贲门腺癌中SFRP1、DKK3基因启动子区甲基化状态的联合分析

目的研究贲门腺癌(gastric cardia adenocarcinoma,GCA)中Wnt通路拮抗基因分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)和DKK3(Dickkopf3)基因的甲基化状态,探讨其与贲门腺癌发生的关系。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)法检测89例贲门腺癌及相应正常黏膜组织中SFRP1和DKK3基因的甲基化状态,并分析与临床病理参数间的关系。结果89例贲门腺癌组织中SFRP1和DKK3基因发生甲基化的分别有77例(86.5%)和16例(20.0%),而正常黏膜组织中仅有15例(13.9%)发生了SFRP1基因的甲基化,未发现有DKK3基因的甲基化现象,癌组织中两基因的甲基化率均明显高于正常黏膜组织(P0.05);SFRP1基因的高甲基化与肿瘤组织的淋巴结转移相关,而与肿瘤的浸润深度、临床分期及病理分级无关,DKK3基因的甲基化与各临床病理指标均无关(P0.05);联合分析SFRP1和DKK3基因,在贲门腺癌组织中两基因共同发生甲基化的有12例,其共同甲基化率与肿瘤的淋巴结转移及TNM分期相关(P0.05)。结论贲门腺癌中SFRP1和DKK3基因的高甲基化状态可能是引起贲门腺癌发生的分子机制之一;SFRP1、DKK3基因甲基化的联合检测对于贲门腺癌的预后评估有一定的参考价值。     

DKK3基因在心力衰竭家兔心脏中的表达改变研究

目的：通过增加家兔心脏前后负荷制作心衰模型,研究DKK3（ dickkopf 3）基因在心衰家兔心脏中表达改变,初步探讨DKK3在心力衰竭家兔中的作用。方法取20只日本大耳白兔随机分为对照组和心衰组。心衰组家兔通过刺破家兔主动脉瓣造成反流,2周后缩窄腹主动脉;对照组仅行假手术。2月后测量心脏结构及功能,行HE和PSR染色评价家兔心肌细胞大小及胶原重构,免疫组化检测DKK3的改变。结果与对照组相比,心衰组家兔射血分数显著下降,心脏重量增加,心肌细胞增大,胶原增多, DKK3含量明显减少。结论在心力衰竭时, DKK3表达降低,加深了心脏重构的程度。     

CapG在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的 利用在线生物信息学数据库,通过组织和细胞水平的实验验证CapG基因在肝癌中的表达和临床意义。方法通过分析UALCAN和GEPIA数据库,获得CapG基因在肝细胞癌患者中的mRNA转录表达水平、DNA甲基化状态和临床病理特征等;用Kaplan-Meier Plotter绘制肝细胞癌患者的生存曲线,用HPA分析CapG的蛋白水平,用Kaplan-Meier Plotter绘制肝细胞癌患者的生存曲线,用HPA分析CapG的蛋白水平。用String网站构建相应蛋白的相互作用网络,用LinkedOmics工具对CapG共表达的基因进行富集分析;此外,用免疫组化法验证CapG在肝癌组织芯片中的表达,用定量PCR法测定CapG在肝癌细胞水平的表达。结果 肝癌患者肝组织中CapG基因的mRNA表达水平和蛋白水平均明显升高(P<0.001),CapG的高mRNA表达水平与DNA甲基化状态的降低明显相关。免疫组织学和细胞水平的实验结果证实了CapG在肝细胞癌中的明显高表达(P<0.05)。String在线分析结果表明,与CapG相互作用的蛋白质参与了生物过程,包括参与肌动蛋白聚合、转录调...     

DKK3蛋白与乳腺癌的临床病理及预后

目的:探讨DKK3 (Dickkopf-3)蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义.方法:采用免疫组织化学方法检测DKK3蛋白在18例乳腺导管内乳头状瘤、14例乳腺非典型增生和103例乳腺癌中的表达,分析其与临床病理特征的关系.结果:在18例乳腺导管内乳头状瘤中,DKK3蛋白的高表达为14例,DKK3蛋白的高表达率为77.8...     

人肝细胞癌金属蛋白酶组织抑制因子-3的表达及与其基因启动子甲基化的关系

目的 探讨肝细胞癌的发生和门脉浸润机制。方法 20例肝细胞癌患者,每例在手术后分别取原发瘤、门脉瘤栓及远离肝癌之肝组织。用Western印迹法检测金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)的蛋白表达,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TIMP-3 mRNA的表达,用甲基化特异性PCR检测TIMP-3基因启动子的甲基化。结果 远离肝癌之肝组织中均可见TIMP-3蛋白和mRNA的表达,原发瘤和门脉瘤栓组织TIMP-3蛋白和mRNA表达明显降低,其中分别有5例和6例完全丢失。远离肝癌之肝组织均未发现TIMP-3启动子甲基化。原发瘤中有7例、门脉瘤栓组织中有9例出现甲基化。所有有甲基化的肝癌组织,包括原发瘤和门脉瘤栓,有13例TIMP-3 mRNA和蛋白表达完全丢失,6例表达降低。TIMP-3启动子甲基化和肝细胞癌组织学分级无关(P>0.05)。结论 肝细胞癌的发生和门脉浸润与TIMP-3基因和蛋白缺失或降低相关、而TIMP-3启动子甲基化是其基因和蛋白缺失或降低的原因。     

hPer3 基因启动子甲基化检测在慢性粒细胞白血病急变监测中的临床意义

目的: 探讨慢性粒细胞白血病(CML)急变中 hPer3 (human period 3)基因启动子甲基化检测的临床意义以及诱导 hPer3 表达对CML细胞株K562的作用。方法: 应用甲基化特异性PCR(MS-PCR)和实时荧光定量PCR检测29例CML患者骨髓 hPer3 基因启动子甲基化状态和mRNA表达,以40例缺铁性贫血(IDA)患者骨髓作为对照。将pcDNA3.1- hPer3 表达质粒经脂质体介导转染CML细胞株K562,MTT法检测生长抑制率,Annexin V/PI染色法检测细胞凋亡。结果: IDA组、CML慢性期、CML加速期和CML急变期中, hPer3 启动子甲基化阳性率(例)分别为0%(0/40)、17.65%(3/17)、66.67%(4/6)和83.33%(5/6),CML急变期和加速期甲基化阳性率均高于CML慢性期,差异显著(χ²=8.44,P＜0.01;χ²=5.03,P＜0.05)。对照组和CML慢性期、CML加速期和CML急变期中, hPer3 mRNA表达分别为75.03±18.16和5.13±2.29、0.40±0.18、0.17±0.05,两两之间差异显著(P＜0.01)。与空载体转染组相比, hPer3 转染后各时点的细胞抑制率和凋亡率均升高(P＜0.01)。结论: CML中 hPer3 启动子高甲基化导致了基因表达沉默,可能作为CML急变的监测指标。 hPer3 的过表达能抑制CML细胞株增殖,并促进其凋亡。     

p16基因启动子甲基化联合检测在肺癌早期诊断中的临床意义

目的： 检测可疑肺癌患者外周血血浆、痰液、支气管肺泡灌洗液(BALF)、胸水以及活检组织中p16基因启动子的甲基化状态, 探讨p16基因启动子的甲基化检测在肺癌早期诊断中的意义。方法: 利用甲基化特异性PCR（MSP）检测可疑肺癌患者外周血血浆、痰液、BALF、胸水以及活检组织中p16基因启动子的甲基化状态。结果: 经病理证实,67例可疑肺癌患者中42例确认为肺癌。p16基因启动子甲基化阳性率在肺癌患者的血浆、痰液、BALF、胸水和活检组织中依次为52.4%（22/42）、47.6%（20/42）、59.5%（25/42）、71.4%（10/14）和61.9%（26/42）;25例良性病变患者中除1例在血液、1例在胸水中检测到异常甲基化外,其余标本中均未检测到p16基因启动子的异常甲基化(P<0. 05)。p16基因甲基化阳性检出率与肺癌的组织类型、临床分期、病理分级以及有无淋巴结和远处转移无关(P>0.05)。结论: MSP检测肺癌患者外周血血浆、痰液、BALF、胸水以及活检组织中p16基因启动子的甲基化状态, 是一项很有潜力的肺癌早期诊断技术。     

WNT信号抑制因子DKK3基因 对结直肠癌细胞系HCT116迁移与侵袭的影响

目的分析DKK3在结直肠癌组织中的表达及对患者预后的影响,同时探索DKK3对结直肠癌细胞增殖、迁移以及侵袭能力的影响,并对机制进行一定的探索。方法在线数据库分析DKK3在结直肠癌组织中的表达及其对患者预后的影响。用RNA干扰技术,下调DKK3;用MTT检测细胞增殖,同时运用细胞小室迁移实验检测细胞迁移及侵袭能力,并通过RT-qPCR技术以及Western blot技术检测迁移相关蛋白表达。结果与正常组织相比,DKK3在结直肠癌组织中的表达显著上调并会导致患者整体预后情况变差(P0.05),干涉DKK3后细胞增殖速率明显减缓(P0.05),并且细胞迁移以及侵袭能力减弱(P0.01)。MMP2、 MMP7以及MMP9与DKK3的表达呈正相关关系(P0.001)。在敲低DKK3后,MMP2、 MMP7、 MMP9以及p-ERK的表达均显著下调(P0.01)。结论 DKK3在结直肠癌细胞系HCT116中表达上调,可能通过MAPK/ERK信号通路促进细胞增殖以及迁移能力。     

膀胱移行细胞癌中TMIP-3 CpG岛DNA甲基化的研究

目的 检测膀胱移行细胞癌中金属蛋白酶组织抑制因子3(tissue inhibitor of metalloproteinase 3,TIMP-3)CpG岛甲基化程度,探讨该基因CpG岛甲基化在该肿瘤中的作用及临床意义.方法 收集60例膀胱移行细胞癌组织标本和30例正常膀胱粘膜标本,用甲基化特异的PCR(methylmion specific PCR ,MSP)法检测TIMP-3基因CpG岛的甲基化状态.结果 膀胱移行细胞癌TIMP-3基因CpG岛的甲基化发生率为45 %(27/60).而出现甲基化的膀胱癌病例,其TIMP-3的蛋白表达水平均不高.结论 膀胱癌细胞TIMP-3基因的CpG岛甲基化发生率较高,检测其表达水平对膀胱移行细胞癌的诊断及预后判断具有一定的参考价值.     

Smad4在甲状腺乳头状癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨Smad4在甲状腺乳头状癌组织中的表达水平及其意义.方法 选取31例甲状腺乳头状癌组织作为实验组,17例甲状腺良性病变组为对照组.应用免疫组织化学方法检测两组Smad4的阳性表达率,Western blot方法检测两组Smad4的表达水平;实时荧光定量PCR方法检测两组Smad4 mRNA的表达水平.结果 甲...     

VDR在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

目的检测维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)在甲状腺乳头状癌中的表达及定位,分析VDR与CK19、HMBE-1、Galectin-3、CD56及TPO蛋白的表达相关性,探讨甲状腺乳头状癌中VDR的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学染色方法检测VDR在98例甲状腺乳头状癌及其癌旁组织中的表达及定位,同时用Western blot验证VDR在甲状腺乳头状癌和癌旁组织中的蛋白表达,应用SPSS23.0统计分析VDR与CK19、HMBE-1、Galectin-3、CD56及TPO蛋白的表达相关性。结果 VDR在甲状腺乳头状癌中表达增高,定位于细胞质, VDR的表达与Galectin-3的表达呈显著负相关,而与患者年龄、性别、肿瘤直径大小、临床分期、淋巴结转移无显著相关性(P0.01),与CK19、HMBE-1、CD56及TPO的表达无显著相关性。结论 VDR可能是甲状腺乳头状癌中Galectin-3表达的重要调节因子,VDR可作为靶向治疗的潜在生物靶点。     

LINC00665通过靶向miR-708-5p/DKK3抑制食管癌细胞的增殖及侵袭

目的 探讨LINC00665在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)组织及细胞中的表达,并探讨其异常表达对ESCC细胞增殖、侵袭能力的影响及可能的分子机制。方法 采用qRT-PCR法检测LINC00665及miR-708-5p的表达情况;采用MTS、Transwell侵袭实验检测LINC00665异常表达对ESCC细胞增殖及侵袭能力的影响。采用双荧光素酶报告基因检测LINC00665与miR-708-5p的相互作用及miR-708-5p对靶基因的调控作用。结果 ESCC组织中LINC00665表达量(3.834±2.016)明显低于癌旁正常组织(7.973±2.752)(P<0.01)。LINC00665表达与ESCC淋巴结转移、浸润深度及TNM分期密切相关(P均<0.05)。LINC00665过表达明显抑制TE13细胞的增殖及侵袭能力(P均<0.05)。LINC00665过表达降低TE13细胞中miR-708-5p的表达及报告基因的荧光素酶活性(P均<0.05);miR-708-5p mimics可降...     

三叶因子3在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

目的 探讨甲状腺乳头状癌（PTC）患者血清与组织中三叶因子3(TFF3)的表达水平及意义。方法 收集甲状腺肿瘤患者153例,其中乳头状癌组66例、腺瘤组51例、乳头状增生组36例,正常组153例（来源于每例标本的正常甲状腺组织）。16例正常人血清标本作为ELISA检测的
正常组。采用免疫组织化学SP法和原位杂交技术检测甲状腺手术标本中TFF3蛋白和mRNA的表达;ELISA检测血清TFF3浓度。结果 1. TFF3蛋白和mRNA均表达于细胞质,呈棕黄色颗粒。66例乳头状癌TFF3表达阳性率92.42％;36例乳头状增生阳性率47.22%;51例腺瘤阳性率31.37％;正
常组阳性率25.40%;各组TFF3 mRNA阳性率略低于其蛋白,且与蛋白表达呈正相关（P.<0.0001）;甲状腺癌组积分吸光度显著高于其他3组（P<0.01）; 2. 甲状腺乳头状癌中TFF3及mRNA高表达率与TNM分期和淋巴结转移有关（P<0.01）; 3. 甲状腺癌组血清TFF3浓度明显高于乳头
状增生组、腺瘤组和健康对照组（P<0.001）。血清TFF3浓度在甲状腺癌组织阳性组明显高于阴性组（P<0.05）。结论 甲状腺乳头状癌高表达 TFF3蛋白及mRNA,检测血清TFF3浓度可能成为诊断甲状腺乳头状癌的筛选指标。     

锯齿状病变组织中Runx3基因的甲基化及蛋白表达

目的探讨Runx3基因启动子区CpG岛甲基化状态和蛋白表达在锯齿状病变发生与癌变通路中的作用及意义。方法用TaqMan探针为基础的实时定量PCR(Methylight)法检测77例锯齿状病变(29例HP、29例SSA/P和19例TSA)、16例正常结直肠组织和14例结直肠癌中Runx3基因CpG岛甲基化状态,同时用免疫组化法检测相应组织中Runx3蛋白的表达;并分析两者之间的关系。结果 Runx3启动子CpG岛甲基化率在正常和HP、SSA/P、TSA、CRC分别为12.5%(2/16)和17.2%(5/29)、51.7%(15/29)、63.2%(12/19)和78.6%(11/14)。Runx3蛋白阳性表达率在正常和HP、SSA/P、TSA、CRC分别为81.3%(13/16)和72.2%(21/29)、48.3%(14/29)、31.6%(6/19)、21.4%(3/14)。SSA/P、TSA和CRC 3组中Runx3甲基化与Runx3蛋白表达结果具有相关性(P0.05),且为负相关。结论 Runx3基因启动子区域甲基化是诱导Runx3蛋白表达下调或缺失的主要原因,在锯齿状病变尤其是锯齿状腺瘤的发生及癌变通路中起重要作用。     

食管鳞癌分泌素-3A1基因启动子甲基化异常

[目的]研究具有抗癌活性的细胞因子分泌素-3A1基因启动子超甲基化所至该基因表达抑制在我国食管鳞癌发生中的作用。[方法] 用RT-PCR 方法检测分泌素-3A1基因在12个食管鳞癌细胞系的表达,并用甲基化特异PCR技术（methylation specific PCR, MSP）检测上述细胞系及37例来自我国河南的原发性食管鳞癌标本分泌素-3A1基因启动子甲基化状态,通过5-aza-dc处理使培养细胞去甲基化,RT-PCR技术检测处理后该基因在Kyse30的重新表达。[结果] 该基因仅在Kyse410、Kyes520和TE8等3个细胞系有表达,5-aza-dc处理可使Kyse30重新表达分泌素-3A1。此外,在18/37（48%）例原发性食管鳞癌细胞有分泌素-3A1基因启动子区域的超甲基化。[结论] 启动子超甲基化造成分泌素-3A1基因在上述食管鳞癌细胞系表达抑制,原发性食管鳞癌细胞分泌素-3A1基因启动子超甲基化提示该基因表达抑制可能与食管鳞癌发生有关。     

肝细胞癌抗原587基因甲基化调节HCA587-TAF9互作介导肝细胞癌的侵袭和迁移

目的：研究肝细胞癌抗原587（HCA587）在肝细胞癌（HCC）组织中的表达和启动子区甲基化状态,探 讨HCA587对肝细胞癌细胞迁移和侵袭的调节机制。方法：纳入肝细胞癌肿瘤组织114 例,分为HCC组和癌旁 非癌组织（NT）组。荧光定量PCR 检测HCA587的mRNA表达量;免疫组织化学和免疫印迹检测HCC组和NT 组组织中HCA587的蛋白表达。基于甲基化敏感酶和甲基化依赖酶酶切,并结合荧光定量PCR 方法分析肝细胞 癌组织中HCA587基因启动子区甲基化状态。构建重组HCA587过表达质粒（pcDNA3.1-HCA587）,培养人肝 细胞癌细胞系BEL-7404,转染pcDNA3.1-HCA587 或者使用甲基化抑制剂5-Azacytidin 处理细胞。细胞分为对照 组、5-Azacytidin 组、pcDNA3.1-HCA587 组和pcDNA3.1-HCA587 空载体（EV） 组。免疫沉淀法分析HCA587 与TATA 盒结合蛋白相关因子9（TAF9）的结合,Transwell 小室检测细胞的迁移和侵袭能力。结果： 与癌旁非 癌组织组比,HCC组的HCA587在mRNA和蛋白水平均上调。免疫组织化学证实HCC组组织中HCA587阳性表 达。HCC组中HCA587的启动子区CpG 岛甲基化水平降低。体外实验结果显示,5-Azacytidin 促进BEL-7404 中 HCA587的表达、HCA587与TAF9的结合、BEL-7404 细胞的迁移和侵袭能力,但抑制HCA587甲基化水平;另外, HCA587过表达增强BEL-7404 细胞的迁移和侵袭能力。结论：HCA587高表达或抑制其启动子区甲基化可以促进 HCA587与TAF9的结合及导致肝细胞癌细胞的迁移和侵袭。     

改进的甲基化特异PCR法及在抑癌基因p16检测中的应用

目的　介绍一种 Ｃｐ Ｇ 岛甲基化分析方法,即甲基化特异的 Ｐ Ｃ Ｒ（ ｍ ｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｏｌｙｍ ｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ , Ｍ Ｓ Ｐ） 法以及对该法的改进。方法　用亚硫酸氢盐修饰被测 Ｄ Ｎ Ａ 后,再进行甲基化与非甲基化特异的 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增,并对 Ｍ Ｓ Ｐ 法进行改进。应用该法分析了颌面部鳞癌中ｐ１６ 基因５′ Ｃｐ Ｇ 岛甲基化状态。结果　发现一些颌面部鳞癌组织中有ｐ１６ 基因５′ Ｃｐ Ｇ 岛的甲基化。采用加热变性代替强碱变性,用透析法脱盐,以及用限制酶 Ｔａｑ Ⅰ取代 Ｂｓｔ Ｕ Ｉ来判断甲基化与非甲基化的扩增片段等均取得了良好的效果。结论　 Ｍ Ｓ Ｐ 法是一种较为简便、灵敏和具特异性的甲基化检测方法,改进后该方法更加简便可行。     

RUNX3基因启动子甲基化与胃癌关系的meta分析

目的采用meta分析的方法评价RUNX3基因启动子甲基化与胃癌发生的关系。方法检索公开发表在Pubmed、EMBASE、Ovid、中国期刊全文数据库（CNKI）关于RUNX3基因启动子甲基化与胃癌发生关系的研究。应用Statall．0统计软件分析RUNX3基因启动子甲基化与胃癌发生间的关联。结果共有19项研究纳入分析．meta分析结果显示：胃癌患者癌组织中RUNX3基因启动子甲基化发生率为P=55％（95％CI：45％～66％）：胃癌患者远癌正常胃组织中RUNX3基因启动子甲基化发生率为P=18％（95％CI：7％～29％）。与远癌正常胃组织相比,胃癌组织中RUNX3基因启动子甲基化发生优势比OR=7．85（95％CI：5．81～10．61）。结论胃癌患者癌组织中RUNX3基因启动子甲基化发生率明显高于远癌正常胃组织,RUNX3基因启动子甲基化可能与胃癌的发生密切相关。     

microRNA let-7a-3基因甲基化与糖尿病肾病的关系

目的探讨微RNAlet-7a-3基因启动子甲基化与糖尿病肾病的关系。方法采用生物信息学方法预测let-7a-3基因启动子区域甲基化位点,采用real-time PCR及甲基化特异性PCR检测20例糖尿病肾病(DN)患者、20例糖尿病患者(DM)以及20例正常对照(CON)的let-7a-3表达水平及启动子区域甲基化水平。结果 let-7a-3在DN组呈低表达。同时,DN组的平均甲基化率为96.2%±6.2%,DM组的平均甲基化率为76.6%±18.9%,正常组的平均甲基化率为63.2%±28.4%。DN组的平均甲基化水平较DM组和正常组显著增高(P0.01)。结论 let-7a-3启动子区域高甲基化可能是糖尿病肾病患者let-7a-3低表达的一个重要因素,并参与调控糖尿病肾病的发生与发展。     

肾细胞癌RASSF1A基因启动子区甲基化状况与表达水平研究

目的检测19例肾细胞癌患者癌组织及癌旁组织Ras相关区域家族蛋白1A（RASSFlA）基因启动子区甲基化情况并检测其mRNA表达水平，探索两者之间的联系。方法收集肾细胞癌患者癌组织及相应癌旁组织19份，分别提取其基因组DNA，以甲基化特异性PCR（Methylation special PCR，MSP）法检测RASSFlA基因启动子区甲基化情况。并以QPCR法检测了RASSFlA基因的mRNA表达水平。结果19例中有lO例肾细胞癌患者癌组织存在高甲基化，mRNA表达水平表达降低，二者之间存在显著负相关性（r=-0．8734，P〈0．01）。结论肾细胞癌中RASSFlA基因启动子区存在高甲基化，并抑制该基因的表达。