多重耐药的铜绿假单胞菌产β-内酰胺酶的检测及耐药性研究

目的 对286株铜绿假单胞菌（PA）持续高产金属β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶和AmpC酶的检测及耐药性分析，揭示其耐药机制，指导临床合理用药。方法 采用VITEK-32和ATB自动微生物分析仪进行286株铜绿假单胞菌的鉴定与药敏试验，对可疑产金属β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶和AmpC酶的菌株，用改良酶提取物三维试验法和双纸片协同试验进行三种酶表型的确证。结果 286株铜绿假单胞菌β-内酰胺酶的总检出率为17．8％（511286），其中，金属酶的检出率为8．7％（25／286），ESBLs的检出率为5．2％（151286），AmpC酶的检出率为3．8％（111286），金属酶＋AmpC酶的检出率为0．7％。产酶菌株的耐药性比非产酶菌株的耐药性明显严重，产酶菌对第3、第4代头孢菌素、单环β-内酰胺类、氟喹诺酮类、磺胺类及酶抑制剂复合抗生素的耐药率均高于50％，结论 产生AmpC酶、ESBLs和金属β-内酰胺酶是PA对β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制，产酶菌株对多种抗生素耐药，应加强对3种β-内酰胺酶的检测，合理使用抗生素，减少耐药菌株的产生及播散。     

多重耐药铜绿假单胞菌产β内酰胺酶研究

目的 研究临床分离所得多重耐药铜绿假单胞菌产β内酰胺酶情况,以指导临床合理使用抗菌药物. 方法 用改良三相水解实验检测药敏试验筛选出的30株多重耐药铜绿假单胞菌产β内酰胺酶情况,然后对产酶菌株进行等电聚焦电泳,判断产酶情况. 结果 30株细菌均未检测到金属酶;26株细菌产β内酰胺酶,其中25株为持续高产AmpC酶,1株同时持续高产AmpC酶和超广谱β内酰胺酶(ESBLs).多重耐药铜绿假单胞菌的产酶率为86.7%. 结论 多重耐药铜绿假单胞菌以持续高产AmpC酶为主;改良三相水解实验能消除外膜通透性降低,主动外排泵过度表达和产酶等因素干扰,从而准确、有效地检测出产ESBLs铜绿假单胞菌株.     

多重耐药铜绿假单胞菌产β内酰胺酶研究

目的研究临床分离所得多重耐药铜绿假单胞菌产β内酰胺酶情况,以指导临床合理使用抗菌药物。方法用改良三相水解实验检测药敏试验筛选出的30株多重耐药铜绿假单胞菌产β内酰胺酶情况,然后对产酶菌株进行等电聚焦电泳,判断产酶情况。结果30株细菌均未检测到金属酶;26株细菌产β内酰胺酶,其中25株为持续高产AmpC酶,1株同时持续高产AmpC酶和超广谱β内酰胺酶(ESBLs)。多重耐药铜绿假单胞菌的产酶率为86.7%。结论多重耐药铜绿假单胞菌以持续高产AmpC酶为主;改良三相水解实验能消除外膜通透性降低,主动外排泵过度表达和产酶等因素干扰,从而准确、有效地检测出产ESBLs铜绿假单胞菌株。     

铜绿假单胞菌高突变性耐药与产β-内酰胺酶的关系

目的:了解铜绿假单胞菌高突变功株的耐药性与产β-内酰胺酶的关系.方法:对分离出的细菌采用API 20NE系统进行鉴定,药敏试验采用K-B法,用内汤稀释法检测高突变菌株,用改良三维试验检测高突变菌株产β-内酰胺酶的情况,用2-巯基丙酸抑制试验筛选金属酶.结果:在120株铜绿假单胞菌中,有45株突变频率超过参考菌株20倍以上,占37.5%.高突变铜绿假单胞菌对亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南、阿米卡星和环丙沙星的耐药率均接近或超过60.0%.45株高突变菌株中有18株(40.0%)产ESBLs,25株(55.6%)产AmpC酶,6株(13.3%)产金属酶.结论:高突变性铜绿假单胞菌对临床常用的抗生素耐药率较高,产ESBLs,AmpC酶和金属酶是其对多种抗生素高度耐药的主要原因之一.     

肠杆菌科细菌产AmpC酶和ESBLs的状况及对β-内酰胺类药物药敏检测分析

目的:了解肠杆菌科细菌产头孢菌素酶(AmpC)酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的状况及对β-内酰胺酶类药物药敏情况。方法:应用头孢西丁三维试验检测AmpC酶,用纸片法检测ESBLs。对β-内酰胺酶类药物药敏试验采用K-B琼脂扩散法。结果:AmpC酶阳性为13.3%(149/1157),其中以阴沟肠杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯阳性率较高,而ESBLs阳性为43.0%(498/1157),其中以大肠埃希菌、肺炎克雷伯、阴沟肠杆菌阳性率较高,ESBLs和AmpC同时阳性为4.7%(54/1157)。除对亚胺培南未形成耐药外,AmpC阳性菌株对β-内酰胺酶类药物耐药率超过50%,ESBLs则超过70%,这些均显著高于非产酶株。结论:须要计划地使用各种抗生素类药物,防止更多的AmpC和ESBLs阳性菌株的形成。     

肠杆菌科细菌产AmpC酶和ESBLs的状况及对β-内酰胺类药物药敏检测分析

目的:探讨临床分离的肠杆菌科细菌产头孢菌素酶(AmpC酶)和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的状况及对β-内酰胺酶类药物药敏情况,为临床用药提供参考依据。方法:AmpC酶测定采用三维试验法,ESBLs测定采用纸片法。对β-内酰胺酶类药物药敏试验采用K-B琼脂扩散法。结果:AmpC酶阳性为15.5%(26/168),ESBLs阳性为41.7%(70/168)ESBLs和AmpC同时阳性为4.8%(8/168)。AmpC阳性菌株对大多数β-内酰胺酶类药物耐药率超过70%,ESBLs则超过60%,亚胺培南耐药率最低,头孢派酮/巴坦次之。结论:AmpC酶和ESBLs是导致肠杆菌科细菌耐药的两类主要酶,亚胺培南是治疗由产AmpC酶和/或ESBLs菌引起感染的有效抗生素。     

三维实验法检测耐亚胺培南的铜绿假单胞菌产β-内酰胺酶

[目的]了解耐亚胺培南的铜绿假单胞菌产β-内酰胺酶的分布及分离率。[方法]采用K-B法进行药物敏感试验,筛选耐亚胺培南的铜绿假单胞菌;再进行改良三维实验,对菌株所产β-内酰胺酶进行分析。[结果]临床分离耐亚胺培南的铜绿假单胞菌40株中,单产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）9株（22.5%）,单产高产染色体头孢菌素酶（AmpC）2株（5.0%）,5株为超超广谱β-内酰胺酶（SSBL）（12.5%）,3株产酶量过高或其他原因（7.5%）,21株无酶活性（52.5%）。[结论]产β-内酰胺酶是耐亚胺培南铜绿假单胞菌的主要耐药机制之一。     

120例肺炎克雷伯菌ESBLs和AmpC酶检测及耐药分析

目的探讨本院儿科病区下呼吸道标本中分离的肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和头孢菌素酶（AmpC酶）的情况及耐药分析。方法采用改良的酶提取物三维试验法检测ESBLs和AmpC酶,采用纸片扩散（K-B）法检测肺炎克雷伯菌对13种抗生素的耐药率。结果从120株下呼吸道标本中分离的肺炎克雷伯菌中单产ESBLS,单产AmpC酶和同时产AmpC酶＋ESBLs的阳性率分别为20.8％（25／120）,10.0％（12／120）和4.2％（5／120）。单产AmpC酶、单产ESBLs及同时产AmpC酶＋ESBLs对13种抗生素的耐药率大部分均高于不产酶菌株。结论本院儿科病区下呼吸道标本中分离的肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因是产生AmpC酶和ESBLs,对产酶菌株临床经验用药首选碳青霉烯类抗生素,其次是β-内酰酶类抗生素和酶抑制剂、头霉类抗生素及其他敏感抗生素。     

90株新生儿痰培养大肠埃希菌耐药性分析

目的 分析我院新生儿科病区痰培养产ESBLs、AmpC酶大肠埃希菌的耐药情况,指导临床合理用药.方法 按CLSI推荐的超广谱β内酰胺酶(ESBLs)确证试验,对大肠埃希菌进行ESBLs检测,并用三维试验法、三维试验抑制试验进行AmpC酶检测.结果 90株大肠埃希菌中,检到产ESBLs菌株50株,阳性率高达55.56%.15株耐头孢西丁菌株检到4株产AmpC酶,其中单产AmpC酶1株,产AmpC+ESBLs菌株3株,AmpC酶阳性率为4.44%(4/90).结论 分离自我院新生儿科下呼吸道的大肠埃希菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药严重,主要以产ESBLs和(或)AmpC酶为主.给临床抗感染治疗带来很大困难,是院内感染的一大隐患.     

铜绿假单胞菌产AmpC酶和ESBLs的研究

目的:研究我院多重耐药铜绿假单胞菌产ESBLs与AmpC酶的耐药表型和基因型,了解两种酶的分布情况。方法:用K-B法进行ESBLs试验,3-氨基苯酚硼酸(APB)纸片增强法检测AmpCβ-内酰胺酶表型阳性菌;IPM和多底物纸片法进行诱导产AmpC酶定性试验;PCR检测AmpC酶和ESBLs基因并进行测序分析。结果:70株菌检测出产AmpC酶阳性菌51株,其中33株诱导产AmpC酶试验阳性,诱导率依次氨曲南和头孢他啶-克拉维酸>哌拉西林>头孢他啶>头孢吡肟>头孢噻肟>头孢噻肟-克拉维酸,1株扩增出DHA型AmpC酶,经测序为DHA-1型;ESBLs阳性1株,扩增为tem基因。结论:我院存在产ESBLs与AmpC酶的多重耐药铜绿假单胞菌。     

下呼吸道分离的铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药机制探讨

目的探讨下呼吸道感染铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性及可能的作用机制。方法收集下呼吸道标本中分离的铜绿假单胞菌58株。采用纸片扩散法检测铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性,采用改良三维试验方法检测超广谱-内酰胺酶（ESBLs）和头孢菌素酶（AmpC酶）,采用外膜蛋白图谱紫外吸收法测定外膜蛋白OprD2含量。结果22株对亚胺培南耐药,其中检出单产ESBLs8株,单产AmpC酶6株,同时产AmpC酶和ESBLs3株。亚胺培南耐药株OprD2相对含量明显低于敏感株（P〈0.01）。结论ESBLs和AmpC酶的产生以及外膜蛋白OprD2的减少是患者下呼吸道感染铜绿假单胞菌对亚胺培南抗生素耐药的主要原因。     

铜绿假单胞菌耐药性及β-内酰胺酶检测与分析

目的分析安徽医科大学第一附属医院铜绿假单胞菌(PA)的感染分布、耐药性及β-内酰胺酶检测情况,为临床治疗提供依据。方法用琼脂稀释法检测120株PA的最小抑菌浓度(MIC),用2-巯基丙酸抑制试验和改良三维试验检测120株PA中的金属酶β-内酰胺酶(MBL)、超广谱β-内酰胺酶(ESBL)和AmpC酶。结果PA在临床上的感染主要以上呼吸道为主(痰液及咽拭子),14种临床常用抗生素表现为多重耐药,耐药率达80%以上的抗生素有7种,依次为头孢曲松95.8%、头孢噻肟89.2%、加替沙星86.7%、氨曲南、庆大霉素和环丙沙星耐药率均为85%、左氧氟沙星的耐药率为83.3%。120株PA中65株产β-内酰胺酶,改良三维试验检出其中产ESBLs酶、AmpC酶、MBL酶分别为9株、4株和37株;10株同时产MBL酶和ESBLs;5株未检出β-内酰胺酶型别。结论PA对多种抗菌药物的耐药率高,多重耐药性明显。产β-内酰胺酶复杂,以产MBL为主,临床应根据药敏试验结果及产酶情况,综合考虑合理选用抗生素,以减少耐药菌株产生和控制医院感染。     

下呼吸道标本肺炎克雷伯菌的耐药性分析及产ESBLs和AmpC酶的检测

目的探讨下呼吸道标本肺炎克雷伯菌的耐药性分析及产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和头孢菌素酶（AmpC酶）的检测。方法采用双纸片协同扩散法检测ESBLs和改良三维试验检测AmpC酶,并采用纸片扩散（K-B）法检测180株肺炎克雷伯菌对18种常用抗生素的耐药率。结果180株分离的肺炎克雷伯菌中检出单产ESBEs70株（38．9％）,单产AmpC酶22株（12．2％）,同时产AmpC酶和ESBLs即超超广谱-内酰胺酶（SSBLs）12株（6．7％）。单产AmpC酶、ESBLs及SSBLs对18种常用抗生素的耐药率均高于不产酶菌株（除哌拉西林／他巴唑）。结论下呼吸道感染肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因是产生ESBLs和AmpC酶,临床经验用药可选择β-内酰胺类／β-内酰胺酶抑制剂和头霉素类抗生素,对重症感染首选碳青霉烯类抗生素。     

浅议新生儿肺炎克雷伯菌的耐药性

目的 分析我院新生儿科病区产ESBLs、AmpC酶的肺炎克雷伯菌的耐药情况,指导临床合理用药.方法 按CLSI 推荐的超广谱β内酰胺酶(ESBLs)确证试验,对肺炎克雷伯菌进行ESBLs检测,并用三维试验法、三维试验抑制试验进行AmpC酶检测.结果 150株肺炎克雷伯菌中,检到产ESBLs肺炎克雷伯菌76株,阳性率高达50.67%.69株耐头孢西丁菌株检到21株产AmpC酶,其中单产AmpC酶4株,产Ampc+ESBLs菌株17株.AmpC酶阳性率为14.0%(21/150).结论 分离自我院新生儿科的肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药严重,主要以产ESBLs和(或)AmpC酶为主.给临床抗感染治疗带来很大困难,是院内感染的一大隐患.     

160株新生儿肺炎克雷伯菌的耐药性分析

目的 分析我院新生儿科病区产ESBLs、AmpC酶的肺炎克雷伯菌的耐药情况.指导临床合理用药.方法 按CLSI推荐的超广谱β内酰胺酶(ESBLs)确证试验.对肺炎克雷伯菌进行ESBLs检测,并用三维试验法、三维试验抑制试验进行AmpC酶检测.结果 160株肺炎克雷伯菌中,检到产ESBLs肺炎克雷伯菌84株.阳性率高达52.50%.71株耐头孢西丁菌株检到23株产AmpC酶.其中单产AmpC酶5株.产Ampc+ESBLs菌株18株.AmpC酶阳性率为14.38%(23/160).结论 分离自我院新生儿科的肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药严重.主要以产ESBLs和(或)AmpC酶为主.给临床抗感染治疗带来很大困难.是院内感染的一大隐患.     

铜绿假单胞菌纸片扩散药敏试验中抑菌环内细菌耐药分析

目的分析铜绿假单胞菌纸片扩散药敏试验中抑菌环内出现菌落原因,并为其进行耐药分析,使结果正确解释提供依据。方法采用K—B法进行药物敏感试验,筛选出抑菌环内出现的菌落,进行重复细菌鉴定药敏试验,通过改良三维试验法对其所产β-内酰胺酶进行分析。结果在65株铜绿假单胞菌中产ESBLs有15株（23．1％）,26株高产AmpC（40．0％）,14株（21．5％）为SSBLsβ-内酰胺酶,1株（1．5％）显示碳青酶烯酶活性,9株（13．8％）未检测出任何活性酶。结论铜绿假单胞菌纸片扩散药敏试验中β-内酰胺类抗生素抑菌环内细胞是其失去抑制产生突变,产ESBLs和（或）高产AmpC变异予个体。医院感染中铜绿假单胞菌抑菌环内出现的菌落现象,在排除污染后对其结果应解释为耐药。     

产ESBLs、AmpC、KPC酶的葡萄糖不发酵细菌的耐药性分析及临床分布

目的 了解本地区葡萄糖不发酵细菌中泛耐药菌(代表株铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌)在临床标本中的分离与耐药情况,为临床合理使用抗生素提供指导.方法 对临床分离的180株葡萄糖不发酵细菌进行分类鉴定和药敏试验,并用纸片扩散法筛选出产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、头孢菌素酶(AmpC酶)及碳青霉烯类水解酶(KPC酶)的耐药菌株.结果 在葡萄糖不发酵细菌的梅成比中,其中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)56株(31.1％),产AmpC酶22株(12.2％),KPC酶2株(1.1％);同时产ESBLs和AmpC酶16株(8.9％),同时产ESBLs、AmpC、KPC酶1株(0.6％).3种主要葡萄糖不发酵细菌对头孢他啶、头孢三嗪、头孢噻肟、哌拉西林的耐药率最高,其中铜绿假单胞菌对阿米卡星、左氧氟沙星、环丙沙星耐药率较低,鲍曼不动杆菌对亚胺培南、左氧氟沙星耐药率较低,嗜麦芽窄食单胞菌对复方新诺明、环丙沙星耐药率较低.结论 葡萄糖不发酵细菌中泛耐药菌特别是铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌均有较高的多重耐药性,临床上应重视葡萄糖不发酵细菌引起的感染,根据药敏试验结果合理使用抗生素.     

产β-内酰胺酶鲍曼不动杆菌的耐药性分析

目的:分析产生β-内酰胺酶的鲍曼不动杆菌对14种抗菌药物的耐药性。方法:双纸片协同试验和标准纸片扩散法确证试验检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),改良三维试验检测AmpC酶。琼脂纸片扩散法检测其对14种抗菌药物的敏感性。结果:89株鲍曼不动杆菌中,ESBLs检出率,双纸片协同试验为10.1%、纸片扩散法确证试验为11.2%,两法符合率为90.2%;改良三维试验检测AmpC酶,阳性率为84.3%,其中有5株细菌产生ESBLs和AmpC两种酶。产酶株对β-内酰胺类药物高度耐药,耐药率在60%～100%,对庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星、复方新诺明、氯霉素等多重耐药,耐药率达70%～83.3%,对亚胺培南的耐药率在10%～25%。结论:鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类药物耐药机制主要是产AmpC酶,产ESBLs较少;同时产ESBLs及AmpC酶菌株对临床常用抗菌药物呈现出多重耐药,耐药性严重,仅对碳青霉烯类的亚胺培南耐药率较低。     

铜绿假单胞菌耐药性分析及其超广谱β-内酰胺酶的流行分布

目的研究临床分离的铜绿假单胞菌的耐药性及其超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的流行分布情况。方法收集2011年1月至2012年6月广州医科大学附属第一医院微生物室分离出的头孢他啶耐药(MIC≥16)的铜绿假单胞菌111株,分析其对11种抗生素的耐药性特点和多重耐药情况,采用表型确证试验筛选产ESBLs的菌株,并对表型试验阳性菌株进行相关耐药基因的多重PCR检测。结果 111株头孢他啶耐药的铜绿假单胞菌对11种抗生素的不敏感率如下:哌拉西林94.4%、哌拉西林/他唑巴坦90.8%、头孢吡肟81.1%、氨曲南91.9%、美罗培南72.7%、亚胺培南72.9%、庆大霉素55.9%、妥布霉素41.4%、阿米卡星31.5%、环丙沙星73.0%、左旋氧氟沙星66.7%;ESBLs表型确证试验阳性菌株共23株,阳性率为20.7%;用多重PCR对23株表型试验阳性菌株进行检测,发现20株β-内酰胺酶基因检测阳性,其中19株为PER型,5株为TEM型,4株同时携带PER型和TEM型耐药基因。结论头孢他啶耐药的铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗菌药物不敏感率高,对氨基糖苷类和喹诺酮类抗菌药物不敏感率则稍低,多重耐药现象普遍;其ESBLs基因可表现为不同的耐药基因型,不同的ESBLs基因型可出现在同一株细菌中;本院铜绿假单胞菌ESBLs基因以PER型最常见。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的检测及其耐药性分析

目的检测铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶并分析其耐药性。方法采用E-test方法进行抗菌药物敏感试验,产金属β-内酰胺酶菌株进行脉冲场凝胶电泳分析。结果105株铜绿假单胞菌对9种抗菌药物的敏感率分别为:哌拉西林/他唑巴坦75.19%、头孢他啶64.0%、阿米卡星44.5%、环丙沙星64.32%、头孢哌酮/舒巴坦70.12%、亚胺培南79.1%、氨曲南58.32%、哌拉西林47.62%、头孢吡肟51.43%。22株耐头孢他啶和亚胺培南铜绿假单胞菌的产金属β-内酰胺酶率为31.8%。7株产金属β-内酰胺酶菌株经脉冲场凝胶电泳分析有4个克隆株。结论产金属β-内酰胺酶是铜绿假单胞菌对碳青酶烯类抗生素及头孢菌素耐药的机制之一,准确的实验室检测不仅可以帮助临床合理使用抗生素并可减少耐药性的传播。