长链非编码RNA HNF1A-AS1靶向has-miR-1对膀胱癌细胞生长和侵袭的调节作用及机制研究

目的：探究长链非编码RNA HNF1A-AS1通过靶向miR-1对膀胱癌细胞增殖和侵袭的作用。方法：荧光定量检测膀胱癌细胞系和正常泌尿道上皮细胞HNF1A-AS1和miR-1的表达情况;分别过表达或沉默HNF1A-AS1和miR-1,荧光定量检测miR-1的表达情况;荧光素酶报告实验确定HNF1A-AS1与miR-1的靶向关系;分别沉默HNF1A-AS1和miR-1,MTT和侵袭实验检测细胞活性和侵袭能力,免疫印迹检测细胞增殖及侵袭相关蛋白的表达。结果：根据预实验结果选择253J细胞系进行后续实验。HNF1A-AS1过表达可明显抑制miR-1表达(P<0.05),减弱miR-1 mimic对miR-1表达的促进作用(P<0.05)。沉默HNF1A-AS1可显著促进miR-1表达(P<0.05),减弱miR-1 inhibitor对miR-1表达的抑制作用(P<0.05);同时,HNF1A-AS1还可明显减弱带有miR-1片段野生型质粒的荧光素酶活性(P<0.05);此外,沉默HNF1A-AS1可显著抑制膀胱癌细胞增殖及侵袭(P<0.05),并且还能显著抑制细胞增殖相关蛋白Ki67、PCNA和侵袭相关蛋白MMP-9、VEGF的表达(P<0.05);抑制miR-1表达可明显减弱shRNA对癌细胞增殖和侵袭的抑制作用(P<0.05)。结论：沉默HNF1A-AS1可通过靶向上调miR-1表达减弱膀胱癌细胞的增殖和侵袭能力。     

趋化因子MIP-1α和MIP-3α募集树突状细胞前体细胞的研究

体外获得树突状细胞(dendritic cells,DC)或其前体对基于DC的免疫治疗至关重要。之前有报道注射MIP-1α可使一群F4/80-B220-CD11c+DC前体通过表达CCR1和CCR5招募至外周血。本研究中给小鼠注射MIP-1α之后鉴定了一种新的亚群细胞,即CCR6+CCR1-CCR5-B220-CD11c+细胞。当加入GM-CSF、IL-4和TNF-α培养时,这群细胞可分化为具有典型形态学特征、表型及抗原提呈能力的成熟DC,称为CCR+DC前体。虽然MIP-1α并不驱动CCR+DC前体招募,但其可通过诱导外周血MIP-3α表达的上调来驱动B220-CD11c+DC前体中CCR+DC前体亚群的招募。此外,外源性地给予MIP-3α可显著增强MIP-1α诱导的DC前体招募,联合应用MIP-1α和MIP-3α招募的DC前体数量显著高于单独使用MIP-1α或MIP-3α。本研究进一步证明了MIP-1α诱导DC前体招募的机制,即除了通过CCR1和CCR5表达驱动DC招募之外,MIP-1α可通过诱导MIP-3α,间接驱动CCR+DC前体招募,扩大了B220-CD11c+DC前体细胞数量。因此,联合使用MIP-1α和MIP-3α可能成为大量收集适合于免疫治疗用DC的有效方法。     

α-突触核蛋白调控大鼠线粒体复合体Ⅰ活性

目的 研究α-突触核蛋白(α-SYN)在大鼠不同脑区线粒体的表达及对线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性的影响.方法 用免疫印迹方法检测不同脑区线粒体中α-SYN表达量的变化并测定α-SYN向分离线粒体的转运;通过观察340 nm处NADH吸收值的变化测定线粒体呼吸链复合体Ⅰ的活性.结果 线粒体α-SYN在不同脑区的表达量不同.人重组α-SYN与分离线粒体进行孵育后,以剂量依赖的方式转运到线粒体内.将不同浓度人重组α-SYN与线粒体孵育后,线粒体复合体Ⅰ活性下降,并且呈明显的量-效关系.结论 线粒体α-SYN在不同脑区的表达量不同.线粒体的α-SYN有可能来源于胞质α-SYN向线粒体的转运,并调节复合体Ⅰ的活性.     

α-突触核蛋白调控大鼠线粒体复合体I活性

目的研究α-突触核蛋白（α-SYN）在大鼠不同脑区线粒体的表达及对线粒体呼吸链复合体I活性的影响。方法用免疫印迹方法检测不同脑区线粒体中α—SYN表达量的变化并测定α-SYN向分离线粒体的转运；通过观察340nm处NADH吸收值的变化测定线粒体呼吸链复合体I的活性。结果线粒体α-SYN在不同脑区的表达量不同。人重组α-SYN与分离线粒体进行孵育后，以剂量依赖的方式转运到线粒体内。将不同浓度人重组α-SYN与线粒体孵育后，线粒体复合体I活性下降，并且呈明显的量．效关系。结论线粒体α-SYN在不同脑区的表达量不同。线粒体的α—SYN有可能来源于胞质α-SYN向线粒体的转运，并调节复合体I的活性。     

一例婴儿型多囊肾病胎儿的 HNF1B基因新发变异分析

目的:对一例婴儿型多囊肾病胎儿的 HNF1B基因变异进行分析,明确其致病原因。 方法:收集引产胎儿的新鲜组织及其父母外周静脉血样,提取基因组DNA,进行全外显子测序分析,筛查出与临床表型相关的变异位点,并通过Sanger测序进行位点验证。结果:胎儿组织样本中检测到 HNF1B基因的一...     

NMDAR1和GABA_A受体的α_1及α_3亚单位在成年猫小脑的定位分布

用免疫组织化学反应及 Nissl染色探讨了 NMDAR1及 GABAA受体α1 和α3亚单位在成年猫小脑皮质及小脑核的定位分布。结果表明 ,NMDAR1免疫反应产物主要分布在 Purkinje细胞胞质和分子层的树突 ,分子层的星形细胞和篮细胞以及颗粒细胞层的颗粒细胞和胶质细胞呈中等强度的阳性反应 ,小脑核的神经元胞质和部分突起着色明显。 GABAA受体的α1 亚单位免疫反应产物主要分布在 Purkinje细胞胞质和树突 ,分子层的星形细胞和胶质细胞呈弱阳性 ,小脑核的神经元阳性反应明显。GABAA 受体的α3亚单位免疫反应产物主要分布在 Purkinje细胞胞质和树突 ,分子层的星形细胞和篮细胞着色明显 ,胶质细胞呈免疫反应弱阳性 ,小脑核神经元及纤维着色明显。在 Purkinje细胞层 NMDAR1、GABAA受体α1 及α3亚单位免疫阳性神经元分别占 Purkinje细胞总数的 80 % ,61% ,88%。结论 :NMDAR1、GABAA受体的α1 及α3亚单位在成年猫小脑具有广泛的分布。这些受体在介导小脑的复杂功能中可能发挥重要的作用。     

一例婴儿型多囊肾病胎儿的HNF1B基因新发变异分析CSCD

目的对一例婴儿型多囊肾病胎儿的HNF1B基因变异进行分析, 明确其致病原因。方法收集引产胎儿的新鲜组织及其父母外周静脉血样, 提取基因组DNA, 进行全外显子测序分析, 筛查出与临床表型相关的变异位点, 并通过Sanger测序进行位点验证。结果胎儿组织样本中检测到HNF1B基因的一个c.1370C>T(p.P457L) 杂合变异, 其父母为正常。该变异经检索相关数据库及文献均未见报道为新变异。结论 HNF1B基因的c.1370C>T新发杂合变异可能为婴儿型多囊肾的致病原因。本研究结果为该病的遗传咨询和临床产前诊断提供了依据。     

Rh蛋白家族及Rh复合体

Rh血型系统的抗原具有强烈免疫原性,主要由RhD、RhCE蛋白携带。RhAG糖蛋白是一类重要的Rh相关蛋白,影响Rh蛋白在红细胞表面的表达。近年来发现红细胞膜表面的其它一些蛋白,诸如LW糖蛋白、血型糖蛋白B,可参与Rh复合体的形成。Rh复合体是近年研究热点。目前已发现Rh复合体除携带Rh抗原外,还影响红细胞的形态稳定,可能还具有离子通道功能。     

胸腺素α1抗体的制备和鉴定

目的：制备用于检测转胸腺素基因蓝藻表达产物的特异性抗体。方法：用提纯的小肽（２８个氨基酸）胸腺素α１与牛血清白蛋白偶联后作为抗原,采用皮下多点注射免疫的方法免疫大鼠。经过３个月的免疫,获得抗Ｔα的多克隆抗体。结果：用间接酶联免疫吸附（ＥＬＩＳＡ）方法,测得抗体效价超过４０９６。蛋白印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ）检测结果显示,该抗体能特异性地与胸腺素α１抗原产生明显免疫亲和反应。结论：所制备的抗体具有很好的灵敏性和特异性。     

前列腺液中MIP-1α、MCP-1表达与慢性前列腺炎的关系

目的 分析前列腺液中巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达与慢性前列腺炎的关系。方法 回顾性分析2019年10月至2021年10月在唐山市开滦总医院进行诊治的150例慢性前列腺炎患者的临床资料,将其作为观察组,根据美国国立卫生研究院制定的病理分型方法将其分为Ⅱ型组(n=50)、ⅢA组(n=54)、ⅢB组(n=46),另根据慢性前列腺炎症状指数将其分为轻度组(n=48)、中度组(n=62)、重度组(n=40),并选取同期50例体检合格的健康男性作为对照组。比较不同病理分型、不同症状严重程度的慢性前列腺炎患者与健康对照组人群前列腺液中MIP-1α、MCP-1水平差异,分析前列腺液中MIP-1α、MCP-1表达与病理分型及病情进展的关系。结果 Ⅱ型、ⅢA型、ⅢB型组前列腺液中MIP-1α、MCP-1水平均高于对照组,且Ⅱ型、ⅢA型组高于ⅢB型组,其中Ⅱ型组又高于ⅢA型组(P<0.05)。轻、中、重度组前列腺液中MIP-1α、MCP-1水平均高于对照组,且中、重度组均高于轻度组,其中重度组又高于中度组(P<0.05)。经ROC曲线分析,MIP...     

组装现象反映蛋白质复合体的进化

Homomer是由自我相互作用的一个蛋白质单位复制产物形成的，如同变构效应一样，这种组装在蛋白质的功能和结构上都起着决定性的作用，因homomers的不正确组装与疾病有关。Homomers广泛存在于蛋白质中，50％-70％含有已知四级结构的蛋白质都组成类似的结构；尽管普遍存在，对homomers在细胞结构进化中的角色和在决定新的分子结构中的作用，以及在细胞进化和组装水平上驱动该结构形成的机制却知之甚少。在目前的研究中，分析了超过5000个独特的原子结构，结果发现homomers的四级结构在超过70％的蛋白质配对中是保守的，有30％的序列一致。详细调查发现了明确的进化途径，     

MIP-1α在狼疮肾炎患者肾组织的表达及意义

目的 :检测狼疮肾炎 (LN)患者肾组织巨噬细胞炎症蛋白 1α(macraphageinflammatoryprotein 1αMIP 1α)mRNA表达情况并探讨其与临床病理间的关系。方法 :原位杂交方法检测肾组织MIP 1αmRNA表达。结果 :正常肾组织未见MIP 1αmR NA表达 ,LN肾组织MIP 1αmRNA表达于肾小球内、皮质小管上皮细胞及间质 ,IV型LNMIP 1α表达尤明显。LN肾小球、肾小管及间质MIP 1α表达与LN病理活动指数正相关 ,与 2 4h尿蛋白无显著相关 ,与LN病理慢性指数、Scr无显著相关。结论 :MIP 1αmRNA在LN肾组织表达增强 ,尤以IV型为著 ,其表达与肾小球及间质小管活动性炎症损害相关。     

幽门螺杆菌经ROS通路激活NLRP3炎症复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18

目的:研究幽门螺杆菌(H.pylori)对NLRP3炎症复合体活化的影响及活性氧(ROS)在其中的作用。方法:将THP-1细胞与H.pylori SS1共孵育,于不同时间点收集细胞及上清,ELISA检测细胞上清中IL-1β和IL-18的含量;流式细胞术(FCM)检测胞内ROS的产生;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测细胞中NLRP3、caspase-1 mRNA的表达;Western blot检测细胞中caspase-1活性亚单位p10的表达;检测ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)及NLRP3特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)预处理细胞后相关信号分子的表达。结果:H.pylori SS1能以时间依赖性和剂量依赖性方式诱导THP-1细胞产生IL-1β、IL-18和胞内ROS;H.pylori SS1刺激能使THP-1细胞NLRP3和caspase-1 mRNA转录水平显著升高;NAC及NLRP3-siRNA预处理THP-1细胞能显著降低H.pylori SS1诱导的NLRP3炎症复合体相关成份的表达及细胞因子的分泌。结论:H.pylori SS1株通过ROS途径激活NLRP3炎症复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18,这可能与机体的先天免疫防御及细菌的致病作用相关。     

胸腺素α1的研究进展

Ｔα１是一种免疫活性肽,广泛分布于哺乳动物的各个组织器官,它主要作用于胸腺细胞成熟的早期和晚期,影响ＴＨ,ＴＣ细胞功能,并与神经内分泌系统有着相互作用,临床上广泛用于治疗各种免疫缺陷病和自身免疫疾病,具有相当可观的应用前景。     

人巨细胞病毒IE1蛋白促进巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α及凋亡

为了研究HCMV IE1-GFP融合蛋白瞬时高表达对巨噬细胞分泌活性及其凋亡的影响,将真核表达载体pEGFP/IE1转染至巨噬细胞(Mφ),转染48h后,用荧光显微镜观察GFP-IE1融合蛋白或GFP的表达与定位。ELISA法检测细胞培养上清中IL-1β或TNF-α的含量以及用RT-PCR检测其mRNA的表达情况,并收集Mφ经PI染色后流式细胞术(FCM)检测其凋亡率。结果发现,GFP-IE1融合蛋白在Mφ内瞬时表达且定位于细胞核,GFP定位于整个细胞中。GFP-IE1融合蛋白在Mφ内瞬时高表达使Mφ分泌IL-1β和TNF-α量及其mRNA表达量均增加且Mφ凋亡率明显上升,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),而GFP表达对Mφ分泌及其凋亡无影响(P>0.05)。HCMV IE1瞬时高表达可上调Mφ分泌细胞因子IL-1β和TNF-α并促进Mφ凋亡。     

α1A-肾上腺素受体与骨形成蛋白-1的相互作用研究

目的 :在α1-AR 3种亚型中 ,α1A-AR的效应最强、功能最广泛 ,但原因一直不明 ,有研究者认为“非G蛋白”可能是一种参与因素。方法 :本研究采用酵母双杂交方法 ,以α1A-AR的细胞内游离C末端 (32 2 - 4 6 6aa)作为诱饵 (bait) ,在酵母细胞中对预转化的人脑cDNA文库进行筛选。对筛选出的克隆进行测序 ,采用免疫共沉淀和免疫荧光等方法在HEK2 93细胞中进一步观察“非G蛋白”与α1A-AR相互作用。结果 :(1)在酵母双杂交实验中 (Y187酵母细胞 ) ,筛选出骨形成蛋白 1片段与α1A-AR细胞内游离C末端 (32 2 - 4 6 6aa)结合 ,但不与α1B-AR…     

胸腺素α1的研究进展

Ｔα１是一种免疫活性肽,广泛分布于哺乳动物的各个组织器官中,它主要作用于胸腺细胞成熟的早期和晚期,影响ＴＨ、ＴＣ细胞功能,并与神经内分泌系统有着相互作用。临床上广泛用于治疗各种免疫缺陷病和自身免疫疾病,具有相当可观的应用前景。     

TNF-α诱导人肝细胞系HepG2细胞释放HMGB1的研究

目的:观察小剂量TNF-α刺激下非坏死HepG2细胞是否存在HMGB1移位及释放.方法:以终浓度为25 ng/ml的TNF-α作用HepG2,RAW264.7及HEK293细胞4、8、12、16、20小时和24小时,MTT法检测细胞存活率,Western blot检测上清HMGB1含量,免疫荧光观察HMGB1移位,TUNEL法原位检测细胞凋亡.结果:TNF-α作用后24小时,HepG2,RAW264.7及HEK293细胞存活率分别为91.99%±0.30%,91.28%±0.56%和90.85%±0.72%.TNF-α作用12～24小时,HepG2和RAW264.7细胞培养上清中可以检测到明显的HMGB1,与对照组及TNF-α作用的HEK293组比较差别有统计学意义(P＜0.01).HMGB1的释放伴随着其从细胞核向胞浆的移位.TNF-α作用后24小时各组细胞凋亡率均低于5.0%,统计学无差异.结论:经TNF-α诱导,活化状态的HepG2细胞可发生HMGB1的移位及释放.     

骨形态发生蛋白、豪猪蛋白和核连接因子α1对成骨细胞分化的调节

骨组织内各种间充质细胞 ,如成骨细胞 ,软骨细胞 ,成肌细胞和骨髓基质细胞都来源于共同的祖细胞即多潜能间充质细胞[1] 。这些多潜能间充质细胞表达何种表现型有赖于分化过程中各种激素和局部因子的调节。大量的实验证实骨形态蛋白(ＢｏｎｅＭｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃＰｒｏｔ     

基于FISH技术研究线粒体分裂蛋白Drp1 mRNA在小鼠杏仁复合体的分布

目的:最新研究表明,对线粒体的分裂进行精密调控的关键蛋白是Drp1(dynamin-related protein 1,Drp1)。杏仁复合体属于中枢神经系统边缘系统的一部分,功能重要但是非常复杂。本研究拟通过荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术对Drp1在杏仁复合体的分布特点进行描述。方法:本实验通过自行设计Drp1基因的引物、合成探针,同时采用(FISH)进行染色观察,得到Drp1 mRNA在小鼠杏仁核复合体的分布特点。结果:研究发现,Drp1 mRNA几乎分布于全部杏仁核,且在内侧杏仁核、皮质杏仁核和基底杏仁核的表达水平非常高。亚细胞水平研究进一步表明,Drp1 mRNA全部位于神经元胞体,特别是核周区域,而在突起处未见其表达。结论:以上结果提示,Drp1可能通过调节杏仁复合体处神经元的线粒体的分裂状态,参与动物的内脏活动、防御功能以及情绪变化。但是具体机制尚需进一步研究。