检测Asia I型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析法的建立及应用

目的:建立一种快速、简便的检测AsiaⅠ型口蹄疫病毒(FMDV)的胶体金免疫层析法(GICA)。方法:采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,用其标记纯化的AsiaⅠ型口蹄疫抗体后包被在玻璃纤维素膜上,另外将纯化的AsiaI型口蹄疫抗体和纯化的羊抗豚鼠抗体分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测带与质控带。玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜按顺序组装成胶体金快速诊断试纸条,通过系列实验验证其灵敏度、特异性、重复性及稳定性。结果:研制的AsiaⅠ型口蹄疫快速检测试纸条对AsiaⅠ型口蹄疫病毒的检测灵敏度为0.116mg/L,对阳性样品进行重复性试验3次检测结果完全相同。交叉反应证实该方法与其他血清型口蹄疫抗原和猪水疱病抗原(SVD)无交叉反应。检测田间样品,GICA与反向间接血凝的定型的符合率为96.87%。稳定性实验证实试纸条可保存12个月。结论:建立的GICA是一种快速、灵敏、特异的FMD抗原检测方法,对基层现场具有广泛应用价值。     

胶体金免疫层析法检测血清癌胚抗原

建立一种快速、简易的检测血清中癌胚抗原(CEA)的胶体金免疫层析法(GICA)。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记抗CEA单克隆抗体4A3。将单克隆抗体3B5划线包被于硝酸纤维素膜上，制成免疫层析检测试纸条。血清中CEA与试纸条上胶体金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动，与膜上的包被抗体结合形成肉眼可见的红色线条。用GICA与ELISA试剂盒对比检测了637份血清标本，其灵敏度为96．69％，特异性为99．38％，两法符合率为98．74％。GICA检测血清中的CEA特异性强、灵敏度高、简便快速，无需特殊仪器设备，有广泛应用价值。     

人心肌肌钙蛋白Ⅰ胶体金免疫层析试纸条的研制

目的建立一种简便实用胶体金免疫层析检测方法．用于人心肌肌钙蛋白I（cTnI）的快速检测。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,以鼠源抗cTnI单克隆抗体进行胶体金标记,以兔源抗cTnI多克隆抗体固定于硝酸纤维素膜作为捕获抗体,采用免疫层析技术制备快速检测cThI胶体金免疫层析检测试纸条。并与国外生产的胶体金试剂盒作对比。结果该试纸条检测范围质量浓度为5ng／mL～1μg／mL;灵敏度质量浓度为5ng／mL：特异性：与肌红蛋白、肌酸磷酸激酶同工酶、cTnT、cTnC无交叉反应：与国外胶体金试纸条检测结果比较阳性符合率为96．4％,阴性符合率为100．0％。结论成功建立cTnI胶体金免疫层析检测方法,该方法灵敏度高,特异性强,检测速度快,适于急性心肌梗死的早期诊断及科研工作需要．     

抗人血红蛋白胶体金免疫层析试纸条的研制

目的研制用胶体金免疫层析法定性检测人体粪便中血红蛋白(Hb)的试纸条。方法试纸条的玻璃纤维膜上包被胶体金标记的小鼠抗人Hb SPR-5单克隆抗体,硝酸纤维素膜的检测线(T)与质控线(C)处分别包被小鼠抗人Hb SP-5单克隆抗体和山羊抗小鼠IgG,通过双抗体夹心技术和免疫层析作用,使阳性样本在T线和C线处均显色,而阴性样本只在C线显色。结果制备的试纸条对人Hb的检测下限为21 ng/mL,与鸡、兔、羊、猪、牛这5种动物血样不发生交叉反应。结论制备的检测试纸条能明显提高人体粪便潜血的检出率并避免假阳性结果。     

早期诊断心肌损伤肌球蛋白胶体金免疫层析法研究

目的建立一种简便、快速、准确检测人心肌损伤的胶体金免疫层析法（GICA）。方法制备胶体金标记抗Myosin多肽抗体，抗Myosin单克隆抗体，结合垫和样品垫的处理，组装免疫层析试纸条。检测患者血清中Myosin，进行敏感性和特异性评定。结果测试条灵敏度可达5ng／mL。检测30例急性心肌梗塞（AMI）患者血清Myosin水平，并与Roche肌钙蛋白胶体金免疫层析试剂条比较，符合率达84.2％。结论本方法特异性强、灵敏度高、简便快速、可用于急性心肌损伤的早期诊断。     

免疫层析法同时检测孕妇TORCH—IgM抗体的研究

目的建立一种免疫层析法用于同时检测孕妇血清中TORCH—IgM抗体。方法用胶体金标记羊抗人IgM（斗链）抗体，将巨细胞病毒（CMV）、风疹病毒（RV）、弓形体（Tox）、单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-Ⅱ）四种重组抗原同时包被在硝酸纤维膜上，研制出同时检测TORCH—IgM抗体免疫层析试纸条。结果自制的免疫层析法与ELISA法对比检测阴阳性血清标本，各单项指标抗-CMV—IgM、抗-RV—IgM、抗-Tox—IgM、抗-HSV-Ⅱ-IgM阳性符合率分别为85．7％、100％、100％、100％，两法总符合率分别为97．9％、100％、100％、100％。结论本方法操作简便，显示结果直观，并且特异、稳定、快速、重复性好，可用于孕妇优生优育检测。     

柯萨奇病毒IgM抗体胶体金免疫层析快速诊断试纸条的研制

目的建立一种快速检测柯萨奇病毒IgM抗体的胶体金免疫层析试纸条，并优化制备中各关键步骤的实验条件。方法以柠檬酸三钠还原法制备20nm的胶体金溶液，标记羊抗人IgM，制备免疫胶体金复合物，组装胶体金免疫层析快速诊断试纸条。结果用柠檬酸还原法制备的20nm胶体金溶液呈亮红色。胶体金标记羊抗人IgM最低稳定量是1μg/ml，最适稳定量为1．5μg/ml。最适pH为8．2。血清标本检测结果与进口ELISA试剂盒比较差异无统计学意义。结论胶体金免疫层析试纸条制备质量不但与抗原抗体的质量、层析材料的选择、胶体金的制备与标记等因素密切相关，而且缓冲系统、辅助添加剂的选择与优化也非常重要。     

基于荧光纳米粒子的新型冠状病毒核衣壳蛋白免疫层析快速检测试剂的 研制

目的：建立新型冠状病毒(SARS-CoV-2)抗原快速检测试剂的制备方法，并对检测试剂的性能指标进行评价。方法：以羧基荧光纳米粒子标记的羊抗SARS-CoV-2核衣壳蛋白(NP)多克隆抗体及鸡IgY为标记抗体，硝酸纤维素膜上分别包被鼠抗N蛋白单克隆抗体和羊抗鸡IgY抗体作为检测线和质控线制备免疫荧光试纸条，对试剂最低检出限、交叉反应性、重复性、临床诊断灵敏度和特异性进行性能评价。结果：检测N全长重组蛋白及热灭活培养物的最低检出限分别为13.8pg/ml和1.6×10~2TCID₅₀/ml；测试16种常见呼吸道病原体高浓度样本均无交叉反应；高、低两个浓度参考品变异系数(CV)分别为7.68%和4.98%。临床鼻咽拭子样本及健康人群鼻拭子样本测试，诊断灵敏度为86.36%(19/22)，特异度为99.16%(355/358)，总符合率为98.42%(374/380)；一致性检验Kappa值为0.8553(P<0.05)。结论：SARS-CoV-2荧光抗原检测试剂检测灵敏度和特异性高，检测速度快，操作便携，可作为现有核酸检测法的补充手段，用于新型冠状病毒的早期筛查...     

人心肌肌钙蛋白T胶体金免疫层析法的建立

目的 建立一种简便,快速,准确检测人心肌肌钙蛋白Ｔ（ｃＴｎＴ）的胶体金免疫层析法（ＧＩＣＡ）。方法 制备的胶体金标记抗ｃＴｎＴ单克隆抗体３Ｆ７,生物素标记另一株抗体２Ｈ８,链霉亲和素结合于硝酸纤维素膜上,制成免疫层析试纸条,血清中ｃＴｎＴ与测试条两种抗体结合后,沿硝酸纤维素膜移动,与链霉亲和素交联形成肉眼可见的红色线条。结果 测试条灵敏度可达０．５ｎｇ／ｍｌ。检测３０例急性心肌梗塞（ＡＭＩ）患者血     

CA242荧光免疫层析定量检测试剂的建立

目的为临床研制一种操作简易,灵敏度高的荧光免疫层析试纸条,用于定量检测CA242。方法采用双抗体夹心法和荧光免疫层析技术,将标记抗体L1与荧光微球结合于聚酯膜结合垫上,检测抗体C包被在硝酸纤维素膜上作为检测线(T),另将质控抗体Q1(羊抗鼠IgG)包被在相互平行的硝酸纤维素膜上作为质控线(C),过量的鼠源标记的荧光微球在质控线处聚集产生质控荧光信号,待测样中的CA242在T处形成荧光微球抗体-抗原-抗体的夹心复合物M2并产生荧光信号,通过荧光检测仪计算出定量结果。结果试纸条检测CA242灵敏度最低可达0.52kU/L,与CEA、CA125无交叉反应,批内CV为3.74%,批间CV为6.34%。与TrFIA方法比较相关性较好,R^2=0.9694;同一批试剂4℃放置6个月后,用100kU/L浓度的标准品进行测试,结果显示荧光计数CV为2.43%。结论该荧光免疫层析试纸条,可以提供较高的灵敏度和特异性,操作简单,能适合临床工作的需要。     

基于直方图均衡化的伽马校正和K-means聚类的舌象苔质分离方法

目的舌苔、舌质分离对后续肿瘤患者舌象的客观化辨证具有重要的意义。常用的算法是基于颜色空间通道舌图像的K-means聚类算法。CIELAB颜色空间的a*通道舌图像相较于其他颜色空间通道的舌图像分割结果稳定,常用于后续的分割。对于部分舌图像,a*通道舌图像的舌苔、舌质虽然具有一定的区分度,但二者的区分度并不是十分明显,影响后续的分割结果。因此,本文提出一种基于直方图均衡化的伽马校正和K-means聚类的舌苔、舌质分离方法。方法采用200幅肿瘤患者的舌图像作为实验样本。首先将舌图像从RGB颜色空间转换到CIELAB颜色空间,对a*通道舌图像进行直方图均衡化增强以及伽马校正,然后利用K-means聚类方法对增强后的舌图像舌苔、舌质分离,得到直方图均衡化以及伽马校正后的a*通道舌图像和分割后的舌苔、舌质图像。为了验证算法的可行性,请5位专业中医医生对200例肿瘤患者的舌图像舌苔、舌质分割效果进行辨析。结果进行直方图均衡化以及伽马校正后的a*通道舌图像舌苔、舌质分割结果明显强于未经处理的a*通道舌图像分割结果。经辨析,分割合格率为97%。结论该方法可以很好地实现舌苔、舌质分离,具有一定的应用价值。     

单侧膝内翻型膝骨关节炎患者足底压力 分布特征研究

目的对比分析单侧膝内翻型膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)患者和健康人在步态周期中的足底压力分布特征的差异,为KOA患者的康复治疗评估提供量化参考。方法利用Footscan足底压力测试系统对40名单侧膝内翻型KOA患者(Kellgren-Lawrence评分符合Ⅰ～Ⅲ级KOA,左右膝各20人)及20名健康人自然行走时的步态进行测试,采集受试者足底各区域的压力峰值、受力时间百分比、冲量,及单足支撑期参数和足轴角等参数,并进行对比分析。结果对于足中部区域所受冲量,左KOA患者(左足98. 57 N·s±38. 58 N·s)和右KOA患者(右足65. 11 N·s±32. 52 N·s)均比健康人(左足45. 53 N·s±12. 69 N·s,右足39. 58 N·s±15. 74 N·s)大60%以上(P<0. 05);患者第1趾区域压力峰值比健康人减小40%以上(P<0. 001);患者足跟内外侧压力峰值比健康人减小27%以上(P<0. 001)。与健康人相比,患者足轴角、足底各区域受力时间百分比、整足支撑阶段时间百分比均增大(P<0. 05),足跟着地阶段时间百分比和前足离地阶段时间百分比减小(P<0. 05)。结论单侧膝内翻型膝骨关节炎患者与健康人相比足底压力分布特征有显著差异,足轴角明显增大,整足支撑期阶段时间延长,第1趾和足跟内外侧压力峰值及足中部所受冲量差异尤为显著,这些指标可为KOA患者的康复疗效评估提供量化参考。     

液态金属柔性热敷实验研究及仿真分析

目的利用液态金属和导热硅橡胶制备柔性电热膜进行相关实验,探究其对人体肘关节皮肤加热效果。利用计算机仿真方法对简化模型进行数值模拟,分析其加热过程中温度场,为基于液态金属导线的热敷临床应用提供实验依据。方法采用3D打印和模板方法制备含硅橡胶管的柔性弹性膜,并通过管内灌注镓铟锡合金形成液态电阻加热丝,将制备的液态金属柔性膜贴敷肘关节,实验研究不同加热功率下热敷性能,最后利用数值模拟方法分析液态金属热敷过程中机体温度变化规律。结果液态金属柔性膜具有显著的加热效果,在加热功率2.4W并持续900s后,肘关节表皮温度达到37.6℃;而当加热功率5.4W并持续700s后,表皮温度高达42.8℃。结论本文提出的可拉伸柔性液态金属电热膜可对各种弯曲状态下肘部实施热敷,通过改善电热膜内层热导率可显著提升其传热性能,为人体表皮热敷提供了新思路。     

痉挛型脑瘫儿童动态足底压力分布特征研究

目的量化分析痉挛型脑瘫儿童足底压力分布特征,为临床诊断提供参考。方法选取12名GMFCSⅠ级或Ⅱ级的痉挛型脑瘫儿童和16名正常儿童作为研究对象,应用0. 5 m足底压力分布测试系统(Rsscan International@,比利时)对受试者进行自然行走过程的步态测试,采用独立样本t检验和配对t检验分别对脑瘫儿童和正常儿童及脑瘫儿童患侧、健侧步态参数的差异性进行检验。结果痉挛型脑瘫儿童足跟着地期、足后部所受冲量百分比、足中部和足跟中部压强峰值、第一趾骨和第一跖骨单位时间负荷率显著小于健康儿童(P<0. 001、P=0. 029、P=0. 035、P=0. 027、P=0. 017、P=0. 026),而全足支撑期、足中部所受冲量百分比、足弓指数、足底第三到第五跖骨和足中部所受冲量显著大于健康儿童(P=0. 041、P=0. 031、P=0. 034、P=0. 024、P=0. 007、P=0. 045、P=0. 046);痉挛型脑瘫儿童受累侧和非受累侧足底压力分布参数的差异无统计学意义。结论痉挛型脑瘫儿童行走过程中足底压力特征发生明显改变,并且非受累侧存在代偿作用。     

数字病理扫描在颈动脉粥样硬化斑块组织学研究中的应用

目的颈动脉粥样硬化斑块的形成是脑血管病变的独立危险因素之一。对颈动脉内膜剥脱术(carotid endarterectomy,CEA)斑块进行充分的组织学判读和研究,将有助于全面把握CEA斑块的组织学表现,进而推进临床辅助诊断。方法本文我们将运用数字病理扫描仪对CEA斑块的切片经H&E染色后进行扫描,介绍数字病理扫描在CEA斑块组织学研究中的应用。结果经数字病理扫描所得的图片,有助于全面掌握和保存CEA斑块组织切片的全层面信息;在软件的帮助下有助于非常方便地测量斑块内各成分的大小;有助于精确评估斑块的狭窄程度。结论综上,数字病理成像应用于CEA斑块,结合MRI,有助于高效且准确地判读斑块组成和预测斑块稳定性,亦有助于人工智能的训练。     

辅助骨盆骨折复位的弹性牵引装置实验研究

目的提出弹性牵引理论,即通过下肢弹性牵引装置平衡骨盆周围主要肌肉的阻力,利用弹性牵引装置中弹性体在牵引过程中产生的弹性形变提升医生复位操作过程中的灵活性,以此解决现有骨折复位机器人无法兼顾大负载与操作灵活性要求,并在搭建的骨盆骨折复位过程中肌肉约束力模拟平台上进行重复复位实验,以探究弹性牵引对骨盆骨折复位力及操作灵活性影响,为骨盆骨折复位手术机器人开发提供实验依据。方法基于肌肉弹性体简化条件,搭建了模拟骨盆骨折复位过程中肌肉约束力的实验平台,模拟骨盆损伤状态下肌肉在复位过程中产生的阻力,并利用该模拟平台开展验证实验,测试比较了0 kg、5 kg、10 kg不同下肢弹性牵引条件下复位实验过程中复位力曲线,并对复位操作过程中复位力进行单因素误差分析及LSD事后多重检验分析,以此分析下肢弹性牵引装置对复位力大小的影响。最后,将患侧骨盆分别沿x、y方向平移3 cm,分析弹性牵引对平移操作灵活性的影响。结果弹性牵引可以显著减小复位操作力大小。在复位维持阶段,5 kg和10 kg弹性牵引使维持复位位置所需的把持力分别减小32. 99%和60. 85%(1号把持螺钉),以及31. 06%和62. 72%(2号把持螺钉)。在操作灵活性实验中,弹性牵引辅助下操作力相较于无弹性牵引时平均减小60%以上。结论本研究初步验证了弹性牵引对辅助骨盆骨折复位的有效性,下肢弹性牵引可以有效减小复位操作过程中复位力的大小,并兼顾操作灵活性,同时有利于正确复位位置的稳定维持。     

正己烷职业暴露人群尿液中吡咯加合物及相关指标分析

目的探讨正己烷职业接触人群尿液与血液多项生物监测指标的差异,分析其内在相关性,为该人群的健康监护提供依据。方法用溶剂解吸气相色谱法测定工作场所空气中正己烷浓度;采用酶标仪比色法测定受检者尿液中吡咯加合物的水平;全自动生化分析仪进行血清主要生化指标检测;全自动血细胞分析仪进行全血细胞计数分析;采用SPSS20.0软件进行均数t检验、秩和检验、双变量Pearson相关分析。结果正已烷职业接触组和对照组车间空气中正己烷时间加权平均浓度(TWA)分别为32.6±6.9mg/m^3和<0.15mg/m^3,两组工人尿液中吡咯加合物水平为1.91±0.29nmol/mL和1.17±0.18nmol/mL,两个指标在两组中差异均有统计学意义(P<0.05)。职业接触组血清总胆红素(TBIL)、间接胆红素(IBIL)、碱性磷酸酶(ALP)、钾离子(K^+)分别是15.76±5.29μmol/L、11.87±4.14μmol/L、64.1±14.9U/L、4.34±0.33mmol/L,对照组上述4项指标分别为11.89±4.1μmol/L、8.36±3.92μmol/L、43.34±9.68U/L、4.49±0.41mmol/L,两组比较(t检验),各指标差异均有统计学意义(P<0.05)。接触组平均红细胞血红蛋白水平(MCHC)、大血小板比例(P-LCR)、单核细胞绝对值(MONO)、嗜酸性细胞绝对值(EOS)指标分别为337.3±9.37g/L、(28.93±1.17)%、(0.35±0.09)×10^9/L、(0.163±0.079)×10^9/L,与对照组指标341.7±13.58g/L、(27.45±0.99)%、(0.39±0.11)×10^9/L、(0.129±0.083)×10^9/L比较,差异均有统计学意义(t检验,P<0.05);尿液中吡咯加合物水平与TBIL、IBIL、ALP呈正相关,相关系数r分别为0.577、0.566、0.431;与MCHC呈负相关,相关系数r为-0.433;与EOS呈正相关,相关系数r为0.517。结论正己烷职业接触人群尿中吡咯加合物水平,血清TBIL、IBIL、ALP、K^+水平与非接触人群相比有显著性差异,建议作为正己烷职业接触者健康监护的监测指标;其中尿液吡咯加合物水平与血液多项功能指标存在相关关系。     

两款糖化血红蛋白床旁分析仪的正确性评价

目的借助二级参考测量程序(SRMP),探讨两款床旁(point-of-care testing,POCT)糖化血红蛋白(HbA1c)分析仪的正确性。方法依据美国临床和实验室标准化协会(CLSI)Ep9-A2选取40份临床EDTA抗凝静脉全血样本,用比对的方式,分别评价两款POCT HbA1c分析仪与SRMP间的偏倚。结果POCT-1和POCT-2相关方程分别为,Y=1.0424X-0.3144和Y=1.0054X-0.2242相关系数(r)分别为0.9959和0.9469。临床各诊断切点处,偏倚小于美国国家糖化血红蛋白标准化计划(NGSP)和美国病理家协会(CAP)的要求(±6%)。结论两款POCTHbA1c分析仪与溯源到IFCC参考方法的SRMP比对具有良好的正确性,可以满足临床使用。     

乳腺癌伴2型糖尿病的临床特征分析

目的探讨伴有2型糖尿病乳腺癌患者的临床特征,为乳腺癌个体化治疗提供依据。方法回顾性分析2015年6月至2018年12月首都医科大学附属北京世纪坛医院乳腺外科收治的年龄大于55岁的205例浸润性乳腺癌患者临床资料,对伴2型糖尿病组及同期对照组的临床特征进行分析。结果伴2型糖尿病组及对照组均为绝经后女性,伴2型糖尿病组平均年龄高于对照组。与对照组比较,伴2型糖尿病的乳腺癌患者临床分期晚,Ⅱ期患者比例高,差异有统计学意义(P<0.05)。但分子分型及组织学分级差异均无统计学意义。结论伴有2型糖尿病组的乳腺癌患者,年龄偏大,临床分期偏晚,伴2型糖尿病是乳腺癌患者预后不良的危险因素。     

血清反复冻融对肾功能指标检测结果的影响

目的研究不同存储温度下(-80℃、-20℃)血清反复冻融对肾功能相关实验室指标包括尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、肌酐(creatinine,CREA)尿酸(uric acid,UA)检测结果的影响。方法分离胶真空采血管采集30份静脉血并分离血清进行CREA、BUN、UA的检测,检测结果作为初始水平,将检测后的血清分为2份分别于-20℃、-80℃冻存,复融后再次进行CREA、BUN、UA定量检测,如此反复进行5次,将检测结果与初始水平数据进行比较分析。结果-80℃冻存的血清样本反复冻融2次及以上CREA、BUN、UA检测结果与初始水平相比差异均有统计学意义(P<0.05)。-20℃冻存的血清样本第2次复融后BUN检测值发生显著性改变(P<0.05),而CREA和UA较稳定,反复冻融5次后未出现明显的升高或降低。结论反复冻融对血清中肾功能指标检测结果会产生较大影响,低温(-80℃、-20℃)冻存时的血清样本应进行分装,冷冻的血清样本应该解冻一次以保持最佳的性能;本实验有利于指导样本的保存和复查工作,提示临床检验者和科研工作者应避免反复冻融对检测结果的影响,以保证实验结果的准确性。