胰岛素对人肺腺癌细胞A549的化疗增敏作用

目的探讨用胰岛素提高人肺腺癌细胞A549生长代谢水平后对其化疗敏感性的影响。方法采用MTT法检测顺铂对A549细胞抑制率达30%时的药物浓度(IC30),检测胰岛素促进细胞增殖的最佳作用浓度和最佳作用时间,并检测不同浓度及不同时间胰岛素作用后对A549细胞化疗敏感性的影响。用流式细胞仪测定胰岛素对A549细胞周期的影响。结果顺铂的IC30约为36.87μg/ml;胰岛素促进细胞增殖的最佳作用浓度为4.0～16mU/ml,取8mU/ml为终浓度时,胰岛素促进细胞增殖的最佳作用时间为8～16h;胰岛素(2.0～16.0mU/ml,8～16h)可增强顺铂(36.87μg/ml)的细胞毒作用(P<0.01)。流式细胞仪分析显示,胰岛素(8mU/ml)作用4～12h,S期细胞随作用时间延长而逐渐增多,但作用16h后S期细胞数目又逐渐接近于对照组水平。结论胰岛素可通过提高人肺腺癌细胞A549的生长代谢水平而提高顺铂对该细胞的抑制率,且该作用呈时间和浓度依赖性。     

X射线对人肺腺癌A549细胞Pokemon基因表达的影响

目的 研究不同剂量X射线照射及照射后不同时间点对人肺腺癌A549细胞Pokemon基因表达的影响.方法 用吸收剂量分别为2、4、6和8 Gy的X射线照射体外堵养的人肺腺癌A549细胞,2、4、8、12、24、48和72 ha,用实时定量PCR技术检测其中的Pokemon mRNA表达水平,以未照射组为对照.结果 在2、4、6、8 Gy X射线照射后的早期(除2 Gy照射后的2和4 h外)Pokemon mRNA的表达降低,但在晚期(48 h以后)呈升高趋势,在大部分时间点实验组与对照组的差异有统计学意义(t=3.40～154.76,P<0.05).结论 较大剂量的X射线在早期可下调A549细胞Pokemon基因mRNA的表达,诱导肿瘤细胞凋亡;但在晚期又可诱导A549细胞高表达PokemonmRNA,这可能与辐射所致A549细胞的DNA损伤修复和细胞周期调控有关.

Abstract：

Objective To study the dose-and time-effects of X-ray irradiation on the expression of Pokemon gene in A549 cells of human lung adenocarcinoma.Methods A549 cells were cultured in vitro and exposed to X-rays with the doses of 2,4,6 and 8 Gy,respectively.Untreated A549 cells were used as control group.The relative levels of Pokemon mRNA expression in the cells were detected by using quantitative real-time PCR at 2,4,8,12,24,48 and 72 h after irradiation.Results The Pokemon mRNA expression levels decreased in the early period after irradiation(except 2 and 4 h after irradiation in 2 Gy group)and then increased in the later stage(48 h after irradiation)with significant statistical differences at the most time points in comparison with the control group(t=3.40-154.76,P<0.05).Conclusions Higher doses of X-rays may degrade the expression of Pokemon mRNA in the human A549 cells and induce apoptosis in the early period,hut also may upgrade its expression in the later period, which might be correlated with the cell cycle regulation and DNA damage repair in the A549 cells.     

X射线对人肺腺癌A549细胞Pokemon基因表达的影响

目的 研究不同剂量X射线照射及照射后不同时间点对人肺腺癌A549细胞Pokemon基因表达的影响.方法 用吸收剂量分别为2、4、6和8 Gy的X射线照射体外堵养的人肺腺癌A549细胞,2、4、8、12、24、48和72 ha,用实时定量PCR技术检测其中的Pokemon mRNA表达水平,以未照射组为对照.结果 在2、4、6、8 Gy X射线照射后的早期(除2 Gy照射后的2和4 h外)Pokemon mRNA的表达降低,但在晚期(48 h以后)呈升高趋势,在大部分时间点实验组与对照组的差异有统计学意义(t=3.40～154.76,P<0.05).结论 较大剂量的X射线在早期可下调A549细胞Pokemon基因mRNA的表达,诱导肿瘤细胞凋亡;但在晚期又可诱导A549细胞高表达PokemonmRNA,这可能与辐射所致A549细胞的DNA损伤修复和细胞周期调控有关.     

顺铂诱导肺腺癌A549细胞线粒体基因组及凋亡相关基因的差异表达

目的　探讨顺铂诱导肺腺癌A5 4 9细胞线粒体基因组及核凋亡相关基因的差异表达情况。方法　实验组A5 4 9细胞给予0 5 μg/ml顺铂作用 2 0h,同时设立空白对照组 ,用人线粒体基因组寡核苷酸芯片检测 2 6个靶基因的差异表达。用流式细胞技术分析细胞凋亡比例。结果　实验组A5 4 9细胞的细胞色素氧化酶亚单位Ⅰ(CoxⅠ)、12SrRNA以及半胱氨酸转运RNA(tRNA Cys)、天冬酰胺转运RNA(tRNA Asn)基因表达显著上调 ,促凋亡基因bax和另外 3个编码多肽基因、4个tRNA基因表达也有一定程度上调。实验组A5 4 9细胞凋亡率为 8 5 %± 0 78% ,显著高于对照组的 1 3%± 0 5 6 % (n=5 ,P <0 0 5 )。结论　顺铂诱导能使残存的A5 4 9细胞mtDNA编码的部分基因表达增强 ,并可能通过对bax基因表达的上调促进细胞凋亡。     

紫杉醇联合奥沙利铂或顺铂治疗晚期非小细胞肺癌疗效观察

目的比较紫杉醇联合奥沙利铂或顺铂治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的疗效和毒性反应。方法将52例初治的NSCLC患者（ⅢB期或Ⅳ期,ECOG评分0～2分,各脏器功能及骨髓造血功能良好）随机分为两组：紫杉醇联合顺铂（TP）组25例,给予紫杉醇135 mg/m2,d1;顺铂25 mg/m2,d1～d3;紫杉醇联合奥沙利铂（TO）组27例,紫杉醇用法同顺铂组;奥沙利铂125 mg/m2,d1。两组均静脉滴入,每21 d为1个周期,每个患者至少给予2个周期。完成2个周期化疗后评价疗效和毒副反应。结果 TO组和TP组有效率分别为37.0%和40.0%（P〉0.05）;Ⅲ～Ⅳ度白细胞减少发生率分别为11.1%和36.0%（P〈0.05）,Ⅲ～Ⅳ度胃肠道反应率分别为14.8%和44.0%（P〈0.05）,Ⅰ＋Ⅱ度神经毒性发生率分别59.2%和20.0%（P〈0.05）。结论紫杉醇联合奥沙利铂或顺铂是治疗晚期NSCLC的有效方案,两方案的近期疗效相似,但紫杉醇联合奥沙利铂方案的血液学毒性及消化道不良反应较轻。     

反义寡核苷酸联用对肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用

目的　研究多基因靶向的反义寡核苷酸联用对肺腺癌细胞A5 4 9增殖的抑制作用 ,建立初步筛选、分析组合靶点的实验方法及统计学方法。方法　选择以端粒酶、PKC α、Bcl 2和IGF 1R为靶点的 4种反义寡核苷酸 ,进行两药组合。以脂质体介导进行反义寡核苷酸转染 ,用MTT法染色并计算细胞生长抑制率 ,用SAS统计软件及金正均Q值法进行数据分析。结果　联合用药对A5 4 9细胞增殖的抑制作用显著高于单药 (P <0 0 5 ) ,并筛选出有协同作用的药物组合 (Q≥ 1 15 )。结论　反义寡核苷酸联合用药可以靶向多个与肿瘤发生发展密切相关的基因 ,提高对肿瘤细胞增殖的抑制效果。     

含CpG寡脱氧核苷酸增强人肺癌细胞株A549放射敏感性的研究

目的探讨含CpG基序的寡脱氧核苷酸对人肺癌细胞株A549放射敏感性的影响。方法分别用不同浓度CpG ODN处理A549细胞,经β射线照射后,检测细胞增殖和集落形成情况,ELISA法检测细胞TNF-α、IL-12和INF-γ的分泌水平,G riess检测细胞NO的含量。结果 CpG ODN抑制A549细胞的增殖,并呈量效关系。CpG ODN（10μg/m l）联合β射线照射,抑制A549细胞的增殖作用最强,且增加了TNF-α、IL-12、INF-γ和NO的分泌。结论 CpG ODN对A549细胞有明显的放射增敏作用,其机制可能与CpG ODN抑制A549细胞增殖、增强TNF-α、IL-12、INF-γ和NO的分泌有关。     

电离辐射及顺铂对人肺癌细胞中TOB1基因表达的影响

目的 探讨电离辐射及其联合顺铂对人肺腺癌细胞株SPCA-1、LTEP-α-2中TOB1基因表达的影响.方法 体外培养人肺腺癌SPCA-1、LTEP-α-2细胞,用X射线一次性照射,细胞吸收剂量为2、4、6、8和10 Gy,源靶距为100 cm,吸收剂量率为200 cGy/min,在6GyX射线照射后6、12、18和24 h取样;X射线和顺铂联合对TOB1表达的研究设立单纯照射组(6 Gy)、顺铂处理组(20 mol/L顺铂)和联合处理组(6 Gy +20 mol/L顺铂);上述实验同时设立未处理的对照组.采用RT-PCR和Western blot法检测TOB1 mRNA及蛋白表达水平的变化.结果 SPCA-1、LTEP-α-2细胞在不同剂量的X射线照射后24 h,其TOB1蛋白及mRNA表达量均明显增加(t=8.25 ～24.48,P ＜0.05);不同时间检测提示,细胞在X射线照射后6h,TOB1蛋白及mRNA的表达量即开始上升,并持续到照射后24 h(t=14.23 ～15.82,P＜0.05);联合处理组TOB1的表达量均明显高于单纯照射组、顺铂处理组和对照组(t=4.67 ～ 13.67,P＜0.05).结论 TOB1基因有可能作为临床肺癌放化疗靶基因,对临床放化疗疗效的判断具有一定的应用潜力.     

100例肺癌选择支气管动脉灌注顺铂的并发症及防治

１００例肺癌选择性支气管动脉灌铂的并发症：消化道反应８８％，骨髓抑制３８％，肾脏毒性８％，心脏毒性６％，神经毒性４％，肝脏毒性４％，变态反应２％，脊髓损伤１％，穿刺点感染３％。穿刺点出血、渗血、血肿８％。其并发症多为化疗药物（主要为顺铂）的毒副反应、ＢＡＩ操作及ＢＡＩ后处理不当所致。但肺癌选择性支气管动脉灌注顺铂，是一种安全的有效治疗方法。     

HDAC抑制剂MS-275诱导人肺腺癌细胞系A549基因表达谱分析

目的 研究HDAC抑制剂MS-275对人肺腺癌A549细胞基因表达谱的影响,探讨MS-275抗肿瘤的分子机制.方法 运用制备的包含8 064个人类基因的cDNA芯片检测MS-275诱导人肺腺癌A549细胞基因表达谱的变化.结果 MS-275(2μmol · L-1)处理A549细胞16h后,cDNA芯片分析筛选出MS-275对A549细胞的影响基因803个,其中上调基因440个,下调基因363个,其中包括许多与细胞凋亡、细胞分化、DNA修复等相关基因如p21、DR6.结论 MS-275通过外源性凋亡信号、内源性凋亡信号和细胞周期阻滞等多种分子机制诱导A549细胞凋亡.     

伊马替尼和十字孢碱对非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响

目的探讨伊马替尼（STI571）、十字孢碱（STS）对非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响。方法经STI571和STS处理后,通过Western印迹检测A549细胞内凋亡诱导因子（apoptosis-inducing factor,AIF）的变化,然后利用膜联蛋白（annexin）Ⅴ-FITC PI凋亡试剂盒,借助流式细胞仪,检测A549细胞凋亡;利用Hoechst染色检测A549细胞凋亡现象并通过免疫荧光技术检测细胞内AIF和线粒体的变化。结果 Western印迹检测结果显示,STI571和STS处理能够提高AIF在A549细胞内以相对分子质量为57×103的形式表达;流式细胞仪检测结果显示,STS处理组膜联蛋白ⅤFITC染色的细胞数随着STS处理时间的增加呈现先增后降的趋势,溴化乙锭PI染色的细胞数随着处理时间增加到20 h呈现增多的趋势;STI571处理组膜联蛋白ⅤFITC的染色结果和溴化乙锭的染色结果与对照组相比,变化均不显著;STI571与STS共同作用组膜联蛋白ⅤFITC染色细胞数少于STS单独处理组结果,溴化乙锭染色的细胞数明显多于STS单独处理组;Hoechst染色结果显示,STS处理组和STI571、STS共同处理组细胞核内染色质发生凝集;间接免疫荧光结果显示,AIF发生聚集且细胞内线粒体染色亮度减弱。结论 STS和STI571处理能够引起细胞内AIF分布形式上的变化,STS可引起A549细胞发生细胞凋亡,STI571处理不能引起细胞发生凋亡,但能引起细胞内AIF发生聚集并对STS引起的细胞凋亡有促进作用。     

丹皮酚对人肺腺癌A549细胞放射增敏作用机制的研究

目的 探讨丹皮酚在体外对人肺腺癌A549细胞放射增敏作用的机制.方法 采取四甲基偶氮唑盐比色法(MTT),测定丹皮酚对人肺腺癌A549细胞的抑制率.分为细胞对照组、单纯加药组、单纯照射组和药物联合照射组.通过克隆形成实验,观察丹皮酚对人肺腺癌A549细胞放射敏感性的影响.采用TUNEL染色与流式细胞仪,检测肿瘤细胞凋亡率,Western blot法观察细胞内Survivin蛋白的表达变化.结果 随着丹皮酚浓度的增加,丹皮酚对人肺腺癌A549细胞的抑制作用相应地增加,IC50为(25.2±2.1)mg/L.经克隆形成实验证实,丹皮酚对人肺腺癌A549细胞有明显的增敏效果,放射增敏比(SER)可达1.29.药物联合照射组的细胞凋亡较单纯照射组明显增加,呈现剂量-时间依赖效应(t =4.95、3.03、3.78、4.59、2.88、3.70和5.54,P＜0.05).同时,Western blot法检测出丹皮酚能够明显下调细胞内Survivin蛋白的表达,单纯给予不同浓度丹皮酚24 h后Survivin蛋白表达下调22.6％ ～ 56.7％(t=4.15、7.30和13.47,P＜0.05);用丹皮酚预处理细胞再经6 GyX射线照射后24 h,细胞内Survivin蛋白下调可达22.2％ ～ 69.4％(t=4.30、8.36和16.34,P ＜0.05).结论 丹皮酚在体外对人肺腺癌A549细胞有放射增敏作用,其机制可能是下调肿瘤细胞内Survivin蛋白的表达.     

甘氨双唑钠修饰纳米金对肺腺癌细胞A549的放射增敏研究

目的 探讨甘氨双唑钠修饰纳米金制备及放射增敏效果。方法 把甘氨双唑钠修饰到已连接聚乙二醇的纳米金上,纳米金粒径18 nm。利用扫描电镜观察肺腺癌(A549)细胞吞噬甘氨双唑钠-纳米金的现象。将培养的肺腺癌细胞分为甘氨双唑钠组、纳米金组、甘氨双唑钠-纳米金组、对照组(不加药组)。用四甲基偶氮唑盐比色法和克隆形成实验对肺腺癌(A549)细胞进行放射增敏的研究。结果 甘氨双唑钠-纳米金能进入细胞质和细胞核;浓度为0.003 mg/ml纳米金和甘氨双唑钠-纳米金没有明显的细胞毒性;甘氨双唑钠-纳米金组相对于甘氨双唑钠组、纳米金组、对照组,D₀、D_q出现了下调;接受2、4、6和8 Gy剂量照射后,甘氨双唑钠-纳米金组肺腺癌细胞的存活率与其他3组相比,均明显下降(F=4.8、14.5、5.7、7.6,P<0.05)。结论 甘氨双唑钠修饰的纳米金能增加肺腺癌细胞的辐射敏感性。     

葡萄糖耦联纳米金对A549肺癌细胞体外放射增敏作用

目的 研究葡萄糖纳米金颗粒（Glu-GNPs）联合千伏和兆伏级X射线对肺腺癌A549细胞的体外放射增敏作用。方法 取指数生长期的人肺腺癌A549细胞,分为对照组、Glu-GNPs组、单纯照射组（6 MV单纯照射组与160 kV单纯照射组）、纳米金联合照射组（6 MV+Glu-GNPs组、160 kV+Glu-GNPs组）。使用透射电镜（TEM）观察Glu-GNPs在A549细胞中的分布。使用结晶紫测定法测定Glu-GNPs对A549细胞的毒性作用以及Glu-GNPs联合射线对细胞的增殖抑制作用。克隆形成实验评估Glu-GNPs对A549细胞的放射增敏作用。用γ-H2AX免疫荧光法检测A549细胞受照射后的DNA双链断裂焦点（foci）。结果 TEM显示Glu-GNPs主要分布在A549细胞质中,包括内涵体和线粒体内。浓度低于100 nmol/L的Glu-GNPs对A549细胞无明显毒性作用。不同浓度的Glu-GNPs联合不同能量级X射线对A549细胞均具有明显的增殖抑制作用。在160 kV与6 MV X射线条件下,Glu-GNPs联合照射组存活分数较单纯照射组明显降低（P<0.05）,放射增敏比（SER_D0）分别为1.41和1.15。此外Glu-GNPs可显著增加射线诱导的DNA双链断裂点,且Glu-GNPs联合160 kV X射线组与联合6 MV X射线组相比,有更多的DNA双链断裂灶点（t=12.392、14.893、18.947,P<0.05）。结论 Glu-GNPs可增加A549细胞的放射敏感性,且在keV条件下增敏效果更加明显。     

LyGDI在非小细胞肺癌细胞A549中的辐射抗性机制研究

目的 探讨LyGDI的表达在非小细胞肺癌细胞A549中的辐射抗性机制。方法 A549和作为对照的H460细胞分别受到0、2、4和6 Gy X射线照射后,克隆形成试验分析辐射抗性差异,Western blot分析LyGDI和辐射敏感性关键基因环氧合酶COX-2的表达。实时荧光定量PCR分析miR-34a以及miR-34b/c在A549和H460细胞中的表达。A549细胞中转染50 nmol/L的miR-34c成熟序列,观察其对A549细胞辐射抗性以及LyGDI和COX-2基因表达的影响。结果 LyGDI和COX-2在辐射抗性的A549细胞中的表达水平高于H460细胞,miR-34a以及miR-34b/c在两种非小细胞肺癌中低表达。转染miR-34c可抑制LyGDI、COX-2和Bcl-2以及激活p21的表达,增强A549细胞细胞的辐射敏感性（t=3.85、5.89、5.12,P<0.05）。结论 LyGDI诱导的COX-2的上调表达以及电离辐射效应miR-34家族的下调表达,是A549细胞辐射抗性的一个主要原因。     

F10基因过表达对A549细胞致瘤性的影响

目的 探讨F10基因过表达对肺癌A549细胞裸鼠成瘤的影响及其机制.方法 取SPF级裸鼠(4～5周龄)18只,随机均分为A549-WT组、MockA549组和F10+A549组(n=6),依次接种野生A549细胞(A549.WT)、转染了空载体的对照细胞株(Mock-A549)和已构建的过表达F10基因的A549细胞(F10+A549)5 × 106个于颈背部皮下.接种后每3～4d称体重并观察,记录肿瘤发生时间,绘制在体肿瘤生长曲线,计算各组裸鼠的成瘤率.各组裸鼠于接种5周后处死,进行大体观察后取瘤组织块制备石蜡切片,HE染色后行病理组织学观察,并采用免疫组化法检测Caspase-3、Bax和Bcl-2在瘤组织中的表达.结果 A549-WT组、Mock-A549组和F10+A549组裸鼠的成瘤时间分别为12.0±1.4、11.7±1.0、8.5±1.4d,组间比较差异有统计学意义(F=13.523,P=0.000),A549-WT组和MocbA549组裸鼠成瘤时间长于F10+A549组(P＜0.05),而前两组比较差异无统计学意义(P=0.660).大体观察可见,F10+AS49组成瘤体积较胚49-WT和Mock-A549组明显增大.F10+A549组肿瘤的在体生长速度较A549-WT和Mock-A549组增快,差异有统计学意义(P＜0.05),而后两组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).肿瘤组织HE切片显示,A549-WT和Mock-A549组成瘤组织中存在较多坏死细胞,HE染色表现为均质红染、无定形物质结构,而F 10+A549组成瘤组织边缘细胞坏死较少,细胞增生明显,且肿瘤组织局部可见微血管生成.免疫组化检测显示,Bcl-2蛋白在A549-WT和Mock-A549两组瘤组织中几乎无表达,而在F10+A549组瘤组织中表达较多,阳性细胞呈弥漫性分布.Bax和Caspase-3蛋白在A549-WT和Mock-A549两组瘤组织中的表达均较强,尤以A549-WT组为显著,但在P10+A549组瘤组织中表达均很弱.结论 F10基因可通过下调Caspase-3和Bax表达、上调Bcl-2表达而增强肺癌A549细胞株在裸鼠体内的致瘤性.     

人肺腺癌A549细胞低剂量辐射超敏感性及其机制的研究

目的 观察A549细胞的低剂量辐射超敏感性现象,探讨其发生的机制。方法 A549细胞接受0~2 Gy的⁶⁰Coγ射线照射后,流式细胞仪对其分选计数,克隆形成法检测细胞存活分数,Western blot法检测ATM1981Ser-P蛋白表达,Hoechst 33258荧光染色法、AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡,PI单染流式细胞仪检测细胞周期。结果 细胞在0~0.3 Gy表现出单位剂量杀伤增强,在0.3~0.5 Gy表现出一定的辐射抗性,0.5 Gy后的区域存活分数随辐射剂量的增加而降低。照射后1 h,ATM激酶在0.2 Gy时开始活化,0.5 Gy时活化达高峰(t=7.96,P<0.05);与0.5 Gy相比1.0和2.0 Gy的活化水平无明显变化(t=0.69、0.55,P>0.05)。照射后24 h,部分细胞发生凋亡,其凋亡曲线与存活曲线相吻合。与未照射组相比,0.1和0.2 Gy组在各时间点(照射后6、12和24 h)的细胞周期无明显变化,而0.3、0.4和0.5 Gy 组,照射后6和12 h细胞发生G₂/M期阻滞(t＝2.87、2.88、4.92和3.70、3.12、8.11,P<0.05),照射后24 h G₂/M期细胞比例下降(t＝3.87、4.77、3.01,P<0.05)。结论 A549细胞存在HRS/IRR现象,其发生可能与ATM激酶、细胞周期变化有关,凋亡是细胞死亡的主要方式。