Caspase-3在癫痫模型大鼠海马神经细胞凋亡中作用的研究

目的对癫痫模型海马神经细胞凋亡中caspase-3的作用机制进行实验研究。方法以TUNEL法检测KA致痫大鼠海马神经细胞凋亡情况，以Western blot法检测其中eIF2α的表达变化。取模型鼠海马组织构建cDNA文库，构建caspase-3的酵母三杂交诱饵载体，进行筛库实验。结果在癫痫发作后12h TUNEL阳性神经元增加，72h达高峰；发作后24hm现eIF2α被caspase-3酶切的片段，逐渐增加至72h。制作成功cDNA文库，构建了caspase-3的酵母三杂交诱饵载体，筛库获得caspase-3的新底物Mizl。结论在癫痫大鼠海马神经细胞凋亡中eIF2α被caspase-3酶切。酵母三杂交寻找caspase-3下游底物有可行性，从癫痫大鼠海马中获得caspase-3的底物Mizl。     

癫痫持续发作对大鼠海马神经元的影响

目的 研究实验性癫痫大鼠在癫痫发作持续不同时间对海马神经元的影响。方法24只SD大鼠随机分成4组：诱发火鼠瘢痫持续状态（status cpilepticus，SE）〈10、10～30、〉30min组及正常对照组。于电镜下观察各组海马神经元超微结构变化；采用免疫组化方法检测凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达及通过流式细胞技术检测细胞凋亡情况。结果SE〈10min组海马神经元所受影响不大．SE10～30min组海马神经元具有明显凋亡特征．SE〉30min组多数海马神经元呈坏死性改变。结论大鼠SE对海马神经元损伤有凋亡和坏死两种不同形式．这与癫痫发作的持续时间密切相关。     

迷走神经刺激对癫痫大鼠行为及脑电图的影响

目的：观察颈部迷走神经干电刺激对癫痫大鼠行为及额叶、海马、杏仁核脑区放电的影响，为迷走神经刺激（Vagus Nerve Stimulation,VNS)抗痫机制研究提供理论依据。方法：利用脑立体定位手段，将电极埋入大鼠脑部双侧额叶皮质、海马和杏仁核，记录VNS前后由红藻氨酸（KA）诱发复杂部分性癫痫大鼠脑电变化并观察动物行为的改变。结果：VNS后大鼠癫痫强直－阵挛发作次数明显减少，首次发作潜伏期延长，癫痫发作平均持续时间缩短；VNS尤其对杏仁核放电有明显的抑制作用。结论：VNS能有效抑制KA诱发的复杂部分性癫痫发作，并且杏仁核可能是抑痫作用的关键核因。     

己酮可可碱预处理对癫痫发作大鼠海马损伤的影响

目的观察己酮可可碱(Ptx)预处理对癫痫发作大鼠海马损伤的影响。方法健康、成年雄性Wistar大鼠分为3组:对照组、癫痫组和Ptx预处理组。对照组腹腔注射生理盐水(127mg·kg~(-1));癫痫组和Ptx组大鼠用氯化锂-匹罗卡品(Li-Pc)诱发癫痫发作,先腹腔注射氯化锂(127mg·kg~(-1)),20h后背部皮下注射匹罗卡品(15mg·kg~(-1));Ptx组大鼠在匹罗卡品注射前30min通过腹腔给予Ptx(60mg·kg~(-1))。观察大鼠癫痫发作情况,利用Timm和Thionin染色分别观察海马苔藓纤维发芽(MSF)和神经元损伤情况。结果癫痫组大鼠在海马苔藓纤维发芽明显增多,并伴有海马神经元的损伤和脱失,Ptx预处理降低了Li-Pc诱发大鼠的癫痫发作率和癫痫发作程度,延长了其癫痫发作潜伏期,减轻了Li-Pc诱发大鼠海马的苔藓纤维出芽及神经元的损伤。结论 Ptx预处理缓解了Li-Pc诱发大鼠的癫痫发作和海马损伤,可能成为治疗癫痫的一种方法。     

电针百会和大椎穴对癫痫大鼠海马CA3和DG区ephrinA5表达的影响

目的探讨电针百会和大椎穴对颞叶癫痫大鼠海马组织中CA3和DG区ephrin A5的调控作用。方法将30只SpragueDawley(SD)大鼠随机分为对照组、癫痫组和电针+癫痫组,每组各10只。建立氯化锂―匹罗卡品颞叶癫痫大鼠模型。造模成功的大鼠电针百会和大椎穴治疗8周后,分别取3组大鼠海马组织,采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测各组大鼠海马CA3和DG区ephrin A5 m RNA水平表达变化;采用Western blotting和免疫组织化学(免疫组化)法检测各组大鼠海马CA3和DG区ephrin A5蛋白水平表达变化。结果 q RT-PCR结果显示:与对照组相比,癫痫组大鼠海马组织中ephrin A5 m RNA表达下调(P <0.05)。通过8周电针百会和大椎穴连续治疗后,ephrin A5 m RNA水平上调(P <0.05)。Western blotting结果显示:ephrin A5蛋白水平变化趋势与m RNA水平相一致。免疫组化结果显示:在CA3区,癫痫组ephrin A5蛋白水平下调;电针后ephrin A5蛋白水平上调。而在DG区与对照组相比,癫痫组和电针+癫痫组,ephrin A5蛋白水平变化不明显。结论电针百会和大椎穴的抗癫痫作用机制很可能与ephrin A5在海马CA3区中的调控机制密切相关。     

褪黑素对癫痫状态大鼠海马Caspase-3 mRNA表达和脂质过氧化的影响

目的 探讨褪黑素（melatonin,Mel）神经元保护作用的机制.方法 采用匹罗卡品（pilocarpine,PILO）诱导大鼠癫痫持续状态（status epilepticus,SE）模型,用比色法检测海马丙二醛（malondialdehyde,MDA）、还原型谷光甘肽（glutathione,GSH）水平和谷光甘肽还原酶（glutathione reductase,GR）的活力,用RT-PCR技术检测海马caspase-3 mRNA的表达.结果 PILO组大鼠SE后6h～72h,海马MDA含量明显高于对照组（P＜0.01）;海马GSH含量和GR活力均明显低于对照组（P＜0.01）,SE后7d,海马MDA含量和GR活力基本恢复正常.PILO＋Mel组大鼠,在SE后各时相点海马MDA含量均明显低于PILO组大鼠（P＜0.01）;而海马GSH含量和GR活力均显著高于PILO组大鼠（P＜0.05）.SE后6h～72h,PILO组大鼠海马caspase-3 mRNA的表达明显高于对照组（P＜0.01）和PILO＋Mel组（P＜0.01）,提示给予Mel可明显抑制SE大鼠海马caspase-3 mRNA的表达.结论 Mel发挥神经元保护作用的机制是通过提高SE大鼠海马GSH水平和GR活力,来减轻脂质过氧化损伤;并通过抑制caspase-3 mRNA的表达,来干预细胞凋亡.     

下丘脑内基因转染对大鼠颞叶癫痫海马病理变化的影响

目的 探讨下丘脑过度兴奋对于颞叶癫痫海马病理变化的影响。方法 利用仙台病毒(HVJ)-脂质体转染法在下丘脑的乳头体内转染兴奋性氨基酸受体亚基GluR2Q，研究其对于海人酸(kainic acid，KA)致痫鼠海马病理变化的影响。结果 GluR2Q能加重KA引起的海马齿状回损伤，但是对CA1及CA3区神经元损伤有一定程度的改善作用。结论 GluR2Q可以使下丘脑兴奋性增强，通过对海马齿状回的抑制解除作用促进癫痫波在海马内的传播。     

奥拉西坦治疗儿童癫痫认知功能障碍的疗效观察

目的观察奥拉西坦治疗儿童癫痫伴有认知功能障碍的临床疗效。方法选取2017-01-2019-12郑州儿童医院50例临床诊断癫痫且伴随认知功能障碍的患儿,随机分为对照组(常规抗癫痫治疗)、观察组(常规治疗的基础上给予奥拉西坦口服),统计分析2组治疗前后MMSE评分、MoCA评分变化状况、认知障碍改善效果及不良反应发生率。结果治疗前2组患儿MMSE、MoCA评分比较,差异均无统计学意义(P0.05);治疗后2组患儿MMSE、MoCA评分均优于本组治疗前,且观察组优于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。观察组总有效率为92%,高于对照组的68%,差异有统计学意义(P0.05);2组均无明显不良反应。结论奥拉西坦治疗儿童癫痫伴认知功能障碍,能更好的促进患儿认知功能的恢复,且无明显不良反应。     

下调GABA受体基因对癫痫模型大鼠海马神经细胞凋亡的影响及作用机制

目的 探讨下调GABA受体基因对癫痫模型大鼠海马神经细胞凋亡的影响及作用机制。方法 选择30只SD健康雄性大鼠,建立癫痫模型,建模成功后分为模型组、上调组、下调组各10只; 进行细胞转染建立稳定转染的GABA上调组、GABA下调组; 检测3组大鼠海马神经细胞凋亡及PI3K、AKt、mTOR、Bax、Caspase-3蛋白表达水平。结果 上调组大鼠各时间点海马神经细胞凋亡率高于模型组(P<0.05); 下调组大鼠各时间点海马神经细胞凋亡率低于模型组(P<0.05); 下调组大鼠各时间点海马神经细胞凋亡率低于上调组(P<0.05)。上调组大鼠各时间点海马神经细胞增殖率、Bcl-2、p-PI3K、p-AKt、p-mTOR蛋白表达水平均低于模型组,而Bax、Caspase-3蛋白表达水平高于模型组(P<0.05); 下调组大鼠各时间点海马神经细胞增殖率、Bcl-2、p-PI3K、p-AKt、p-mTOR蛋白表达水平均高于模型组,而Bax、Caspase-3蛋白表达水平低于模型组(P<0.05); 下调组大鼠各时间点海马神经细胞增值率、Bcl-2、p-PI3K、p-AKt、p-mTOR蛋白表达水平均高于上调组,而Bax、Caspase-3蛋白表达水平低于上调组(P<0.05)。结论 下调GABA受体基因可能是通过调节PI3K/AKt/mTOR来作用于下游凋亡靶基因,最终抑制癫痫模型大鼠海马神经细胞凋亡     

大鼠海马干细胞移植治疗颞叶癫痫的初步研究

目的 通过神经干细胞移植至癫痫鼠后与宿主细胞的整合及其对损伤宿主的修复作用，为神经干细胞移植治疗癫痫提供理论依据。方法 分离、培养新生鼠海马干细胞，移植至海人酸(KA)所致癫痫模型鼠的右侧海马内，应用Timm、Nissl、HE染色及动态脑电记录仪记录脑电图。在光镜及电镜下比较正常对照组、移植组及KA未移植组大鼠，在移植后的1周、4周、8周及24周苔状纤维发芽(MSF)、海马CA3区锥体神经元损伤情况及海马、杏仁核的脑电变化。结果 海马干细胞的移植可以显著抑制KA引起的MFS，其抑制作用从移植后第4周开始，第8周时最强，持续至第24周；同时亦明显的减轻了KA所致的CA3区锥体细胞缺失，其作用在第8周最强；KA所致CA3区锥体神经元超微结构的损伤亦得到一定程度的修复；但是，干细胞的移植并未使宿主恢复到损伤前的水平，海马干细胞移植可减少癫痫动物脑电的痫性发放，并降低其癫痫波的波幅约50％。结论 神经干细胞移植对于KA诱发癫痫鼠具有显著的修复作用，其具体作用机制还有待于进一步的研究。     

电针对癫痫模型大鼠自发性反复发作及海马CA3和DG区谷氨酸脱羧酶67表达的影响

背景由于对药物疗法不良反应的担忧,近几年人们对使用针灸治疗癫痫越来越感兴趣。尽管现已报道了不少针灸抗癫痫作用的临床证据,但其确切机制仍不清楚。目的 研究电针(EA)对癫痫大鼠自发性复发性癫痫(SRS),以及海马CA3和齿状回(DG)区中谷氨酸脱羧酶67(GAD67)表达的影响。方法 将50只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为对照组、癫痫组、假刺激组、非穴位电针组和穴位电针组,每组10只。除对照组外,其余4组均制备氯化锂—匹罗卡品颞叶癫痫大鼠模型。造模成功的大鼠采用针刺或电针穴位治疗,8周后观察自发性复发性癫痫发作的次数。分别取5组大鼠海马组织,采用荧光定量PCR和Western blotting分别检测各组大鼠海马组织中GAD67 mRNA水平和蛋白水平表达变化;采用免疫组化法检测各组大鼠海马CA3和DG区GAD67蛋白水平表达变化。结果 治疗8周后,穴位电针组与癫痫组、假刺激组、非穴位电针组比较,减少了自发性复发性癫痫发作的次数,差异有统计学意义(P<0.05)。qRT-PCR结果显示：与对照组相比,癫痫组、假刺激组、非穴位电针组和穴位电针组大鼠海马组织中GAD6...     

红藻氨酸诱导癫痫发作大鼠海马EphA5受体及其配体ephrinA3基因表达变化的研究

目的研究在红藻氨酸(Kainic acid,KA)诱导的损伤型颞叶癫痫(Mesial temporal lobe epilepsy,MTLE)的大鼠海马中,轴突导向因子EphA5受体及其配体ephrinA3基因表达的变化,探讨EphA5/ephrinA3与癫痫后海马兴奋性神经网络形成的作用和关系。方法侧脑室内微量注射KA,建立KA诱导的成年大鼠MTLE模型,用原位杂交法检测癫痫发作1d、1周、2周、3周、4周大鼠海马内EphA5/ephrinA3 mRNA的表达,定量分析表达的动态变化。结果EphA5/ephrinA3 mRNA于癫痫发作后1周,在海马齿状回颗粒细胞层和CA_3区锥体细胞层开始增强,2周达到高峰,4周恢复接近对照组水平。结论在KA所致的癫痫持续状态(Status epilepsy,SE)中,海马神经元通过增强EphA5/ephrinA3 mRNA的表达。调控MTLE大鼠海马内苔藓纤维和突触的重建,是癫痫后海马新的稳定的异常兴奋性神经网络形成的可能机制。     

伽玛刀对癫痫大鼠模型的治疗作用及机制研究

目的 研究伽玛刀照射对癫痫大鼠的放射生物学作用,探讨伽玛刀治疗癫痫的作用机制.方法 制备海人酸大鼠癫痫模型,利用自行设计的伽玛刀动物定向头架,分别应用100Gy和20Gy的伽玛射线对癫痫大鼠海马组织进行照射,观察大鼠行为学、脑电图、MRI及超微结构、脑组织氨基酸含量及GABA能神经元表达变化.结果 伽玛刀照射后大鼠癫痫发作次数明显减少.100Gy组照射后2个月MRI表现为靶区高信号,20Gy组5个月MRI未见改变.伽玛刀照射后兴奋性氨基酸含量显著低于癫痫组,GABA能神经元表达低于正常,但高于癫痫组.结论 伽玛刀照射对癫痫大鼠具有治疗作用,高剂量伽玛射线(100Gy)对致痫灶有毁损作用.低剂量伽玛射线(20Gy)通过抑制兴奋性神经元释放兴奋性氨基酸使癫痫发作减少.     

从癫痫模型大鼠海马神经元中克隆caspase 3的新底物PIASI

目的 从癫痫模型大鼠海马凋亡神经元中克隆caspase-3的新底物。方法 制作癫痫模型大鼠海马组织cDNA文库；PCR获得caspase-3的P12和P17两亚基，然后分别定向插入pBridge质粒，构建三杂交诱饵栽体；进行酵母三杂交筛库。结果 建立成功癫痫模型大鼠海马组织cDNA文库，构建了大鼠caspase-3基因的酵母三杂交诱饵栽体，并通过了caspase-3与eIF2n之间的相互作用验证，筛库获得caspase-3的新底物PIASI。结论 用酵母三杂交系统寻找caspase-3下游底物具有可行性，从癫痫模型大鼠海马的cDNA文库中筛库获得caspase-3的新底物PIASl，为进一步研究caspase-3在癫痫发作引起的海马损伤中的作用奠定了基础。     

红藻氨酸诱导癫痫大鼠前脑CX32的表达及辛醇干预的影响

目的 观察红藻氨酸(kainic acid,KA)诱导癫痫大鼠前脑缝隙连接蛋白32(connexin 32,CX32)的表达及辛醇干预的影响.方法 用免疫荧光法检测癫痫发作后各时间点大鼠皮质及海马CX32阳性细胞表达.同时观察致痫前给予辛醇干预对大鼠皮质及海马CX32阳性细胞表达的影响.结果 KA致痫组大鼠皮层及海马CX32阳性细胞在各时程明显高于正常对照组(P<0.05),并且随时程延长呈增加趋势,7d达高峰,在海马中的变化比皮层明显,但无统计学意义(P>0.05).辛醇干预组大鼠皮层及海马CX32阳性细胞在各相应时程明显低于KA致痫组(P<0.01).结论 CX32组成缝隙连接(gap junction,GJ)在癫痫的发生发展过程中起重要作用,辛醇可以减少癫痫大鼠CX32表达,降低癫痫敏感性,实现脑保护作用.     

奥卡西平对癫痫患者Hcy CRP及认知功能的影响

目的探讨奥卡西平对癫痫患者同型半胱氨酸(Hcy)、C反应蛋白(CRP)及认知功能影响。方法选取巩义市人民医院2015-01-2017-12收治的癫痫患者100例,按照随机数字表法分为观察组50例与对照组50例。对照组给予苯妥英钠治疗,观察组给予奥卡西平治疗,2组疗程均为12周。比较2组疗效,治疗前后血浆Hcy和CRP水平、MoCA评分和P300电位潜伏期时长变化及不良反应发生情况。结果观察组总有效率(92.00%)高于对照组(72.00%)(P0.05)。2组治疗后血浆Hcy和CRP水平降低(观察组:t=11.905、29.791,对照组:t=6.627、12.243,P0.05);观察组治疗后血浆Hcy和CRP水平低于对照组(t=8.562、26.363,P0.05)。2组治疗后MoCA评分增加(观察组:t=16.664,对照组:t=10.845,P0.05);观察组治疗后MoCA评分高于对照组(t=5.386,P0.05)。2组治疗后P300电位潜伏期时长降低(观察组:t=17.946,对照组:t=6.835,P0.05);观察组治疗后P300电位潜伏期时长低于对照组(t=9.969,P0.05)。观察组不良反应发生率(14.00%)低于对照组(36.00%)(P0.05)。结论奥卡西平治疗癫痫的疗效显著,且可降低患者Hcy和CRP水平,改善患者认知功能。     

癫痫大鼠海马CA3区钙超载与癫痫发病机制的相关性研究

目的:探讨癫痫的发病机制,海马CA3区钙超载是否在癫痫的发病机制中起主要作用。方法:用荧光倒置显微镜来测定癫痫状态下海马CA1、CA3区钙超载的情况,并用钙离子拮抗剂尼莫地平作用于海马脑片看钙超载的变化。并把点燃成功的大鼠麻醉后做海马脑片,看海马的组织病理学改变。结果:癫痫大鼠海马CA1、CA3区钙超载高于对照组,CA3区钙超载高于CA1区,在尼莫地平的作用下CA3区钙超载明显降低。组织病理学改变亦显示CA3区是神经元变性、坏死是海马区最明显的部位。结论:钙超载参与了癫痫的发病机制,其中海马CA3区的钙超载在癫痫发病机制中起主要作用。     

托吡酯对癫痫大鼠海马神经细胞凋亡的保护作用

目的　探讨托吡酯对癫痫发作大鼠海马神经元凋亡的影响及其可能的机制。方法　采用戊四氮致痫模型 ,大鼠癫痫发作后连续给予托吡酯 80mg/ (kg·d)和 4 0mg/ (kg·d) ) ,共 14d。以TUNEL方法标记DNA片段 ,原位检测海马CA1和CA3区的神经细胞凋亡。结果　各组大鼠海马CA1、CA3区均出现TUNEL阳性细胞。对照组 ,海马CA1、CA3区TUNEL阳性细胞数分别为 (35 .83± 4 .5 8)个和(36 .83± 3.87)个 ;4 0mg/ (kg·d)托吡酯组分别为 (31.5 2± 3.4 3)个和 (32 .35±4 .6 9)个 ;80mg/ (kg·d)托吡酯组为 (2 1.17± 3.0 6 )个和 (2 1.16± 3.87)个。 80mg/ (kg·d)托吡酯组与对照组比较存在显著差异(P<0 .0 0 1) ,4 0mg/ (kg·d)托吡酯组TPM组与对照组相比无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论　TPM对癫痫发作后神经元凋亡具有一定的保护作用     

氟西汀对癫痫合并抑郁大鼠模型海马自噬的作用

目的探讨氟西汀对癫痫合并抑郁大鼠海马齿状回自噬的影响。方法将60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、氟西汀组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组。采用体重、摄食量、旷场试验评定大鼠抑郁水平;采用免疫组化测定大鼠海马齿状回beclin1、LC3-I、m ToR蛋白表达水平,荧光实时定量RT-PCR测定大鼠海马齿状回beclin1、LC3-I、m ToR基因表达水平。结果药物干预后,模型组体重、摄食量、垂直运动次数和水平运动次数明显低于对照组(P 0. 01);氟西汀组、3-MA组经药物治疗后以上指标高于模型组(P 0. 01,P 0. 05)。模型组海马齿状回beclin1、LC3-I表达显著升高,m ToR表达下降,与对照组相比有统计学意义(P 0. 01);氟西汀组、3-MA组大鼠海马齿状回beclin1、LC3-I表达下降,m ToR表达升高,与模型组相比差异有统计学意义(P 0. 01)。结论氟西汀可能通过改善癫痫合并抑郁大鼠海马齿状回区beclin1、LC3-I、m ToR表达,抑制细胞自噬。