血管活性肠多肽调控大鼠阴茎勃起的年龄及雄激素相关性研究

目的建立不同月龄及不同雄激素水平的SD大鼠模型,评价血管活性肠多肽（VIP）调控不同模型大鼠阴茎勃起的作用。方法 SD雄性大鼠80只随机等分为4组：A组（对照组）;B组（去势组）,行双侧睾丸切除;C组（老龄组）,普通饲养16个月;D组（去势老龄组）,去势术后饲养16个月。A和B组1月后测勃起功能;C和D组16个月后测勃起功能。电刺激海绵体神经时海绵体内压力（ICP）的最大值与对应平均动脉压（MAP）的比值表示勃起功能,记为Ratio。海绵体注射VIP前、后大鼠勃起功能分别以b-Ratio和m-Ratio表示。m-Ratio与b-Ratio的比值（记为mR/bR）表示VIP对勃起功能的影响程度。留取血清,ELISA方法检测血清睾酮浓度。结果 A、B、C和D组的b-Ratio（%）分别为69.8±7.0、36.8±5.4、53.2±8.5、33.2±6.3;m-Ratio（%）分别为73.0±8.7、63.4±9.6、79.7±10.8、67.0±11.8;mR/bR分别为1.05±0.03、1.72±0.08、1.56±0.29、2.06±0.44。后3组与A组比较勃起功能增加程度明显（P均〈0.01）。A、B、C和D组的血清睾酮浓度（ng/mL）分别为1.542±0.131、0.438±0.096、0.840±0.153、0.416±0.101,后3组均明显低于A组（P均〈0.01）。结论年龄增长和雄激素水平降低导致大鼠勃起功能下降,年龄对勃起功能的影响可能基于雄激素水平的变化;VIP对阴茎勃起的调控作用与年龄增长呈正相关,与雄激素水平负相关。     

雄激素调控ERK1/2通路改善去势大鼠勃起功能的机制研究

目的:研究细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)通路在雄激素缺乏引起的勃起功能障碍(ED)中的作用。方法:8周龄健康雄性SD大鼠30只,随机分成对照组(A组)、去势组(B组)、去势后补充雄激素组(C组)。B组和C组大鼠均手术去势,其中C组大鼠在去势1周后注射十一酸睾酮(TU)100 mg/kg,其余组则注射等量生理盐水。1个月后测各组大鼠血清睾酮浓度、平均颈动脉压(MAP)、阴茎海绵体内压(ICP),通过Western印迹检测大鼠阴茎海绵体ERK1/2、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)的蛋白表达。结果:B组大鼠血清睾酮[(1.27±0.48)nmol/L]较A组[(17.14±1.07)nmol/L]和C组[(16.24±1.90)nmol/L]明显降低(P0.05),ICP/MAP比值B组较A组和C组明显下降(P0.05);Western印迹结果显示ERK1/2在各组中表达基本一致(P0.05),而磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(P-ERK1/2)在B组中表达高于A组和C组(P0.05),e NOS在B组中表达明显低于A组和C组(P0.05)。结论:雄激素可能通过调控ERK1/2通路改善去势大鼠的勃起功能。     

雄激素缺乏对大鼠阴茎海绵体H2S信号通路的影响

目的:研究H2S信号通路在雄激素缺乏引起勃起功能下降中的作用。方法:8周龄健康雄性SD大鼠30只,随机分成6组:假手术2周组(A组)、假手术4周组(B组)、去势2周组(C组)、去势4周组(D组)、去势后雄激素替代治疗2周组(E组)和去势后雄激素替代治疗4周组(F组)。E、F去势术后给予生理剂量丙酸睾酮3 mg/(kg·d)皮下注射。测定各组大鼠血清睾酮、阴茎海绵体内压(ICP)、平均颈动脉压(MAP),测定血浆和阴茎组织内H2S浓度,免疫组化和Western印迹检测胱硫醚-β-合成酶(CBS)、胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)蛋白的表达。结果:血清睾酮水平结果显示C组[(0.63±0.15)nmol/L]较A组[(16.55±4.17)nmol/L]、E组[(18.99±4.62)nmol/L]显著降低(P0.05);D组[(0.70±0.22)nmol/L]较B组[(15.44±5.18)nmol/L]、F组[(20.99±6.41)nmol/L]显著降低(P0.05)。予以5、7 V电刺激盆神经后,ICP/MAP在C组较A、E组显著降低(P0.05),D组较B、F组显著降低(P0.05)。血浆及阴茎组织内H2S浓度含量C组较A、E组显著降低(P0.05),D组较B、F组显著降低(P0.05)。免疫组化和Western印迹检测阴茎海绵体组织内CBS、CSE蛋白表达量,C组较A、E组显著降低(P0.05),D组较B、F组显著降低(P0.05)。C组较D组CBS、CSE蛋白表达量显著降低(P0.05)。结论:阴茎海绵体组织CBS、CSE表达下降引起H2S信号通路受抑可能是雄激素缺乏引起大鼠勃起功能下降的机制之一。     

雄激素对大鼠视前内侧区一氧化氮合酶阳性神经元的影响

目的 探讨雄激素对大鼠下丘脑一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元的影响。方法 2个月龄雄性大鼠分成A组(去势组)、B组(假手术组)、C组(去势 睾酮替代组)以及D组(保列治喂饲组)，分别于处理前、处理后2周和2个月观察大鼠30min非接触性阴茎勃起(NCE)的次数，对视前内侧区(MPOA)、视上核(SON)、室旁核(PVN)以及终纹床核行尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶(NADPH—d)组织化学染色。结果 A组和D组大鼠30min NCE次数明显少于B组和C组。在NADPH组织化学染色中，术后2周各组大鼠脑组织阳性着色差异无显著性，术后2个月，A组与D组MPOA阳性着色明显少于B组和C组，而其他脑区阳性着色在各组间差异仍无显著性。结论 大鼠阴茎勃起功能对雄激素具有依赖性，而雄激素对性反应调节中枢的影响可能与调节MPOA NOS阳性神经元有关；其中5α—双氢睾酮可能是主要的雄激素活性成分。     

雄激素对大鼠腹叶前列腺GDNF mRNA表达的影响

目的 :探讨雄激素对大鼠腹叶前列腺中胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)mRNA表达的影响。　方法 :2 4只SD大鼠分为 3组 ,其中A组 (n =8)为假手术对照组 ,B组 (n =8)为去势组 ,C组 (n =8)为雄激素替代组 (去势后肌注十一酸睾酮 5 0mg/kg) ;术后 3d处死 ,通过半定量RT PCR检测GDNFmRNA在去势前后和雄激素替代组大鼠腹叶前列腺中的表达变化。　结果 :去势后大鼠前列腺的体积萎缩变小 ;雄激素替代组出现前列腺增生变大 ;对照组正常的大鼠前列腺有GDNFmRNA表达 ,去势组GDNFmRNA表达量减少 ,雄激素替代组GDNFmRNA表达量增加。与正常对照组比较 ,去势组的GDNFmRNA表达量显著减少 (P <0 .0 5 ) ,雄激素替代组的GDNFmRNA表达量显著增加(P <0 .0 5 )。　结论 :雄激素可增加GDNFmRNA表达 ,促进前列腺细胞生长。     

去势联合地塞米松建立大鼠骨质疏松模型的研究

目的观察去势联合地塞米松肌肉注射的方法建立大鼠骨质疏松模型的效果。方法将24只3.5月龄雌性SD大鼠(250±20)g随机分成3组,A组:假手术+肌注生理盐水组(8只)、B组:去势+肌注生理盐水组(8只)和C组:去势+肌注地塞米松组(8只)。后两组大鼠行双侧卵巢切除术。分别于术前及术后2w、4w、6w采用(双能X线吸收)骨密度仪进行大鼠全身BMD的测量,术后6w三组大鼠分别进行骨CT值测量、外周血生化检测和股骨颈骨组织形态学观察及其骨小梁形态计量学测定。结果大鼠术后6w,C组全身BMD及骨CT值较A组明显降低(P<0.05);B和C组血清Ca浓度较A组明显下降(P<0.05);B和C组血清P浓度较A组明显升高(P<0.05);B组血清ALP、TRACP浓度较A组明显升高(P<0.05),C组与B组比较血清ALP浓度显著降低(P<0.01)、TRACP浓度显著增高(P<0.01);B组和C组大鼠骨小梁均变窄,连接不完整出现断裂、局部镂空的现象,骨髓腔变大,骨细胞分布减少,骨小梁形态计量值降低(P<0.01),C组更明显。结论去势联合肌注地塞米松法建立大鼠骨质疏松症模型较单纯去势法时间短、效果明显、稳定性好。     

血红素氧合酶在去势大鼠阴茎海绵体的表达

目的:研究血红素氧合酶(HO)在去势大鼠阴茎海绵体的表达,探讨其在雄激素缺乏的勃起功能障碍发生中的机制。方法:40只10周龄雄性SD大鼠随机分成:假手术2周组(A组),假手术4周组(B组),去势2周组(C组),去势4周组(D组)。术后2、4周检测血清睾酮水平,免疫组化及RT-PCR技术检测HO及nNOS在大鼠阴茎海绵体的表达。结果:去势组大鼠较假手术组血清睾酮水平显著下降,[AvsC:(283.222±117.171)ng/dlvs(7.117±3.700)ng/dl;BvsD:(289.280±87.413)ng/dlvs(48.826±19.477)ng/dl](P<0.01)、HO-1、HO-2蛋白表达明显降低(P<0.01),去势组HO-1、HO-2及nNOSmRNA表达较假手术组显著降低(P<0.01)。结论:雄激素可能通过HO-CO系统部分调控阴茎勃起功能。     

红景天预防高原去势大鼠骨质疏松症的实验研究

目的探讨红景天预防高原去势大鼠骨质疏松症的作用。方法在海拔3100m高原建立去势大鼠骨质疏松模型,分为A组正常组(假手术组),B组模型组(去除卵巢组),C组阳性组(去除卵巢 尼尔雌醇组),D组红景天组(去除卵巢 红景天混合饲料组)。术后3个月,测血清IL-6、TNF-α和尿DPD含量指标,观察骨组织切片变化,观察红景天对高原去势大鼠骨质疏松的预防作用。结果A组、C组和D组IL-6、TNF-α和尿DPD含量均显著低于B组。A组、C组和D组被测3项内容之间比较,差异无显著性。骨组织切片显示:B组骨小梁变细,变稀,并见断裂现象。C、D组组织结构基本与正常组一样,骨小梁分布均匀,结构粗细一致。结论红景天能有效降低高原去势大鼠血清IL-6、TNF-α含量和尿DPD排泄浓度,提高骨密度,具有抗高原组织缺氧抑制骨吸收和促进骨形成的作用。     

缺氧诱导因子-1α在去势前后大鼠腹叶前列腺中表达的变化

目的探讨与缺氧相关的缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)是否参与去势后前列腺萎缩过程.方法24只SD大鼠分为3组,其中A组(n=8)为假手术对照组,B组(n=8)为去势组,C组(n=8)为雄激素替代组(去势后肌注十一酸睾酮50mg/kg);术后3天处死,通过半定量RT-PCR检测与HIF-1α在去势前后前列腺表达变化.结果去势后大鼠前列腺的体积萎缩变小;雄激素替代组出现前列腺增生变大;对照组正常的大鼠前列腺有HIF-1 α mRNA低水平表达,去势组HIF-1α mRNA表达量增加,雄激素替代组HIF-1αmRNA表达量减少,与正常对照组比较,去势组的HIF-1α mRNA的表达量显著增加(P＜0.05),雄激素替代组的HIF-1αmRNA的表达量显著减少(P＜0.01).结论前列腺组织的缺氧参与去势后大鼠前列腺的早期萎缩过程.     

雄激素调控大鼠阴茎海绵体组织中eNOS表达的分子机制

目的:研究雄激素是否通过蛋白激酶B-3(AKT3)、Ⅰ类磷脂酰肌醇-3-激酶的p110催化亚单位(PIK3CA)、钙调蛋白(CALM)、小窝蛋白1(CAV1)调控大鼠阴茎海绵体组织内皮型一氧化氮合酶(e NOS)的表达,并影响阴茎勃起功能。方法:8周龄健康雄性SD大鼠36只,随机均分为6组:4周对照组(A组)、6周对照组(B组)、4周去势组(C组)、6周去势组(D组)、4周去势+睾酮(T)替代组(E组)、6周去势+T替代组(F组)。C、D、E、F组切除双侧睾丸及附睾,1 d后E、F组隔日1次丙酸睾酮3 mg/kg皮下注射,其余各组等量植物油皮下注射。4周后(A、C、E组)、6周后(B、D、F组)分别检测各组大鼠海绵体内压(ICP_(max))/平均动脉压(MAP)、血清T,通过免疫组化法及Western印迹法分别测定e NOS、P-e NOS、AKT3、PIK3CA、CALM、CAV1在各组大鼠阴茎海绵体中的表达。结果:各组实验大鼠体重、MAP无显著差异。血清T值和ICP_(max)/MAP比值:去势组(C、D组)较对照组(A、B组)及去势+T替代组(E、F组)极显著降低(P均0.01),且去势6周组(D组)较去势4周组(C组)显著降低(P均0.05),去势+T替代组(E、F组)及对照组(A、B组)各组间无显著差异。免疫组化结果显示:e NOS、Pe NOS主要表达在血管内皮细胞胞膜和海绵窦血管腔内;AKT3、PIK3CA、CALM、CAV1主要表达于血管内皮细胞胞质和胞膜,少数表达于平滑肌细胞。e NOS、P-e NOS、AKT3、PIK3CA、CALM、CAV1Western印迹结果显示:去势组(C、D组)与对照组(A、B组)、去势+T替代组(E、F组)相比极显著降低(P均0.01),去势+T替代组(E、F组)与对照组(A、B组)相比无显著差异,且6周去势组(D组)比4周去势组(C组)表达显著降低(P均0.05),6周去势+T替代组(F组)与4周去势+T替代组(E组)相比无显著差异,6周对照组(B组)与4周对照组(A组)相比无显著差异。结论:雄激素可能通过上调AKT3、PIK3CA、CALM、CAV1蛋白的表达,磷酸化e NOS后激活e NOS,促进勃起;然而,确切的机制还应该采用AKT3、PIK3CA、CALM、CAV1等的阻滞剂或者激活剂,以及采用基因转染或者基因敲除等方法,进一步明确分子机制。