瑞芬太尼对人肝细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的 探讨瑞芬太尼对人肝细胞缺氧复氧损伤的保护作用.方法 人肝细胞株HL-7702,建立培养肝细胞缺氧复氧损伤模型.将培养的肝细胞分为7组,每组6个样本,缺氧培养15h,复氧5h,然后分别取上清液和肝细胞线粒体,测定ALT、AST、MDA的含量和SOD的活性.结果 与正常对照组相比较,损伤对照组的ALT、AST、MDA明显升高,而SOD活性明显下降(P＜0.05).低浓度的瑞芬太尼(5、10、20ng/ml)能使细胞内ALT、AST、MDA明显降低(P＜0.05)及SOD活性明显升高(P＜0.05).而瑞芬太尼浓度＞30ng/ml时,其结果与损伤对照组比较差异无统计学意义.结论 低浓度瑞芬太尼对缺氧复氧的肝细胞损伤具有保护作用.     

二氮嗪预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及对连接蛋白43的影响

目的:观察二氮嗪预处理(DPC)对大鼠在体心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的保护作用及对心室肌连接蛋白43(connexin43,Cx43)含量的影响。方法:45只SD大鼠随机分为假手术(sham)组、缺血再灌注(IRI)组、缺血预适应(IPC)组、二氮嗪预处理(DPC)组和5-羟葵酸(5-HD)预处理组,每组9只。建立大鼠在体心肌MIRI模型,连接Medlab生物信号采集处理系统,监测左心室收缩压、舒张末压等心功能指标的变化。再灌注结束后,采取血浆检测心肌酶谱,留取心室肌标本,应用Western Blot法检测Cx43含量。结果:DPC组与IRI组比较,肌酸激酶同工酶及乳酸脱氢酶均下降(P0.05～P0.01);Cx43含量的平均光密度显著升高,且以PCx43为主(P0.01);左心室收缩和舒张功能均较IRI组升高(P0.05～P0.01)。结论:DPC能维持再灌注心肌Cx43的数量,降低心肌损伤,维护左心室收缩和舒张功能水平,提示Cx43可能参与了二氮嗪预处理的心肌保护作用。     

缺血后处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护效应

目的探讨缺血后处理对肝脏缺血再灌注损伤（IRI）的保护效应。方法建立大鼠局部肝脏IRI模型,将24只健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术、缺血再灌注、缺血后处理3组,以缺血再灌前、反复多次的短暂预再灌、停灌作后处理;观察肝组织中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）水平变化,采用免疫组化法检测肝组织中Bcl-2蛋白含量,TUNEL法检测肝细胞凋亡状态,透射电镜观察肝组织超微结构的病理形态学变化,并以图象分析仪对线粒体立体形态进行定量分析。结果与缺血再灌注组相比,缺血后处理组肝组织中MDA含量及肝细胞凋亡指数明显下降（P〈0.05）,而SOD、CAT、GSH-PX水平和Bcl-2蛋白表达的光密度值则显著升高（P〈0.05）,线粒体超微结构损伤亦明显减轻。结论缺血后处理可通过抑制再灌注后肝实质细胞凋亡,减轻肝脏IRI。     

山葡萄多酚对大鼠心肌线粒体氧化损伤的保护作用

目的:在大鼠心肌线粒体（Mt）自由基损伤的体外实验中观察山葡萄多酚(PVAR)对心肌线粒体氧化损伤的保护作用,为治疗心肌缺血再灌注损伤提供实验依据。方法: 实验分5组,正常线粒体组、诱导损伤线粒体组和预先加25、50、100 mg•L^-1PVAR再诱导损伤线粒体组;利用Fe²⁺/维生素C（VitC）系统产生氧自由基,体外对Wistar大鼠心肌Mt诱导损伤,观察各组Mt心磷脂和MDA含量、膜流动性、ATPase活性和肿胀度的变化。结果：与损伤组比较,三种剂量PVAR组心磷脂含量明显增高（P<0.05),MDA明显减少（P<0.01),膜流动性显著增大(P<0.01),ATPase活性增高（P<0.05),100 mg•L^-1PVAR组线粒体肿胀度与正常组比较差异无显著性。结论:氧自由基引起Mt损伤;PVAR对氧自由基引起的大鼠心肌Mt损伤具有保护作用,保护机制可能是直接减少氧自由基的生成。     

参附注射液预处理对缺血再灌注损伤保护作用的影响

目的探讨参附注射液预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法新西兰大白兔30只,随机分成2组:缺血再灌注损伤组(IR)、参附注射液预处理组(SFI)。实验期间描记心功能指标:左室内压力峰值(LVSP)、左室舒张末期压(LVEDP)、左室内压变化最大速率(±dp/dtmax)。2组均于再灌注30min后立即取结扎线下约0.5cm处心肌组织1g,制成组织匀浆,采用高速离心法制备线粒体悬液,检测琥珀酸脱氢酶(SDH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活力及丙二醛(MDA)含量。结果与IR组比较,SFI组各时点的收缩及舒张功能下降程度明显减轻(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05),GSH-PX活力显著升高(P<0.05),SDH活力明显升高(P<0.01)。结论参附注射液预处理能较明显地抑制缺血再灌注损伤时线粒体脂质过氧化作用,降低MDA的含量,提高GSH-PX和SDH的活力,保护心肌细胞线粒体的结构和功能,对再灌注引起的损伤起到保护作用。     

环维黄杨星D对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的保护作用初探

目的:探讨环维黄杨星D对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的保护作用。方法:SD大鼠30只,分为假手术组、模型组和环维黄杨星D干预组,造模后分别于缺血30min、再灌注60min,观察3组大鼠的血清和心肌组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)的含量的变化。结果:与模型组比较,环维黄杨星D组血清及心肌组织MDA水平明显降低,SOD水平明显升高。结论:环维黄杨星D对大鼠心肌缺血-再灌注引起心肌损伤具有明显的保护作用,其机制可能与抑制脂质过氧化物生成、清除氧自由基相关。     

前列腺素E1后处理对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的  探讨前列腺素E1（PGE1）后处理对大鼠移植肝缺血再灌注损伤（IRI）的保护作用及其机制。方法  建立SD大鼠肝移植模型,随机分为3组：IRI组、PGE1后处理组（PGE1组）及假手术组（S组）。检测各组血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、超氧化物岐化酶（SOD）及丙二醛（MDA）的含量;采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测移植肝组织内肿瘤坏死因子（TNF-α）信使核糖核酸（mRNA）的表达水平;苏木精-伊红染色（HE）观察移植肝病理形态学变化。结果  供肝再灌注后2及6 h,PGE1组的大鼠血清ALT、AST和MDA水平及TNF-α mRNA的表达低于IRI组（P <0.05）,血清SOD水平高于IRI组（P <0.05）,光镜下PGE1组肝组织损伤较IRI组轻。结论  PGE1后处理可通过提高肝组织的抗氧化能力,降低TNF-α来减轻大鼠移植肝IRI。

     

三七总皂甙对大鼠肝脏短期缺血再灌注损伤早期钙离子含量变化的影响

[目的 ]观察三七总皂甙对大鼠肝脏短期缺血再灌注损伤早期线粒体钙离子含量的影响 .[方法 ]通过直接注入并保留药物的方法 ,用原子吸收分光光度法测定大鼠肝脏局部缺血再灌注损伤模型肝细胞线粒体与胞浆中的钙离子含量 ,同步观察电子显微镜下组织学改变 .[结果 ]用三七总皂甙处理的大鼠肝细胞线粒体钙离子含量在再灌注早期虽有波动 ,但无显著性意义 ;再灌注 90min ,三七总皂甙处理组的大鼠肝细胞线粒体钙离子含量 (6 30± 0 71μg/g)明显低于对照组 (8 73± 2 0 3μg/g) ,缺血再灌注大鼠肝细胞胞浆中钙离子含量在三七总皂甙组与对照组均随着再灌注时间的延长逐渐增加 ;对照组到再灌注 90min时钙离子含量 (14 2 6± 2 6 9μg/g)显著升高 ,而相比之下三七总皂甙组钙离子含量的增加相对比较平稳 ,且各时间组均略低于对照组 ,但未见显著性差异 .电子显微镜下观察到三七总皂甙组的线粒体等超微结构的改变较对照组轻 .[结论 ]大鼠肝脏短期缺血再灌注损伤早期线粒体与胞浆中的钙离子含量随着再灌注时间的延长而逐渐增高 ,以胞浆中的变化为甚 ,而超微结构的损伤则以线粒体为主 ;三七总皂甙对大鼠肝脏短期缺血再灌注损伤早期线粒体钙离子含量的影响较对胞浆明显 ;三七总皂甙对大鼠肝脏短期缺血再灌注损伤具有     

葛根素预处理保护心肌缺血再灌注损伤的机制

目的:探讨线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP)是否参与葛根素(puerarin,PUE)预处理保护心肌缺血再灌注损伤的机制.方法:开胸结扎左冠状动脉前降支(LAD),复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,设立假手术(sham)组、缺血再灌注(I/R)组、PUE预处理组,PUE预处理加mitoKATP特异性阻断剂5-hydroxydecanoate(5-HD)组和5-HD组,采用TTC法测定心肌梗塞面积,TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况,并测定血清肌酸激酶(CK)活力.结果:I/R组较sham组心肌梗塞面积、血清CK活力以及心肌细胞凋亡指数显著增高;与I/R组比较,PUE预处理组心肌梗塞面积明显缩小,血清CK活力和心肌细胞凋亡指数显著降低;PUE加5-HD组与PUE预处理组相比心肌梗塞面积增大,心肌细胞凋亡增加,血清CK活力增高;5-HD组与I/R组相比以上指标差异均无显著意义.结论:葛根素预处理明显减轻了大鼠心肌I/R损伤,其心肌保护效应可能部分通过开放mitoKATP通道的途径产生.     

肝十二指肠韧带内注射利多卡因对缺血-再灌注损伤肝脏的影响

目的探讨肝十二指肠韧带内注射利多卡因减轻肝脏缺血-再灌注(Ischemia-reprefusion,I-R)损伤的有效性以及从蛋白质组水平研究其可能涉及的机制. 方法 46 只 SD 大鼠随机分成 I-R 组、利多卡因组和开腹组.检测各组血清丙氨酸转氨酶(ALT)和门冬氨酸转氨酶(AST),肝脏组织标本胎盘蓝染色分析.肝脏组织的蛋白质组学分析采用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-D PAGE)、质谱( MALDI-TOF-MS)方法. 结果 利多卡因组 ALT 和 AST 较 I-R 组显著降低(ALTt=2.599,P<0.02;ASTt=2.992,P<0.01),胎盘蓝染色的无活性肝细胞较I-R组也明显减少.利多卡因组的 2-DPAGE 图谱较I-R 组发生了改变,质谱鉴定出 11 个差异表达的蛋白质,其中 6 个上调表达,5 个下调表达. 结论肝十二指肠韧带内注射利多卡因预处理有效地减轻了大鼠肝脏随后的 I-R 损伤,是一种保护面临 I-R 损伤肝脏的新方法.蛋白质组学研究可见,利多卡因预处理改变了肝脏 I-R 后的蛋白质表达.     

PEP-1-CAT融合蛋白预处理对在体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察细胞穿透肽PEP-1介导CAT转导入在体大鼠心肌组织的能力,探究PEP-1-CAT融合蛋白对在体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法以生理盐水为对照,分别从SD大鼠尾静脉注射500μgPEP-1-CAT和CAT融合蛋白,在0.5,1,2,4,8,24h时将其处死,取其心脏,免疫荧光检测CAT的转导能力,用试剂盒检测心肌CAT的酶活性。40只SPF级雄性SD大鼠,随机分为5组,假手术组,心肌缺血再灌注组,100μgPEP-1-CAT融合蛋白预处理组,300μgEP-1-CAT融合蛋白预处理组,500μgPEP-1-CAT融合蛋白预处理组。结扎冠状动脉前降支1h,再灌注2h末,检测血中的LDH和CK活性以及心肌组织内的MDA含量。结果生理盐水组以及CAT组,荧光显微镜下均未见到绿色荧光;PEP-1-CAT各组均可观察到绿色荧光,且8h时强度最大;酶活性检测显示,CAT组与生理盐水对照组差别没有统计学意义（P〉0.05）,而PEP-1-CAT组随着时间的延长,心肌组织中CAT的活性逐渐增加,在8h时达到峰值,为对照组的4.20倍。PEP-1-CAT各剂量组均能显著减少血清中LDH和CK活性和心肌组织的MDA含量（P〈0.01）。结论PEP-1能够介导CAT以时间依赖的方式转导入在体大鼠心肌组织,转导入大鼠心肌组织内的CAT具有相应的酶活性;PEP-1-CAT融合蛋白预处理对在体大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,为临床应用PEP-1-CAT融合蛋白防治心肌缺血再灌注损伤奠定了实验基础。     

左旋四氢帕马汀对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨左旋四氢帕马汀(L-THP)对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响.方法 建立肾缺血再灌注损伤大鼠模型,34只大鼠分为治疗组(n=10)和模型组(n=16).另设假手术组(n=8)作为对照.治疗组于肾动脉夹闭时静脉给予L-THP 60mg/kg,再灌注时又给予原药量的1/2;模型组同时给予等量0.9%氯化钠溶液.观察肾组织中P-选择素、细胞间粘附分子(ICAM-1)的表达及丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性变化,检测血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)的含量.结果 缺血再灌注后,模型组大鼠肾组织中P-选择素、ICAM-1明显表达,MDA含量增高, SOD活性下降, BUN和Cr含量明显上升;治疗组肾组织中P-选择素、ICAM-1表达受到抑制;相对模型组MDA含量降低, SOD活性增高, BUN和Cr含量降低.结论 P-选择素和ICAM-1参与肾缺血再灌注损伤机制,L-THP明显减轻脂质过氧化反应,对肾缺血再灌注损伤大鼠具有保护作用.     

八味沉香散对肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨八味沉香散对失血性休克大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用。方法:建立失血性休克大鼠肾损伤模型,分为对照组、休克组及八味沉香散治疗组3组,进行组织学观察,并检测血丙二醛(MDA)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)和肾组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果:八味沉香散治疗组血浆MDA、Cr、BUN水平较失血性休克组显著下降(P<0.05);肾组织匀浆SOD显著升高(P<0.05)。结论:八味沉香散对肾缺血再灌注损伤具有保护作用。     

依达拉奉对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨依达拉奉注射液对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响。方法：实验大鼠分为假手术对照组（A组）、缺血再灌注组（B组）和依达拉奉3个不同剂量治疗组（C1、C2、C3组）,观察各组大鼠肾脏缺血再灌注24h后血清及肾组织匀浆丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、血肌酐、血尿素氮和肾组织超微结构的改变。结果：同A组比较,B组缺血再灌注24h后,血清及肾组织匀浆MDA、血肌酐、血尿素氮显著升高（P〈0．01）,血清及肾组织匀浆SOD显著下降（P〈0．01）。使用依达拉奉治疗后,C组各组血清和肾组织匀浆MDA、血肌酐均低于B组（P〈0．01）;C组各组血清和肾组织匀浆SOD均高于B组（P〈0．01）;C组血尿素氮同B组血尿素氮之间无明显差异（P〉0．05）。透射电镜观察发现,依达拉奉治疗后肾组织超微结构的损伤明显减轻。结论：依达拉奉注射液对大鼠肾缺血再灌注损伤有保护作用。     

缺血预处理对肢体缺血-再灌注损伤的保护作用

目的：探索缺血预处理对肢体再灌注损伤的保护作用。方法：分别给予兔后肢一次或多次短暂的缺血预处理,然后于持续缺血4h,再灌注1h后行股静脉穿刺,抽血检测血清肌磷酸激酶(CPK)、谷草转氨酶(COT)、乳酸脱氢酶(LDH)及超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量,并取腓肠肌病检。结果：缺血预处理各组再灌注后肌细胞内酶释放减少,病理切片也发现骨骼肌坏死和梗塞灶减少,血清MDA含量下降,而SOD活力升高。不同次数的缺血预处理结果之间存在差异。结论：缺血预处理可以影响体内的自由基代谢,对肢体再灌注损伤具有保护作用,且这种保护作用与预处理次数有一定关系。     

蒺藜皂苷预适应对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的：研究蒺藜皂苷（GSTT）对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法：56只Wistar大鼠随机分为7组：正常对照组、缺血再灌注（I/R）组、心肌缺血预适应（IPC）组、阳性药腺苷（Ado）组、GSTT 200、100和50 mg/l组,缺血30 min、再灌注40 min,检测心脏灌流液中肌酸肌酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、天门冬酸氨基转移酶（AST）含量,以及心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛（MDA）水平;采用HE染色,观察GSTT作用下心肌组织病理形态学的变化。结果：与I/R组比较,GSTT 200和100 mg/L组灌流液中CK、LDH、AST的含量均明显降低（P<0.05或P<0.01）,心肌组织SOD活性均明显升高（P<0.05或P<0.01）,MDA含量均降低（P<0.05或P<0.01）,心肌组织的病理损害减轻。结论：GSTT对心肌细胞的缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制与其具有抗氧自由基作用有关。     

Protective role of mitochondrial K-ATP channel and mitochondrial membrane transport pore in rat kidney ischemic postconditioning

Background  Previous studies suggested that mechanical intervention during early reperfusion, or ischemia postconditioning (IPo), could protect kidneys against renal ischemia reperfusion injury (RIRI). However, the mechanisms responsible for this protection remain unclear. This study therefore investigated the protection afforded by IPo in rat kidneys in vivo, and the roles of mitochondrial K_ATP channels (mitoK_ATP) and mitochondrial permeability transition pores (MPTPs), by inhibiting mitoK_ATP with 5-hydroxydecanoate (5-HD), and by directly detecting open MPTPs using calcein-AM and CoCl₂.

Methods  Thirty-five male Sprague-Dawley rats were randomly assigned to sham-operation (S), ischemia-reperfusion (I/R), IPo, ischemia reperfusion with 5-HD (I/R+5-HD), or IPo with 5-HD (IPo +5-HD) groups. Rats in each group were sacrificed after 6 hours of reperfusion by heart exsanguination or cervical dislocation under anesthesia. RIRI was assessed by determination of creatinine and blood urea nitrogen (BUN), and by examination of histologic sections. The roles of mitoK_ATP and MPTP were investigated by analyzing fluorescence intensities of mitochondria, mitochondrial membrane potential, intracellular reactive oxygen species (ROS) and intracellular calcium, using appropriate fluorescent markers. The relationship between apoptosis and RIRI was assessed by determining the apoptotic index (AI) of kidney tubular epithelial cells.

Results  The RIRI model was shown to be successful. Significantly higher levels of creatinine and BUN, and abnormal pathology of histologic sections, were observed in group I/R, compared with group S. 5-HD eliminated the renoprotective effects of IPo. Mitochondrial and mitochondrial membrane potential fluorescence intensities increased, and intracellular calcium, ROS fluorescence intensities and AI decreased in group IPo, compared with group I/R. However, mitochondrial and mitochondrial membrane potential fluorescence intensities decreased, and intracellular calcium and ROS fluorescence intensities and AI increased in group IPo+5-HD, compared with group IPo.

Conclusions  mitoK_ATP and MPTPs participated in IPo-induced renoprotective mechanisms in rat kidneys subjected to RIRI, possibly through decreased renal tubular epithelial cell apoptosis. 

     

《实验动物与比较医学》第25卷第1～4期总目次

·主编寄语· 抚前瞻后，大力发展我国比较医学—写于本刊更名之际··························，····································……刘瑞三(67) ·学者论坛· 对中闺实验动物科学事业儿个问题的浅见(续).·································································……徐兆光，刘瑞三(3) 如何开展外科比较医学研究·····，····························…     

复方丹参对家兔肾缺血-再灌注损伤的影响

目的探讨复方丹参药物对肾缺血再灌注损伤的保护作用。方法取健康大耳自家兔共34只,随机分成A、B两组,分别夹闭右肾动脉缺血20min（A组）及30min（B组）后开放,产生再灌注损伤。在开放后30min、60min、90min、120min分别取血测定血清丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量。A、B两组均设实验组及对照组。实验组给予复方丹参液,对照组给予5％葡萄糖液。结果当缺血时间为20min时,实验组与对照组比较未出现统计学意义（P〉0．05）,缺血时间为30min时,实验组血清MDA含量明显低于对照组（P〈0．05）。结论预防性应用复方丹参药物对肾缺血再灌注损伤有保护作用。     

氧自由基致大鼠心肌线粒体损伤及维生素C对其保护作用的实验研究

目的：在大鼠心肌线粒体自由基损伤的体外实验中,观察维生素C的保护作用,为治疗心肌缺血再灌注损伤提供实验依据。方法：采用黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶系统产生氧自由基,对分离的心肌线粒体进行体外损伤实验,通过电镜形态学和生物化学及同位素方法检测大鼠心肌线粒体病理变化、脂质过氧化物含量及摄钙能力。结果：黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶系统产生的氧自由基对心肌线粒体有损伤作用,电镜可见形态学改变,线粒体悬液中脂质过氧化物含量明显升高,线粒体摄钙能力明显降低。维生素C可减少大鼠心肌线粒体的形态学损伤,改善线粒体的摄钙能力。结论：氧自由基可在体外条件下对大鼠心肌线粒体产生损伤,这种损伤表现在电镜形态学改变,线粒体摄钙能力的减弱;维生素C能保护氧自由基损伤的大鼠心肌线粒体,保护机制是能直接减少氧自由基的生成。