白血病患者STAT5、SOCS1和PTPRO基因的表达及意义

目的探讨信号转导子与转录激活子5(STAT5)、SOCS1和受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O(PTPRO)基因在急性白血病中的表达情况及临床意义。方法将入选患者分为急性白血病(AL)初治组、AL缓解组、慢性粒细胞白血病(CML)组和正常对照(NC)组,采用Syber G reen荧光定量PCR方法检测白血病和NC组骨髓单个核细胞中STAT5、SOCS1及PTPRO mRNA的表达。结果 AL初治组STAT5表达水平明显高于AL缓解组和NC组;CML组高于NC组,低于AL初治组和AL缓解组(P<0.05)。AL初治组SOCS1、PTPRO表达水平低于AL缓解组,更低于NC组(P均<0.05);CML组低于AL缓解组和NC组(P<0.05),与AL初治组无统计学差异(P>0.05)。结论 STAT5的高表达及SOCS1和PTPRO的低表达可能在白血病的发生发展中起重要作用。     

抗凋亡蛋白XIAP在急性白血病中的表达及临床意义

目的本研究通过检测抗凋亡蛋白XIAP在急性白血病（AL）中的表达,探讨XIAP在AL中的临床意义。方法应用SP-免疫组织化学方法检测78例AL患者初治组、缓解组、复发组及25例正常人（对照组）中XIAP的表达情况。结果（1）XIAP在初治AL患者骨髓中表达水平及表达强度均高于缓解组（P〈0．05,P〈0．008）和对照组（P〈0．05,P〈0．008）,与复发组相比差异均无显著性（P〉0．05）;（2）XIAP高表达患者完全缓解率低于XIAP低表达患者（P〈0．05）。结论XIAP过度高表达和急性白血病的发病和复发相关,XIAP可作为预后不良的指标。     

肺耐药蛋白在急性白血病中的表达及意义

目的 探讨急性白血病（AL）患者骨髓单个核细胞肺耐药蛋白（LRP）的表达及意义。方法 采用LRP单克隆抗体、流式细胞技术分别测定15例单纯缺铁性贫血患者（对照组）和65例AL患者（AL组）LRP的表达率。结果 LRP的表达率在初治和复发／难治急性淋巴细胞白血病（ALL）患者分别高于初治和复发／难治急性髓细胞白血病（AML）患者（P均〈0．05）；AML中M5亚型表达率高于M3亚型（P〈0．05）。初治及复发／难治LRP（＋）者缓解率明显低于LRP（-）者（P〈0．05）。结论 LRP的表达与AL患者临床预后密切相关，化疗前检测LRP表达率有助于个体化治疗和预测疗效。     

恶性血液病患者骨髓微血管密度与凝血酶敏感蛋白-1的表达及意义

目的探讨恶性血液病患者骨髓微血管密度（MVD）和凝血酶敏感蛋白．1（TSP-1）的表达及意义。方法选择恶性血液病患者48例（观察组），其中急性白血病（AL）23例、慢性粒细胞白血病（CML）10例、多发性骨髓瘤（MM）15例；正常对照组20例。利用sP免疫组化法检测观察组治疗前后及对照组骨髓组织标本中MVD、TSP-1的表达情况。结果①恶性血液病在不同疾病的同一阶段比较，骨髓MVD、TSP-1表达均元统计学差异（P均〉0．05）。②初诊组与未缓解组的骨髓MVD值高于对照组及缓解组（P均〈0．01），TSP-1阳性率低于对照组及缓解组（P均〈0.01）。③相关性分析显示，MVD、TSP-1与年龄、性别、血细胞计数等无显著相关性（P〉0．05）。结论MVD是分析恶性血液病病情的独立指标，TSP-1是血管生成负性调节分子，联合检测有助于更准确地评价病情及疗效，指导临床治疗。     

髓系白血病患者SHP-1与c-kit基因检测的临床意义

目的探讨造血细胞磷酸酶（SHP-1）基因与原癌基因c—kit在髓系白血病患者中的表达,以及其与白血病发生和预后的关系。方法用半定量逆转录-聚合酶链反应法检测67例髓系自血病患者（患者组）及33例正常对照组的白细胞SHP-1与c-kit mRNA表达。结果患者组中,急性髓系白血病（AML）、慢性粒细胞白血病慢性期（CML—CP）和急变期（CML—BP）患者的SHP-1平均表达水平均低于对照组（P〈0．05）;CML-CP患者的c—kit平均表达水平高于对照组,CML—CP和CML—BP患者比较有统计学差异（P〈0．05）;34例初治AML患者中,SHP-1^＋的完全缓解率高于SHP-1^-,而c—kit则相反。SHP-1^＋c—kit^＋的完全缓解率高于SHP-1^-c-kit^＋。结论SHP-1可能作为潜在的抑癌基因与c-kit基因参与白血病的发病,检测SHP-1与c—kit基因表达可作为判断髓系白血病患者预后的指标。     

HSP70对急性白血病预后的影响及其与mdr-1的关系

目的探讨热休克蛋白-70（HSP70）对急性白血病（AL）预后的影响及与多药耐药基因mdr．1的关系。方法应用反转录聚合酶链反应半定量分析50例初治AL患者（其中难治组10例,缓解组40例）细胞中HSP90、mdr-1的表达水平。结果难治组HSPT0表达水平明显高于缓解组（P〈0．01）;mdr-1阴性组HSPT0表达水平明显低于mdr-1阳性组;mdr-1mRNA的表达与HSP70mRNA的表达呈显著正相关。结论HSP70mRNA的高表达是AL疗效差、预后不良的标志,且HSP70与mdr-1协同影响耐药。     

survivin基因及增殖细胞核抗原与急性白血病关系的研究

目的 探讨增殖细胞核抗原（PCNA）、survivin基因与急性白血病（AL）的关系：方法收集2003—2004年浙江大学医学院附属第一医院住院AL患者的资料，采用免疫组化方法检测PCNA和RT—PCR方法检测survivin在AL在治疗前后以及与正常对照组的比较：结果初发AL患者与正常对照组的PCNA和survivin的表达差异有统计学意义（P〈0．05）。AL在治疗前与治疗缓解后其PCNA的表达差异有统计学意义（P〈0．05）。survivin高表达的急性髓细胞白血病（AML）缓解率低，但是急性淋巴细胞白血病（ALL）的缓解率与survivin表达无关。结论 PCNA和survivin在白血病中均高表达，与白血病的发生及发展有一定的联系，PCNA与survivin互补，可作为判断急性白血病的疗效和预后指标。     

WT1基因及CD34在急性白血病中的表达及意义

目的研究WT1基因与CD34在急性白血病（AL）中表达的相关性及其临床意义。方法采用实时定量RT-PCR方法检测92例初治AL患者骨髓细胞WT1基因的表达,同时应用流式细胞仪测定骨髓细胞CD34的表达。结果初治AL患者WT1基因、CD34表达的阳性率分别为67．4％（62／92）、44．6％（41／92）,WT1基因、CD34阳性表达者的缓解率显著低于阴性表达者（P〈0．01）;WT1基因与CD34表达呈正相关（rn=0．5304,χ^z=25．88,P〈0．05）;WT1^＋CD34^＋、WT1^＋CD34、WT1-CD34^-AL患者第一次缓解率比较有统计学差异（P〈0．01）。结论WT1基因、CD34在AL患者骨髓细胞中的表达呈正相关,且阳性表达者的缓解率低、疗效差、预后不良。     

血管内皮生长因子、环氧化酶-2在急性白血病中的表达及其与血管新生的关系

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）、环氧化酶-2（COX-2）在急性白血病（AL）的表达及与血管新生的关系。方法应用酶联免疫吸附试验（EHSA）测定23例AL初发未治,21例完全缓解（CR）,18例复发患者血清中VEGF、COX-2的含量,并与正常对照组比较。结果AL初发未治组、复发组患者血清VEGF、COX-2的含量明显高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）;CR组患者血清VEGF、COX-2的含量较初发未治组明显下降,与正常对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;复发组血清VEGF、COX-2的含量明显高于CR组,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论VEGF、COX-2与AL的发生、发展密切相关,COX-2可能通过上调VEGF促进AL的血管新生及发生、发展,抗VEGF和COX-2有望成为白血病治疗新的靶点。     

Skp2、p27在急性白血病细胞中的表达及意义

采用免疫组化方法检测了Skp2及p27在32例急性白血病患者（AL组）及10例良性血液病患者（对照组）血细胞中的表达。结果AL组Skp2表达高于对照组，p27表达低于对照组，P均〈0．05。认为Skp2高表达与白血病的发生、发展密切相关，应用其抑制剂可为多靶位治疗白血病提供理论及技术基础。     

急性白血病患者细胞周期蛋白E及依赖激酶抑制剂表达的意义

目的：探讨细胞周期蛋白E（cyclin E)、细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂（p27KIP1)对成人初治急性白血病（AL）发展及预后的作用。方法：用流式细胞术检测60例AL及17例对照cyclin E、p27 KIP1、多药耐药基因蛋白p170表达及细胞周期分布;逆转录－聚合酶链反应检测46例成人AL患者及17例对照的骨髓cyclin E、p27KIP1、多药耐药蛋白的mRNA水平。结果：60例AL患者全周期及G2／M期cyclinE表达均高于对照组（＜0．01或0．05）;p27KIP1全周期表达亦均高于对照组,但G2／M期差异无显著性（P＞0．05）;cyclinE与p27KIP1的表达呈正相关;AL患者cyclin E高表达组缓解率（44．8％）低于正常表达组（77．4％）（P＜0．01）;复发率（92．3％）高于正常表达组（41．7％）（P＝0．003;p27KIP1表达对AL缓解率、复发率的影响无统计学意义（P＞0．05,P＝0．89）。结论：cyclinE在成人AL有异常高表达,并可能促使AL的发展,是AL缓解率、复发率的重要危险因素。     

慢性间歇低氧对大鼠肝细胞SOCS3表达的影响

目的通过构建慢性间歇低氧大鼠模型,检测模型大鼠空腹血糖、胰岛素水平及胰岛素抵抗指数并检测大鼠肝细胞SOCS3蛋白及其mRNA表达量的变化,探讨慢性间歇低氧对胰岛素抵抗的影响。方法选取健康雄性SD大鼠24只,按随机数字表法分为正常对照组（NC组）、慢性间歇低氧2周组（CIH2组）、慢性间歇低氧5周组（CIH5组）,每组8只。NC组无间歇低氧暴露,CIH2组、CIH5组暴露于间歇低氧环境中（每日8h,舱内最低氧浓度为6％～7％）。分别于第15天、第36天测定大鼠空腹血糖、放射免疫法测空腹胰岛素水平并按稳态模型评估法（HOMA）计算胰岛素抵抗指数,SABC法免疫组织化学试剂盒检测大鼠肝细胞SOCS3蛋白表达,以平均灰度值表示SOCS3蛋白表达量,荧光定量-PCR法检测SOCS3-mRNA基因表达量。结果与NC组比较,CIH2与CIH5组空腹血糖水平（差异有统计学意义,F=33．582,P〈0．05）、胰岛素水平（差异有统计学意义,F=35．633,P〈0．05）及HOMAIR（差异有统计学意义,F=49．045,P〈0．05）升高,且CIH5组最为显著（P〈0．05）;与NC组比较,CIH2与CIH5组SOCS3蛋白表达升高（差异有统计学意义,F-9．472,PG0．05）,CIH2与CIH5组差异无统计学意义（P〉0．05）;与NC组及CIH2组比较,CIH5组SOCS3-mRNA表达升高（差异有统计学意义,F=8．665,P〈0．05）,CIH2组升高不明显（差异无统计学意义,P〉0．05）。Pearson相关分析显示HOMA—IR与sOCS3平均灰度值呈负相关（r=-0．759,P〈0．001）,HOMA-IR与SOCS3-mRNA呈正相关（r=-0．603,P=0．01）。结论①CIH暴露使大鼠胰岛素水平及血糖水平升高且发生胰岛素抵抗,且随间歇低氧暴露时间延长,胰岛素抵抗程度加重。②CIH导致大鼠肝细胞内SOCS3蛋白表达增高,SOCS3-mRNA基因表达上调,CIH可能通过SOCS3参与了胰岛素抵抗的发生发展。     

Cyr61和VEGF在慢性髓细胞白血病中的表达及相关性探讨

目的：探讨富半胱氨酸61（Cyr61）基因蛋白在慢性髓细胞白血病（cML）中的表达及其与血管内皮细胞生长因子（VEGF）基因表达的相关性。方法：应用免疫组织化学SP法检测40例CML患者及10例正常对照组骨髓单个核细胞中Cyr61、VEGF蛋白的表达，分析其与CML的发生、发展的关系及2者的相关性。结果：①cML患者在慢性期、加速期、急变期骨髓单个核细胞中Cyr61和VEGF蛋白表达水平明显高于正常对照组（P〈0．05）。Cyr61和VEGF蛋白在加速期和急变期的表达明显高于慢性期（P〈0．05）；②CML中染色体核型异常组Cyr61和VEGF表达显著高于无染色体核型异常组（P％0．05）；③治疗后达完全缓解（CR）组Cyr61和VEGF蛋白表达低于未缓解组（NR）；④Cyr61和VEGF蛋白在CML中的表达呈显著正相关（r=0．8962，P〈0．01）。结论：Cyr61和VEGF基因蛋白在CML中的异常表达可能与CML的发生、发展及预后有关，且2者存在一定的相关性。     

初治急性白血病患者肺耐药蛋白和多药耐药相关蛋白基因表达与预后的关系

目的 探讨肺耐药蛋白（1rp)基因和多药耐药相关蛋白（mrp)基因表达与初治急性白血病（AL）患者化疗效果的关系。方法 用逆转聚合酶链反应方法检测58例初治AL患者骨髓单个核细胞中lrp和mrp的mRNA的表达。结果 初治急性淋巴细胞白血病（ALL）患者lrp和mrp阳性表达率分别为15．0％和40．0％, 初治急性非淋巴细胞白血病（ANLL）患者lrp和mrp阳性表达率分别为15．8％和42．1％;在ALL和ANLL组,lrp和mrp基因阳性与阴性患者的首次完全缓解（CR）经统计学分析,差异无显著性（P＞0．05）,而lrp和mrp基因双阳性与双阴性患者的首次CR经统计学分析,差异有显著性（P＜0．05）;lrp和mrp基因两者无相关性。结论 lrp和mrp单独作为预测初治AL患者化疗效果的敏感性较差,而两者联合检测则是预示原发耐药的良好指标。     

急性白血病细胞G-CSF、GM-CSF受体的检测及其临床意义

目的：研究急性白血病（AL）患者骨髓单个核细胞表面粒细胞集落刺激因子受体（G-CSFR）与粒-巨噬细胞集落刺激因子受体（GMCSFR）的表达规律。观察重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）在AL中应用的临床疗效。方法：采用流式细胞术检测15例正常对照和86例AL患者G-CSFR、GM—CSFR的表达率。观察rhG-CSF的应用对AL治疗的影响。结果：急性非淋巴细胞白血病（ANLL）患者G-CSFR、GM—CSFR的表达率明显高于急性淋巴细胞白血病（ALL）（P〈0．01），均低于对照组。AL患者G-CSFR与GMCSFR表达率无相关性（rs=0．127，P〉0．20）；ANLL患者，G-CSFR表达率与CD13、MPO表达率呈正相关（P〈0．01），与CD33表达率呈负相关（P〈0．01），GM-CSFR表达率与HLA-DR表达率呈正相关（P〈0．01）。ALL患者。GM—CSFR的表达率与CD19的表达率呈正相关（P〈0．01）。应用rhG-CSF能减少AL患者中性粒细胞缺乏及发热的天数，但对缓解率无影响。结论：G-CSFR、GM—CSFR．的表达率在ANLL与ALL中有差异，两者的表达无相关性，在化疗过程中及化疗后应用rhG-CSF对AL的缓解率无显著影响。     

hergl基因调控慢性髓细胞白血病细胞的增殖和细胞周期

目的：研究hergl基因在慢性髓细胞白血病（CML）细胞的表达及其对CML细胞增殖和细胞周期的调控作用。方法：应用RT-PCR方法测定33例初治慢性髓细胞白血病患者和10例健康志愿者的骨髓细胞hergl基因的表达，检测特异性抑制剂处理后CML细胞株K562增殖凋亡和细胞周期的变化。结果：①在初发CML病例中，hergl mRNA的表达率是72．7％（24／33），高于正常对照（20％）（P〈0．01）。CML加速期和急变期的hergl mRNA的表达率分别为75％和90．9％，高于正常对照（P〈O．01），但是hergl的表达与CML的临床分期并无相关性（P〉0．05）。②E-4031（1μmol／L）可呈时间依赖性抑制细胞增殖，不诱导明显凋亡。③E-4031阻滞K562细胞周期于G1期。结论：CML细胞hergl基因表达失调IHERG抑制剂E-4031对K562细胞的增殖和细胞周期具有调控作用，hergl基因可能与CML发病机制相关。     

恶性血液病患者血清sHLA-Ⅰ水平的变化及临床意义

目的探讨白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤等恶性血液病患者体内可溶性人类白细胞抗原Ⅰ（sHLA-Ⅰ）水平的变化及其临床意义。方法用ELISA方法检测112例恶性血液病患者的血清sHLA-Ⅰ水平。结果血清8HLA．冰平白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤均高于正常对照组（P均〈0．01）,淋巴瘤、多发性骨髓瘤高于白血病（P均〈0．05）,淋巴瘤组与多发性骨髓瘤组比较无统计学意义（P〉0．05）;白血病初治组、复发或未缓解组血清sHLA-Ⅰ水平高于缓解组（P均〈0．01）,初治组与复发组比较无统计学意义（P〉0．05）。血清sHLA-Ⅰ水平与患者外周血乳酸脱氢酶及β2-微球蛋白水平有关。结论血清sHLA-Ⅰ可以作为一种辅助监测及判断恶性血液病预后及复发的指标。     

受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的探讨受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O（PTPRO）在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学SP法和图像分析技术检测40例肝癌组织和10例正常肝组织中PTPRO基因蛋白的表达;westernblot法检测10例正常肝组织和10例肝癌组织中PTPRO蛋白的表达。结果（1）免疫组化结果显示,40例肝癌组织中PTPRO蛋白免疫组化阳性反应颗粒的平均光密度（0．1749±0．0152）明显低于正常肝组织（0．3523±0．0027）,差异有显著性（P〈0．05）;PT-PRO蛋白的表达与肝癌的组织分化有关（P〈0．05）,与肿瘤直径的大小、性别无明显相关（P〉0．05）;（2）western blot法结果显示,条带灰度扫描PTPRO在肝癌组织中的表达水平（0．1381±0．0004）明显低于正常肝组织（0．4410±0．0026）,差异有显著性（P〈0．05）。结论PTPRO的表达缺失与肝癌的发生、发展和预后可能有关。     

急性白血病患者血清VEGF及VEGFR-2的临床研究

目的：探讨急性白血病（AL）患者血清中血管内皮生长因子（VEGF）及其受体2（VEGFR-2）的表达水平与临床的关系,以及血管新生在AL发病中的作用。方法：采用双抗体夹心ELISA法检测20例健康志愿者与39例AL初发患者未治时血清VEGF及VEGFR-2的含量,及25例获得完全缓解后的AL患者血清VEGF及VEGFR-2的水平;同时留取39例AL初发患者骨髓液涂片,进行瑞特染色后检测骨髓原始和幼稚细胞水平。结果：血清VEGF、VEGFR-2在AL初发组的含量明显高于正常对照组,尤其在未缓解组,P〈0.05;急性非淋巴细胞白血病（ANLL）和急性淋巴细胞白血病（ALL）之间血清VEGF、VEGFR2的水平差异无统计学意义（P〉0.05）;25例完全缓解的AL患者,其缓解前、后的血清VEGF、VEGFR2水平均高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,同时缓解后较缓解前血清VEGF、VEGFR2水平也明显下降（P〈0.05）;血清VEGF、VEGFR2的含量与患者骨髓中原始幼稚细胞水平有一定的相关性（均P〈0.05）。结论：提示AL患者有血管新生的存在,且血清VEGF及VEGFR-2水平与病情的特征以及预后的判断有一定的相关性。