缺血预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血侧海马CA1区低氧诱导因子-1α及存活素表达的影响

目的探讨缺血预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血侧海马CA1区低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及存活素表达的影响。方法健康雄性SD大鼠130只随机分为假手术组(SO组,n=10)、局灶性脑缺血再灌注组(MCAO组,n=60)、缺血预处理组(BIP组,n=60),MCAO组和BIP组又分别分为再灌注2 h、6 h、12h、24 h、48 h、72 h 6个亚组,每亚组10只大鼠。采用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型。BIP组在缺血前24h给予10 min的预缺血。采用免疫组化染色法检测HIF-1α、存活素的阳性细胞数。采用Western blot法检测HIF-1α、存活素的蛋白相对含量。结果与SO组比较,MCAO组和BIP组各时间点亚组大鼠缺血侧海马CA1区HIF-1α及存活素的阳性细胞数及蛋白相对含量均明显升高(均P0.05)。与MCAO组比较,BIP组各时间点亚组大鼠缺血侧海马CA1区HIF-1α及存活素的阳性细胞数及蛋白相对含量均明显升高(均P0.05)。在MCAO组和BIP组中,大鼠缺血侧海马CA1区HIF-1α及存活素的阳性细胞数及蛋白相对含量均在再灌注24 h时达到最高峰(均P0.05)。结论缺血预处理能够诱导局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血侧海马CA1区HIF-1α、存活素表达上调,这或许与脑缺血耐受的产生机制有关。     

急性缺血再灌注大鼠脑中γ-氨基丁酸A型受体α1 mRNA的表达变化

目的观察大鼠脑组织中GABAARα1mRNA在脑缺血再灌注不同时段的表达及动态变化规律,探讨其在脑缺血再灌注损伤中的意义。方法55只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、脑缺血2h再灌注6h、12h、24h、3d、7d组（手术组）,及其相应的假手术对照组,采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型,至上述规定时间点后取大脑组织,利用地高辛标记寡聚核苷酸探针原位杂交技术与计算机分析系统在光学显微镜下观察GABAARα1mRNA分别在相应海马区及大脑皮质阳性神经元的表达情况,以及相应海马区及大脑皮质的病理变化。结果假手术组GABAARα1mRNA表达同正常对照组相比没有明显改变。而各手术组GABAARα1 mRNA表达在脑缺血2h再灌注24h开始下降,3d下降显著,7d恢复正常。结论GABAARα1 mRNA在急性脑缺血再灌注时含量降低可能为脑缺血再灌注损伤的重要原因。     

急性缺血再灌注大鼠脑中γ-氨基丁酸A型受体α1mRNA的表达变化

目的观察大鼠脑组织中GABAARα1mRNA在脑缺血再灌注不同时段的表达及动态变化规律,探讨其在脑缺血再灌注损伤中的意义。方法55只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、脑缺血2h再灌注6h、12h、24h、3d、7d组（手术组）,及其相应的假手术对照组,采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型,至上述规定时间点后取大脑组织,利用地高辛标记寡聚核苷酸探针原位杂交技术与计算机分析系统在光学显微镜下观察GABAARα1mRNA分别在相应海马区及大脑皮质阳性神经元的表达情况,以及相应海马区及大脑皮质的病理变化。结果假手术组GABAARα1mRNA表达同正常对照组相比没有明显改变。而各手术组GABAARα1 mRNA表达在脑缺血2h再灌注24h开始下降,3d下降显著,7d恢复正常。结论GABAARα1 mRNA在急性脑缺血再灌注时含量降低可能为脑缺血再灌注损伤的重要原因。     

亚低温对大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马CA1区c-Jun蛋白表达的影响

目的研究亚低温对大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马CA1区神经元的保护作用,并探讨其可能的机制。方法采用四血管阻断法建立大鼠全脑缺血模型。SD大鼠,随机分为假手术组(SH组)、常温组(IR组)和亚低温组(HIR组)。各组在全脑缺血15min后分别再灌注6h、12h、1d、3d,采用苏木素-伊红(HE)染色观察各时间点海马CA1区细胞形态学变化和TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡,免疫印迹检测c-Jun蛋白表达。结果(1)HE染色结果 IR组和HIR组于全脑缺血再灌注后6h,HE染色未见明显改变,IR组缺血再灌注1d时CA1区出现严重改变,3d时损伤最严重,出现细胞数目减少,细胞胞体缩小、胞核固缩深染,损伤严重,排列紊乱,核膜不清,核仁消失。而HIR组海马存活的锥体细胞数较之IR组12h、1d、3d时间点均明显增加(P<0.05)。(2)TUNEL标记IR组于缺血再灌注后6h在海马CA1区阳性细胞开始增多,缺血再灌注1 d时阳性细胞数最多。而HIR组各时间点阳性细胞数均较IR组明显减少(P<0.01)。(3)免疫印迹结果全脑缺血再灌注后6h c-Jun蛋白在IR组海马CA1区表达开始增加,12h达高峰,持续到3d;HIR组在各时间点的表达均弱于IR组(P<0.01)。结论亚低温通过减少海马CA1区c-Jun的表达,抑制海马CA1区神经元的凋亡,可能是亚低温脑保护作用的机制之一。     

大鼠局灶性脑缺血预处理后XBP-1表达的变化

目的 观察缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注后X盒结合蛋白1(XBP-1)mRNA及其蛋白表达的影响.方法 SD大鼠60只,随机分为假手术组(SO)、脑缺血再灌注组(MCAO)、脑缺血预处理组(BIP)3组,每组按照再缺血后12h、1d、2d、3d4个时间点分为4个亚组.采用二次线栓法制备大鼠局灶性脑缺血预处理模型,用实时荧光定量PCR和Western blot法观察再缺血后各个时间点XBP-1 mRNA及其蛋白的表达变化.结果 MCAO组XBP-1 mRNA及其蛋白表达均于缺血再灌注后12h开始明显上升,24h达高峰(P＜0.01),随再灌注时间延长其表达逐渐下降,但仍保持较高表达水平(P ＜0.01);BIP组较MCAO组XBP-1 mRNA及其蛋白表达明显升高(P＜0.05,P＜0.01).结论 脑缺血预处理可能通过诱导XBP-1表达发挥其神经保护作用.     

脑缺血再灌注后热休克蛋白70、c-fos的表达及柘树制剂的神经保护作用

目的 观察局灶脑缺血再灌注后热休克蛋白（HSP）70、c-fos的表达及其与细胞调亡的关系,探讨柘树制剂对脑缺血后神经细胞损伤的保护作用。方法 采用改良Longa法制作大鼠局灶脑缺血冉灌注模型。柘树制剂预处理组（柘树组）大鼠在实验前灌服柘树制剂2ml每日3次,连用5d。在缺血再灌注不同时点（1h、6h、12h、24h、3d、7d）将大鼠处死取腑,进行HSP70及c-fos免疫组化染色、c-fos mRNA原位杂交、原位末端标记（TUNEL）及HE染色,许对其阳性结果进行半定量分析。结果脑缺血再灌注能诱导HSP70及c-fos的表达。缺血冉灌注6h绀HSP70存缺血侧皮质及基底节开始表达,24h达高峰。缺血再灌注1h组c-fos即有表达,6h达高峰,后逐渐下降。细胞凋亡于缺血再灌注6h最显著。柘树组HSP70及c-fos表达的阳性细胞数均较缺血再灌注组明监增加,两组比较差异均有显著性（均P〈0．01）,而TUNEL阳性细胞数明显减少。结论 HSP70及c=-ros均参与了脑缺血的病理生理过程,柘树制剂对脑缺吡冉灌注损伤有保护作用。     

大鼠局灶性脑缺血预处理后激活转录因子4mRNA及其蛋白表达的变化

目的 观察缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注后激活转录因子4 (ATF4) mRNA及其蛋白表达的影响.方法 SD大鼠120只,随机分为假手术组(SO)、脑缺血再灌注组(MCAO)、脑缺血预处理组(BIP)3组,每组按照再缺血后12h、ld、2d、3d4个时间点分为4个亚组.采用二次线栓法制备大鼠局灶性脑缺血预处理模型,用原位杂交法和Western blot法观察再缺血后各个时间点ATF4 mRNA及其蛋白表达的变化.结果 MCAO组12hATF4mRNA及其蛋白表达均达高峰(P＜0.01),随再灌注时间延长其表达逐渐下降;BIP组较MCAO组ATF4 mRNA及其蛋白表达均明显降低(P＜0.05,P＜0.01).结论脑缺血预处理可能通过抑制ATF4表达发挥其神经保护作用.     

行为学训练对局灶性脑缺血大鼠内源性神经干细胞增殖及PS1蛋白表达的影响

目的检测早老素(Presenilinl,PS1)在局灶性脑缺血大鼠海马组织神经干细胞中的表达及穿梭箱训练的干预作用,探讨影响神经干细胞增殖分化的分子调控机制。方法采用大脑中动脉栓塞(MCAO)制作局灶性脑缺血大鼠模型,用免疫组织化学方法检测海马神经干细胞Brd U、PS1的表达及穿梭箱训练的干预作用。结果随着脑缺血再灌注3 d缺血海马神经元Brd U阳性细胞明显增多,7 d达高峰。PS1反应产物脑缺血再灌注7 d较正常组增多,随缺血再灌注时间的进一步延长逐渐减少,14 d后持续低水平表达。穿梭箱训练后Brd U、PS1蛋白的表达明显增加。结论穿梭箱训练促进神经干细胞的增殖及缺血脑组织PS1的表达,提示穿梭箱训练促进神经干细胞增殖作用可能由PS1信号介导。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后BDNF mRNA及其蛋白的表达变化

目的 观察大鼠脑缺血再灌注后缺血半暗带皮质脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA和蛋白的表达变化.方法 采用线栓法制作局灶性脑缺血大鼠(MCAO)模型,用原位杂交法和免疫组化法观察脑缺血后3、6、12h及1、3、7d共6个时间点BDNF mRNA及其蛋白的表达变化.结果 缺血半暗带BDNF mRNA及其蛋白的表达均于缺血再灌注后3h开始明显上升,6h表达继续增强,12h达高峰,3d后表达开始减弱(P＜0.05或0.01),7d后降至基础水平.结论 脑缺血再灌注后缺血半暗带BDNFmRNA及蛋白表达均明显增加,提示其可能参与了脑缺血后神经保护.     

单核细胞趋化蛋白-1在大鼠脑缺血再灌注损伤中的表达变化

目的 观察大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）后再灌注不同时间点单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）与基因表达的变化．以探讨其在脑缺血再灌注损伤中的意义。方法 建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，用免疫荧光双标染色、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测MCP-1蛋白表达、mRNA转录水平。结果 （1）缺血再灌注后缺血脑组织中存在表达MCP-1／NSE和MCP-1／GFAP双阳性细胞．提示神经元和神经胶质细胞是产生MCP-1的细胞来源之一。（2）各缺血再灌注组MCP-1 mRNA表达均高于假手术组．再灌注1h MCP-1的mRNA转录即有升高．且随时间延长而进一步升高．24h达到高峰之后逐渐下降。结论 脑缺血再灌注引起MCP-1表达上调．提示MCP-1可能参与了局灶性脑缺血再灌注损伤。     

脑缺血再灌注后脑组织c-fos基因表达与丹参的影响

采用线栓法制成大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，用地高辛精标记ｃ－ｆｏｓ探针进行原位杂交。结果示缺血再灌注鼠栓塞侧皮层及海马ｃ－ｆｏｓ基因表达显著增多，图像分析灰阶值为１１８．６±５．１，对侧为１５９．６±３．１（Ｐ＜０．００１）。丹参组栓塞侧皮层及海马ｃ－ｆｏｓ基因表达亦增多，灰阶为１３５．００±２．０５，对侧为１６７．００±２．００（Ｐ＜０．００１）。丹参组与缺血再灌注组比较，栓塞侧丹参组ｃ－ｆｏｓ基因表达显著低于缺血再灌组（Ｐ＜０．０５），而两组栓塞对侧比较无显著差异。本实验表明，脑缺血再灌注后脑组织ｃ－ｆｏｓ基因表达显著增多，丹参能部分抑制缺血后ｃ－ｆｏｓ基因的表达，这可能是其治疗缺血性脑血管病的机理之一。     

MCAO模型大鼠海马区1β-HSD1的表达及活性变化

目的探讨大鼠海马区11β-羟类固醇脱氢酶1（11β-HSD1）在局灶性脑缺血再灌注过程中的表达及活性变化。方法采用大脑中动脉线栓法（MCAO）建立大鼠局灶性脑缺血-再灌注模型。42只雄性SD大鼠,随机分为脑缺血-再灌注后4、8、12、24、48、72h组和假手术组,每组6只。采用核糖核酸酶保护实验检测11β-HSD1mRNA的表达,采用Westernblot方法分析11β—HSD1蛋白表达水平变化,采用薄层层析（TLC）方法检测11β-HSD1酶活性。结果短暂性脑缺血-再灌注后大鼠海马区11β－HSD1表达增强,并于再灌注后24h达高峰,且11β-HSD1酶的活性也呈现类似变化规律。结论海马区11β—HSD1表达和活性的异常可能参与了大鼠脑缺血-再灌注损伤的病理生理过程。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马Bcl-2、Bax蛋白的表达

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后Bcl-2、Bax蛋白在海马表达的变化.方法 线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组化染色检测Bcl-2、Bax蛋白表达,应用TUNEL法检测海马区细胞凋亡.结果 缺血再灌注2h后海马神经元Bcl-2、Bax蛋白开始表达,Bcl-2蛋白12h达高峰,Bax蛋白12h～24h达高峰,之后开始下降.再灌注2h后海马凋亡细胞开始表达,随着再灌注时间的延长,其表达不断增加.Bcl-2/ Bax的比率在再灌注开始时升高,再灌注12h达高峰,随后开始下降.结论 凋亡是脑缺血再灌注损伤的重要形式之一,Bcl-2/ Bax的改变与缺血再灌注后海马的神经元存亡有关,缺血再灌注可导致海马神经元凋亡.     

Regional expression of heat shock protein-70 mRNA and c-fos mRNA following focal ischemia in rat brain.

In situ hybridization was used to estimate regional levels of heat shock protein-70 (HSP-70) mRNA and c-fos mRNA in two related models of focal cerebral ischemia. In the first model, permanent occlusion of the distal middle cerebral artery (MCA) alone caused a patchy increase in HSP-70 mRNA by 1 h in the central zone of the MCA territory of the ipsilateral neocortex. Tissue levels of HSP-70 mRNA continued to increase for several hours and remained elevated at 24 h. In contrast to the focal expression of HSP-70, c-fos mRNA was increased throughout the ipsilateral cerebral cortex by 15 min and remained elevated for least 3 h. The wide distribution of c-fos expression suggests it may have been caused by spreading depression. In the second model, severe focal ischemia was produced with a combination of transient (1-h) bilateral carotid artery occlusion and permanent MCA occlusion. Combined occlusion for 1 h without reperfusion caused expression of HSP-70 mRNA only in regions adjacent to the central zone of the MCA territory of the neocortex. However, reperfusion of the carotids for 2 h generated intense expression of HSP-70 mRNA throughout most of the ipsilateral cerebral cortex, white matter, striatum, and hippocampus. The wide-spread increase in HSP-70 mRNA suggests that reperfusion triggered expression in all previously ischemic regions. However, at 24 h of reperfusion, increased levels of HSP-70 mRNA were restricted primarily to the ischemic core of the neocortex. These results suggest that expression of HSP-70 mRNA is prolonged in regions undergoing injury, but is transient in surrounding regions that recover.     

钙拮抗剂对大鼠缺血性脑损伤后Bcl-2和Bax基因表达的作用

目的探讨大鼠实验性脑缺血后海马组织Bcl-2和Bax基因的表达及尼莫地平预处理对Bcl-2和Bax基因表达的影响。方法采用线栓法建立大鼠脑缺血模型；尼莫地平预处理；逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定其海马组织中Bcl-2和Bax mRNA。结果大鼠大脑中动脉阻断(MCAO)后，海马组织Bcl-2和Bax基因均被诱导表达，Bcl-2表达量持续升高，而Bax表达量在脑缺血24h达高峰，随后逐渐下降。在脑缺血后6h和24h，经尼莫地平预处理7d的大鼠，海马组织Bcl-2基因的表达水平较未经预处理的大鼠明显上调，而Bax基因表达水平则较未经预处理的大鼠明显下调。结论钙拮抗剂尼莫地平能有效地调控大鼠缺血性脑损伤后海马组织Bcl-2和Bax基因表达的水平，为干预脑卒中后基因表达提供依据。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后MDM2的表达

目的探讨局灶性脑缺血再灌注后(murine double-minute 2,mdm2)mRNA表达的时间分布特征。方法采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血2h再灌注模型,RT-PCR技术检测mdm2 mRNA的表达。结果 Mdm2 mRNA在半暗带区缺血再灌注后6h表达开始增加,12h达高峰,24h开始下降,7d仍有表达。结论脑缺血再灌注后mdm2 mRNA表达增加可能是机体对缺血损伤的保护性反应。     

大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马自噬相关蛋白Beclin 1的表达变化

目的研究自噬相关蛋白Beclin 1在大鼠全脑缺血-再灌注损伤后海马中的表达情况,并探讨其意义。方法使用四动脉结扎法制作大鼠全脑缺血-再灌注损伤模型,实验动物随机分为：假于术组和缺血再灌注组。存全脑缺血15min后,分别再灌注0min、30min、3h、6h、12h、24h、1d、3d,使用Western blot检测各个时阃点大鼠全脑缺血-再灌后海马自噬相关蛋白Beclin1的表达情况。结果与假手术组比较,大鼠全脑缺血-再灌注损伤后1d,海马区Beclinl蛋白的表达最强（P〈0．05）。结论大鼠全脑缺血-再灌注损伤后海马自噬相关蛋白Beclinl表达上调,表明脑缺血-再灌注损伤后海马区域的自噬活性上调．     

大鼠局灶性脑缺血后再灌注期caspase—9 mRNA及Apaf—1mRNA表达的动态变化

目的探讨大鼠局灶性脑缺血后再灌注期caspase-9 mRNA及Apaf-1 mRNA表达的动态变化.方法采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血后再灌注模型,以逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测caspase-9 mRNA及Apf-1 mRNA的表达.结果缺血2 h后再灌注,缺血皮质中caspase-9 mRNA的表达在再灌注后24h达高峰,48h仍保持高水平,而Apaf-1 muRNA的表达无明显改变.结论局灶性脑缺血后再灌注48h内caspase-9 mRNA表达增强.     

伽玛刀照射正常大鼠海马组织的放射生物学研究

目的研究伽玛刀照射对正常大鼠海马组织的放射生物学作用,探讨伽玛刀作用于正常脑组织的机制,为立体定向放射外科的开展提供理论依据。方法利用自行设计的伽玛刀动物定向头架,应用不同剂量的伽玛射线对大鼠海马组织进行照射,原位杂交观察c-fosmRNA和HSP70mRNA表达,免疫组化观察FOS、HSP70、GFAP和bcl-2蛋白表达。结果c-fosmRNA在照射后3h、7d出现2个高峰,HSP70mRNA在照射后1~3h即有表达。FOS、HSP70、GFAP和bcl-2蛋白表达随照射时间和部位的不同而各有自己的特点。结论自行设计的伽玛刀动物定向头架定位准确、可靠。c-fos和HSP70表达说明伽玛刀照射虽局限于海马,但引起的反应却是强烈的。bcl-2具有抑制电离辐射所致细胞凋亡作用,GFAP阳性细胞反应可作为脑组织损伤的一种标志。     

大鼠短暂性脑缺血后葡萄糖转运子3表达变化

目的 研究大鼠短暂性脑缺血葡萄糖转运子3（GLUT3）转录水平表达规律。方法 用插线法建立大鼠短暂性脑缺血模型。剥取缺血半暗带及中心区皮质组织,采用半定量逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）,测定不同再灌注时间GLUT3mRNA水平的变化。结果 再灌注3h缺血半暗区GLUT3mRNA3h升高,48h达到高峰,再灌注1周后仍高于正常。结论 再灌注后,缺血半暗带GLUT3的表达明显上调,有可能是机体抗损伤性反应。