丹皮酚联合三七总皂苷对AngⅡ诱导的心脏成纤维细胞增殖及TGF-β/Smads信号通路的影响

目的探讨丹皮酚联合三七总皂苷应用对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导新生大鼠的心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖及TGF-β/Smads信号通路的影响。方法采用胰酶消化法分离培养的CFs随机分为6组:正常对照组,模型组,三七总皂苷组,丹皮酚组,丹皮酚与三七总皂苷联合用药大、小剂量组。采用MTT比色法测定各组培养液中CFs增殖情况,免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平,RTPCR法检测转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,Tgfb1)的mRNA表达水平,Western blot法检测TGF-β1、磷酸化的Smad2/3(p-Smad2/3)的蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,模型组大鼠CFs增殖明显增高,Tgfb1的mRNA表达显著增加,α-SMA及TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达显著增加;与模型组比较,丹皮酚组、三七总皂苷组、联合用药的大剂量和小剂量组均可抑制由AngⅡ诱导的CFs的增殖,Tgfb1的mRNA表达显著减少,α-SMA及TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达显著减少;与丹皮酚组、三七总皂苷组比较,联合用药大、小剂量组在抑制CFs增殖的作用上显著增强,抑制Tgfb1的mRNA表达效果显著增强,抑制α-SMA及TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达效果显著增强;与联合用药小剂量组比较,联合用药大剂量组对以上指标的抑制效果更佳,显示一定的剂量依赖性。结论丹皮酚与三七总皂苷联合应用对抑制CFs增殖,呈现明显的协同作用。其作用机制与抑制TGF-β/Smads信号通路的传导有关。     

丹参酸乙对大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原基因表达的影响

目的 :探讨丹参酸乙 (SA B)对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )孵育的新生大鼠心脏成纤维细胞功能的影响。 方法 :将培养的心脏成纤维细胞分成四组 :空白对照组 ;AngⅡ组 :培养基中加了 10 7mol/LAngⅡ ;SA B10 6mol/L组 :培养基中加 10 7mol/LAngⅡ 10 6mol/LSA B ;SA B10 4mol/L组 :培养基中加 10 7mol/LAngⅡ 10 4mol/LSA B。加药后 2 4h分别作3 H TdR细胞增殖测定和采用逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)测定Ⅰ、Ⅲ型胶原基因的转录水平。结果 :10 4mol/LSA B可有效抑制由AngⅡ引起的心脏成纤维细胞的增殖。 10 5mol/LSA B可抑制胶原Ⅲ型mRNA的表达量 ,而 10 6mol/LSA B和 10 5mol/LSA B都可显著抑制胶原Ⅰ型mRNA的表达。结论 :丹参酸乙可逆转由AngⅡ引起的心脏成纤维细胞的增殖和Ⅰ、Ⅲ型胶原基因的表达水平。     

丹参酮Ⅱ_A对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖及Ⅰ型胶原合成的影响

目的:通过观察丹参酮ⅡA(TSN)对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖及Ⅰ型胶原合成的影响,探讨其抗心肌纤维化的作用机制。方法:差速贴壁法提取原代CFs,采用四氮唑盐(MTT)比色法测定细胞数目,ELISA法检测Ⅰ型胶原合成,RT-PCR法半定量检测Ⅰ胶原mRNA表达。结果:①AngⅡ组OD值高于空白对照组,两者比较有显著性差异(P<0.01);AngⅡ+TSN组OD值低于AngⅡ组,两者比较有显著性差异(P<0.01)。②AngⅡ组有促进心肌成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原的作用,与空白对照组比较,有显著性差异(P<0.01);AngⅡ+TSN组Ⅰ型胶原含量低于AngⅡ组,两者比较,有显著性差异(P<0.01)。③AngⅡ组Ⅰ型胶原mRNA表达高于空白对照组,两者比较有显著性差异(P<0.05);AngⅡ+TSN组Ⅰ型胶原mRNA表达低于AngⅡ组,两者比较有显著性差异(P<0.05)。结论:AngⅡ可直接诱导CFs的增殖,促进其分泌Ⅰ型胶原,并能显著增加Ⅰ型胶原mRNA的表达;TSN对AngⅡ诱导的CFs增殖及Ⅰ型胶原分泌增加,及Ⅰ型胶原mRNA表达增强均有抑制作用。提示:TSN抗心肌纤维化作用的产生可能与丹参酮ⅡA抑制心脏局部的RAS系统有关。     

丹参酮ⅡA通过下调CTGF抗血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原合成

目的 观察丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原合成的影响及可能的机制下调CTGF水平.方法 采用AngⅡ诱导和建立心肌成纤维细胞纤维化模型,采用不同浓度的丹参酮ⅡA处理纤维化细胞,观察其对Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA的影响,同时采用Western blot和RT-PCR检测CTGF和CTGF mRNA水平.结果 (1)AngⅡ处理后的心肌成纤维细胞的Ⅰ型、Ⅲ型胶原的mRNA水平高于DMSO组,且给予丹参酮ⅡA处理后,Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA水平呈浓度依赖的方式下降,且在50μmol/L的浓度下,恢复正常;(2)AngⅡ处理后的心肌成纤维细胞的CTGF和CTGF-mRNA水平高于DMSO组,且50mol/L丹参酮ⅡA可降低CTGF和CTGF-mRNA水平;(3)给予外源性的CTGF处理后,丹参酮ⅡA抑制成纤维细胞胶原合成的作用减弱,且10 μmol/L的CTGF可完全减弱丹参酮ⅡA的作用,外源性CTGF处理未改变CTGF-mRNA水平.结论丹参酮ⅡA具有降低血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原合成的作用,可能的机制是下调CTGF水平.     

丹皮酚联合三七总皂苷对心梗后心室重构大鼠TNF-α,IL-1β mRNA表达的影响

目的:通过检测丹皮酚联合三七总皂苷用药后大鼠心肌中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA的变化,探讨丹皮酚联合三七总皂苷对大鼠急性心肌梗死(AMI)后引发心室重构的影响及机制。方法:80只雄性SD大鼠中随机选取的70只,结扎左冠状动脉的前降支制备AMI大鼠的动物模型。存活且成模大鼠依照干预不同随机的分成模型组、丹皮酚(Pae 8 mg·kg~(-1))组、三七总皂苷(NTS 40 mg·kg~(-1))组、联合低剂量组(Pae 4 mg·kg~(-1)+NTS 20 mg·kg~(-1))、联合高剂量组(Pae 8 mg·kg~(-1)+NTS 40 mg·kg~(-1)),卡托普利组(10 mg·kg~(-1))阳性药组,此外设立假手术组。各组分别给予相应药物腹腔注射,连续28 d。苏木素-伊红(HE)染色法观察各组大鼠心肌组织的病理学变化,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测NF-κBp65,p-IκB-α蛋白的表达水平,逆转录PCR(RT-PCR)检测TNF-α和IL-1βmRNA表达水平。结果:与假手术组比较,模型组心肌病理改变明显,NF-κBp65,p-IκB-α蛋白的表达和TNF-α,IL-1β的mRNA表达显著升高(P0.01);同模型组比较,各用药组心肌病理改变有不同程度改善,目的蛋白与目的基因的表达显著降低(P0.01);并且联合用药组中各指标的改善情况明显优于单味药组(P0.05,P0.01),联合用药高剂量组较低剂量组作用更显著(P0.05,P0.01)。结论:丹皮酚联合三七总皂苷能协同改善心梗后大鼠心室重构,其机制可能与阻断NF-κB/IκB信号通路,下调TNF-α和IL-1βmRNA的表达减少炎症反应有关。     

生肌化瘀方及拆方对成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达影响

目的 :观察生肌化瘀方及拆方对创面成纤维细胞的α1(Ⅰ )mRNA和α1(Ⅲ )mRNA表达的影响 ,探讨其促进创面修复呈皮肤修复的作用机理。方法 :采用体外培养创面肉芽组织成纤维细胞 ,以乳鼠皮肤成纤维细胞作对照 ,分别加入生肌方、化瘀方及生肌化瘀方大、小剂量药物血清 ,运用NthernBlot分子杂交法检测成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ前胶原mRNA的表达。结果 :生肌方能够加强创面成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达 ,高于模型组 ;化瘀方能够降低创面成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达 ,低于模型组 ;生肌化瘀方各剂量组Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达与正常组相比差异均无显著性。结论 :生肌化瘀方通过调控创面成纤维细胞的α1(Ⅰ )mRNA和α1(Ⅲ )mRNA表达使创面修复呈皮肤修复     

丹皮酚联合三七总皂苷对大鼠糖尿病心肌纤维化的影响

目的:探讨丹皮酚联合三七总皂苷对大鼠糖尿病心肌纤维化的影响,探讨其作用机制。方法:采用高脂高糖饲喂联合腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病心肌病模型。按照二因素五水平均匀设计法,以心肌组织马松(Masson)染色测定的心肌胶原容积分数为观测指标,采用多元回归分析确定丹皮酚联合三七总皂苷对糖尿病心肌病大鼠最佳组合剂量。运用2×2析因设计试验分析两者之间有无交互作用,设空白组,模型组,丹皮酚(80 mg·kg-1)组,三七总皂苷(100 mg·kg-1)组,丹皮酚(80 mg·kg-1)+三七总皂苷(100 mg·kg-1)组,二甲双胍(157.5 mg·kg-1)组。检测体质量,心重指数(HWI),血糖(FBG),乳酸脱氢酶(LDH),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)的含量,心肌组织中的丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)活性变化,观察Masson染色心肌胶原分布。结果:发现丹皮酚(80 mg·kg-1)和三七总皂苷(100 mg·kg-1)联合抗糖尿病心肌病作用最佳并有协同作用。与正常组比较,模型组HWI,FBG,LDH,AST,CK-MB,MDA的含量升高,SOD活性降低,体质量显著下降(P0.05),Masson染色显示心肌胶原纤维明显增高(P0.05)。与模型组比较,丹皮酚组,三七总皂苷组,联合用药组的HWI,FBG,LDH,AST,CK-MB,MDA的含量下降,SOD活性升高,体质量显著增高(P0.05),Masson染色显示心肌胶原纤维明显减少(P0.05),而联合用药组与单味用药组比较有显著差异(P0.05)。结论:丹皮酚联合三七总皂苷具有协同降低心肌纤维化作用,可能与抗氧化应激作用有关。     

康心汤对主动脉缩窄心肌肥厚大鼠模型心脏Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的探讨康心汤对腹主动脉缩窄心肌肥厚大鼠模型心脏Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达的作用。方法造模4周后,予以康心汤干预,实验分假手术组、模型组、模型组+康心汤大、中、小剂量组。假手术组(生理盐水),模型组(生理盐水),模型+康心汤低剂量组[2.5g/(kg·d)],模型+康心汤中剂量组[5g/(kg·d)],模型+康心汤高剂量[10 g/(kg·d)]灌胃,药物干预8周后无痛处死大鼠取材,测定左心室质量指数,RT-PCR检测心脏Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA。结果模型组左心室重量增加,左心室质量指数增加,心脏Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达上调,康心汤降低左心室质量指数,下调心脏Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达。结论康心汤可以调节心脏Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达缓解腹主动脉缩窄大鼠模型心肌肥厚和纤维化。     

人参三七川芎提取物对自然衰老大鼠血管外膜重构的干预机制

目的观察自然衰老大鼠血管外膜的重构特点,并探讨人参三七川芎提取物的干预作用。方法将85只20月龄的自然衰老Wistar大鼠按体重水平分层后随机分为衰老组、人参三七川芎醇提物低、中、高剂量组(下称中药低、中、高剂量组)及氯沙坦对照组(Losartan组),每组17只,另选14只2月龄青年Wistar大鼠作为青年组。中药高、中、低剂量组分别给予不同剂量的人参三七川芎醇提物[1493.4、746.7、373.4mg/(kg·d)]灌胃给药,Losartan组给予氯沙坦钾混悬液[10 mg/(kg·d)]灌胃,衰老组及青年组给予同体积蒸馏水灌胃,均每日1次。干预15周后,采用HE染色法观察各组大鼠胸主动脉壁形态;采用苦味酸天狼猩红染色法观测血管壁胶原种类、分布和含量;放射免疫分析法检测血浆肾素活性(plasma renin activity,PRA)、血浆血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)浓度及外膜组织AngⅡ含量;生物化学分析法检测外膜组织羟脯氨酸水平;实时荧光定量多聚酶链式反应(real-time PCR,RT-PCR)检测外膜组织血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡreceptor 1,AT_1R)、血管紧张素Ⅱ2型受体(angiotensinⅡreceptor 2,AT_2R)mRNA水平;Western blot法检测外膜组织AT_1R、AT_2R蛋白表达水平。结果与青年组比较,衰老组血管外膜增厚,外膜厚度/管径增高,胶原纤维堆积,Ⅰ型胶原面积增加,Ⅲ型胶原面积减少,Ⅲ型胶原/Ⅰ型胶原降低(P0.05),血浆PRA及AngⅡ降低(P0.01,P0.05),外膜组织AngⅡ及羟脯氨酸含量增高,AT_1R mRNA及蛋白表达下调,AT_2R mRNA及蛋白表达上调(P0.01,P0.05)。与衰老组比较,中药低、中、高剂量组均可改善衰老血管形态学改变;中药中、高剂量组及Losartan组外膜厚度/管径均减小,中药高剂量组及Losartan组Ⅰ型胶原面积减少,Ⅲ型胶原面积增加,Ⅲ型胶原/Ⅰ型胶原明显升高,血管外膜羟脯氨酸含量明显降低(P0.05,P0.01);中药中、高剂量及Losartan组外膜组织中AngⅡ水平降低(P0.01,P0.05);衰老组、中药各剂量组、Losartan组各组间PRA比较,差异无统计学意义(P0.05)。与衰老组比较,各治疗组AT_1R mRNA表达均增加(P0.01),中药中、高剂量组AT_2R mRNA表达亦增加(P0.05);中药高剂量组及Losartan组AT_1R蛋白表达升高(P0.01,P0.05);中药中、高剂量组AT_2R蛋白表达亦升高(P0.05)。结论衰老大鼠血管出现外膜重构,表现为外膜增厚,胶原堆积,Ⅰ型、Ⅲ型胶原比例紊乱等,其机制可能与局部肾素血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)激活有关;人参三七川芎提取物可能通过对外膜局部AngⅡ、AT_1R等多靶位的干预,改善外膜重构,进而延缓血管衰老。     

赤芍和茜草水提取物对系统性硬皮病成纤维细胞增殖及胶原合成影响的研究

目的:研究赤芍和茜草水提取物对系统性硬皮病成纤维细胞增殖和I、Ⅲ型前胶原mRNA合成的影响。方法:MTT法测定对成纤维细胞增殖的影响,RT-PCR测定对成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA合成的影响。结果:赤芍和茜草水提取物对成纤维细胞的增殖和Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达都具有一定的抑制作用。赤芍水提取物可以使Ⅰ型前胶原表达减少29%,Ⅲ型减少33%;茜草水提取物使Ⅰ型减少27%,Ⅲ型减少23%。结论:赤芍和茜草水提取物能够抑制系统性硬皮病成纤维细胞增殖,不同程度的抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达,具有一定的抗纤维化作用。     

阿魏酸钠对乙醛诱导的肝星状细胞增殖、活化和胶原合成的影响

目的:研究阿魏酸钠(SF)对体外乙醛诱导的大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖、活化、胶原合成的影响及其作用机制。方法:体外培养HSC-T6细胞,建立乙醛诱导的HSC-T6增殖模型,设空白组、乙醛组、秋水仙碱组(2.5μmol·L~(-1))及SF组(1,10,25,50,100,200,400μmol·L~(-1)),通过细胞增殖和毒性检测(MTS)比色法检测细胞增殖,筛选合适的SF浓度。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测SF(400,200,100μmol·L~(-1))对乙醛诱导的HSC-T6细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测Ⅰ型,Ⅲ型胶原浓度,酸水解法检测羟脯氨酸(Hyp)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测转化生长因子-β_1(TGF-β_1),信号转导蛋白Smad2,Smad3,Smad4,Smad7,基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)基因mRNA表达变化。结果:与空白组比较,200μmol·L~(-1)的乙醛能显著诱导HSC-T6体外增殖(P0.01);与空白组比较,模型组HSC-T6增殖显著增加(P0.01),α-SMA和I型,Ⅲ型胶原和Hyp含量显著增加(P0.01),TGF-β_1,Smad2,Smad3,Smad4,Smad7 mRNA的表达显著上调(P0.01),MMP-1和TIMP-1 mRNA表达显著上调(P0.01)。与模型组比较,400,200,100μmol·L~(-1)浓度的SF能明显抑制乙醛诱导的HSC-T6增殖(P0.05,P0.01),显著降低α-SMA和I型,Ⅲ型胶原和Hyp含量(P0.01),下调TGF-β_1,Smad2,Smad3,Smad4基因mRNA的表达(P0.05,P0.01),上调Smad7基因mRNA表达(P0.01),并明显上调MMP-1 mRNA表达(P0.05,P0.01)和下调TIMP-1 mRNA表达(P0.01)。结论:SF能通过调控TGF-β_1/Smad和MMP-1/TIMP-1信号通路,抑制乙醛诱导的体外HSC-T6细胞的增殖,活化和胶原分泌。     

基于巨噬细胞极化观察白术内酯Ⅱ对胃癌细胞的作用

目的:研究白术内酯Ⅱ对巨噬细胞极化的影响并探讨其发挥抗肿瘤的作用机制。方法:用佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度白术内酯Ⅱ作用不同时间,对巨噬细胞生长的影响,筛选出白术内酯Ⅱ的安全给药浓度。不同浓度白术内酯Ⅱ作用24 h,巨噬细胞与胃癌细胞共培养,光镜下观察2种细胞的存活状态,MTT比色法检测胃癌细胞的增殖变化,筛选出白术内酯Ⅱ的有效给药浓度。将细胞分为空白组、模型组、白术内酯Ⅱ(200,100,50 mg·L~(-1))组。划痕实验观察不同浓度白术内酯Ⅱ作用后巨噬细胞对胃癌细胞迁移及形态的影响。流式细胞术(FCM)检测M1,M2型巨噬细胞表面标志CD86,CD206表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测M1,M2型巨噬细胞相关肿瘤坏死因子(TNF)-α,人类白细胞抗原2(HLA-DRA),CD80,转化生长因子-β(TGF-β),白细胞介素(IL)-10和IL-6 mRNA和蛋白表达;Western blot检测巨噬细胞内磷脂酰肌醇激酶(PI3K)和磷酸化(p)-PI3K蛋白表达。结果:当白术内酯Ⅱ质量浓度为1,10,50,100,200 mg·L~(-1)时,对巨噬细胞生长无抑制作用;与模型组比较,50,100,200 mg·L~(-1)白术内酯Ⅱ作用的巨噬细胞可显著抑制胃癌细胞增殖(P0.01);与模型组比较,白术内酯Ⅱ(200,100 mg·L~(-1))组胃癌细胞迁移率降低(P0.05);白术内酯Ⅱ(200,100,50 mg·L~(-1))组M1型巨噬细胞表面标志CD86表达增高(P0.05,P0.01),白术内酯Ⅱ(200 mg·L~(-1))组M2型巨噬细胞表面标志CD206表达下降(P0.05);白术内酯Ⅱ(200,100 mg·L~(-1))组M1型巨噬细胞相关细胞因子TNF-α,HLA-DRA,CD80 mRNA表达增高(P0.05,P0.01),白术内酯Ⅱ(200 mg·L~(-1))组TNF-α蛋白表达增高(P0.05);白术内酯Ⅱ(50 mg·L~(-1))组M2型巨噬细胞相关细胞因子TGF-βmRNA表达显著降低(P0.01),白术内酯Ⅱ(200 mg·L~(-1))组IL~(-1)0,IL-6蛋白表达降低(P0.05,P0.01);白术内酯Ⅱ(200,100 mg·L~(-1))组p-PI3K蛋白表达降低(P0.05,P0.01)。结论:白术内酯Ⅱ通过减少巨噬细胞内p-PI3K的表达,诱导巨噬细胞向M1型极化,进而抑制胃癌增殖和迁移。     

西洋参赤芍配伍对大鼠心肌梗死后早期心室重构心肌纤维化的影响

目的观察益气活血配伍(西洋参茎叶总皂苷+赤芍总苷)对大鼠心肌梗死后早期心室重构炎性因子和心肌纤维化的影响,并从胶原代谢方面探讨可能的作用机制。方法结扎Wistar大鼠冠状动脉前降支制备AMI模型,将90只造模成功的大鼠随机分为6组,每组15只,分别为假手术组(冠状动脉前降支仅穿线不结扎)、模型组、阳性对照组(灌胃缬沙坦7.2 mg·kg~(-1)·d~(-1))、益气组(灌胃西洋参茎叶总皂苷162 mg·kg~(-1)·d~(-1))、活血组(灌胃赤芍总苷54 mg·kg~(-1)·d~(-1))和益气活血组(灌胃西洋参茎叶总皂苷162 mg·kg~(-1)·d~(-1)+赤芍总苷54mg·kg~(-1)·d~(-1))。第2天开始灌胃给药,连续4周,假手术组和模型组灌胃等量蒸馏水。4周后取材,超声心动图检测心脏结构及心功能变化,HE染色观察心肌组织病理变化,免疫组织化学染色法检测缺血心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达。放射性免疫法检测血清心肌损伤标记物B型脑钠尿肽(BNP)、肌钙蛋白T(cTnT),炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β),纤维化指标层连蛋白(LA)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原氨基末端肽(PⅢNP)的含量。结果与模型组比较:(1)益气活血组大鼠心肌细胞炎性浸润减少,心肌纤维间隙水肿和心肌纤维细胞坏死变性明显减轻;(2)阳性对照组、活血组和益气活血组大鼠左室舒张末期内径(LVDd)均显著降低,左室射血分数(LVEF)均显著升高(P0.05,P0.05),益气活血组左室收缩末期内径(LVDs)显著降低(P0.05);(3)阳性对照组和益气活血组心肌损伤标记物血清BNP水平明显降低(P0.05);(4)阳性对照组和益气活血组炎性因子血清TNF-α、IL-1β含量显著降低(P0.05,P0.01);(5)益气活血组纤维化指标血清LA、HA、PⅢNP含量明显降低(P0.05);(6)阳性对照组和益气活血组损伤心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达明显降低(P0.05,P0.01)。结论益气活血配伍可以减轻心梗后心肌纤维化过程中的炎性反应,减少损伤心肌纤维化因子的释放及胶原的堆积从而达到减轻心室重构改善心功能的作用。     

20(R)-人参皂苷Rg3抗角膜瘢痕机制研究

目的:研究不同浓度的20(R)-人参皂苷Rg3(GRg3)对兔角膜成纤维细胞增殖和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,探讨GRg3抑制角膜瘢痕增生的机制。方法:直接选用大白兔获取兔角膜成纤维细胞后进行原代培养,采用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法观察不同浓度(10 mg·L~(-1),20 mg·L~(-1),50 mg·L~(-1),100 mg·L~(-1),150 mg·L~(-1),200 mg·L~(-1))GRg3对兔角膜成纤维细胞增殖作用的影响。应用反转录-PCR(RT-PCR)技术研究不同浓度GRg3对培养的兔角膜成纤维细胞TGF-β1m RNA表达的影响。结果:MTT法检测结果:与对照组比较,当GRg3浓度达到20 mg·L~(-1)及以上时,兔角膜成纤维细胞增殖均显著受抑制。当GRg 3浓度达到50 mg·L~(-1)及以上时,GRg3对兔角膜成纤维细胞TGF-β1 mRNA表达具有抑制作用。结论:GRg3具有抑制体外培养的兔角膜成纤维细胞增殖的作用,并随着GRg3浓度的增加,其抑制作用增强。随培养时间的延长,GRg3抑制作用增强。GRg3对兔角膜成纤维细胞TGF-β1mRNA表达具有抑制作用。     

五倍子瘢痕膏水溶液对瘢痕疙瘩成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ前胶原基因表达的影响

目的探讨五倍子瘢痕膏治疗瘢痕疙瘩的作用机理。方法采取瘢痕疙瘩成纤维细胞原代培养,通过核酸斑点杂交实验观察不同浓度药物对原代培养的第7～8代瘢痕疙瘩成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ前胶原基因表达的影响。结果对Ⅰ、Ⅲ前胶原mRNA的表达,大、中剂量药物组与对照组比较有非常显著性差异(P0.01),而小剂量组与对照组比较无显著性差异(P0.05),对Ⅰ、Ⅲ前胶原mRNA的表达大剂量组和小剂量组均有显著性差异(P0.05)。药物对瘢痕疙瘩成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ前胶原mRNA表达的抑制作用与药物剂量有一定的依赖关系。结论五倍子瘢痕膏水溶液能在Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因的转录水平上影响瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原的合成,从而减少瘢痕疙瘩组织中胶原的大量沉积。     

鹿角方对压力负荷增加大鼠心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的：为了进一步观察鹿角方抗心肌纤维化的作用及其可能作用机制。方法：建立腹主动脉狭窄所致充血性心力衰竭心肌肥厚大鼠模型,观察左室质量(LVMI),采用RT-PCR方法观察心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA的表达,并采用放射免疫分析方法检测血浆和心肌血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)水平。结果：模型组LVMI明显高于假手术组(P＜0.001),鹿角方组LVMI与模型组比较有明显下降(P＜0.01);模型组Ⅰ型胶原mRNA的表达假手术组显著升高(P＜0.05),鹿角方组较模型组明显下降(P＜0.05);模型组Ⅲ型胶原mRNA与假手术组比较有显著升高(P＜0.05),鹿角方组较模型组显著下降(P＜0.05)。模型组血浆和左室心肌AngⅡ水平较假手术组显著升高(P＜0.001),鹿角方组明显降低血浆AngⅡ(P＜0.01)和左室心肌AngⅡ水平(P＜0.001)。结论：心肌纤维是腹主动脉狭窄所致充血性衰竭心肌肥厚的一个重要的病理改变,鹿角方具有逆转充血性心力衰竭心肌纤维化的作用。     

鹿角方对压力负荷增加大鼠心肌I型和Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的为了进一步观察鹿角方抗心肌纤维化的作用及其可能作用机制。方法建立腹主动脉狭窄所致充血性心力衰竭心肌肥厚大鼠模型,观察左室质量(LVMI),采用RT-PCR方法观察心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA的表达,并采用放射免疫分析方法检测血浆和心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平。结果模型组LVMI明显高于假手术组(P＜0.001),鹿角方组LVMI与模型组比较有明显下降(P＜0.01);模型组Ⅰ型胶原mRNA的表达假手术组显著升高(P＜0.05),鹿角方组较模型组明显下降(P＜0.05);模型组Ⅲ型胶原mRNA与假手术组比较有显著升高(P＜0.05),鹿角方组较模型组显著下降(P＜0.05)。模型组血浆和左室心肌AngⅡ水平较假手术组显著升高(P＜0.001),鹿角方组明显降低血浆AngⅡ(P＜0.01)和左室心肌AngⅡ水平(P＜0.001)。结论心肌纤维是腹主动脉狭窄所致充血性衰竭心肌肥厚的一个重要的病理改变,鹿角方具有逆转充血性心力衰竭心肌纤维化的作用。     

德都红花-7味散原药方与优化方对肝纤维化大鼠Ⅰ,Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的:探讨德都红花-7味散原药方及优化方对肝纤维化大鼠Ⅰ,Ⅲ型胶原mRNA表达的影响。方法:40只Wistar大鼠分为正常组、模型组、阳性药组、原药组、优化组。大鼠ip 30%CCl4橄榄油溶液建立肝纤维化模型。同时1次/日ig给药,阳性药组给予秋水仙碱片0.4 mg·kg-1;原药组给予德都红花-7味散0.6 g·kg-1;优化组给予德都红花-7味散优化方0.6 g·kg-1。连续40 d后处死大鼠。取肝脏天狼星红染色,观察肝组织纤维化程度和Ⅰ,Ⅲ型胶原分型。酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝组织匀浆Ⅲ型前胶原和Ⅳ型胶原,层粘连蛋白(LN),透明质酸(HA)含量。实时荧光定量PCR法检测Ⅰ型胶原,Ⅲ型胶原mRNA表达变化。结果:天狼星红染色模型组Ⅰ,Ⅲ型胶原纤维较正常组增多,阳性药组、原药组、优化组Ⅰ,Ⅲ型胶原纤维较模型组减少。与正常组比较,酶联免疫法检测模型组Ⅳ型胶原,HA含量升高(P0.05)。与模型组比较,阳性药组、原药组、优化组Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、HA含量明显降低(P0.05)。实时荧光定量PCR法检测模型组Ⅰ型胶原mRNA和Ⅲ型胶原mRNA表达较正常组上调(P0.01)。阳性药组、原药组、优化组Ⅰ型胶原mRNA和Ⅲ型胶原mRNA表达较模型组下调(P0.01)。原药组、优化组Ⅰ型胶原mRNA表达较阳性药组下调(P0.05)。优化组Ⅰ型胶原mRNA表达较原药组下调(P0.05)。结论:德都红花-7味散原药方与优化方是通过抑制Ⅰ型胶原mRNA和Ⅲ型胶原mRNA的转录,达到阻断或延缓肝纤维化的发生发展,德都红花-7味散优化方优于原药方。     

黄芪总皂苷对IEC-6细胞增殖及相关蛋白表达的影响

目的观察黄芪总皂苷对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移和增殖的影响,并从多胺及其调控的细胞增殖相关蛋白(转录因子c-Myc、Rho-GTP酶RhoA和细胞周期依赖激酶Cdk2)表达角度研究其作用机制。方法从黄芪中提取黄芪总皂苷(皂苷含量88.8%)作为受试药,高效液相色谱仪蒸发光检测(HPLC-ELSD)获得受试药色谱图;移液器吸头划痕法检测细胞迁移率;MTT法检测细胞增殖;Western Blot法检测相关蛋白表达。结果黄芪总皂苷(25、50、100 mg·L~(-1))对细胞迁移无明显影响(与空白组比较,P0.05)。黄芪总皂苷(50 mg·L~(-1)或100 mg·L~(-1))有促进细胞增殖作用(与空白组比较,P 0.05),且能逆转二氟甲基鸟氨酸(DFMO,多胺合成抑制剂)所致的细胞增殖抑制;可提高c-Myc、RhoA和Cdk2蛋白表达,逆转DFMO所致的c-Myc、RhoA和Cdk2蛋白表达抑制。结论黄芪总皂苷可促进IEC-6细胞增殖,其作用机制与影响多胺调控的增殖相关蛋白表达有关。     

基于"异类相制"的雷公藤复方对小鼠精母细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响

目的:探讨雷公藤复方单体成分对小鼠精母细胞凋亡及凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱天冬蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法:建立体外培养小鼠精母细胞体系,实验分为空白组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+梓醇3 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+三七总皂苷12 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+草酸铵1.5 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+青藤碱0.75 mg·L~(-1)组。流式细胞仪测定药物作用24 h后精母细胞凋亡率,Western blot测定精母细胞Bax,Bcl-2,Caspase-3蛋白表达情况。结果:梓醇、三七总皂苷可减轻雷公藤甲素对小鼠精母细胞凋亡的诱导作用,与雷公藤甲素比较有明显差异(P0.05),草酸铵和青藤碱组与雷公藤甲素组相比无明显差异;雷公藤甲素促使Bax,Caspase-3蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,与正常比较差异显著(P0.01),雷公藤甲素配伍梓醇、三七总皂苷后Bax,Caspase-3蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调,与雷公藤甲素比较较有明显差异(P0.05)。而配伍草酸铵及青藤碱则差异不明显。结论:雷公藤甲素可引起精母细胞凋亡,并通过Bax/Bcl-2,Caspase-3系统启动精母细胞凋亡。而雷公藤复方组成中其他药物组分可不同程度抑制雷公藤甲素引起的精母细胞凋亡,减轻其雄性生殖毒性。