TTV酶联免疫方法的建立及其初步应用

目的 建立检测TTV的酶免疫技术,了解不同型肝炎患者血清中抗－TTV抗体的分布情况,并结合TTV DNA的检测分析两者的关系。方法 以原核表达的TTV ORF1蛋白为抗原建立检测抗－TTV的酶联免疫吸附试验（ELISA）方法,采用该方法检测不同肝炎患者中抗－TTV抗体;在套式聚合酶链反应（PCR）方法检测血清标本中TTV DNA。结果 所建立的检测TTV的ELISA方法具有较好的特异性,不同别肝炎患者中抗－TTV抗体阳性率分别为：甲型肝炎患者10.5%（4／38）,乙型肝炎患者12.5%（16／128）,丙型肝炎患者8.3%(7/84),丁型肝炎患者7.7%(30/93),健康人群1.3%(1/78)。统计学分析表明,非甲－庚型肝炎患者抗－TTV阳性率显著高于其他型肝炎患者（P＜0.01）,而正常人群则显著低于肝炎患者（P＜0.05）。抗－TTV阳性率与TTV DNA阳性率存在相关性（P＜0.05）。结论 在不同型肝炎患者中均可检出抗-TTV抗体,但以非甲－庚型肝炎患者阳性率高;TTV抗体可与基因同时存在于患者血清中,抗－TTV抗体可能类似抗－HCV, 是一传染性标志。     

麻疹IgM抗体行定量酶联免疫吸附试验检测应用效果分析

目的探讨对麻疹患者采用定量酶联免疫吸附试验测定IgM抗体的临床价值。方法回顾性分析在我院接种麻疹疫苗的100例儿童的临床资料,分别采用定量酶联免疫吸附试验和中和抗体试验测定血清IgM抗体水平,比较两者的符合率;同时统计ELISA与NT诊断的耗时、费用和阳性率。结果浓度≥200 IU/L样品ELISA检测与NT的符合率明显高于200 IU/L样品,其差异有统计学意义(P0.05)。两种检查手段阳性率无明显差异(P0.05),但ELISA法的耗时和费用明显低于NT法其差异有统计学意义(P0.05)。结论定量酶联免疫吸附试验在检测麻疹Ig M抗体时具有很高的准确性,且耗时和费用均较低,值得临床推广。     

用单克隆抗体酶联免疫法检测临床标本中单纯疱疹病毒抗原

本文报告在太原市6所医院从各类感染性疾病中采取各种临床标本2067份,正常妇女阴道分泌物72份,用ELISA法快速分型检测单纯疱疹病毒抗原(HSV-Ag),总阳性率为24.5％,其中HSV-1占4.4％,HSV-2占20.1％;正常对照总阳性率为7.0％,HSV-1占1.4％,HSV-2占5.6％。HSV-Ag阳性率和型分布因感染部位而不同:肺部感染以HSV-1居多,生殖器疱疹、疱疹性脑炎、宫颈癌和胎儿畸型均以HSV-2为主。     

Colgalt2-酶联免疫试剂盒的制备

目的 利用N末端Colgalt2多克隆抗体和C末端Colgalt2多克隆抗体,制备Colgalt2双抗体夹心酶联免疫试剂盒.方法 体外扩增Colgalt2的N-末端编码序列,构建其原核表达质粒,诱导纯化Colgalt2重组蛋白.免疫大耳白兔获得抗Colgalt2 N-末端重组蛋白的多克隆抗体.以Colgalt2 N-末端重组蛋白为抗原,利用ELISA和Western Blot技术检测多克隆抗体效价和特异性.以Colgalt2 N-末端多克隆抗体包被酶标板,同时利用HRP标记的C末端Colgalt2抗体,制备Colgalt2-ElISA试剂盒.结果 我们成功克隆表达了N末端Colgalt2基因片段,制备了兔抗Colgalt2多克隆抗体,ELISA分析表明该抗体效价较高（＞1∶1 280000）,Western Blot分析显示该抗体有良好的特异性.对我们所制备的不同浓度的Colgalt2重组蛋白进行分析显示,所制备的分析试剂盒,在1.25～25 μg/ml范围内具有较好分析线性.线性相关系数约为0.98.结论 所制备的Colgalt2-ELISA分析试剂盒可以用于标本内Colgalt2蛋白检测.     

可溶性CD40酶联检测试剂盒的研制及其检测的临床意义

目的 :建立灵敏、特异和稳定的人可溶性CD4 0 (sCD4 0 )酶标检测试剂盒及探讨其检测的临床意义。方法 :采用该室制备的鼠抗人CD4 0单抗 5C11作为包被抗体 ,另一株识别不同抗原位点的单抗 3G3经生物素 (biotin)标记后作为检测抗体 ,建立双单抗夹心的人sCD4 0酶标检测方法和对各种质控参数进行优化。在此基础上测定了健康供血员、甲亢、慢性肾炎、白血病、类风湿性关节炎患者的血清、肺癌患者血清和胸水及多种多发性骨髓瘤 (MM)、淋巴瘤细胞株培养上清中sCD4 0的含量。结果 :成功地研制了人sCD4 0酶联检测试剂盒 ,其灵敏度为 15 6pg ml。该试剂盒 4℃放置 3个月 ,离散度 (CV) <± 7 9% ,回收率为 95 %～ 114 % ,提示检测方法具有良好的灵敏度、稳定性和准确性。用该试剂盒测得血清中sCD4 0含量的 95 %正常值范围 (x±s)为 10 5 0 0± 18 88pg ml,甲亢、慢性肾炎、白血病、类风湿患者的血清、肺癌患者血清和胸水中sCD4 0的含量明显高于正常对照组 (P <0 0 1)。结论 :成功地研制了检测人sCD4 0酶标检测试剂盒 ,对一些与CD4 0分子表达或信号异常的疾病患者外周血检测结果显示 ,该试剂盒在临床检测中具有潜在的应用价值     

化学发光酶免疫分析法在乙肝病毒及核心抗体定性检测中的应用分析

目的 通过对比,探讨了化学发光酶免疫分析法在乙肝病毒及核心抗体定性检测中的应用价值.方法 选取2013年5月至2015年5月在我院的疑似乙型肝炎患者80例,抽取空腹血液样本后都分别进行乙肝病毒以及核心抗体的化学发光酶免疫分析法及ELISA法检测,并对其检测结果进行分析.结果 化学发光酶免疫分析法检出乙型肝炎病毒阳性78例,检出率为97.5％;而ELISA检出乙型肝炎病毒阳性76例,检出率为95.0％,两种方法的检出率对比差异无统计学意义(P＞0.05).化学发光酶免疫分析法对于乙肝病毒核心抗体IgM与IgG的检测阳性率分别为80.0％和70.0％,而ELISA法检测两种抗体的阳性率则分别为18.8％和20.0％,化学发光酶免疫分析法对乙肝核心抗体IgM与IgG的检测阳性率明显高于ELISA法(P＜0.05).ELISA法检出HBc-IgM的最低限为0.135 IU/ml,检出HBc-IgM最低限为0.143 IU/ml;化学发光酶免疫分析法检出HBc-IgM最低限为0.032 IU/ml,检出HBc-IgG最低限为0.038 IU/ml.结论 化学发光酶免疫分析法在乙型肝炎检测中具有高的检出率,尤其对乙肝病毒的核心抗体的检测敏感度较高,值得在临床推广应用.     

前列腺特异抗原的酶联免疫分析

用本室纯化的人前列腺特异抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，经淋巴细胞杂交瘤技术，建立了４株体外稳定分泌抗人前列腺特异抗原的杂交瘤细胞株，分别命名为ＱＷ２、ＱＷ４、ＱＷ７和ＱＷ８。将杂交瘤细胞注入同系小鼠腹腔制备腹水，用ＥＬＩＳＡ方法测得腹水抗体效价为１０６，其中ＱＷ８的抗体滴度最高。ＱＷ８腹水经５０％硫酸铵沉淀后包被酶标板，建成双抗体夹心ＥＬＩＳＡ，标准曲线线性良好，灵敏度为１．０μｇ／Ｌ血清稀释曲线，回收率及批内、批间变异系数测定表明，该方法的准确性和精密度均符合质量控制要求。检测８１名５０岁以下正常男性血清，ＰＳＡ均值为１．０５±０．７３μｇ／Ｌ，１０例临床确诊为前列腺癌患者的血清ＰＡＳ均值为３６．５±２．３μｇ／Ｌ明显高于正常值。     

氯霉素磁分离酶联免疫(MEIA)检测方法的建立

目的:采用磁分离酶联免疫分析法(MEIA)建立定量检测氯霉素(CAP)的一种高灵敏度方法.方法:采用免疫竞争法,用异硫氰酸荧光素(FITC )标记抗CAP抗体,碱性磷酸酶(AP)标记CAP,以羊抗FITC抗体包被的免疫磁珠作为固相分离载体,单磷酸酚酞做显色底物,建立检测CAP的MEIA法.结果:成功建立了检测CAP的MEIA法,检测时间为40 min,检测灵敏度为0.03μg/L,线性范围为0.1～8.1μg/L,批内变异系数(CV) 3.9%-5.3%,批间CV 4.8%-8.1%,回收率为97%～101.5%,与国标方法液相色谱一串联质谱法的检测结果对比,相关系数r=0.9817.结论:检测CAP的MEIA法的灵敏度及准确率高、检测时间短,为食品中氯霉素残留的监测提供了一种新的免疫分析方法.     

酶联免疫吸附试验检测梅毒螺旋体抗体的分析性能评价

目的评价ELISA检测梅毒螺旋体（TP）抗体的分析性能,探讨未知诊断的定性实验的性能评价方法。方法参照临床实验室标准化协会（CLSI）发布的EP12-A2文件对ELISA法测定TP的临界值±20%范围的重复性进行分析,并与TP明胶凝集试验（TPPA）结果进行一致性比较。结果 ＋20%浓度临界值检测阳性率为≥95%,CV为14.8%;-20%浓度临界值检测阴性率≥95%,CV为19.6%;两种方法的一致程度百分比为99.6%,一致程度95%可信区间为98.8%~99.6%。结论 TP-ELISA法检测TP抗体的临界值±20%浓度范围之外标本,可得到可靠的检测结果。TP-ELISA法与TPPA法结果一致性好,可代替其作为TP诊断试验。     

酶联免疫技术在乙型肝炎表面抗原检测中的应用

目的 分析酶联免疫吸附法（ELISA）在乙型肝炎表面抗原（HBsAg）检测中的临床应用价值.方法 选择150例乙肝患者和50例健康体检者,分别采用ELISA法、胶体金试纸条法、电时间分辨免疫荧光法（TRFIA）检查血液样本HBsAg,比较三种检查方法检查结果的一致性.结果 三种方法在检测乙型肝炎血清标志物HBsAg结果方面具有很高的一致性.结论 酶联免疫吸附法（ELISA）是检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的有效方法,具有较高的临床应用价值,可以用于检验科的常规检查.     

溶血标本对酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎表面抗原影响的分析

目的：探讨溶血标本对酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎表面抗原结果的影响。方法对400份不同的血清标本采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的测定,其中阴性标本217份,强阳性标本95份,弱阳性标本88份;用人为方法造成溶血,对溶血标本重新测定,对2次检测结果进行比较。结果217例HBsAg阴性标本和95例HBsAg强阳性标本,非溶血标本和溶血标本血清检测结果(阴性或强阳性)全部一致,非溶血标本和溶血标本血清的HBsAg的OD值无统计学意义;88例HBsAg弱阳性标本,溶血标本血清检测出现假阳性率为7.95%(7/88),非溶血标本和溶血标本血清的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的OD值具有统计学意义。结论溶血对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阴性及乙型肝炎表面抗原(HBsAg)强阳性的标本影响不大,而对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)弱阳性标本的检验结果具有一定影响,甚至可能造成假阴性。     

化学发光酶联免疫法检测汉坦病毒IgM抗体的研究

目的建立化学发光酶联免疫分析法（CLEIA）检测肾综合征出血热（HFRS）患者血清中IgM抗体。方法以抗人IgM-μ链抗体包被黑色不透明聚乙烯板，辣根过氧化物酶标记汉坦病毒核蛋白作为检测抗原以及luminol-H2O2作为发光底物，建立CLEIA法并对CLEIA与IgM抗体捕获酶联免疫吸附法（MacELISA）进行比较。结果CLEIA与MacELISA相关系数0．97；对于51份确诊的HFRS患者急性期血清CLEIA检测敏感度100％，MacELISA为90．2％；对48份正常人血清两种方法检测特异度均为100％；CLEIA次内变异系数范围5．02％-12．7％，次间变异系数范围0．4％～7．0％，与MacELISA相当。结论化学发光酶联免疫分析法是一种更为灵敏，准确和稳定的方法，适用于检测HFRS早期患者血清中IgM抗体。     

可溶性gp130酶联检测试剂盒的研制及其运用

目的 :建立灵敏、特异、稳定和简便的人可溶性gp130 (sgp130 )酶标检测试剂盒。方法 :采用本室制备的鼠抗人gp130单抗T2作为包被单抗 ,另一株识别不同抗原位点的单抗T12经生物素 (biotin)标记后作为检测抗体 ,建立双单抗夹心的人sgp130酶标检测方法 ,并分别测定了 40例健康供血员、40例甲亢及 47例慢性肾炎患者血清中sgp130的含量。结果 :成功地研制了人sgp130酶联检测试剂盒 ,其灵敏度为 10ng/ml。该试剂盒 4℃放置 3个月 ,离散度 (CV) <± 7 6 %,回收率为95 %～ 111%,提示检测方法具有良好的灵敏度、稳定性和准确性。用该试剂盒测得的血清中sgp130含量的 95 %正常值范围为5 36 92～ 2 87 88(ng/ml) ,甲亢及慢性肾炎患者血清中sgp130的含量分别为 937 16± 2 17 5 9和 80 6 4 5± 138 4 7(ng/ml) ,明显高于正常对照者 (P <0 0 1)。结论 :建立的人sgp130酶标检测试剂盒 ,能够对血清中sgp130进行准确定量 ,可为临床gp130相关性疾病的辅助诊断、疗效估价和判断预后提供有价值的生物学参数 ,具有良好的运用前景。     

酶联免疫法（ELISA）在检测肝纤维化指标中的应用

目的 探讨酶联免疫法（ELISA）在检测血清透明质酸（HA）、Ⅲ型前胶原（PcⅢ）、Ⅳ型胶原（CIV）、层粘蛋白（LN）中的应用。方法 利用ELISA与放射免疫分析法（RIA）分别检测116例慢性肝炎组、215例正常组和36例肝硬化组的血清HA、PCⅢ、CIV、LN，比较二者的优缺点。结果 两种方法结果无差异（p〉0．05）。结论 ELISA法准确、简便和安全，可代替RIA法。     

检测肾综合征出血热循环免疫复合物的酶联免疫测定（ELISA）捕捉法的建立及初步应用

以肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）患者血清中提取的γ球蛋白与ＨＦＲＳ病毒抗原形成的免疫复合物（ＩＣ）为模型，抗人μ链和γ链单克隆抗体（ＭＡｂ）为包被抗体，辣根过氧化物酶标记的抗－ＨＦＲＳ病毒组特异性ＭＡｂ为指示抗体，建立了检测ＨＦＲＳ特异性循环ＩＣ（包括ＩｇＭ型和ＩｇＧ型）的ＥＬＩＳＡ捕捉法，并初步用于ＨＦＲＳ急性期患者血清标本的检测。结果表明该法特异，敏感，简便，可用于ＨＦＲＳ发病机理及免疫功能的研究。     

石杉碱甲快速检测酶联免疫试剂盒的制备

目的:制备并鉴定石杉碱甲单克隆抗体,研制石杉碱甲间接竞争酶联免疫试剂盒。方法:以石杉碱甲人工抗原免疫BALB/c小鼠获得单克隆抗体,采用酶联免疫吸附法制备石杉碱甲试剂盒,对试剂盒各项指标进行评价。结果:试剂盒工作范围为5~2 500 ng/ml,检测限为6.242 ng/ml,与多种生物碱均无交叉反应,试剂盒可在4℃或-20℃下稳定贮存半年以上,石杉碱甲片回收率在94.2%~108.6%之间,变异系数在2.3%~4.8%之间。结论:石杉碱甲ELISA试剂盒快速、灵敏、稳定,可用于石杉碱甲的含量测定。     

以生物素化酶免疫试验检测乙型肝炎e系统

本文以生物素化酶免疫试验(BA-ELISA)与常规ELISA对比检测乙型肝炎e系统。本法HBeAg检出相对敏感度为常规ELISA法的2倍;其HBeAg检出阳性率亦非常显著高于常规ELISA(P<0.01);两法检测HBV·DNA的一致性以及与Abbott试剂的符合率本法均优于常规ELISA。     

血清肝纤维化指标酶联免疫分析实验和增强化学发光免疫分析系统检测的评价

目的 评价增强化学发光免疫分析系统(Enhanced Chemiluminescence Immunoassay, ECLIA)与酶联免疫吸附试验(ELISA),测定血清透明质酸(HA)、层黏蛋白含量(LN)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)和Ⅲ型前胶原(PCⅢ)方法与患者肝纤维化程度的相关性.方法 以患者肝穿病理结果为金标准,分别用ECLIA和ELISA法检测253例患者的4项血清纤维化指标,并分别与病理结果进行比较.结果 两种方法的检测结果均能反映患者从肝炎到肝硬化的肝纤维化逐渐加重的趋势.但与ELISA法比较,ECLIA方法检测的结果与病理结果的相关性较好.结论 ECLIA系统检测血清肝纤维化四项指标,可以更好的反应肝硬化的发展程度.     

电化学发光免疫分析法和酶联免疫吸附法测HBsAb效果评价

用电化学发光免疫分析法(ECLIA)和ELISA分别测定不同浓度乙肝表面抗体(HBsAb),并对结果进行分析比较.结果表明: ECLIA法测HBsAb的批内CV: 高值为0.95%, 中值为1.13%, 低值为2.63%, 批间CV: 高值为4.03%, 中值为4.93%, 低值为7.34%, 灵敏度为4IU/L; ELISA法测HBsAb的批内CV: 高值为5.76%, 中值为12.8%,低值为15.9%,批间CV: 高值为10.1%, 中值为19.6%, 低值为25.2%, 灵敏度为19IU/L.5种用ELISA法筛选的165例标本, 除3例ECLIA法HBsAb阳性, ELISA法HBsAb阴性, 不符合外, 其他162例两种方法结果一致.总之,用ECLIA测定HBsAb的各技术参数优于ELISA法.     

酶联免疫吸附试验检测肾综合征出血热病毒抗原最佳条件探讨

本试验表明:以McAb为包被抗体,HRP-SPA为酶标结合物可以将非特异性反应降低接近于零,以患者血清为第二抗体可提变试验敏感性,以OPD或TMB为底物,每步作用60分钟或40分钟、每孔加样0.1ml或0.05ml,结果无明显区别。