依达拉奉对局灶性脑缺血大鼠神经功能恢复及海马病理形态学改变的影响

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血后神经功能恢复及海马病理形态学改变,评价依达拉奉的干预作用.方法 126只雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(A组,6只),生理盐水组(B组,MCAO后6h、12h、24h、48h、72h、5d、7d7时点,各6只),依达拉奉处理组(C组,同B组),术后即刻予以依达拉奉干预.行神经功能缺损评分测定;TTC染色观察脑梗死体积改变;用HE染色方法观察病理形态学改变.结果 术后进行神经缺损评分发现,由于麻醉和手术创伤的影响,假手术组术后出现6～24h神经功能减退.与假手术组相比,在6～24h时间段盐水组神经功能下降明显(P＜0.05).依达拉奉组神经功能明显好于盐水组(P＜0.05).术后7d盐水组和依达拉奉组神经功能基本恢复.同时,在依达拉奉组和盐水组中,缺血24h脑梗死体积最大;与盐水组相比,术后6～24h依达拉奉组脑梗死体积明显减小(P＜0.05).HE染色显示术后6h在脑缺血区神经元细胞无明显改变,6h后缺血区脑组织逐渐出现肿胀与坏死;在依达拉奉组,脑水肿和神经元坏死病理损害明显较轻,在假手术组,脑组织无明显改变.结论 依达拉奉具有改善神经功能缺损、缩小脑梗死体积和减轻缺血性病理损害程度的作用;研究还提示依达拉奉对缺血性脑卒中早期神经功能恢复具有十分重要的临床意义.     

依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血Caspase-3、Bcl-xl表达的影响

目的探讨依达拉奉对局灶性脑缺血损伤过程中脑细胞Caspase-3、Bcl-xl表达的影响及其机制。方法采用光镜、免疫组化方法检测大鼠局灶性脑缺血后梗死体积、病理变化及不同时间Caspase-3、Bcl-xl表达,应用依达拉奉对上述指标进行干预。结果局灶性脑缺血时Caspase-3、Bcl-xl的表达水平呈动态变化,Caspase-3表达于缺血24h达高峰,Bcl-xl表达于缺血6h达高峰,依达拉奉可使Caspase-3表达下降,Bcl-xl表达增加;依达拉奉能明显减小缺血后24h的梗死体积,减轻神经细胞损伤。结论依达拉奉干预可使脑缺血后Caspase-3表达减弱,Bcl-xl表达增强,缩小梗死体积,从而减轻神经元损伤。依达拉奉调整Caspase-3、Bcl-xl蛋白表达变化,可能是其脑保护作用机制之一。     

脑缺血大鼠水通道蛋白-9 mRNA表达与钙离子浓度的改变及其关系

目的 研究脑缺血后脑组织水通道蛋白-9(AQP9)mRNA表达和Ca2 浓度的改变及其关系.方法 制作脑缺血大鼠模型,在脑缺血6 h、1 d、2 d,3 d、5 d,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测缺血脑组织AQP9 mRNA的表达水平;用Fura-2/AM荧光法测定水肿区脑细胞内Ca2 浓度;并与对照组比较.结果 与对照组相比,脑缺血后6 h,水肿区脑组织AQP9 mRNA表达水平和Ca2 浓度均开始增高,在脑缺血后第2 d、3 d表达最强(P<0.05～0.01);AQP9 mRNA表达水平与Ca2 浓度呈正相关(r=0.7654,P＜0.05).结论 脑缺血后AQP9表达增强,Ca2 浓度增高;提示AQP9和Ca2 可能共同参与缺血性脑水肿的形成.     

依达拉奉对脑缺血-再灌注大鼠的神经保护作用及其机制研究

目的探讨依达拉奉对局灶性脑缺血-再灌注损伤的影响及其可能的神经保护机制。方法用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤模型,用试剂盒检测脑组织丙二醛(MDA)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性;分别测定脑组织含水量;免疫组织化学染色检测水通道蛋白4(AQP-4)的表达水平。结果缺血再灌注损伤后,大鼠脑组织脂质过氧化产物丙二醛含量和一氧化氮合酶活性增高,MDA含量和NOS合酶活性于脑缺血-再灌注后30min开始增高,于3d达到高峰,于7d基本恢复正常;脑组织含水量于脑缺血再灌注后1d开始增高,于3d达到高峰,于7d时下降至大致正常水平;AQP-4的表达于脑缺血-再灌注后6h开始增高,于3d达到高峰,于7d时下降至大致正常水平。依达拉奉干预能显著降低MDA含量和NOS活性,降低脑组织的含水量,并使AQP-4的表达明显下降。结论在脑缺血-再灌注损伤后,依达拉奉能通过清除自由基而减轻脂质过氧化损伤,并通过抑制AQP-4的表达减轻脑水肿,从而起到神经保护作用。     

依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡及caspase-3蛋白表达的影响

目的 探讨依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经功能损伤、细胞凋亡及caspasc-3蛋白表达的影响.方法 雄性SD大鼠24只采用随机数字表法分为假手术组、脑缺血再灌注组、生理盐水治疗组、依达拉奉治疗组,每组6只.除假手术组外,其余3组均采用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型.依达拉奉治疗组于脑缺血开始时及再灌注后12 h分别腹腔注射依达拉奉3 mg/kg,生理盐水治疗组同时间注射等量生理盐水;假手术组同样过程造模,但不插入尼龙线造成缺血.造模后24 h后进行大鼠神经行为学评分;应用免疫组织化学及Western blot检测caspase-3蛋白表达水平的变化;利用原位缺口末端标记法(TUNEL法)研究神经细胞凋亡的变化.结果 与脑缺血再灌注组及生理盐水治疗组相比,依达拉奉治疗组大鼠神经行为学评分明显减少,caspase-3免疫阳性细胞及蛋白表达明显减少,凋亡细胞也减少,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 依达拉奉能有效减轻脑缺血灌注损伤后神经细胞凋亡.改善神经功能缺损症状,推测其机制与抑制caspase-3蛋白表达有关.     

依达拉奉对脑缺血再灌注后FADD、caspase-8表达的影响

目的研究大鼠脑缺血再灌注后Fas相关死亡域蛋白（FADD）、caspase-8蛋白的表达及依达拉奉对其的影响。方法用免疫组化法测定缺血2h后再灌注不同时相缺血半暗带FADD、caspase-8蛋白的表达。结果缺血半暗带皮质内FADD、caspase-8蛋白的表达于缺血再灌注后3h明显上升，再灌注12h达高峰（P〈0．01），至再灌后24h明显下降。依达拉奉能显著下调其表达（P〈0．01，P〈0．05）。结论脑缺血再灌注后缺血半暗带FADD、caspase-8蛋白的表达均明显增加，提示二者可能在脑缺血再灌注损伤中发挥重要作用．依达拉奉可能通过抑制其表达而达到脑保护的作用。     

依达拉奉和尼莫地平联合应用对脑缺血大鼠脑组织血管内皮生长因子表达的影响

目的 探讨依达拉奉与尼莫地平联合应用对脑缺血大鼠脑组织血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 90只Wistar大鼠随机分为5组:正常对照组、脑缺血组、依达拉奉组、尼莫地平组和依达拉奉+尼莫地平组(依尼组),各组又分为缺血12 h、24 h、48 h亚组.用线栓法制作大鼠大脑中动脉堵塞(MCAO)脑缺血模型.制模后1 h,各药物干顶组分别注射依达拉奉3 mg/kg、尼莫地平2 mg/kg和依达拉奉+尼莫地平,正常对照组和脑缺血组大鼠分别腹腔注射生理盐水.各组大鼠分别于预定时间点处死,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测脑组织VEGFmRNA水平.结果 各组缺血24 h、48 h亚组脑组织VEGF mRNA水平明显低于正常对照组(均P＜0.01),各药物干预组脑组织VEGF mRNA水平显著高于脑缺血组(均P＜0.01);依尼组脑组织VEGF mRNA水平又显著高于依达拉奉组和尼莫地平组(均P＜0.01).结论 依达拉奉和尼莫地平能上调缺血脑组织VEGF的表达水平,联合应用效果更好.     

依达拉奉对尿激酶溶栓大鼠脑组织基质金属蛋白酶-9表达及出血转化的影响

目的探讨依达拉奉对尿激酶溶栓大鼠脑组织基质金属蛋白-9(MMP-9)表达及脑出血性转化的影响。方法健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠制作大鼠自体血大脑中动脉栓塞模型,制作成功后随机分成3组:尿激酶组、脑缺血组、尿激酶+依达拉奉组;每组20只,另加20只为假手术组。取脑组织进行病理学检查并用免疫组化技术检测MMP-9表达,RT-PCR检测MMP-9mRNA表达。结果各组大鼠脑组织病理学结果:尿激酶组中7只发生脑出血,脑缺血组仅1只有红细胞漏出血,尿激酶+依达拉奉组4只发生脑出血,且出血体积较尿激酶组明显减少。尿激酶组中MMP-9在脑组织中高度表达,尿激酶+依达拉奉组表达相对减少,与脑缺血组及尿激酶组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。假手术组大鼠脑组织中微量表达。MMP-9mRNA表达与MMP-9在各组中表达一致。结论依达拉奉能显著降低尿激酶溶栓大鼠脑组织中MMP-9mRNA及MMP-9蛋白表达,并可能降低溶栓后出血转化率。     

依达拉奉对大鼠脑梗死溶栓治疗后MMP-9表达的影响

目的研究依达拉奉对大鼠脑梗死溶栓治疗后脑组织中MMP-9表达及血脑屏障的影响,探讨依达拉奉对脑梗死溶栓治疗后再灌注损伤的保护机制。方法采用SD大鼠自体血栓栓塞法制备大脑中动脉闭塞模型,并将SD大鼠随机分为假手术组、尿激酶溶栓治疗组(UK)、尿激酶+依达拉奉治疗组(UK+ED),12h后分别以免疫组织化学法和比色法对SD大鼠脑组织中MMP-9表达水平和伊文思蓝含量进行测定。结果与尿激酶溶栓治疗组相比,尿激酶+依达拉奉组SD大鼠缺血侧脑组织MMP-9表达水平和EB含量均显著降低,差异具有统计学意义(P值均<0.01)。结论依达拉奉可能通过下调MMP-9表达,减轻血脑屏障的破坏,减轻溶栓后脑缺血再灌注损伤。     

依达拉奉对脑缺血再灌注大鼠海马一氧化氮的影响

目的研究依达拉奉对脑缺血再灌注大鼠海马一氧化氮(NO)产生的影响。方法大鼠脑缺血采用四血管阻断法,选择性测定电极检测的浓度。实验分为生理盐水组、依达拉奉组(Edaravone)和7-Nitroindazole(7-NI)组。结果依达拉奉和7-NI皆未影响大鼠的血压和海马血流量,均显著减少了缺血再灌注时海马内NO的产生(均P<0.001)。结论依达拉奉可能通过抑制神经型一氧化氮合酶(nNOS)或减少NO而起到神经保护作用。     

大鼠脑缺血再灌注后水孔蛋白-4的免疫组化表达与脑水肿关系的研究

目的　研究大鼠脑缺血再灌注后脑组织中水孔蛋白 - 4 (AQP- 4 )的表达与脑水肿的关系。方法　采用大鼠大脑中动脉栓塞 (MCAO)模型 ,经免疫组化法测定 AQP- 4表达阳性细胞数 ,干、湿重法测定脑水含量 ,脑水肿以脑水含量评价。结果　脑缺血再灌注后 12 h,脑缺血坏死周边区 AQP- 4表达阳性细胞及脑水含量增加 ,于 4 8～ 12 0 h 达到高峰 ,16 8h后仍处于较高水平 ,两者之间呈正相关 (r=0 .95 8,P<0 .0 1)。结论　脑缺血再灌注后AQP- 4参与脑水肿的发生 ,为脑缺血再灌注损伤的重要因素之一。     

甘露醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤时神经细胞凋亡的影响

目的 研究甘露醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤时神经细胞凋亡的影响。方法 采用大鼠大脑中动脉阻断（MCAO）模型，给予不同剂量甘露醇进行干预，用TUNEL染色标记大鼠神经细胞凋亡情况，按Swanson方法测量、计算梗死体积，并与未干预组及生理盐水对照组比较。结果 大、小剂量甘露醇均能减轻大鼠脑缺血再灌注后的神经细胞凋亡，并能阻止梗死体积的扩大。大、小剂量的效果之间无明显差异。结论 甘露醇的脑保护作用不完全与脱水降颅压有关，还可通过抑制神经细胞凋亡而发挥重要的脑保护作用。     

大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织STAT3变化的免疫组织化学研究

目的 探讨信号转导和转录激活子（ＳＴＡＴ）３在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的表达及其与缺血性神经细胞损伤的关系方法 用ＡＢＣ免疫组化方法观察大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑组织中的ＳＴＡＴ３蛋白免疫反应阳性细胞分布。结果 正常和假手术大鼠脑内以及脑缺血后的非缺血半球脑组织中未发现有ＳＴＡＴ３免疫反应阳性细胞,脑缺血再灌注损伤后１２小时在栓塞侧梗死区可见少量ＳＴＡＴ３免疫阳性细胞,２４小时后阳性细胞显著增多达高峰,在缺血侧纹状体和缺血皮质周边区表达最明显,１周后梗死周边区少数神经细胞仍有阳性表达。差异有显著意义（Ｐ〈０．０１）。结论 ＳＴＡＴ３活化及超量表达可能介导了缺血神经细胞信号转导过程,并参与了脑缺血神经细胞损伤与修复的病理生理过程。     

脑缺血后尼膜同对AQP9 mRNA表达和血脑屏障通透性的影响

目的 研究脑缺血后尼膜同对AQP9 mRNA表达和血脑屏障通透性的影响以及脑缺血后尼膜同对脑的保护作用.方法 采用阻断大鼠大脑中动脉制作脑缺血大鼠模型,通过原位杂交和图像分析方法测定梗死区AQP9 mRNA的表达水平,同时电镜进行对应部位的病理观察,并检测缺血脑组织中伊文思蓝外渗的量.结果 脑缺血后,在尼膜同组和对照组缺血组织均出现缺血性病理变化、AQP9 mRNA表达上调、血脑屏障通透性增加,其变化趋势一致,随着脑缺血时间延长其改变加重.尼膜同组AQP9 mRNA的表达变化与生理盐水对照组,虽有差别,但差异无显著性意义(P>0.05);尼膜同组血脑屏障通透性及病理变化明显低于生理盐水对照组,其差异有显著性意义(P<0.05).结论 脑缺血后,尼膜同可能阻滞血脑屏障通透性的增加,起到脑保护作用,但不影响AQP9 mR-NA的表达.

Abstract：

Objective The aim of the study was to investigate the effect of Nimotop on the expression of AQP9 mRNA and the changes of BBB penetrability, as well as the effect of Nimotop on the brain after cerebral ischemia in rats.Methods The model of cerebral ischemia was made by occluding unilateral middle cerebral artery(MCA) of the rats with the suture method. The expression of AQP9 mRNA was assessed by in situ hybridization and imaging analysis. The pathological changes of the ultrastructure were observed under TEM. The BBB permeability of ischemic brain was determined by Evans Blue (EB) extravasation method. Results In Nimotop groups, the expression of AQP9 mRNA, the increasing of BBB permeability and the ultrastructure changes of the tissues were as same as those in control groups. The changes of two groups became remarkable after cerebral ischemia. Changes of AQP9 mRNA expression in Nimotop group were as same as those in control groups(P > 0.05) ;BBB permeability and the uhrastructure changes were more slight in Nimotop group than in control group (P < 0. 05). Conclusion Nimotop could decrease the permeability of BBB and brain damage after cerebral ischemia. However, Nimotop had no effect on the expression of AQP9 mRNA.     

15-脂氧化酶及其mRNA在局灶性脑缺血预处理大鼠中作用机制的探讨

目的　观察局灶性脑缺血预处理对大鼠脑 15 -脂氧化酶 (15 - L O)表达及其 m RNA(15 - L O m RNA)转录的影响 ,探讨两者在诱导脑缺血耐受中的意义。方法　线栓法制备大鼠局灶性脑预缺血 -缺血再灌注模型 (PC-MCAO)及局灶性单纯脑缺血再灌注模型 (MCAO) ,各组于不同时程用免疫组化法检测 15 - L O的表达、原位杂交法检测 15 - L O m RNA的表达。结果　 PC- MCAO组较对应时程的 MCAO组 15 - L O m RNA及其蛋白 15 - L O的表达强度显著降低 (P<0 .0 5 )。结论　脑预缺血处理可致 15 - L O及其基因表达下调 ,这可能是局灶性脑缺血预处理诱导脑缺血耐受的机制之一。     

高压氧联合依达拉奉对大鼠脑梗死区AQP9的影响

目的探讨高压氧联合依达拉奉对脑梗死大鼠AQP9表达及脑水肿的影响。方法建立老年SD大鼠大脑中动脉闭塞(MCAQ)模型,随机分为4组:对照组、依达拉奉组、高压氧组和联合组,每组20只。对各组大鼠进行神经功能评分,检测大鼠脑组织内AQP9基因及蛋白的表达、梗死脑组织的含水量,并进行HE染色,观察病理学变化。结果各组大鼠神经功能缺损评分比较显示,联合组明显低于对照组、依达拉奉组及高压氧组;RT-PCR及Western blot检测表明,联合组AQP9的mRNA蛋白表达及梗死区脑组织含水量明显低于脑梗死组、依达拉奉组及高压氧组(P0.05);HE染色结果显示,高压氧组、依达拉奉组较对照组炎性浸润及水肿减轻,联合组比高压氧组、依达拉奉组又有明显缓解。结论高压氧联合依达拉奉治疗可促进脑梗死大鼠神经功能的恢复。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后MDM2的表达

目的探讨局灶性脑缺血再灌注后(murine double-minute 2,mdm2)mRNA表达的时间分布特征。方法采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血2h再灌注模型,RT-PCR技术检测mdm2 mRNA的表达。结果 Mdm2 mRNA在半暗带区缺血再灌注后6h表达开始增加,12h达高峰,24h开始下降,7d仍有表达。结论脑缺血再灌注后mdm2 mRNA表达增加可能是机体对缺血损伤的保护性反应。     

亚低温疗法联合依达拉奉对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨亚低温疗法联合依达拉奉对大鼠脑缺血再灌注损伤后的保护作用。方法采用线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型,缺血6h后再灌注,并分为假手术组、模型组、依达拉奉组、亚低温联合依达拉奉组,再灌注24h后进行神经功能缺损评分,采用TTC染色测定脑梗死体积和用免疫组化的方法检测Bax和Bcl-2的阳性细胞数。结果与模型组比较,依达拉奉未能减少脑梗死体积,但能通过下调Bax及上调Bcl-2减少细胞的凋亡,对脑细胞有保护作用;与模型组、依达拉奉组比较,亚低温联合依达拉奉组能通过上调Bcl-2及下调Bax明显降低大鼠神经缺陷评分及减少脑梗死体积。结论亚低温疗法联合依达拉奉对大鼠脑缺血再灌注损伤具有很好的保护作用。