旋毛虫不同发育阶段同工酶的电泳分析

目的 通过对旋毛虫不同发育阶段同工酶酶谱变化的研究，以探讨其生物发育过程中的一些规律。方法 应用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）和UVP凝胶分析仪对猪型黑龙江株旋毛虫成虫，肌肉期幼虫和新生幼虫的酯酶同工酶时期的MDH，EST酶谱基本相似。LDH的酶谱虽均有1条带，但新生幼虫最深，肌肉期幼虫最浅，MUF酶谱新生幼虫最深，成虫较浅，肌肉期幼虫未见酶带，结论 旋毛虫发育过程中MDH，EST同工酶变化较小，但是LDH、MUF同工酶存在较大差异。     

不同发育期卫氏并殖吸虫的苹果酸脱氢酶同工酶的研究

本文用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦(IEF)技术对卫氏并殖吸虫生活史3个发育阶段:囊蚴、童虫、成虫的苹果酸脱氢酶(MDH)同工酶谱进行研究。结果表明:从囊蚴到成虫MDH同工酶组份随着发育趋于复杂;在发育过程中,有些同工酶区带持续存在;随着宿主的转换有些区带消失或出现新的区带。定量分析显示同工酶活性随着生长和发育有所增减。结果提示:对发育过程中MDH酶谱的动态观察可部分地显示在遗传基因和寄生环境的双重影响下寄生虫所作出的适应性改变,是并殖吸虫发育生物学研究的有效手段之一。     

大白鼠体内卫氏并殖吸虫滞育虫体苹果酸脱氢酶(MDH)同工酶酶谱的研究

用卫氏并殖吸虫囊蚴感染大白鼠,检获两种滞育虫体,早期滞育虫体和晚期滞育虫体,用聚丙烯酰胺等电聚焦技术对两种滞育虫体的苹果酸脱氢酶(MDH)的同工酶酶谱进行分析,并与犬体童虫和成虫的酶谱相比较,结果发现在鼠体内从早期滞育虫体到晚期滞育虫体MDH同工酶区带增多,符合“卫氏并殖吸虫的MDH同工酶区带随发育呈增多及复杂的趋势”的研究结果。鼠体的晚期滞育虫体与犬体童虫和成虫的MDH酶谱基本相似,提示卫氏并殖吸虫在转续宿主体内滞育虫体的MDH同工酶的基因表达及修饰过程与适宜宿主体内的虫体可能一致。     

我国旋毛虫地理株的同工酶分析

目的 为旋毛虫属的分类提供依据.方法 应用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)对我国6个猪源旋毛虫地理株(河南、云南、哈尔滨、黑龙江同江、湖北及天津)肌幼虫的超氧化物歧化酶(SOD)、苹果酸酶(ME)、酯酶(EST)、谷氨酸脱氢酶(GLDH)进行分析,并以旋毛虫(17tichinella spiralis,T1)、乡土旋毛虫(T. nativa,T2)、布氏旋毛虫(T. britovi,T3)、伪旋毛虫(T. pseudlospiralis,T4)及纳氏旋毛虫(T. nelsoi,T7)的国际参考株作为对照.结果 我国6个猪源旋毛虫地理株的4种同工酶(SOD、ME、EST、GLDH)酶谱均与T1的相同.结论 经4种同T酶分析我国6个猪源旋毛虫地理株均为T1.     

华支睾吸虫不同发育期同工酶及蛋白质的研究

目的通过对华支睾吸虫不同发育时期的同工酶及蛋白质分析,了解其变化规律。方法以浓度梯度-聚丙烯酰胺凝胶电泳(CG-PAGSE)对10、20、30、609、0 d五个虫龄期华支睾吸虫乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)、脂酶(EST)、过氧化物酶(PO)、超氧化物歧化酶(SOD)进行同工酶分离,应用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离蛋白质(PT),用凝胶成像软件对酶(蛋白)带的迁移率、相对浓度分布、光密度等结果进行分析。结果60 d、90 d虫龄期LDH-5相对浓度增加;MDH以90 d组酶带最多,为8条;EST以20 d3、0 d组酶带最多,分别为8条和7条;PO在60 d9、0 d组分别多了1条带;SOD酶带随虫龄增大呈减少趋势;PT分子质量在6.0~169.8 ku之间,随虫龄增大带数增加。结论华支睾吸虫不同发育时期的同工酶及蛋白质变化有一定规律,实验结果为该虫的发育学、生理、生化及杀虫药物研究等提供了基础资料。     

一种体外培养旋毛虫成虫收集新生幼虫的改进方法

有关旋毛虫成虫和肌肉期幼虫的形态学、抗原性等方面的研究较多较深入,而由于收集新生幼虫不易,因此使有关研究受到了很大限制。本实验系参照Dennis等和Stewart等法,改进了体外培养旋毛虫成虫中收集大量新生幼虫的方法。     

曼氏迭宫绦虫成虫及裂头蚴3种同工酶电泳分析

应用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(PAGE),对曼氏迭宫绦虫成虫及幼虫裂头蚴的乳酸脱氢酶同工酶、酯酶同工酶及苹果酸脱氢酶同工酶进行了分析测定。结果显示,成虫与幼虫的3种同工酶谱均有明显差别,反映出该绦虫在不同的发育时期,其代谢特点不同。     

曼氏迭宫绦虫成虫与裂头蚴乳酸脱氢酶和酯酶同工酶的研究

本文应用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法分析了曼氏迭宫绦虫成虫与裂头蚴乳酸脱氢酶(LDH)和酯酶(EST)同工酶谱。结果表明,成虫LDH同工酶带和裂头蚴一样,仅有一条带,其位置差异不显著;成虫EST显示5条带,主带有2条;裂头蚴EST显示10条带,主带有3条。     

旋毛虫新生幼虫抗原的免疫印迹分析

利用免疫印迹法分析了旋毛虫的新生幼虫(NBL)抗原,并与旋毛虫的成虫和肌肉期幼虫抗原加以比较。NBL虫体组分经SDS-PAGE分离出约40条区带,与成虫和肌肉期幼虫的电泳图谱明显不同。免疫印迹表明,用NBL作免疫原可诱导家兔产生具有期特异性的免疫反应,其有抗原性的分子量分别为129、120、89、87、79、72、64、58、43、40、38、34、32和20kDa。但在自然感染过程中,宿主体内未检测到抗NBL的抗体。     

湖北地区肋壳钉螺与光壳钉螺种群间亲缘关系的探讨

应用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳对长江水系的湖北钟祥、蒲圻光亮钉螺和江陵、潜江、阳新助壳钉螺进行酯酶同工酶（EST）和苹果酸脱氢酶（MDH）电泳比较，结果显示：3地肋壳钉螺EST同工酶酶带数目、活性及Rf值完全一致；2地光亮钉螺与肋壳钉螺相比，酶谱特征也基本一致，EST同工酶仅1－3条弱带稍有差异；MDH同工酶仅蒲圻光亮钉螺与其它各地肋壳与光亮钉螺稍有差异，提示上述各地钉螺在种系进化上具有比较密切的亲缘关系。     

五个地理株周期型马来丝虫成虫蛋白和同工酶电泳分析

本文应用圆盘电泳对五个地理株——福建建阳株、安徽泾县株、四川乐山株、贵州独山株和贵州荔波株周期型马来丝虫成虫的蛋白和七种酶进行了区带分析和比较。结果显示五个虫株的蛋白、PGM和PO同工酶电泳型没有差异;而MDH和GPI的同工酶电泳型出现了两种类型,即贵州省内的两个株与另外三个株不同;G6PD、EsT和LDH没有区带出现。     

旋毛虫成虫、新生幼虫和肌幼虫抗原的保护性免疫研究

目的：比较旋毛虫成虫抗原和肌幼虫抗原接种小鼠诱导产生的保护性免疫。方法:检查肠道成虫、肌幼虫和血液中嗜酸性细胞数;用ELISA测血清中抗旋毛虫肌幼虫IgG抗体滴度。结果：成虫、新生幼虫和肌幼虫抗 免疫组的成虫减虫率分别为82.19％、72.31％和42.88％;肌幼虫减虫率分别为68.83％、78.19％和51.96％。血清IgG抗体滴度明显升高,成虫、新生幼虫和肌幼虫抗原免疫组的GMRT分别为对照组的7.46倍、5.28倍和4.92倍。血液嗜酸性粒细胞明显增多。结论：旋毛虫成虫抗原、新生幼虫抗原均为激发特异性液免疫和细胞免疫,诱导小鼠对攻击感染产生保护性。其中,成虫抗原和新生幼虫抗原显示出更好的免疫原性,而成虫抗原有可能成为较理想的免疫疫苗来源。     

Ts21基因在旋毛虫不同期虫体的表达及特性的研究

目的观察旋毛虫Ts21基因在不同发育期虫体的表达及其特性。方法应用RT-PCR检测旋毛虫Ts21基因在成虫、新生幼虫、感染后15d的成囊前幼虫及感染后42d的成囊幼虫(肌幼虫)的转录情况;应用抗Ts21重组蛋白血清通过间接荧光抗体试验(IFA)对成囊前幼虫及肌幼虫冰冻切片抗原进行检测。应用抗Ts21重组蛋白血清对旋毛虫肌幼虫粗(可溶性)抗原及排泄分泌(ES)抗原进行Western-blot分析。结果RT-PCR发现旋毛虫成虫与感染后42d肌幼虫均扩增出一条分子量约540bp的特异性条带(Ts21基因目的条带),而新生幼虫与感染后15d成囊前幼虫则未扩增出目的条带;IFA结果表明抗Ts21重组蛋白血清只与感染后42d成囊幼虫抗原发生阳性反应,而不与感染后15d的成囊前幼虫抗原发生阳性反应。Western-blot结果显示抗Ts21重组蛋白血清只与旋毛虫肌幼虫粗抗原和ES抗原中Mr 21 000的单一蛋白条带发生阳性反应。结论旋毛虫Ts21基因的表达具有期特异性,Ts21蛋白是旋毛虫肌幼虫ES抗原中的一部分。     

旋毛虫成虫可溶性抗原和排泄分泌抗原对小鼠免疫保护作用的比较研究

目的　比较旋毛虫成虫可溶性抗原和排泄分泌抗原对小鼠的免疫保护作用。方法　收集人工感染大鼠小肠内的成虫, 经研磨和冻融制备成虫可溶性抗原。采用体外培养的方法从培养液中提取旋毛虫成虫排泄分泌抗原。分别用两种抗原免疫小鼠, 间隔１ 周共免疫３ 次, 末次免疫后１ 周, 每只小鼠攻击感染１００ 条旋毛虫感染性肌肉幼虫。感染后１ 周检查小鼠小肠内成虫数量和雌虫生殖力, 感染后５ 周检查肌肉幼虫负荷。结果　成虫可溶性抗原诱导的成虫减虫率、新生幼虫减虫率和肌肉幼虫减虫率分别为７９５５ ％ 、６２２５ ％ 和６５０ ％ 。成虫排泄分泌抗原诱导的成虫减虫率、新生幼虫减虫率和肌肉幼虫减虫率分别是９７２７ ％ 、８６６０ ％ 和９００ ％ 。结论　实验结果表明旋毛虫成虫可溶性抗原和成虫排泄分泌抗原均能够诱导宿主产生较强的抗攻击感染的免疫力, 但后者的免疫原性更强。     

两型肝片吸虫同工酶等电点聚焦电泳比较研究

本文以等电点聚焦电泳对两型肝片吸虫过氧化物酶、苹果酸脱氢酶、酯酶同工酶进行了比较研究。结果显示,两型肝片吸虫过氧化物酶同工酶谱有显著性差别,苹果酸脱氢酶及酯酶同工酶谱也出现变异酶带。提示两型肝片吸虫已发生了一定程度的遗传分化。     

应用PCR检测旋毛虫DNA的研究

根据旋毛虫幼虫１．６ｋｂ基因序列而设计合成引物，并进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）以检测含鼠肌肉旋毛虫幼虫及纯幼虫。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，可见扩增出了特异的６７０ｂｐ与５００ｂｐ大小的ＤＮＡ条带，而正常肌肉对照未见扩增出此条带。本法可检测０．０１条幼虫产物，具有高敏感性和特异性     

旋毛虫新生幼虫p46000抗原基因的表达与抗原性分析

目的　对旋毛虫新生幼虫p46000抗原基因进行原核表达并检测重组抗原的抗原性。　方法　利用聚合酶链反应 (PCR)扩增目的基因 ,克隆到原核表达载体 pET-28a ,构建重组表达质粒 ,经酶切及测序鉴定后转化大肠埃希菌BL21(DE3 ),以异丙基-β-D 硫代半乳糖苷诱导表达。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)、酶联免疫吸附测定 (ELISA)和蛋白质印迹法 (Western blotting)分析表达产物。　结果　 SDS-PAGE结果显示表达产物的分子量约为Mr 48000 ,与理论值相符。ELISA和Western blotting结果表明 ,重组蛋白可被旋毛虫感染的猪血清和兔抗重组蛋白血清识别 ;兔抗重组蛋白血清可识别旋毛虫新生幼虫抗原Mr 46000蛋白。　结论　成功表达了旋毛虫新生幼虫p46000抗原基因 ,重组抗原具有良好的抗原性。     

旋毛虫新生幼虫抗原保护性免疫的研究进展

旋毛虫新生幼虫抗原具有很好的免疫原性，有明显的抗旋毛虫保护性免疫作用。本文介绍了旋毛虫新生幼虫抗原保护性免疫研究的新进展。