0.05)。VEGF-AmRNA和VEGF-DmRNA表达量均随时间的延长逐渐增加(P<0.5)。HIF-1α、VEGF-A、VEGF-D蛋白表达量随乏氧时间的延长逐渐增加(P<0.05)。结论:胃癌细胞株SGC-7901乏氧环境中,HIF-1α、VEGF-A和VEGF-D的mRNA与蛋白表达均明显增加。 相似文献
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目的 初步探讨高氧刺激下PAC1对人乳腺癌细胞株MDA-MB435的凋亡诱导作用及其机制。方法 通过脂质体法转染目的质粒pcDNA3.1(+)/PAC1进入人乳腺癌细胞株MDA MB435,筛选稳定表达PAC1的细胞克隆,并使用Westernblotting法鉴定高表达PAC1的MB435细胞克隆。应用台盼蓝染色法检测不同细胞在H2O2处理后的存活率变化,同时进一步使用Westernblotting法检测MB435/PAC1细胞克隆经H2O2处理后其ERK1/2磷酸化的水平。结果 在细胞克隆MB435/PAC1-C2和MB435/PAC1-C6中均有高水平的PAC1表达,这些高表达PAC1的肿瘤细胞经高氧化合物H2O2刺激后细胞存活率相对于对照组均明显降低(P<0.01),而且PAC1的高表达可以引起细胞内MAPK激酶ERK1/2的活性受到抑制,使磷酸化水平降低。结论 PAC1可以通过抑制ERK1/2的磷酸化水平而介导细胞对高氧刺激的反应,从而诱导细胞发生凋亡。 相似文献
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Bcl—2基因在人肺癌组织中的转录表达研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 探讨Bcl-2基因转录表达与肺癌发生、发展的关系。方法 采用orthern印迹杂交方法检测31例肺癌癌组织、癌旁组织、远癌肺组织和13例肺良性病变组织Bcl-2 mRNA表达水平。结果 (1)肺癌组织中Bcl-2 mRNA表达水平(179.91±25.02)明显高于远癌肺组织(133.70±20.45)和肺良性病变组织(132.53±13.85)(P〈0.01);(2)低分化肺癌组织(193 相似文献
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为寻找防治放射性肺纤维化的措施,使用α1(Ⅰ)和α1(Ⅲ)型胶原cDNA探针,采用斑胶点杂交技术观察了富硒螺旋藻对大鼠胸部照射后肺组织胶原mRNA合成的影响。图像分析仪定量测试斑点杂交结果的积分光密度显示,单纯照射可使肺组织胶原mRNA合成增多,应用富硒螺旋藻使照射后肺组织胶原mRNA合成减少,本实验初步结果表明富硒螺旋藻对大鼠肺胶原mRNA合成可能有一定程度抑制作用 相似文献
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Northern印迹杂交分析nm23基因在人肺癌中的表达研究 总被引:19,自引:1,他引:18
目的探讨nm23基因表达在人肺癌中的作用。方法通过Northern印迹杂交,检测40例人肺癌组织和19例非癌肺组织的nm23H1和nm23H2mRNA表达,采用地高辛标记和检测系统显示杂交信号,并分析mRNA表达与肺癌临床特征的关系。结果低分化鳞癌的nm23H2mRNA表达较中高分化鳞癌显著降低(P<0.01),小细胞肺癌的nm23H1和nm23H2mRNA表达较肺鳞癌明显降低。但在有或无淋巴结转移的原发癌灶组织间,以及肺癌的临床分期间,nm23基因mRNA表达差异无显著性(P>0.05)。结论nm23基因mRNA表达与肺癌的组织分化有关,未发现其在肺癌中的癌转移抑制作用。 相似文献
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人非小细胞肺癌组织p73基因转录表达研究 总被引:5,自引:0,他引:5
目的 探讨P73基因转录表达与肺癌发生、发展的关系。方法 采用逆转录多聚酶链反应技术(RT-PCR)检测32例非小细胞肺组织、癌组织和7例肺良性病变组织,及其对应正常肺组织P73m,RNA的表达。结果 32例肺癌组织中28例P73表达明显升高,肺7癌组织P73mRNA阳性表达率明显高于癌旁肺组织和肺良性病变组织(P〈0.01)。肺癌组织强P73mRNA阳性表达率型、细胞分化程度和P-TNM分期无明 相似文献
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EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞系中通过TRAF2活化NF-kB 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:为了探讨EB病毒(EBV)中LMP1的致瘤机制,对鼻咽癌LMP1激活重要的核转录因子NF-_KB的机制进行了研究。方法:①以LMP1阴性的鼻咽癌细胞系HNE2及表达载体(pSG5)的鼻咽癌细胞系HNE2-pSGS为对照,采用免疫共沉淀-Western-blotting方法在稳定表达LMP1的鼻咽癌细胞系HNE2-LMP1中证实LMP1与TRAF2是否直接结合形成免疫共沉淀复合物;②在HNE2-LMP1细胞系导入TRAF2表达质粒或不同剂量TRAF2显性负性突变体(TRAF2A6- 86)表达质粒,以 NF-kB报道基因方法确定 LMP1是否通过 TRAF2活化 NF-kB ;③将LMP1(1-231)(CTAR2缺失区)或LMP1△187-351(CTARI缺失区)及不同剂量TRAF2A6-86瞬时导入HNE2中以证实LMP1 CTAR1或CTAR2是否介导了这种效应;④以转染或未转染TRAF26-86的HNE2-LMP1细胞系为材料,应用免疫共沉淀-Western-blotting方法,确定TRAF2△6-86是否竞争性抑制TRAF2与LMP1结合。结果:①在HNE2-LMP1中LMP1与TRAF2形成复合物 相似文献
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Bcl-2基因及其家族Bax,Bcl-Xl和Fas/Apo-l,P16的检测在急性白血病中的临床意义 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:为了解白血病凋亡正、负反馈网络中的问题与临床的关系,研究了抑制凋亡的基因Bcl2及其家族Bax,BclXl以及诱导凋亡的基因Fas/Apo1,P16。方法:采用细胞免疫组化,WesternBlot,以及NorthernBlot的方法。结果:发现在AML组和ALL组,Bcl2抗原表达均明显高于正常(P<001),回顾性分析AMLCR组其明显低于NR组(P<001)。蛋白印迹CR组Bcl2表达虽然降低,但和NR组比较无统计学意义(P>005)。Bcl2mRNA的表达CR组明显低于NR组(P<0.01)。Bax的表达在免疫组化中白血病明显低于正常(P<001),但在CR组与NR组,免疫组化,蛋白印迹,BaxmRNA的表达,均无差异(P>005)。但BclXlmRNA的表达两组间有明显差异(P<001)。Fas/Apo1的表达为白血病组低于正常(P<001),但在CR与NR组中,免疫组化与蛋白印迹分析均无统计差异(P>005)。P16的表达为白血病组低于正常组(P<001),但在CR组与NR组中无统计学意义(P>005)。结论:Bcl2抗原以及Bcl2mRNA,Bcl 相似文献
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芳香化酶mRNA在肺癌组织中表达的初步研究 总被引:7,自引:2,他引:5
目的 探讨芳香化酶P450 mRNA在肺癌组织中的表达及其定位分布情况。方法 以芳香化酶cRNA作探针,采用原位杂交检测23例肺癌及其相对应的癌旁组织和7例肺良性疾病及其相应正常肺组织中芳香化酶mRNA的表达。结果 11例肺鳞癌、6例腺癌和2例腺鳞癌芳香化酶mRNA表达均为阳性,而3例小细胞肺癌和1例肺泡细胞癌均为弱阳性。阳性信号主要位于癌细胞的胞浆和胸核内,肿瘤的间质细胞和血管内皮细胞也有少量表 相似文献
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为逆转多药耐药mdr-1基因产物P-gp蛋白所介导的肿瘤细胞对多种化疗药物的耐受性,作者设计合成了一种能切割mdr-1mRNA第196密码子GUC序列的锤头状核酶(Ribozyme),并定向克隆于逆转录病毒载体。经PA317包装后,病毒上清感染BEL-7402/DOX细胞株。经Northernblot杂交证实,PA317及转化的BEL-7402/DOX细胞中均有病毒的高表达,RT-PCR结果表明,转化细胞中mdr-1mRNA与未转化细胞相比明显减少甚至不能扩增出来,流式细胞技术检测发现转化细胞表面P-gp的表达与非转化细胞相比明显下降。MTT法检测发现转化细胞对多种化疗药物重新产生较高的敏感性。结果提示,此Ribozyme转化BEL-7402/DOX细胞后能有效抑制mdr-1基因的表达,使已产生耐药的肝癌细胞的多药耐药表型发生逆转。 相似文献
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目的 研究食管癌相关基因-1(ECRG-1)的编码蛋白质在大肠杆菌中的表达,进一步制备抗ECRG-1编码蛋白质的多克隆抗体。方法 用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法克隆ECRG-1基因蛋白编码序列。构建该基因的表达质粒,在大肠杆菌中诱导表达,以Western blot鉴定。用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE电泳)纯化的蛋白免疫BALB/C小鼠制备多抗。结果 RT-PCR所分离的ECGE 相似文献
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应用胶体金标记鲎凝集素(Limuluspolyphemusagglutinin,LPA)标记4例正常肺组织和54例肺癌组织,各例还用生物素化蓖麻(RCA)、菜豆(PHA)、双花藕豆(DBA)和麦胚凝集(WGA)作为对照标记。结果表明:1.LPA受体在正常肺组织中选择性分布在大支气管上皮杯状细胞和粘膜下浆液性细胞,在非小细胞癌中的阳性率为57.1%(20/35),小细胞癌、类癌中的阳性率为63.2%(12/19);2.与RCA、PHA、DBA和WGA受体表达相比,LPA受体表达可能与肺癌发生的关系更密切,LPA受体在肺癌中的阳性率较RCA、PHA、DBA和WGA受体表达阳性率高,而且在小细胞癌和类癌中阳性率相差均有显著性意义(P<0.05)。 相似文献
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EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞系中通过TRAF2活化NF—kB 总被引:9,自引:0,他引:9
目的 为了探讨EB病毒(EBV)中LMP1的致瘤机制,对鼻咽癌LMP1激活重要的核转录因子NF-kB的机制进行了研究。方法:①以LMP1阴性的鼻咽癌细胞系HNE2及表达载体(pSG5)的鼻咽癌细胞系HNE2-pSG5为对照,采用免疫共沉淀-Western-blotting方法在稳定表达LMP1的鼻咽癌细胞系HNE2-LMP1中证实LMP1与TRAF2是否直接形成免疫共沉淀复合物;②在HNE2-LM 相似文献
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凋亡相关基因产物Fas/APO—1和Bcl—2蛋白在肺癌组织中的表达及意义 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨凋亡相关基因Fas/APO-1和Bcl-2在肺癌发生发展中的作用。方法采用免疫组织化学方法对65例肺癌组织中46例远离肺癌正常肺癌组织Fas/APO-1和Bcl-2蛋白的表达进行检测。结果 肺癌组织Fas/APO-1蛋白阳性表达率(56.92%)明显低于正常肺组织的阳性表达率(82.61%)(P〈0.01),而Bcl-2蛋白阳性表达率(46。15%)明显高于正常肺组织的阳性表达率(6.5 相似文献