APP5肽类似物P165对糖尿病小鼠海马突触蛋白的影响

目的探讨β-淀粉样前体蛋白（APP）5肽类似物P165对糖尿病小鼠海马神经元α-突触核蛋白（α-Syn）、Shank1和突触后致密物质95（PSD-95）的影响。方法链脲佐菌素腹腔注射诱发DM小鼠模型，P165灌胃治疗。5周后，行灌注固定，海马CA1区α-Syn、Shank1和PSD-95免疫组织化学染色。结果与对照组相比，糖尿病（DM）组α-Syn阳性细胞增多（P〈0.01），胞浆突起深染，Shank1和PSD-95阳性细胞减少，染色浅（P〈0.01）；与DM组相比，P165治疗组α-Syn阳性细胞减少（P〈0.05），胞浆突起染色变浅；Shank1和PSD-95阳性细胞增多（P〈0.05），胞浆突起深染。结论糖尿病小鼠海马神经元存在突触蛋白表达的异常，P165可改善DM小鼠海马神经元突触蛋白的表达。     

APP17肽对糖尿病小鼠海马神经元凋亡相关蛋白的影响

本研究的目的在于观察糖尿病小鼠海马内神经元的凋亡情况，探讨糖尿病神经退变发生的可能机理及APP17肽的作用。     

丹栀逍遥散对糖尿病抑郁大鼠胰岛素受体和胰岛素底物-1mRNA表达的影响

目的 探讨丹栀逍遥散对糖尿病抑郁大鼠肝组织胰岛素受体和胰岛素底物-1 mRNA影响的分子机制.方法 以高脂高糖乳剂加链尿佐菌素复制糖尿病大鼠模型,再予慢性孤养加慢性不可预见性中等刺激,建立糖尿病抑郁模型,给予丹栀逍遥散3 w后,观察其体重、行为学、空腹血糖、胰岛素、葡萄糖耐量试验、下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)的激素的变化、采用RT-PCR检测肝组织胰岛素受体(IR)、胰岛素受体底物-1(IRS-1)mRNA的表达.结果 丹栀逍遥散提高糖尿病抑郁大鼠活动度;降低血糖和胰岛素;降低CRH、ACTH、CorT;提高胰岛素靶组织肝的IR、IRS-1mRNA 的表达.结论 丹栀逍遥散治疗糖尿病抑郁其机制可能与纠正紊乱HPA 轴和提高肝组织IR、IRS-1的基因表达从而改善胰岛素的信号传导有关.     

APP17肽对糖尿病小鼠记忆功能和海马NT—3,胆碱乙酰化酶神 …

目的 观察糖尿病小鼠学习记忆功能入脑海马内营养因子ＮＴ－３、胆碱乙酰化酶神经元表达的变化，并观察ＡＰＰ１７肽（ＡＰＰ３１９￣３３５）对上述指标的影响。方法 用链脲佐菌素（Ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ ＳＴＺ）诱发糖尿病小鼠模型，并皮下注射ＡＰＰ１７肽，４周后行水迷宫试验；其后对小鼠进行灌注固定，取小鼠脑海马冰冻切片组化染色。结果 （１）糖尿病小鼠与给予ＡＰＰ１７肽的糖尿病小鼠的血糖差异无显著性，分     

胰岛素受体底物-1与骨代谢

胰岛素受体底物(insulin receptor substrate,IRS)是胰岛素信号传导通路中受体后水平的重要信号蛋白。IRS-1对骨骼生长、骨转换以及骨折愈合等均具有重要作用,为代谢性骨病和骨质疏松的防治提供了新思路。     

糖尿病小鼠视网膜神经细胞的凋亡及APP17肽对其影响

目的　研究Kkay(KK)小鼠视网膜神经细胞凋亡的情况 ,并观察APP17肽对其影响。　方法　实验小鼠随机分 3组 :正常对照 (NC)组 ,糖尿病 (DM )组 ,APP17肽组。分别于 1,3个月后取眼球作视网膜组织切片 ,TUNEL法标记凋亡细胞 ,光镜观察。　结果　DM组较NC组小鼠视网膜神经细胞凋亡显著增加 (P <0 .0 1) ,APP17肽治疗能显著减少视网膜神经细胞凋亡。　结论　DM早期即有视网膜神经细胞凋亡异常增多 ;APP17肽有抑制视网膜神经细胞凋亡的作用。     

脂肪酸受体GPR120影响胰岛素受体底物-1的表达

目的 研究在3T3-L1脂肪细胞中G蛋白耦联受体120(GPR120)与胰岛素受体底物-1(IRS-1)的关系.方法 利用经典“鸡尾酒法”诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,以未诱导组作为阴性对照,通过油红O染色法检测细胞内脂滴的形成情况,从而确定前脂肪细胞分化为脂肪细胞,再利用实时PCR方法检测GPR120 mRNA的表达水平.采用siRNA技术下调3T3-L1前脂肪细胞中GPR120的表达,以无关干扰组为阴性对照,干扰24 h后诱导细胞分化,诱导后于3T3-L1脂肪细胞培养液中加入软脂酸孵育24 h,分别用实时PCR和Western印迹方法检测3T3-L1脂肪细胞中IRS-1的表达水平.结果 诱导分化的3T3-L1脂肪细胞中,GPR120 mRNA表达量较未诱导组明显升高(P＜0.05);干扰GPR120表达后3T3-L1脂肪细胞中脂滴体积和数量明显减小.另外,GPR120表达的量降低后,IRS-1 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P＜0.05).结论 GPR120参与胰岛素信号通路中IRS-1的表达调控.     

APP17肽对糖尿病KK小鼠肾脏的保护作用

目的：观察App17肽对2型糖尿病小鼠尿白蛋白、总蛋白排泄量和肾脏超微结构的影响。方法：KKAy小鼠，根据血糖水平分为：血糖正常组（C组），糖尿病组（D组）和17肽治疗组（D＋17P组），17肽治疗组给予APP17肽皮下注射。12周后将3组小鼠处死。处死前1d，用代谢笼收集小鼠24h尿量，测总蛋白、白蛋白值；处死时心脏取血测血糖及血胰岛素水平；取肾皮质送电镜检查。结果：（1）D组小鼠肾小球基底膜明显增厚，近曲小管出现大量空泡和退变钙化的线粒体，而线和D＿17P组小鼠无此改变。（2）三组小鼠尿总蛋白和尿白蛋白排泄量由低到高依次为C≤D＋17P≤D（P＜0．05）。（3）D组和D＋17P组小鼠的血糖、糖化血红蛋白、胰岛素水平比C组明显升高（P＜0．05），D组和D＋17P组之间差异无显著性（P＞0．05）。结论：App17肽对KKAy糖尿病小鼠肾脏病变具有保护作用，但不是通过影响血胰岛素和血糖水平实现的。     

中国人2型糖尿病患者胰岛素受体底物-1基因变异的研究

确定中国人胰岛素受体底物－１基因变异是否与２型糖尿病相关。方法用聚合酶链反应－单链构象多态性分析方法筛选了６８例中国人２型糖尿病患者和６８例正常对照组的胰岛素受体底物－１基因的＋１７００－＋４４３７ｂｐ片段。再将单链构象多态性有改变的全部片段进行ＤＮＡ序列分析。     

胰岛素受体底物-1基因多态性与血糖水平的相关性

目的　了解高血压家系和非高血压家系后代中 ,胰岛素受体底物 1(IRS 1)基因多态性与血糖水平的关系。　方法　对大庆地区 184个高血压家系和 99个非高血压家系的第一代直系亲属及其配偶共 5 6 6人进行空腹血糖 (FPG)、胰岛素 (Ins)、甘油三酯 (TG)和纤维蛋白原 (Fib)测定 ,并采用PCR BslN1酶解法 ,检测IRS 1基因 972密码子多态性。　结果　 (1)高血压及非高血压家族的第一代直系亲属中 ,IRS 1基因Gly/Arg型频率差异不显著 (7 4 %∶5 1% ) ;(2 )多因素分析 ,排除年龄、性别影响后 ,FPG最高三分变量组 (5 35± 0 0 1)mmol/L比最低三分变量组 (4 19± 0 0 2 )mmol/L携带IRS 1基因Gly/Arg型明显增多 (OR =3 2 8)。再调整父母高血压家族史影响后结果相似。 　结论　IRS 1基因可能是大庆地区部分人群血糖升高的遗传因素之一 ,但与原发性高血压无关。     

胰岛素受体底物1（IRS-1）基因Gly972Arg突变与中国人糖尿病的相关性

目的 研究胰岛素受体物１（ＩＲＳ－１）基因Ｇｌｙ９７２Ａｒｇ突变与中国人糖尿病的相关性。方法 随机选取上海地区中国人３５９例,用ＰＣＲ／ＢｓｔＮ１酶解法检测Ｇｌｙ９７２Ａｒｇ突变。结果 本组中国人中仅发现２例该突变且均为非糖尿病者。结论 该突变可能不是中国人糖尿病的重要遗传因素。     

胰岛素受体底物-2对胰岛β细胞的作用

胰岛素受体底物-2(IRS-2)是胰岛素/胰岛素样牛长因子信号通路的重要介导者,可促进B细胞复制、新生及牛存,与β细胞存活、胰岛素抵抗及凋亡密切相关.完整的IRS-2信号途径为胰岛B细胞牛存所必需,是调节外周胰岛素信号和β细胞数量及功能的重要通路.IRS-2信号通路受损导致获得性β细胞数量不足和β细胞功能不良是2型糖尿病发病的主要因素.不断深化对IRS-2通路的认识,可以为糖尿病的治疗提供新的治疗靶点.     

APP17肽对DM大鼠海马神经元胰岛素和凋亡信号传导通路相关蛋白的影响

目的 观察糖尿病大鼠海马脑区胰岛素和凋亡信号传导通路中某些相关蛋白的表达及APP17肽对其表达的影响。方法 链脲佐菌素诱发大鼠糖尿病模型，并用APP17肽治疗。用免疫沉淀和Western-blot法分析海马中信号传导及部分凋亡相关蛋白；电镜观察大鼠脑组织超微结构。结果 DM大鼠IGF－IRα、Akt/PKB、CREB表明明显降低，APP17肽治疗后明显上调（P＜0．05），GSK－3β、PP－1及凋亡相关蛋白Bax、AIF表达增加，治疗后则明显降低（P＜0．05）；超微结构表明APP17肽治疗后兴奋性突触小泡明显减少。结论 糖尿病大鼠海马脑区胰岛素和凋亡信号传导通路中某些重要蛋白表达异常，APP17肽部分纠正这些蛋白的异常表达，这可能是其保护DM大鼠海马神经元的机制。     

高脂高糖诱导的非酒精性脂肪肝小鼠肝胰岛素底物受体-2的表达

目的探讨非酒精性脂肪肝小鼠肝脏胰岛素受体底物-2(insulin receptor substrate-2,IRS-2)的表达。方法于2002年1月至2003年3月在中国医科大学附属盛京医院内分泌科将30只6~8周龄的雌性SPF级C57BL6J小鼠随机分为3组饲养,其中正常饮食组10只、高脂高糖饮食8周组10只(实验过程中死亡5只)及高脂高糖食16周组10只。测定其血脂、血清胰岛素及空腹血糖、肝功能、肝脏重量、腹部瘦肉及瘦肉含量,肝脏脂质含量及IRS-2蛋白表达。并做肝脏病理检查。结果高脂高糖饮食16周的小鼠腹部脂肪量、血清甘油三酯、空腹血糖、碱性磷酸酶显著高于正常饮食小鼠(P<0.05~0.01);白蛋白及白蛋白球蛋白比值较正常饮食小鼠显著降低(P<0.05)。高脂高糖饮食小鼠肝脏有明显脂肪变性,16周的小鼠较8周的小鼠严重。高脂高糖饮食小鼠的肝脏总胆固醇和甘油三酯含量显著高于正常饮食小鼠,16周时达到正常饮食小鼠的2倍以上;IRS-2表达低于正常饮食小鼠,16周的小鼠高于8周的。结论高脂高糖饮食可使C57BL6J小鼠出现非酒精性脂肪肝,肝脏的IRS-2蛋白表达量低于正常饮食小鼠     

妊娠期糖尿病发病患者脂肪组织胰岛素受体底物1的表达及其酪氨酸磷酸化水平

目的 研究胰岛素受体底物1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)在妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)患者脂肪组织中的表达及其蛋白质酪氨酸磷酸化程度,探讨其与GDM发病的关系.方法 用RT-PCR和Western印迹法分别检测20例GDM患者(GDM组)、20例糖耐量正常孕妇(对照组)脂肪组织中IRS-1 mRNA和蛋白质的表达,用免疫沉淀及增强化学发光法检测IRS-1蛋白酪氨酸磷酸化程度,采用葡萄糖氧化酶法检测两组血糖水平.结果 (1)GDM组脂肪组织中IRS-1 mRNA的表达明显低于对照组(0.61 ±0.06 us 1.12±0.17,P<0.01).(2)与RT-PCR结果一致,GDM组脂肪组织IRS-1蛋白的表达也明显低于对照组(0.57±0.08 us 0.83±0.07,P<0.01).(3)IRS-1蛋白质酪氨酸磷酸化程度GDM组明显低于对照组(0.23±0.06 us 0.62±0.04,P<0.01).结论 GDM患者脂肪组织中IRS-1蛋白的表达及酪氨酸磷酸化下降,可能是GDM胰岛素受体后信号转导障碍而引起胰岛素抵抗的分子机制之一.     

胰岛素抵抗的分子机制——胰岛素受体底物-1丝氨酸磷酸化和p85α表达增加

尽管胰岛素抵抗（IR）与糖尿病（DM），肥胖，高血压和心血管疾病关系密切，但其分子机制并不完全清楚。在细胞水平，IR是指胰岛素信号传导能力的减低，这种信号传导从胰岛素受体向下到达胰岛素作用的终未底物，涉及到细胞功能的多种代谢和促有丝分裂方面。     

二甲双胍对OLETF大鼠靶组织内胰岛素受体底物-1蛋白表达水平的影响

目的探讨二甲双胍作用的分子机制。方法用Western杂交检测二甲双胍治疗后自发发病的2型糖尿病模型(OLETF大鼠)肝脏、肌肉、脂肪组织内IRS-1(胰岛素受体底物1)蛋白表达水平的改变,并与治疗前比较。结果二甲双胍治疗后OLETF大鼠肝脏组织内IRS-1的蛋白表达较治疗前明显增加(P＜0.001),肌肉组织内IRS-1的蛋白表达亦较治疗前增加,但差别无统计学意义(P＞0.05),脂肪组织内IRS-1的蛋白表达则较治疗前减少(P＜0.05)。结论二甲双胍治疗后能使OLETF大鼠靶组织内IRS-1蛋白表达发生改变,特别是它能明显增加肝脏组织IRS-1的蛋白表达,这可能是其抗高血糖、改善组织胰岛素敏感性的机制之一。     

Kh DIC小鼠海马神经细胞线粒体自由基水平的变化及APP17肽的影响

目的 观察Kh DIC（KM hn／IDL JIMP CAMS）小鼠海马神经细胞线粒体自由基水平的变化及APP17肽（β-amyloid precursor protein，APP，319-335肽段）的影响。方法 2．5月龄的Kh DIC小鼠随机分为模型组和APP17肽治疗组，正常对照组采用月龄和性别相匹配的正常昆明（KM）小鼠。APP17肽治疗组给予皮下注射APP17肽，每只每次0．34g-g，每周3次；模型组和正常对照给予等量的生理盐水；25W后成模。应用水迷宫试验观察小鼠学习、记忆功能的变化，应用羟胺法和硫代巴比妥酸（TBA）比色法分别检测了海马神经细胞线粒体抗氧化酶活性及自由基水平。结果 ①水迷宫结果显示，模型组小鼠存在明显的学习和记忆功能障碍，其游完全程的时间和错误反应次数均较正常对照组增多（P〈0．05）；APP17肽治疗组小鼠的行为学障碍明显轻于模型组，其上述的水迷宫检测结果与正常对照组比较无显著性差异。②与正常对照组比较，模型组小鼠海马神经细胞线粒体超氧化物歧化酶（SOD）活性明显降低（P〈0．01），丙二醛（MDA）含量显著升高（P〈0．01）；APP17肽治疗组检测结果与正常对照组接近，SOD活性高于模型组（P〈0．01），而MDA含量低于模型组（P〈0．01）。结论 ①Kh DIC小鼠存在学习和记忆功能障碍；而且其海马神经细胞线粒体氧化应激反应明显加剧。②APP17肽具有清除自由摹和抑制氧化应激反应的作用，从而提高脑组织的抗氧化能力，保护学习、记忆功能。     

APP5肽类似物165对链脲佐菌素损伤SH-SY5Y细胞的保护作用

目的探讨体外APP5肽类似物165（下称P165）对链脲佐菌素（STZ）损伤SH-SY5Y细胞的保护作用。方法STZ0.8mmol/L作用于SH-SY5Y细胞的损伤模型。通过测定噻唑蓝（MTT）代谢率、乳酸脱氢酸（LDH）漏出率,瑞氏染色观察细胞形态,Western blot检测相关蛋白,观察P165的保护作用。结果与正常对照组细胞的MTT代谢率（1.00±0.01）和LDH漏出率（201.56±47.54）比较,STZ损伤组细胞MTT代谢率降低（0.84±0.01）,LDH漏出率升高（317.83±76.95）,差异有统计学意义（P〈0.05）,细胞胞体面积缩小,胰岛素信号通路相关蛋白IRS-1、PI3K表达减少;P16530μmol/L组细胞MTT代谢率升高（0.91±0.01）,LDH漏出率降低（228.53±35.65）,细胞形态恢复正常,胰岛素信号通路相关蛋白IRS-1、PI3K表达恢复正常。结论体外STZ与SH-SY5Y细胞共孵育,可能影响胰岛素/胰岛素受体信号转导系统对细胞的促生长作用,而P165可能通过激活该信号通路逆转这种损伤,可作为一种神经营养因子起到保护作用。     

胰岛素受体底物-4基因多态性与2型糖尿病的相关性研究

目的 研究北京地区汉族人群胰岛素受体底物-4(IRS-4)基因密码子879c/g多态性与2型糖尿病的相关性。方法 采用配偶对作病例-对照研究。用聚合酶链反应(PCR)-限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)的方法检测IRS-4基因密码子879c/g多态性。结果 (1)男性与女性间。[RS-4基因密码子879c／g多态性分布特点不同，男性无杂合子。g等位基因频率为男性61．8％，女性63．9％。(2)此多态性位点的基因型频率和等位基因频率在2型糖尿病组和对照组间差异无显著意义。(3)在男性对照组中，可见gg基因型组胰岛β细胞功能指数低于cc基因型组。结论 北京地区汉族人群中IRS-4基因密码子879c／g多态性与2型糖尿病无明显相关性。