共刺激分子B7在肾细胞癌的表达及意义

目的;检测Ｂ７基因在肾细胞癌的表达及其与肾细胞癌分级,分期及预后的关系。方法：本文应用ＲＴ－ＰＣＲ和免疫组织化学技术检测了２２例肾组织癌组织Ｂ７的表达。结果：ＲＴ－ＰＣＲ５例阳性,免疫组化４例阳性,Ｂ７ｍＲＮＡ表达与肾癌病理分级,分期无关系,病理切片ＨＥ染色显示,Ｂ７阳性肿瘤组织内淋巴细胞浸润明显增多。结论：表达Ｂ７的肿瘤组织局部抗肿瘤免疫反应增强,提示Ｂ７表达可能与肿瘤预后有关。大部分泌尿系肿瘤     

P^16蛋白,增殖细胞核抗原在肾癌的表达及与预后的关系

目的　探讨多肿瘤抑制基因Ｐ１６／ＭＴＳ１蛋白在肾细胞癌（ＲＣＣ）的表达及与临床病理指标、预后的关系。方法　采用免疫组化方法对Ｐ１６蛋白和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）在５６例ＲＣＣ的表达进行病理观察。结果　Ｐ１６蛋白在ＲＣＣ的阳性率为６０．７％（３４／５６）,各组织学分级的阳性率差异有显著性（Ｐ＜０．０１）,其阳性组和阴性组的５年生存率差异无显著性。ＰＣＮＡ标记指数（ＰＣＮＡＬＩ）在１％～８５％,平均为１９．７％,在不同组织学分级及临床分期中差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。ＰＣＮＡ高表达组和ＰＣＮＡ低表达组的５年生存率差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。Ｐ１６蛋白的表达与ＰＣＮＡ无一致性（Ｐ＜０．０５）。结论　ＰＣＮＡＬＩ是反映ＲＣＣ组织分化程度及预后的良好指标,Ｐ１６蛋白的胞浆型表达对肾癌临床分期及预后无明显影响。     

凋亡抑制基因XIAP在肾透明细胞癌中的表达

目的研究凋亡抑制基因XIAP在肾透明细胞癌组织的表达情况,以探讨其与肾癌临床病理特征的关系。方法应用反转录-聚合酶链反应和免疫组织化学法,检测XIAP在70例肾透明细胞癌中的表达情况。结果70例肾癌组织中XIAP基因高表达,XIAP蛋白阳性表达率74.2%,10例非肿瘤肾组织无1例XIAP表达阳性;随着病理分级和临床分期的逐渐升高,XIAP蛋白的表达也愈高,差异有统计学意义(P<0.05);XIAP的表达与肾癌的病理分级、临床分期相关(P<0.05)。结论XIAP的表达与肾癌的病理分级、临床分期密切相关,XIAP可作为反映肾癌生物学行为的指标之一,有可能用于肾癌预后的判断。     

PCR法检测EB病毒基因及其与鼻咽癌发病的关系

目的　研究患者颈部转移性淋巴结中是否存在ＥＢ病毒。方法　①采用聚合酶链反应（ＰＣＲ） 技术检测５０ 例患者的颈部淋巴结穿刺液;②采用ＰＣＲ法检测１５ 例石蜡包埋鼻咽癌（ＮＰＣ） 组织;③对１２例ＥＢ病毒ＶＣＡＩｇＡ 抗体阳性患者血清进行ＥＢ 病毒基因检测。结果　①３０ 例ＮＰＣ 患者中,２７ 例ＥＢＶＤＮＡ 阳性（ 阳性率９０ ％ ） ;７ 例头颈部其他肿瘤患者中１ 例阳性（１４－３ ％ ） ;８ 例其他部位肿瘤患者中１ 例阳性（１２－５ ％ ） ;５ 例鼻咽部炎症患者ＥＢＶＤＮＡ 检测均为阴性。经χ２ 检验,ＮＰＣ 组与其他肿瘤及鼻咽部炎症组相比,阳性率差异有非常显著意义（ Ｐ＜ ０－００５） 。②１５ 例石蜡包埋ＮＰＣ 组织,ＥＢＶ基因阳性者有１２ 例（ 阳性率８０ ％ ） ;１ 例鼻咽部慢性粘膜炎石蜡包埋组织末检测到ＥＢＶＤＮＡ。③３ 例临床诊断为ＮＰＣ 的血清中均检测到ＥＢＶＤＮＡ（２５ ％ ） 。结论　对于隐性鼻咽癌和原发灶不明的颈部转移癌中确认是否为鼻咽癌,ＥＢ 病毒基因检测是有价值的,ＰＣＲ 技术可以为ＮＰＣ 的诊断和鉴别诊断提供参考依据。     

血小板衍化内皮细胞生长因子在肾细胞癌中的表达及其预后意义

目的 探讨血小板衍化内皮细胞生长因子(PD-ECGF)在肾细胞癌中的表达及其预后意义.方法 采用免疫组化EnVision两步法检测2002年6月至2006年12月76例肾细胞癌患者肿瘤组织中PD-ECGF的表达水平,并分析其与肾细胞癌患者临床病理特征及预后的关系.结果 76例肾癌患者肿瘤组织中PD-ECGF高表达41例,低表达35例.PD-ECGF表达水平与肿瘤分期及组织学分级呈正相关.PD-ECGF高表达患者5年总生存率(60.98％)显著低于PD-ECFG低表达患者(94.29％,P=0.000).单因素分析显示肿瘤分期、淋巴结转移、远处转移、组织学分级及PD-ECGF表达水平均与肾癌患者5年生存率密切相关,Cox比例风险模型多因素分析显示肿瘤分期、组织学分级及PD-ECGF表达水平为影响肾癌患者预后的独立危险因素(OR=17.971、9.702、6.790,95％CI:3.010～107.290、1.835 ～ 51.305、1.156 ～ 39.894).结论 PD-ECGF在肾细胞癌的发生、发展中可能起重要作用,PD-ECGF高表达可能与肾细胞癌的预后有关.     

RT-PCR方法检测非神经元、类神经元、神经元细胞系中淀粉样前体蛋白基因表达

目的与方法：根据人淀粉样前体蛋白（ａｍｙｌｏｉｄｐｒｅｃｕｒｓｏｒｐｒｏｔｅｉｎ，ＡＰＰ）基因ｃＤＮＡ序列设计的引物，提取总ＲＮＡ，利用ＲＴＰＣＲ方法检测非神经、类神经及神经细胞系ＡＰＰ基因的表达。结果：利用专门设计的引物不能检测野生型ＣＯＳ７细胞中ＡＰＰ基因的表达，但可以检测转染人ＡＰＰ基因的非神经元类ＣＯＳ７细胞，类神经元的野生型ＰＣ１２及人神经母细胞瘤细胞ＳＨＳＹ５Ｙ细胞中ＡＰＰ基因的表达。结论：利用特异设计的人ＡＰＰ基因引物及ＲＴＰＣＲ方法可以检测类神经及神经细胞系ＡＰＰ基因的表达     

nm_(23)-H_1 mRNA在胰腺癌中的表达及其与预后的关系

目的：探讨肿瘤转移抑制基因ｎｍ２３－Ｈ１表达产物ｎｍ２３－Ｈ１ｍＲＮＡ在胰腺癌组织中的表达及其与预后的关系。方法：应用ＲＴ－ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法，检测２７例胰腺癌及７例正常胰腺组织中ｎｍ２３－Ｈ１ｍＲＮＡ的表达。结果：７例正常胰腺组织仅１例表达ｎｍ２３－Ｈ１ｍＲＮＡ，占１４．２８％，２７例胰腺癌标本中有１９例表达ｎｍ２３－Ｈ１ｍＲＮＡ，占７０．２５％。经卡方检验发现：ｎｍ２３－Ｈ１ｍＲＮＡ表达与胰腺癌病理分级、临床分期及伴随局部淋巴结转移呈显著相关（Ｐ＜０．０５）。结论：检测ｎｍ２３－Ｈ１ｍＲＮＡ表达对判断胰腺癌恶性程度及预测预后有重要参考价值。     

结肠癌中p73基因改变的意义

研究Ｐ７３基因在结肠癌中的改变及其意义,方法采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法检测４０例结肠癌及其癌帝非癌组织中Ｐ７３基因突变,采用定量ＲＴ－ＣＲ方法检测Ｐ７３基因的表达。结果①ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测出７例存在Ｐ７３等位基因缺失,未见突变;②定量ＲＴ－ＰＣＲ检测出３３例结肠癌呈高表达,７例呈中等表达,非癌列呈低水平表达。     

肾癌增殖细胞核抗原的研究

为探讨肾癌的生物学行为及预后，采用免疫组化ＡＢＣ法对５３例肾癌组织中ＰＣＮＡ进行检测，取６例肾错构瘤及正常肾组织作为对照。结果发现：肾错构瘤中未见ＰＣＮＡ着色，在正常肾组织中仅见少许细胞着色，而肾癌所有切片均呈阳性反应。肾癌组织的ＰＣＮＡ表达与肿瘤分期、分级均相关，ＰＣＮＡ高表达组（３～４级）术后５年生存率显著较ＰＣＮＡ低表达组（１～２级）短。ＰＣＮＡ可定量地判断肿瘤分化程度及恶性度，可作为肾癌预后判断的独立指标     

非霍奇金淋巴瘤中EB病毒BNLF_1片段及其表达产物的检测及意义

为研究ＥＢ病毒与非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）的关系，采用ＰＣＲ、原位杂交、ＬＳＡＢ（ｌａｂｅｌｉｎｇｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｖｉｎｂｉｏｔｉｎ）免疫组化技术，检测３２例ＮＨＬ和３３例反应性增生淋巴结中的ＥＢＶＢＮＬＦ１基因片段及其表达产物潜伏膜蛋白（ＬＭＰ１）。ＮＨＬ中ＥＢＶＢＮＬＦ１ＰＣＲ扩增阳性率为５３％，明显高于反应性增生淋巴结组２７％（Ｐ＜０．０５），其中５例Ｔ细胞淋巴瘤全部阳性。１７例ＰＣＲ阳性的ＮＨＬ中５例原位杂交阳性。ＬＭＰ１检测仅２例阳性。结果表明本组病例半数以上ＮＨＬ中有ＥＢＶ感染，可能与肿瘤的发生发展有一定关系。     

卵巢癌p16基因的纯合性缺失、突变及表达异常的研究

目的：研究p16基因的纯合性缺失，突变及表达异常与卵巢癌的发生是否存在相关关系。方法：采用PCR-SSCP检测卵巢癌p16基因的纯合性缺失和突变；采用RP-PCR定性及半定量分析p16基因；采用免疫组化技术检测p16蛋白。结果：32例卵巢癌中检测到1例外显子1突变，未检测到p16基因的纯合性缺失；RT-PCR分析卵巢癌中p16基因mRNA均有表达，半定量分析卵巢癌与正常卵巢组织中p16基因mRNA表达水平无差别；免疫组化检测9例卵巢癌中的p16蛋白为阴性（28.2%)。结论：卵巢癌的发生与p16基因的纯合性缺失和突变无相关关系，与p16基因异常表达有相关关系。     

HDAC7在肾癌组织中的表达及其临床意义

目的检测并分析肾癌(透明细胞癌)组织中HDAC7mRNA和蛋白的表达差异,探讨其与肾癌的发生、发展以及患者预后之间的关系。方法应用实时荧光定量PCR和免疫组化法对60例肾癌组织及20例正常肾组织中HDAC7的表达情况进行检测,并通过对患者随访,探讨其蛋白表达水平与肾癌临床病理学指标及患者预后之间的关系。结果HDAC7在肾癌组织中的表达较正常肾组织明显增高,且与肾癌的病理分级和临床分期之间均呈负相关(P<0.05)。HDAC7低表达者的生存率低于HDAC7高表达者(P<0.05)。结论 HDAC7可能与肾癌的发生、发展有关,提示HDAC7可作为评估肾癌恶性程度及预后的肿瘤标志物。     

人大肠癌中Ⅰ型膜型金属蛋白酶mRNA的表达

目的:探讨Ⅰ型膜型金属蛋白酶(membrane-type matrix metalloproteinase 1,MT1-MMP)mRNA的表达与人类大肠癌的关系.方法:用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)对38例大肠癌中MT1-MMP mRNA的表达进行检测.结果:86.8%(33/38)的大肠癌中MT1-MMP mRNA的表达高于相应正常黏膜(P＜0.01),癌/ 膜的中位数为1.63(Min=0.70,Max=11.00),其表达水平与大肠癌的浸润深度呈正相关(P＜0.05).结论:MT1-MMP高表达可能在大肠癌对周围组织的浸润过程中具有重要作用,可以作为反映大肠癌侵袭能力的生物学标志物.     

RFA联合TACE和HFH对兔VX2肝移植瘤细胞凋亡的影响

目的：探讨射频消融（RFA）联合经动脉化疗栓塞（TACE）和高频热疗（HFH）治疗对兔VX2肝移植瘤细胞凋亡的影响。方法建立兔VX2肝移植瘤模型,随机分为 RFA＋ TACE治疗组（A组）,RFA＋ TACE＋ HFH 治疗组（B组）,RFA＋HFH治疗组（C组）和TACE＋ HFH治疗组（D组）。检测各组治疗后的血清谷丙酸转氨酶（ALT）,了解治疗的安全性。TUNEL法检测癌组织凋亡及计算凋亡指数;免疫组织化学、Western blot和实时荧光定量PCR技术检测Caspase‐3蛋白和mRNA水平。结果血清ALT在B组升高最明显。与其他组比较,凋亡指数在B组显著升高（P＜0．05）。免疫组织化学法表明Caspase‐3蛋白在各组中出现强弱不同的表达,在B组表达明显增强。Western blot和实时荧光定量PCR显示Caspase‐3蛋白和mRNA在B组表达最高,与其他组比较差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 RFA＋ TACE＋ HFH治疗能有效杀伤肿瘤细胞,促进肿瘤细胞的凋亡,但对于肝功能的损害也较为严重。     

实时荧光定量PCR检测原发性肝癌中CDK4基因的表达

目的：应用实时荧光定量PCR法检测原发性肝细胞癌中CDK4基因的表达。方法：提取手术切除人肝癌和癌旁组织总RNA并逆转录为cDNA。应用实时荧光定量PCR法观察人肝细胞癌组织及癌旁组织中cDK4的表达水平。结果：20例肝细胞癌标本中有18例肿瘤组织中CDK4基因表达明显高于癌旁肝组织，其中7例高出4倍以上。结论：实时荧光定量PCR可以准确定量测定基因的表达；CDK4基因在肝细胞癌的发生、发展中可能起重要作用。     

石蜡包埋肾肿瘤标本VHL基因突变研究

目的：研究石蜡包埋肾肿瘤标本ＶＨＬ基因突变情况。方法：采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法分析３８ 例肾透明细胞癌、１０ 例肾颗粒细胞癌、１０ 例肾盂移行细胞癌、１０ 例肾胚瘤ＶＨＬ基因突变情况。结果：９ 例肾透明细胞癌ＶＨＬ基因外显子２ 发生突变,突变率为２３％ ,其他３ 种肾肿瘤均未发现ＶＨＬ基因突变。结论：ＶＨＬ基因突变与肾透明细胞癌的发生关系密切,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法检测ＶＨＬ基因突变可用于ＶＨＬ病及肾透明细胞癌的诊断     

T1期肾透明细胞癌组织中B7-H4的表达与预后的关系

目的:研究B7-H4在T1期肾癌组织中的表达及其评估预后的价值?方法:检测并统计102例肾癌标本中B7-H4的表达率?肾癌患者临床特征及术后复发率等?结果:B7-H4表达阳性及阴性组在临床及病理特征方面无统计学差异;无瘤生存率和转移率方面阳性组明显高于阴性组,具有统计学差异;多变量分析中,肾癌术后复发方面,肿瘤大小?临床分期及B7-H4阳性表达具有显著相关性(P < 0.05)?结论:B7-H4的表达与肾透明细胞癌的发生发展及免疫逃避密切相关,在评估肾癌患者预后方面具有一定价值?     

抑癌候选基因NDRG2在乳腺肿瘤组织及乳腺癌细胞系中的表达分析

目的：分析抑癌候选基因NDRG2在人类乳腺肿瘤组织及乳腺癌细胞系中的表达情况．方法：收集4种乳腺癌细胞系及21例乳腺肿瘤组织及其癌旁组织，提取总RNA，应用半定量RT-PCR及RNA斑点杂交的方法检测NDRG2 mRNA的表达水平．为进一步分析Ndrg2蛋白质的表达水平，分别提取21例组织及细胞系的总蛋白，应用蛋白印迹技术检测其Ndrg2的蛋白表达水平，同时运用免疫组化的方法检测4种乳腺癌细胞系中Ndrg2的表达情况．结果：RT-PCR结果显示，4种乳腺癌细胞系中，有3种NDRG2 mRNA水平明显降低．21例乳腺肿瘤组织中，有5例NDRG2的mRNA水平明显降低．蛋白印迹结果显示，筛选出的3种低表达NDRG2 mRNA乳腺癌细胞系中2种Ndrg2的蛋白表达明显降低，而有1种Narg2的蛋白表达没有变化．21例乳腺肿瘤组织中发现5例Narg2的蛋白水平明显下降，与RT-PCR检测结果一致．免疫组化结果显示，4种乳腺癌细胞系中，2种细胞系Narg2的表达水平明显降低，1种细胞系Ndrg2表达水平没有明显变化，与蛋白印迹结果一致．结论：Ndrg2在某些乳腺肿瘤组织和乳腺癌细胞系中呈低表达，提示其可能对乳腺肿瘤的发生或发展有重要作用，这不仅为研究乳腺癌的发病机制进一步提供了线索，而且对乳腺癌的诊断和治疗具有重要意义．     

Toll样受体7和NF-κB在食管鳞癌中的表达及其临床意义

目的探讨Toll样受体7(TLR7)和NF-κB在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测20例食管鳞癌及相应癌旁正常组织中TLR7和NF-κB mRNA的表达;采用免疫组织化学方法检测90例食管鳞癌及相应癌旁正常组织中TLR7和NF-κB蛋白的表达。结果 (1)食管鳞癌组织中TLR7和NF-κB mRNA的表达量为(0.72±0.59)、(0.69±0.32),显著高于癌旁正常组织的(0.45±0.36)、(0.47±0.16),其表达差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)食管鳞癌组织中TLR7和NF-κB蛋白的阳性表达率为77.6%(68/90)、75.4%(67/90),明显高于癌旁正常组织的18.9%(17/90)、33.3%(30/90),其表达差异均有统计学意义(P<0.05);TLR7蛋白表达与肿瘤的分化程度和肿瘤浸润深度密切相关,表达差异均有统计学意义(P<0.05);NF-κB蛋白(p65)表达与肿瘤的分化程度和淋巴结转移密切相关,表达差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)食管癌组织中TLR7和NF-κB蛋白的表达呈正相关(r=0.259,P=0.014)。结论 TLR7可能通过上调NF-κB mRNA和蛋白的表达,促进食管鳞癌的发生与发展。     

新抑癌基因WTX在肾肿瘤中的表达及意义

目的 探讨定位于X染色体的新抑癌基因WTX mRNA及其蛋白在肾肿瘤及对应正常肾组织中的表达及意义。方法 采用地高辛标记cDNA探针原位杂交及免疫组织化学S-P法检测40例肾细胞癌、10例肾母细胞瘤以及对应正常肾组织中WTX mRNA及其蛋白的表达情况。结果 WTX mRNA及其蛋白在正常肾组织普遍高表达,而在肾母细胞瘤中表达明显降低,差异具有统计学意义（P<0.001）,在肾细胞癌中表达降低,也具有统计学意义（P<0.05）。WTX mRNA与蛋白表达具有较好的一致性。结论 WTX抗体的应用为WTX蛋白的生物学功能研究奠定了实验基础。WTX表达降低与肾肿瘤高度相关,可能在肾肿瘤的发生、发展中发挥重要作用。