枸杞多糖对K562白血病细胞抑制作用及凋亡的研究

目的 探讨枸杞多糖（LBP-X）诱导人类慢性髓系白血病K562细胞株凋亡。方法 用吖啶橙（AO）荧光染色观察细胞结构的变化，用MTT、比色法测定抑制率，琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测法分析细胞凋亡。结果 LBP-X可明显抑制K562细胞的生长，凋亡率呈时间和剂量依赖性。LBP-X作用48h后，荧光显微镜下可见细胞核不规则，浓缩成大小不等的团快，核碎裂呈新月形改变，琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯带。流式细胞仪分析图上可见明显的凋亡。结论 LBP-X能诱导K562细胞的凋亡，并呈一定的时间浓度依赖关系。     

三尖杉酯碱诱导慢性髓系白血商K—562细胞凋亡的实验研究

目的 阐明三尖杉酯碱（HT）作用于K562细胞的机制。方法 应用细胞形态，DNA凝胶电泳和流式细胞仪等检测，观察HT对K562细胞株的作用方式，进一步用RT-PCR方法研究bc/rlabl基因在转录水平的改变。结果 0.01-100.00μg/ml浓度HT可诱导K562细胞凋亡，并呈时间和剂量依赖性，随着药物作用时间的延长，bcr/abl基因的转录下调。结论 低浓度HT就可通过抑制bcr/abl基因的表达，诱导K562细胞凋亡。     

Antineoplastic mechanism of Octreotide actionin human hepatoma

Objectives To investigate whether apoptosis can be induced by Octreotide in human hepatoma cells in vitro and elucidate the antineoplastic mechanism of Octreotide in hepat oma. Methods A cultured human hepatoma cell line, BEL-7402, was exposed to Octreotide and ap optosis was evaluated by cytochemical staining (Hochesst 33 258), transmiss ion electron microscopy, agarose gel electrophoresis and flow cytometry (FCM).Results After exposure to 0.2 μg/ml Octreotide, apoptosis with nuclear chromatin cond ensation as well as fragmentation, cell shrinkage and the formation of apoptotic bodies was observed using cytochemical staining and transmission electron micros copy. A DNA ladder in agarose gel electrophoresis was also displayed. FCM show ed that the apoptotic cell number rose with an increase in the concentration of Octreotide (0-2 μg/ml). There was a positive correlation between Octreotide concentration and apoptotic rate in BEL-7402 cells (r=0.809, P<0.05) .Conclusion Apoptosis in human hepatoma cells can be induced by Octreotide, which may be rel ated to the mechanism of antineoplastic action ofOctreotide in hepatoma.     

高三尖杉酯碱诱导K562细胞凋亡中bcl—2家族基因的表达

目的 探讨在高三尖杉酯碱（HHT）诱导K562细胞凋亡时,bcl-2家族部分基因在mRNA水平表达的改变。方法 细胞形态（光镜和电镜）、DNA凝胶电泳、流式细胞仪等方法证实凋亡,进一步用RT－PCR方法研究凋亡过程中bcl-2家族中部分基因表达的改变。结果 超过一定“阈浓度”HHT可诱导K562细胞凋亡;RT－PCR方法发现bax基因和bfl-1基因在加药6h开始上调,家族其它基因bcl-2、bcl-xL的表达未见明显改变。结论 HHT可诱导K562细胞凋亡;其机制可能与HHT在mRNA水平上调bax基因有关;而bfl-1基因的上调可能是K562细胞抗HHT诱导其进一步凋亡的原因。     

Study on Taxol in Inhibiting Human Leukemia Cell Proliferation andInducing Apoptosis

Objective: To explore the effects of Taxol in inhibiting human leukemia k562 cell proliferation and inducing apoptosis in vitro. Methods: Human leukemia K562 cells were treated with Taxol of different concentrations for 12-72 hrs. Cell proliferation was evaluated by MTT assay and morphological changes of apoptosis were examined by microscopy. Cell apoptosis was determined by flow cytometry (FCM) and DNA gel electrophoresis. Results: Growth of K562 cells was inhibited by Taxol with an IC50 value of 0. 84μg/ml. Typical nuclear condensation and apoptosis bodies were observed as early as 24 hrs after a 0.5μg/ml Taxol treatment; Apoptotic rate of the Taxol-treated K562 cells increased from 3.7% to 24.0% in 24 hrs. No DNA ladder was observed by DNA gel electrophoresis. Conclusion: Taxol could inhibit K562 cell growth and induce apoptosis in vitro.     

高三尖杉酯碱诱导K562和CML细胞凋亡及分化的实验研究

目的 明确三尖杉酯碱（HHT）治疗慢性粒细胞性白血病（CML）的机理。方法 应用细胞长曲线、克隆形成能力、细胞内血红蛋白含量测定、细胞形态,结合DNA凝胶电泳、流式细胞仪等方法,观察HHT对K562细胞株及CML慢性期细胞的作用方式。进一步用RT－PCR方法研究bcr-abl、c-myc 、max基因在转录水平的改变。结果 低浓度HHT抑制K562细胞的克隆形成能力并使K562细胞内血红蛋白含量增加;0.1umol /L 及以上浓度HHT可诱导K562细胞及CML细胞凋亡;细胞周期分析发现细胞阻滞于G1期。c-myc基因在加药24h开始下凋; bcr-abl和max基基的表达未见明显改变。结论 低浓度HHT可抑制K562 细胞增殖并诱导其向红系分化;超过一定“ 阈浓度”HHT可诱导K562细胞和CML慢性期细胞凋亡;HHT可通过抑制c-myc/max 表达来阻 滞细胞周期。     

一氧化氮诱导口腔鳞癌细胞凋亡和 P53蛋白表达的实验研究

目的：研究外源性一氧化氮（NO）对人舌鳞癌Tca8113细胞诱导凋亡的作用及可能机制。方法：硝普钠（SNP）作为NO的供体，用不同时间和不同浓度SNP处理细胞。采用MTT法检测N（）对细胞的生长抑制，丫啶橙染色、Wright—Giemsa染色、流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡作用，蛋白电泳法分析细胞凋亡机制。结果：NO对Tca8113细胞的抑制作用呈剂量和时间依赖性。SNP处理细胞后，DNA、RNA合成减弱；细胞形态学出现凋亡的特征性改变；电泳可见典型的DNA Ladder形成；流式细胞仪上见随着SNP浓度增高，细胞凋亡随之增加，并出现G2／M期阻滞；Western blot显示随着SNP浓度增高，P53蛋白表达水平上调。结论：外源性NO对人舌鳞癌Tca8113细胞有增殖抑制和诱导凋亡作用，P53蛋白介入了硝普钠引起的细胞凋亡调控作用。     

苦参碱对K562细胞增殖及凋亡相关分子表达的影响

目的 研究苦参碱对人白血病细胞K562增殖、凋亡的影响及其机制。方法 苦参碱（0.2mg/ml）作用于K562细胞,每日计数白细胞、计算抑制率;流式细胞分析仪检测苦参碱对K562细胞周期的改变及凋亡的影响;电子显微镜观察凋亡细胞形态;Western blot检测BCL－6及增列细胞核抗原（PCNA）表达情况。结果 苦参碱对K562细胞有明显的抑制作用,用药72h的细胞增殖抑制率达69％;用药5d后,G1期细胞明显增多,高达58.5%,68％的细胞发生凋亡。电子显微镜可观察到苦参碱诱导的早、中、晚期K562凋亡细胞;BCL－6表达增强,PCNA表达下降。结论 苦参碱能显著抑制K562细胞增殖、促进其凋亡,其机制可能与细胞增殖周期受阻及PCNA表达下降、BCL－6表达增加有关。     

环孢菌素A诱导K562细胞凋亡机制的研究

目的：观察环孢菌素A对K562细胞株凋亡的影响及其作用机制。方法：采用瑞氏染色、流式细胞术观察环孢菌素A对K562细胞株凋亡的影响;采用流式细胞仪检测环孢菌素A影响K562细胞凋亡时Bcl-2基因表达的改变情况。结果：20μmol/L环孢菌素A作用24 h可诱导K562细胞凋亡,瑞氏染色呈现典型的凋亡形态学改变,流式细胞术显示凋亡峰,细胞周期分析发现环孢菌素A可使K562细胞生长阻滞于G0~G1期。环孢菌素A处理组的凋亡率高于对照组（P〈0.01）;环孢菌素A处理组的Bcl-2蛋白阳性率低于对照组（P〈0.01）。结论：环孢菌素A可诱导K562细胞株凋亡,其机制可能是通过下调Bcl-2基因表达。     

邻苯二甲酸正丁酯对白血病细胞增殖与凋亡的影响

应用细胞培养、形态学观察、ＤＮＡ断裂百分率测定及ＤＮＡ片段凝胶电泳，观察了邻苯二甲酸正丁酯对ＨＬ－６０与Ｋ５６２细胞增殖与凋亡的影响。结果表明，邻苯二甲酸正丁酯在抑制白血病细胞增殖的同时，也诱导其凋亡，但对Ｋ５６２细胞作用相对较弱。     

三尖杉酯碱诱导慢性髓系白血病K-562细胞凋亡的实验研究

目的阐明三尖杉酯碱（HT）作用于K562细胞的机制。方法应用细胞形态、DNA凝胶电泳和流式细胞仪等检测,观察HT对K562细胞株的作用方式,进一步用RT-PCR方法研究bcr/abl基因在转录水平的改变。结果0.01～100.00μg/ml浓度HT可诱导K562细胞凋亡,并呈时间和剂量依赖性。随着药物作用时间的延长,bcr/abl基因的转录下调。结论低浓度HT就可通过抑制bcr/abl基因的表达,诱导K562细胞凋亡。     

Thapsigargin逆转K562/A02细胞多药耐药性的实验研究

目的 探讨内质网Ca^2 -ATP酶抑制剂thapsigargin对白血病多药耐药细胞株K562／A02化疗敏感性的影响。方法 用MTT比色法检测K562／A02细胞耐药性、thapsigargin的增殖抑制活性及其对K562／A02细胞化疗敏感性的影响；丫啶橙(AO)／溴化乙锭(EB)染色荧光显微镜观察thapsigargin处理后K562／A02细胞形态改变；流式细胞仪(FCM)检测P-糖蛋白(P-gp)表达；荧光显微镜检测Pgp功能。结果 ①thapsigargin对K562和K562／A02细胞的增殖抑制活性呈剂量和时间依赖性，K562／A02细胞较K562细胞对thapsigargin更敏感，thapsigargin诱导K562／A02细胞呈现典型的凋亡细胞形态学改变。②K562／A02细胞对阿霉素(ADM)、柔红霉素(DNR)、长春新碱(VCR)、依托泊苷(VP-16)、高三尖杉酯碱(HHT)和米托蒽醌(MXT)均出现不同程度的耐药性；thapsigargin抑制K562／A02细胞P-gP功能而对其表达无影响，thapsigargin能增加K562／A02细胞对ADM、DNR、VCR、VP-16、HHT和MXT的化疗敏感性。结论 Thapsigargin能诱导白血病多药耐药细胞株K562／A02细胞凋亡并能部分逆转K562／A02的多药耐药性；thapsigargin的多药耐药逆转功能可能与其凋亡诱导作用和抑制PgP功能有关。     

小檗胺对人慢性粒细胞白血病细胞发生凋亡的诱导机制研究

目的 研究新型p210 bcr/abl抑制剂小檗胺诱导人慢性粒细胞白血病细胞凋亡分子的机制.方法 培养表达内源性p210 bcr/abl蛋白的Ph＋人慢性粒细胞白血病细胞系K562,用小檗胺按指定时间和剂量干预细胞.应用膜联蛋白荧光素（Annexin-V-Fluos）/碘化丙啶（propidium iodide,PI）试剂盒和流式细胞术定量分析凋亡细胞百分比;用cytoperm/cytofix和天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白水解酶-3-McAb-PE定量检测含活化天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）细胞百分比;以免疫共沉淀技术（c-abl抗体）和Western印迹[p-Tyr（pY99）抗体]定量分析p210 bcr/abl蛋白磷酸化;p210 bcr/abl蛋白总量直接用Western印迹（c-abl抗体）检测;Hsp90和Hsp70等分子伴侣蛋白水平的变化用Western印迹（Hsp90和Hsp70抗体）.结果 48 h IC50浓度小檗胺（8μg/ml）作用48 h后,45.69% K562白血病细胞表达活化的Caspase-3凋亡分子和48.43%白血病细胞发生凋亡.免疫印迹和免疫共沉淀结果显示,低剂量小檗胺可明显抑制白血病细胞内p210 bcr/abl磷酸化：8μg/ml浓度小檗胺处理6 h后,白血病细胞磷酸化p210 bcr/abl蛋白含量仅为对照组的8.41%,而p210 bcr/abl蛋白总量并无变化.小檗胺还能直接下调p210 bcr/abl分子伴侣Hsp90蛋白水平：白血病细胞经8μg/ml浓度小檗胺处理24h时的Hsp90水平只有对照组的18.37%,而且对能诱导白血病细胞产生凋亡抵抗的Hsp70蛋白水平影响不明显.结论 （1）小檗胺是一种新型p210 bcr/abl蛋白磷酸化抑制剂,能通过抑制p210 bcr/abl蛋白磷酸化和诱导Caspase-3通路介导的Ph＋白血病细胞发生凋亡;（2）与已知Hsp90抑制剂格尔德霉素（GA）不同,小檗胺能直接下调Hsp90蛋白水平,而对与肿瘤细胞凋亡抵抗有关的Hsp70蛋白表达影响不大,这提示小檗胺可能还是一种新型蛋白分子伴侣Hsp90抑制剂,值得进一步研究.     

高三尖杉酯碱联合低剂量阿糖胞苷治疗慢粒白血病急变

目的研究高三尖杉酯碱(homoharrmgtonine,HHT)以及小剂量阿糖胞苷(arabinsyl cytosine,Ara-C)联合诱导慢粒急变细胞株K562凋亡作用及其机制.为两药的临床联合应用提供理论基础.方法应用光镜、电镜、Annexm-V/PI双染实验、流式细胞分析技术及免疫组织化学实验,观察HHT联合小剂量Ara-C诱导K562凋亡模式.结果HHT联合小剂量Ara-C可协同诱导K562凋亡.机制与降低线粒体膜电位,下调bcl-xl等有关.结论高三尖杉酯碱联合低剂量阿糖胞苷治疗慢粒白血病急变简便,经济,有效.     

莪术注射液抑制K562细胞增殖及诱导其凋亡的研究

目的：探寻新的抗白血病药物。方法：采用ＭＴＴ法,以柔红霉素（ＤＮＲ）、阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）和羟基脲作对照,了解莪术注射液对Ｋ５６２细胞增殖抑制作用;通过流式细胞仪检测和ＤＮＡ凝胶电泳,观察莪术注射液诱导Ｋ５６２细胞凋亡的情况。结果：莪术注射液对Ｋ５６２细胞不仅具有强大的增殖抑制作用,功效明显强于对照ＤＮＲ、Ａｒａ－Ｃ和羟基脲;而它更主要的作用是诱导Ｋ５６２细胞不仅具有强大的增殖抑制作用,功效明显     

一氧化氮信号在辛伐他汀诱导K562细胞凋亡过程的作用

目的:观察一氧化氮(Nitric oxide,NO)信号在辛伐他汀(Simvastain)诱导K562细胞凋亡过程中变化,推测一氧化氮信号与K562细胞凋亡之间关系.方法:20μmol/L辛伐他汀处理K562细胞24、48和72 h;流式细胞技术检测细胞凋亡率;比色法测定K562细胞内总一氧化氮浓度;RT-PCR检测诱导型一氧化氮合成酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)基因;一氧化氮抑制剂和20μmol/L辛伐他汀共同培养,观察不同时间细胞凋亡率.结果:与对照组比较,24、48 h和72h处理组细胞凋亡率增加6.1%±0.4%,14.2%±0.4%,30.7%±0.6%,差异具有显著性;不同时间处理诱导性一氧化氮基因均显著上调;处理组细胞内总一氧化氮浓度增加为(0.3±0.1)mg/ml,(2.8±0.2)mg/ml.(3.8±0.4)mg/ml,与对照组比较显著升高;一氧化氮抑制剂能显著降低处理组细胞凋亡率.结论:辛伐他汀能诱导K562细胞凋亡,细胞内升高的一氧化氮浓度可能是辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的信号机制之一.     

补骨脂素加长波紫外线照射对白血病K562细胞的杀伤作用

目的:探讨补骨脂的提纯物补骨脂素(psoralen)加长波紫外线(ultraviolet-A light)照射光化学疗法,亦称PUVA(psoralen plus ultraviolet-A light)疗法,对慢性粒细胞白血病红白病变细胞株K562细胞的杀伤作用.方法:以传代培养的K562细胞为模型,采用四甲基偶氮唑盐比色法(monotetrazolium test, MTT)测定单纯补骨脂素、单纯紫外线照射及PUVA疗法对白血病细胞的杀伤作用;采用流式细胞仪对其进行DNA含量分析,并用早期凋亡试剂盒Annexin-Ⅴ-FITC和碘化丙啶(propidine iodide, PI)双染法测定单纯补骨脂素对白血病细胞的作用;采用电镜技术对其进行形态学观察.结果:单纯补骨脂素或单纯紫外线照射对K562细胞均有杀伤作用,PUVA比单纯补骨脂素或单纯紫外线照射对K562细胞的杀伤作用有明显增强(P＜0.05).PUVA处理后的白血病细胞通过流式细胞仪可以检测到亚二倍体凋亡峰.电镜下可见:细胞体积变小,胞浆浓缩,胞核染色质聚集或边集,核小体碎裂,大部分细胞呈典型的凋亡形态.结论:中药补骨脂提纯物补骨脂素对人白血病细胞K562具有杀伤作用.补骨脂素具有光敏活性,结合360 nm波长紫外线照射治疗对K562细胞的杀伤作用有明显增强.紫外线照射时间以10 min为最佳;补骨脂素适宜的终浓度为40 μg/ml.PUVA对人白血病细胞K562杀伤作用的机制主要是诱导细胞凋亡.     

中药"拮新康"对白血病细胞凋亡的影响

为探讨中药“拮新康”对白血病细胞凋亡的影响。采用形态学及DNA凝胶电泳方法观察其对白血病细胞株HL 6 0及K5 6 2细胞凋亡的影响 ,结果示 :①电镜观察可见凋亡细胞和凋亡小体 ,DNA凝胶电泳可见典型的梯形带改变 ;②一定浓度范围内的拮新康经适当作用时间后可诱导白血病HL 6 0 ,K5 6 2细胞凋亡 ,但诱导K5 6 2细胞凋亡所需时间较HL 6 0长且剂量较大。提示拮新康可诱导白血病细胞凋亡 ,与剂量和时间有一定的关系 ,为临床治疗白血病提供了实验依据。     

冬凌草甲素诱导多药耐药细胞系K562／A02凋亡,逆转耐药性？…

目的：探讨冬凌草甲素诱导多药耐药细胞系Ｋ５６２／Ａ０２凋亡、逆转耐药性的作用。方法：以不同浓度的冬凌草甲素处理Ｋ５６２／Ａ０２及敏感株Ｋ５６２／Ｓ细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）比色法检测半数抑制率（ＩＣ５０）,分析冬凌草甲素对两种细胞柔红霉素（ＤＮＲ）、高三尖杉酯碱（ＨＨＴ）敏感性的影响,流式细胞仪检测冬凌草甲素对两种细胞内ＤＮＲ浓度的影响。结果：冬凌草甲素可诱导两种细胞     

附子中的新乌头碱对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的研究附子中的成分新乌头碱作用于白血病K562细胞株对其生物学特性的影响。方法采用高效液相色谱法(HPLC)检测附子中是否含有新乌头碱和苯甲酰新乌头原碱。用新乌头碱标准品作用白血病K562细胞,电子显微镜下观察白血病细胞形态变化。流式细胞仪检测白血病细胞的细胞周期状态、凋亡的情况。结果高效液相色谱法检测出附子中含有新乌头碱。25~50 mg/L的新乌头碱对K562细胞增殖有明显的抑制作用,并呈剂量和时间依赖性(P0.05)。K562细胞在形态学上有明显的凋亡变化。流式细胞仪检测白血病细胞的细胞周期和凋亡状态,S期比例上升,G1期比例降低(P0.05)。25~50 mg/L的新乌头碱能不同程度地诱导K562细胞发生凋亡(P0.05)。结论附子中的新乌头碱具有抑制白血病K562细胞增殖、诱导其细胞凋亡的作用。