SHH在人牙胚钟状期的表达

目的观察信号分子Sonichedgehog（Shh）在人牙胚钟状期的表达,探讨其在牙齿发育过程中的作用。方法采用免疫组化方法观察人牙胚钟状期中Shh的表达。结果在钟状早期,Shh在成釉细胞强阳性表达,成牙本质细胞亦可见Shh阳性信号,而牙乳头细胞、星网层和中间层细胞无明显表达。钟状晚期即硬组织形成期,Shh在成釉细胞的表达仍强于成牙本质细胞,成釉器星网层未见表达。     

转化生长因子β1和E-钙黏附分子在人牙胚发育过程中的表达及意义

目的：观察转化生长因子β1（TGF-β1）和E-钙黏附分子（E-cadherin）在人牙胚发育过程中的表达,探讨其对牙齿发育的作用及意义。方法：胎龄8~34周胎儿尸体36例,取连牙胚的下颌骨,制成4 μm厚的连续石蜡切片。采用SABC免疫组化方法,观察TGF-β1 和E-cadherin在人牙胚中的分布。结果：TGF-β1和E-cadherin在人牙胚发育的不同时期均有表达。TGF-β1在蕾状期和帽状期的牙蕾上皮、牙板、内釉细胞和外釉细胞均呈阳性表达,钟状期在内釉细胞、釉结、中间层、牙板、成釉细胞、成牙本质细胞呈强阳性表达,靠近成牙本质细胞的牙乳头细胞和牙囊呈阳性表达。E-cadherin在蕾状期和帽状期的牙蕾上皮、牙板上皮、钟状早期的成釉细胞、外釉细胞中呈阳性表达,在钟状中期成釉细胞、成牙本质细胞中呈强阳性表达,外釉上皮和靠近成牙本质细胞的牙乳头细胞中呈阳性表达,在钟状晚期接近硬组织处的成釉细胞、成牙本质细胞、上皮根鞘呈强阳性表达。结论：TGF-β1是参与牙胚细胞分化及形态发生的重要调节因子,E-cadherin与牙釉质和牙本质的发育、分泌及矿化密切相关。     

CD44在小鼠磨牙牙胚发育中的时空表达

目的：观察CD44在小鼠磨牙牙胚发育表达的时空顺序及分布,探讨CD44对牙齿发育的形态发生和细胞分化的作用及意义．方法：采用免疫组织化学方法,观察CD44在牙胚发育的蕾状期、帽状期、钟状形态发生期、分化期、分泌期、成熟期的表达．结果：在牙胚发育的蕾状期、帽状期,CD44在口腔上皮、牙板上皮、成釉器、牙乳头、牙囊呈弱阳性表达或无表达．在钟状期CD44在口腔上皮、牙板上皮强阳性表达;外釉上皮、星网状层、成牙本质细胞弱阳性表达;分泌期的成釉细胞和牙囊阳性表达．钟状分化期、分泌期、成熟期,中间层细胞CD44强阳性表达．结论：CD44参与牙齿形态发生及细胞分化,推测其在釉质矿化以及牙根和牙周组织的形成中起重要作用．     

转化生长因子β3 mRNA在小鼠磨牙牙胚发育过程中的表达

目的:探讨转化生长因子β3(TGFβ3)mRNA在小鼠磨牙牙胚发育过程中的表达及其意义。方法:制备小鼠磨牙各发育阶段标本,用原位杂交分析TGFβ3mRNA在牙胚中的表达与分布。结果:TGFβ3mRNA在小鼠磨牙牙胚不同发育阶段呈时间-空间特异性模式表达。TGFβ3mRNA在蕾状期和帽状期的上皮强表达,在牙胚发育晚期的成牙本质细胞和成釉细胞的表达随细胞分化程度而增强。结论:TGFβ3mRNA在牙形态发生过程中可能通过自分泌和旁分泌机制协同调控上皮-间充质相互作用及成牙本质细胞和成釉细胞的分化。     

RT-PCR法研究sonic hedgehog基因及其受体patched在小鼠牙胚钟状晚期的表达

目的:判断sonic hedgehog(Shh)基因及其受体patched(Ptc)是否在小鼠牙胚钟状晚期有表达.方法:用RT-PCR法研究Shh及其受体Ptc在小鼠牙胚钟状晚期的表达.设计Shh及其受体Ptc的PCR引物;选取新生鼠第1天(P1)、第3天(P3)、第7天(P7)的牙胚为研究对象,提取总RNA.两步法进行RT-PCR反应,10 g*L-1琼脂糖电泳观察.结果:出生后第1天、第3天、第7天小鼠牙胚RT-PCR产物可见Shh、 Ptc条带.结论:Shh及其受体Ptc在小鼠牙胚钟状晚期有表达.     

碱性成纤维细胞生长因子在牙发育各阶段中的表达及意义

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在牙发育各阶段中的表达,探讨其作用及意义。方法：以胎龄8～34周人胎儿牙胚、出生1～22 d乳鼠和出生6周～5个月犬牙为研究对象,采用免疫组织化学法定性观察bFGF发育各阶段的表达强度。结果：bFGF在牙发育的各个阶段均有表达。胎儿蕾状期和帽状牙蕾上皮、牙板、成釉器、内外釉上皮bFGF呈阳性表达,钟状期内釉细胞、中间层、成釉细胞、成牙本质细胞呈强阳性,牙乳头及牙囊bFGF呈阳性表达。乳牙萌出前、萌出期的生后乳鼠和生后6周犬牙,成釉细胞、成牙本质细胞、上皮根鞘、牙囊bFGF呈强阳性。犬恒乳牙替换期牙根、牙周膜及靠近牙周膜的成骨细胞bFGF呈阳性表达。结论：bFGF是牙发育的重要调控因子,参与牙胚细胞分化和形态发生、萌出及恒乳牙替换各阶段的调控。     

经典瞬时受体电位通道1在大鼠牙胚发育过程中的表达

目的研究经典瞬时受体电位通道1(TRPC1)在大鼠牙胚发育过程中的表达并探讨其意义。方法 制备大鼠牙胚发育各阶段(蕾状期E14.5、帽状期E16.5、钟状期E18.5、钟状晚期P1及牙根形成期P7)标本,进行TRPC1的免疫组化研究。结果 TRPC1在牙胚发育过程中呈动态时空表达。在蕾状期增厚的牙板上皮,帽状期和钟状早期的内釉上皮和外釉上皮,钟状晚期的成釉细胞和前成牙本质细胞及牙根形成期的成牙本质细胞和成釉细胞均可见阳性信号表达,且呈增强趋势。结论 TRPC1可能是一种新的参与调控牙胚细胞的增殖分化和牙齿发育矿化的跨膜信号转导分子。     

小鼠钟状期牙胚中Frizzled蛋白的表达

目的 观察牙胚发育钟状期时Frizzled蛋白的表达情况,探讨Wnt/Frizzled信号分子的作用及机制.方法 取胚胎17 d和19 d的胎鼠,另取生后2 d的幼鼠,分别制作下颌第1磨牙的切片,运用免疫荧光技术显示Frizzled蛋白的阳性分布部位,并在荧光显微镜下观察.结果 胚胎17 d时Frizzled蛋白在成釉器的内、外釉上皮有弱阳性分布,胚胎19 d时在前成釉细胞和前成牙本质细胞的顶端有Frizzled蛋白的阳性表达,生后2 d的标本上成釉细胞和成牙本质细胞的顶端Frizzled蛋白呈强阳性表达.结论 Wnt/Frizzled信号分子参与了成釉细胞和成牙本质细胞的分化过程的调节.     

Axin2、Wnt5a以及Shh基因在小鼠磨牙胚帽状期中的表达

目的研究Axin2、Wnt5a以及Shh基因在小鼠下颌第一磨牙发育帽状期的表达,初步探讨Wnt与Shh信号通路在牙胚发育中的作用。方法制备小鼠下颌第一磨牙胚帽状期标本,用H-E染色组织学观察磨牙胚帽状期的特点,同时用原位杂交检测Axin2、Wnt5a以及Shh基因的表达部位及强度。结果光镜下可看到磨牙胚帽状期的典型釉结节,周围牙胚间充质细胞聚集,Axin2与Shh基因主要表达于釉结节,而Wnt5a基因主要表达于牙胚间充质。结论经典和非经典的Wnt信号系统以及Shh信号系统在牙胚发育帽状期有各自的表达特点,提示它们可能在牙胚形态发生的调控起着重要的作用。     

新生大鼠成牙本质细胞及牙本质形成的光、电镜观察

目的:探讨成牙本质细胞的发育变化以及牙本质的结构发育特点.方法:取不同日龄新生大鼠的下颌切牙牙胚进行光、电镜观察.结果:成牙本质细胞由低柱状变为高柱状,并发生极化,细胞器渐增多,有分泌颗粒出现,细胞突起逐渐形成;形成的前期牙本质和牙本质在6～9 d达最厚,且胶原纤维较丰富而密集,牙本质小管多;成牙本质细胞突起贯穿前期牙本质和牙本质,并进入牙釉质中.结论:0～9 d日龄大鼠的下颌切牙牙胚正处于牙体组织的分泌形成期,是研究牙齿发育过程的很好的动物模型.     

sonic hedgehog及patched基因在角化囊肿中的表达

目的:了解Shh(Sonic hedgehog),Bmp-4,Ptc(patched)基因在角化囊肿中的表达情况,明确Shh及其相关基因在角化囊肿发病中的作用.方法:选取角化囊肿石蜡切片.将Shh,Bmp-4,Ptc分别转染与大肠杆菌XL-1-Blue,提质粒,线性化质粒,体外转录法合成地高辛标记的RNA探针,原位杂交检测角化囊肿中Shh,Bmp-4,Ptc的表达情况.结果:Shh,Bmp-4共同表达于角化囊肿上皮细胞,胞浆呈强阳性表达;Ptc表达于角化囊肿间充质细胞,胞浆表达较弱.结论:Shh,Bmp-4,Ptc在角化囊肿中都有异常表达,提示(1)角化囊肿的发生与生长发育中的上皮残余有关;(2)Shh与Ptc之间平衡的破坏是发生角化囊肿的条件之一;(3) 角化囊肿与正常生长发育相似,存在Bmp-4与Shh协同表达.     

中间层细胞增殖与凋亡在釉质形成中的作用

目的检测小鼠牙釉质形成过程中中间层细胞的增殖与凋亡的表达情况,探讨细胞增殖与凋亡在釉质形成过程中的作用。方法制备出生后1、3、5、7、9、15和17天发育阶段的BALA/C小鼠牙胚的石蜡标本,采用SP免疫组织化学技术及原位末端标记法观察中间层细胞及成釉细胞分化各阶段细胞增殖及凋亡的表达情况。结果釉质形成早期,中间层细胞、成釉细胞均呈PCNA阳性表达,且两者在同期表达强弱程度上具有一致性,随着牙冠发育的完成,PCNA的表达减弱;凋亡在分化各期的成釉细胞中皆有表达,尤其在成熟期成釉细胞中表达明显增强,中间层细胞中可散见凋亡现象。结论细胞增殖与凋亡是牙齿正常发育所必需的重要调控机制,中间层细胞与成釉细胞间的增殖与凋亡在时空表达强弱程度变化上具有一致性,具有一定"量"的变化相关性,提示中间层细胞在釉质形态的正常发育过程中起到一定的调控作用。     

中间层在成釉细胞分化及分泌期的形态学观察

目的明确中间层细胞在釉质形成过程中的形态学变化,为进一步研究其在成釉细胞分化和釉质形成中的具体作用机制提供理论依据。方法建立出生后BALB／C小鼠牙胚中间层发育HE染色的实验模型;电镜观察其超微结构的变化。结果钟状晚期细胞处于分化期,中间层为2—3层的多细胞层结构,电镜下可见少量的粗面内质网、线粒体等细胞器成分,内釉上皮呈柱状或高柱状,可见中间层与成釉细胞间的桥粒连接;釉质分泌期,中间层呈明显的单细胞结构,细胞排列紧密,与周围组织的界限清楚,成釉细胞呈高柱状,可见大量釉质的分泌,线粒体、粗面内质网、高尔基复合体等细胞器成分明显增多,细胞间的桥粒连接明显;随着釉质的不断建立,釉质分泌基本完成,中间层结构已不易辨认,此时牙齿亦部分萌出,电镜下细胞间联系疏松,细胞器成分萎缩变减少。结论中间层对成釉细胞的分化及釉质形态的正常发育起到一定的调控作用,并在釉质形成中起到了一定的物质转运及营养支持功能。     

慢性氟中毒对小鼠切牙胚内釉上皮TGF-beta1表达的影响

目的 :观察慢性氟中毒对小鼠切牙胚内釉上皮表达 TGF- beta1的影响 ,探讨TGF- beta1在氟牙症发生机制中的作用。方法 :给小鼠分别喂以含 0、5 0、1 0 0 ppm Na F的饮水 ,6周后免疫组化观察结果。结果 :图像分析显示加氟组 TGF- beta1的表达水平低于空白组。结论 :氟可能通过抑制 TGF- beta1的表达干扰内釉上皮的分化和基质分泌 ,导致氟牙症的发生。     

Sonic Hedgehog信号通路在大鼠牙髓炎中的作用

目的:观察Sonic Hedgehog(Shh)信号分子在大鼠牙髓炎中的免疫定位,探讨Shh信号通路在牙髓防御和修复中所起的作用。方法:将15只SD大鼠随机分成1d、3d和7d组,每组5只,用穿髓开放法建立大鼠牙髓炎模型,3组大鼠分别于术后1,3,7d处死,取出下颌磨牙,常规组织学处理,免疫组化方法检测Shh,Smo,Ptc,Gli1的表达,并对Shh信号通路在大鼠牙髓炎中的表达进行半定量分析,对照组为大鼠正常牙髓。结果:大鼠牙髓炎模型1,3,7dShh广泛表达于穿髓孔下方牙髓间充质细胞及远离穿髓孔的根髓细胞中,表达量随炎症的进展无显著性提高(P>0.05)。Ptc、Smo、Gli1在大鼠牙髓损伤后1d未见阳性表达,3d和7d均表达于穿髓孔下方牙髓间充质细胞中,且表达量均有显著性提高(P<0.05)。空白对照组中Shh信号通路阴性表达。结论:Shh信号通路在牙髓炎过程中表达,提示其可能被激活,参与牙髓炎症反应。     

核仁素在小鼠帽状期牙胚中的特异性表达

目的 检测核仁素在小鼠胚胎帽状期牙胚发育过程中的特异性表达,并推测其可能的生物学作用.方法 采用原位杂交和免疫组化方法分别检测核仁素mRNA和蛋白在小鼠胚胎第15天(E15)发育牙胚中的表达.核仁素和TUNEL的双重荧光染色观察核仁素与牙胚中凋亡细胞的关系.结果 核仁素mRNA和蛋白主要表达于E15牙胚中的颈环、内釉上皮及其下邻接的牙乳头部分;核仁素蛋白还存在于原发性釉结节和基底膜之中.双重荧光染色显示,核仁素的分布与原发性釉结节中凋亡细胞的位置不重合.结论 在帽状期牙胚中,核仁素mRNA与蛋白的表达并不完全一致.核仁素蛋白在基底膜中的表达提示其可能通过参与内釉上皮与牙乳头间充质的相互作用而影响牙胚的形态发生.