结直肠锯齿状病变与p16基因甲基化的研究进展

结直肠锯齿状病变是一种新的癌前病变,可能通过无异型增生的畸形隐窝灶—增生性息肉/锯齿状腺瘤—癌变途径发展为癌,迫切需要更多分子水平的指标预测锯齿状息肉的癌变潜能。更多地了解结直肠癌癌变的分子学改变,可以提高对结直肠肿瘤的诊断和治疗水平。在锯齿状病变中经常检测到p16基因甲基化,因此,正确认识p16基因甲基化与锯齿状病变的关系对早期预防和诊断结直肠癌有重要意义。     

结直肠癌患者p16基因甲基化的检测

目的检测p16基因启动子区异常甲基化发生情况,探讨p16基因异常甲基化作为结直肠癌临床辅助诊断分子生物学标志物的可能性。方法选取2004年5月至2004年12月第三军医大学西南医院及贵州省人民医院普外科住院的结直肠癌患者53例,所有患者均经病理学诊断证实,并按Dukes病理分期分为四期,提取肿瘤组织DNA,分别应用巢式甲基化特异性PCR(nested methylation specific polymerase chain reaction,nested-MSP)及甲基化特异性PCR(methylation specific polvmerase chain reaction,MSP)方法,检测患者肿瘤组织中p16基冈的异常甲基化情况;比较MSP及nested-MSP两方法的灵敏度。结果应用MSP方法,Dukes A、B期患者和Dukes C、D期患者p16基因的甲基化率分别为23.8%和59.4%,两组比较有显著性差异(P<0.05);应用nested-MSP方法,Dukes A、B期患者和Dukes C、D期患者p16基因的甲基化率分别为52.4%和84.4%,两组比较有显著性差异(P<0.05)。应用MSP与nested-MSP方法检测肿瘤组织p16基因甲基化的阳性率分别为45.3%(24/53)、71.7%(38/53),两组比较有显著性差异(P<0.01)。结论应用nested-MSP方法检测肿瘤组织p16基因甲基化的灵敏度明显高于普通的MSP方法,分析患者DNA的p16基因异常甲基化有可能成为结直肠癌辅助诊断及预后评估的有效方法之一。     

胃癌中p16蛋白表达和p16基因启动子甲基化的研究

目的:探讨胃癌中p16基因的失活机制。方法:采用免疫组织化学SP方法检测40例胃癌组织和43例正常胃黏膜组织中p16蛋白的表达情况,采用甲基化特异性PCR(MSP)方法研究40例胃癌组织和35例正常胃黏膜组织p16基因启动子的甲基化状况。结果:23例胃癌组织的p16基因启动子发生了甲基化,甲基化发生率为58%,正常胃黏膜组织中未发现甲基化,两组间比较差异有显著性(P<0.01)。31例胃癌组织中的p16蛋白表达阴性,正常胃黏膜组织中6例表达阴性,两组间差异有显著性(P<0.01)。胃癌组织中,MSP方法和免疫组织化学方法结果间差异无显著性(P>0.05)。结论:胃癌的发生与p16基因失活关系密切,启动子甲基化可能抑制了蛋白的表达,这种途径可能是胃癌中p16基因失活的重要机制。     

p16甲基化与结直肠癌关系的研究进展

结直肠癌是消化道常见的恶性肿瘤之一,其发病率和病死率呈上升趋势。有文献报道,2002年结直肠癌新病例102．3万,死亡52．9万,其发病率和病死率分别居所有癌症的第3位和第4位。在现有2460万癌症患者中,结直肠癌占11．4％。近年来,我国青年人（〈30岁）大肠癌呈上升趋势,但性别无差异。我国发病年龄普遍比西方国家平均提早10年左右。     

食管癌中p16基因甲基化的研究进展

食管癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,食管癌的发生是一个多步骤,多因素参与的复杂的生物学过程,涉及遗传学与表观遗传学信息的改变。DNA甲基化是最重要的一种表观遗传修饰方式,高甲基化所致基因转录失活,     

银屑病患者外周血中p16基因甲基化的检测

目的检测斑块型银屑病患者外周血单个核细胞（PMBCs）中p16基因启动子甲基化的状态,探讨p16基因甲基化的检测在斑块型银屑病发病中的作用和机制。方法收集2011年4月至2012年5月该院门诊和住院48例宽块型银屑病患者（实验组）和18例健康者（对照组）的外周血单个核细胞（PBMCs）,采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测PBMCs中p16基因甲基化的状态,并分析p16基因甲基化与患者病程和银屑病皮损面积和严重程度指数（PASI）评分的关系。结果斑块型银屑病患者PBMCs中p16基因甲基化状态（31．3％）明显高于对照组（5．6％）,差异具有统计学意义（Y。=4．71,P〈0．05）,且与PASI评分之间差异具有统计学意义（t=2．63,P〈0．05）,而与患病病程之间差异无统计学意义（t=0．55,P〉0．05）。结论斑块状银屑病患者PBMCs中p16基因呈高甲基化比例明显增高状态,可能参与斑块状银屑病的发病机制。     

p16基因甲基化对胃癌的早期诊断

目的:检测胃癌患者癌组织及全血DNAp16基因甲基化,并探讨其在胃癌早期诊断中的作用。方法:收集新鲜的胃癌组织及血液标本4 4例,胃溃疡等胃部良性疾病患者标本2 0例。采用甲基特异性PCR(MSP)技术分别检测肿瘤组织DNA和全血DNA中p16基因启动子甲基化。结果:38.6 % (17/ 4 4 )胃癌组织出现p16基因甲基化,出现甲基化组织对应的血液标本中88.2 % (15 / 17)出现p16基因甲基化。胃溃疡等胃部良性疾病患者标本中未发现甲基化。肿瘤组织中p16基因的甲基化状况与全血中出现p16基因甲基化关系密切(P<0 .0 1)。结论:胃癌组织及血液标本中p16基因甲基化的检测有助于胃癌的早期诊断。     

结直肠癌p53基因点突变和蛋白表达的研究

目的了解中国人结直肠癌ｐ５３基因的突变谱，探讨聚合酶链反应－单链构象多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术用于研究结直肠癌中ｐ５３基因突变的可行性。方法应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测４１例结直肠癌ｐ５３基因突变，以ＡＢＣ免疫组织化学染色检测结直肠癌Ｐ５３蛋白的表达。结果３４％（１４／４１）的病例显示有ｐ５３基因突变，其中外显子５，６，７和８各有４，１，５和４例突变。２０例有Ｐ５３蛋白异常表达，阳性率为４９％。结论导致Ｐ５３蛋白异常堆积的ｐ５３基因突变是结直肠癌的一种常见的分子结构改变，可能在结直肠癌的发生和发展中起着重要的作用。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术是一简便、快速、有效的检测基因点突变的方法     

p16基因与卵巢癌

1　发现、结构与功能p16是近年来发现的一种肿瘤抑制基因。Serrano[1 ] 等用酵母双杂交技术寻找与人CDK4相关蛋白 ,找到一种阳性cDNA克隆编码的由 15 6个氨基酸构成的含有蛋白 蛋白相互作用所需的 4个锚蛋白重复序列、相对分子量为 16 5 6 9的蛋白[2 ] ,并将此蛋白质命名为p16INK4。Kamb[3] 等对近 10 0个人黑色素细胞系研究后发现有一半以上的细胞系在 9P2 1附近存在纯合性缺失 ,经部分测序后 ,其中两个独立的区域与已知的编码人的CDK4抑制因子 (即p16 )的序列相似 ,被命名为多种肿瘤抑制因子 1(MTS1、CDKN2 )即p16。p16基因由三…     

多发性骨髓瘤中p16、p15基因甲基化及其mRNA表达的研究

目的 探讨p16、p15基因的高甲基化及其mRNA转录阻抑与多发性骨髓瘸的发病和进展之间的关系。方法 采用甲基化敏感的限制性内切酶联合聚合酶链反应方法（REP法）,检测了28例多发性骨髓瘸患者骨髓细胞p16、p15基因5端启动子区的甲基化状态,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测多发性骨髓瘸患者p16、p15基因mRNA表达情况。结果 p16、p15基因启动子区过度甲基化率分别为57．14％（16／28）、64．28％（18／28）,53．57％（15／28）患者同时存在p16、p15基因启动子区过度甲基化。大多数存在甲基化的患者不表达p16、p15基因mRNA。结论 p16、p15基因的高甲基化与多发性骨髓瘸的发病有关,p16、p15基因甲基化与其转录阻抑高度相关。     

巢式甲基化特异性聚合酶链反应在p16基因启动子过甲基化检测中的应用

目的　介绍巢式甲基化特异性聚合酶链反应 (nMSP)法 ,探讨了最佳PCR扩增条件 ,并用该法分析新鲜癌组织、石蜡包埋组织及肿瘤患者血清中p16基因启动子的甲基化状态。方法　将基因组DNA变性成为单链 ,用亚硫酸氢盐修饰单链DNA ,将所有未甲基化的胞嘧啶被转变为尿嘧啶 ,而甲基化的胞嘧啶则不变。设计针对甲基化和非甲基化等位基因特异引物 ,进行巢式聚合酶链反应扩增 ,最后经凝胶电泳检测目的片段。结果　在 3种类型的标本中都检测出了p16基因启动子甲基化。用甲基化特异性聚合酶链反应法 (MSP)和nMSP法分别检测 34例非小细胞肺癌 (NSCLC)患者血清 ,p16基因启动子甲基化阳性率分别为 5 3% (18/34)和 74 % (2 5 /34) ,nMSP法具有更高的灵敏度。结论　筑巢式甲基化特异性聚合酶链反应是一种灵敏度高、特异性强的甲基化检测方法 ,可广泛应用于不同类型标本基因启动子甲基化分析。     

急性白血病患者p16及p15基因纯合子缺失及甲基化研究

目的　探讨血液系统恶性肿瘤患者ｐ１６ 及ｐ１５ 基因失活的发生率及其临床意义。方法　用聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ） 方法扩增ｐ１６ 及ｐ１５ 基因外显子１ 及外显子２ ,检测等位基因纯合子缺失;再用限制性内切酶 Ｐ Ｃ Ｒ 方法检测ｐ１６ 及ｐ１５ 基因甲基化; 然后用 Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ 法（ Ｔｄ Ｔｍｅｄｉａｔｅｄ ｄ Ｕ Ｔ Ｐｄｉｇｏｘｙｇｅｎｉｎ ｅｎｄｌａｂｅｌｉｎｇ） 检测细胞凋亡。结果　５６ 例患者中有ｐ１６ 和（ 或）ｐ１５ 基因失活者共３３ 例,其中急性淋巴细胞白血病（ Ａ Ｌ Ｌ）３８ 例中２３ 例（ 占６０ ．５ ％ , Ｔ Ａ Ｌ Ｌ１２ 例, Ｂ Ａ Ｌ Ｌ１１ 例） , Ａ Ｎ Ｌ Ｌ１８ 例中１０ 例（ 占５５５ ％ ） 。 Ａ Ｌ Ｌ 患者ｐ１６ 及ｐ１５ 基因均以甲基化失活为主。 Ｔ Ａ Ｌ Ｌ 失活的频率比 Ｂ Ａ Ｌ Ｌ 高。有ｐ１６ 和（ 或）ｐ１５ 基因失活者, 细胞的凋亡比例明显减少,病情进展迅速,治疗效果差,缓解率低, 缓解期明显缩短。结论　ｐ１６ 及ｐ１５ 基因失活的检测对于探讨急性白血病的发病机制,判断疾病进程有重要意义。     

粪便DNA甲基化分析在结直肠癌诊断中的应用价值

目的研究人粪便中分泌型卷曲相关蛋白2（SFRP2）、增生性息肉蛋白（HPPI）和O^6．甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）基因甲基化状态及其用于结直肠癌（CRC）筛查的可行性。方法从52例CRC患者、35例结直肠良性疾病患者和24名正常对照者粪便标本中提取DNA，采用甲基化特异性PCR（MSP）技术分析粪便DNA中SFRP2、HPPI和MGMT基因甲基化状态。结果CRC患者粪便SFRF2、HPP1和MGMT基因甲基化阳性率分别为94．2％、71．2％和48．1％;96.2％的CRC和81．8％的癌前病变患者中至少存在1个基因的过甲基化。1例正常粪便标本SFRP2甲基化阳性。联合3个基因诊断CRC和癌前病变的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为93．7％、77．1％、84．3％和90．2％。结论联合分析SFRP2、HPP1和MGMT基因甲基化是检测CRC及癌前病变的高敏感性方法。检测粪便基因甲基化有望成为CRC无创诊断或高风险人群筛查的一个新途径。     

p16基因异常甲基化检测对周围型肺癌的诊断价值

目的:了解周围型肺癌患者外周血血浆中p16基因异常甲基化发生情况及其在周围型肺癌临床辅助诊断中的应用价值。方法:选取56例肺周围型结节手术患者的血浆和组织标本,其中31例为周围型肺癌,25例为肺部良性结节,采用甲基化特异性聚合酶链反应方法检测p16基因启动子的异常甲基化情况。结果:在周围型肺癌患者的血浆和肿瘤组织中,p16基因甲基化检出率分别为64.5%(20/31)和70.9%(22/31);周围型肺癌患者血清、肿瘤组织中p16基因的甲基化异常事件与肿瘤分期、分型无明显相关性。在25例良性肺部疾病患者中,3例血浆和手术切除标本检测出p16基因启动子的异常甲基化存在;良、恶性肺周围型结节的p16基因异常甲基化发生情况差异存在显著性。结论:检测周围型肺癌患者血浆中p16基因异常甲基化情况有可能成为有价值的临床辅助诊断手段。     

乳腺癌14-3-3 sigma基因异常甲基化的研究

目的探讨乳腺癌组织14-3-3signm基因甲基化状态和表达情况。方法用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）方法，分别检测40例乳腺癌患者肿瘤组织和18例乳腺良性病变组织的14-3-3signm基因甲基化状态、并用逆转录（RT）-PCR和免疫印迹法（wB）分别从mRNA和蛋白质水平检测14-3-3signm基因的表达情况。结果在40例乳腺癌患者肿瘤组织中，MSP法检测出34例14-3-3signm基因甲基化，甲基化率达85％；而RT-PER为12．5％（5／40）；WB法显示，80％患者乳腺癌组织存在14-3-3sigma蛋白表达缺失（32／40）；在34例MSP甲基化患者中，有30例RT-PER和WB同时显示阴性（88％）。18例良性疾病患者病变乳腺组织均未检出14-3-3signm基因甲基化，而RT-PER和WB同时也证明14-3-3signm基因在乳腺上皮细胞均有表达。提示乳腺癌时14-3-3signm基因高度甲基化，且可能与14-3-3signm基因表达缺失密切相关。结论14-3-3signm基因甲基化及其表达缺失是乳腺癌的经常性事件，14-3-3signm基因甲基化可能与其基因表达缺失有关。     

多发性骨髓瘤患者p16基因结构改变及启动子区甲基化的研究

目的探讨p16基因结构及启动子区CPG岛甲基化在多发性骨髓瘤(MM)发病中的作用.方法利用PCR-单链构象多态性、甲基化特异性PCR(MSP)技术研究骨髓瘤细胞株U266、LP1、KM3及MM患者p16基因结构改变及启动子区CPG岛甲基化状态.结果KM3细胞株为p16基因外显子2的同源缺失;U266、LP1细胞株及55.56%MM患者的p16基因启动子区存在CPG岛甲基化现象,p16基因甲基化与MM分期无关(P>0.05).结论p16基因甲基化在MM中较为常见,这可能为MM的治疗提供借鉴.     

子宫内膜癌中p16蛋白异常表达及基因缺失和甲基化的研究

目的:研究子宫内膜癌中p16蛋白与其基因缺失及CpG岛甲基化的关系。方法:对36例子宫内膜癌标本分别用免疫组化方法和PCR技术检测MTS1/p16蛋白表达和基因纯合性缺失及第一外显子异常甲基化情况。结果:36例癌组织中14例p16蛋白表达阳性,蛋白表达缺失率为61.11%(22/36);9例发生基因缺失,12例发生甲基化,未发现基因缺失与甲基化同时存在的病例,p16基因总失活率58.33%;22例p16蛋白表达缺失标本有19例基因失活。结论:p16蛋白缺失程度与子宫内膜癌组织学分级和临床分期呈正相关;p16蛋白缺失程度与p16基因缺失和甲基化有关。