RNA干扰Caspase-3基因抑制大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的 观察RNA干扰(RNAi)Caspase-3基因对大鼠肝脏缺血再灌注损伤(IRI)的保护作用.方法 构建针对大鼠Caspase-3基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体.肝脏IRI前48 h经门静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS)或Caspase-3 shRNA,实验随机分为3组,假手术组、PBS组和shRNA组.阻断大鼠70%入肝血流40 min,再灌注6,12,24 h,3,5,7 d检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,肝组织Caspase-3 mRNA的表达,细胞凋亡情况,丙二醛(MDA)以及超氧化物歧化酶(SOD)的含量.结果 与PBS组比较,shRNA组再灌注6,12,24 h血清ALT和AST水平显著降低(P<0.05),shRNA组大鼠肝组织的Caspase-3 mRNA水平、肝细胞凋亡指数(25.21%±3.18%vs 35.24%±2.33%,P<0.05)和肝组织中MDA含量[(96.3±12.8)nmol/mg vs(133.5±12.4)nmol/mg,(P<0.05)]显著降低,SOD活性显著升高[(22.5±3.4)U/mg vs(12.2±3.1)U/mg,(P<0.05)].结论 RNA干扰Caspase-3基因可以抑制细胞凋亡的发生,保护肝脏缺血再灌注损伤.     

Caspase-3和Caspase-8基因沉默保护大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的 观察Caspase-3和Caspase-8基因沉默对大鼠肝脏缺血再灌注损伤((IRI)的保护作用.方法 分别构建针对大鼠caspase-3和caspase-8基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体.肝脏IRI前48 h经门静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS)、空载体或Caspase-3和Caspase-8shRNA,实验随机分为4组,假手术组、PBS组、空载体组和shRNA组.阻断大鼠70%入肝血流40min,再灌注6、12、24 h、3、5、7 d检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,肝组织Caspase-3和Cmpase-8 mRNA的表达,Caspase-3和Caspase-8蛋白活性,细胞凋亡情况,丙二醛(MDA)以及超氧化物岐化酶(SOD)的含量.结果 与PBS组和空载体组比较,shRNA组再灌注6、12、24 h、3、5 d血清ALT和AST水平显著降低(P＜0.05),Caspase-3和Caspase-8 mRNA水平、Caspase-3和caspase-8蛋白活性(Cmpme-3活性:0.18±0.03比0.36±0.03和0.38±0.02,P＜0.05;caspase-8活性:0.16±0.03比0.32±0.02和0.34±0.03,P＜0.05)、肝细胞凋亡指数[(22.46±3.25)%比(35.24±2.33)%和(37.36±2.51)%,P＜0.05]和肝组织中MDA含量[(76.2±15.3)比(123.5±12.4)、(136.7±13.6)nmol/mg,P＜0.05)显著降低,SOD活性显著升高[(24.1±3.2)比(12.2±3.1)、(11.4±2.9)U/mg,P＜0.05].结论 Caspase-3和Caspase-8基因沉默可以抑制细胞凋亡的发生,从而起到保护肝脏IRI的作用.     

RNA干扰Kupffer细胞肿瘤坏死因子-α减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的 观察RNA干扰肝脏Kupffer细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用.方法 构建针对大鼠TNF-α基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体.肝脏缺血再灌注损伤前48 h经门静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS)、空载体或TNF-α shRNA.实验随机分为4组,假手术组、PBS组、空载体组和shRNA组.阻断大鼠70%入肝血流40 min,再灌注6 h检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肝脏Kupffer细胞TNF-α mRNA、血清TNF-α、肝组织中丙二醛(MDA)以及超氧化物岐化酶(SOD)含量.结果 与PBS组和空载体组比较,shRNA组再灌注6 h后血清ALT和AST水平显著降低(P＜0.05),Kupffer细胞TNF-α mRNA水平、血清TNF-α水平(56.6±6.7 pg/ml比87.8±8.7 pg/ml和96.5±7.3 pg/ml,P＜0.05)、肝组织中MDA含量(93.4±13.3 nmol/mg比133.5±12.4 nmo1/mg和136.7±13.6 nmol/mg,P＜0.05)显著降低,SOD活性显著升高(22.4±4.6 U/mg比12.2±3.1 U/mg和11.4±2.9 U/mg,P＜0.05).结论 RNA干扰Kupffer细胞TNF-α基因的表达可以减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤.     

红景天苷对大鼠肝脏缺血再灌注损伤及其诱导凋亡作用的影响

目的探索红景天苷对大鼠肝脏缺血再灌注(IR)损伤的保护作用及其相关机制。方法将54只SD大鼠随机分成3组(假手术组、IR组、红景天苷组),每组各18只。实验前7 d,红景天苷组每天腹腔注射方式给药(30 mg·kg-1·d-1),IR组和假手术组以相同体积等渗Na Cl溶液代替。建立大鼠肝脏70%IR模型,缺血45 min后恢复血供,再灌注后4、8、16 h每组各处死6只大鼠,立即下腔静脉采血并取肝组织标本。检测大鼠再灌注后不同时间点血清ALT、AST水平;蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9的表达;免疫组织化学法观察上述相关凋亡相关分子阳性细胞表达并进行半定量分析;流式细胞仪检测肝细胞凋亡率。采用单因素方差分析比较各组大鼠再灌注后不同时间点血清ALT和AST含量、凋亡相关蛋白相对表达量及细胞凋亡率。结果与假手术组相比,IR组各时间点ALT、AST均上升,红景天苷组ALT、AST均低于IR组(P均0.05)。与IR组相比,红景天苷组Bax、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达降低,Bcl-2表达增加;2组再灌注后各时间点Bcl-2、Bax相对表达量差异均具有统计学意义,再灌注后4 h Caspase-3相对表达量差异有统计学意义,再灌注后8、16 h Caspase-8、Caspase-9相对表达量差异有统计学意义(P均0.05)。再灌注后8 h,红景天苷组、IR组和假手术组肝细胞凋亡率分别为(24.09±2.43)%、(45.71±3.19)%和(5.46±0.34)%,差异有统计学意义(F=4.08,P0.05)。结论红景天苷预处理可以减轻肝脏缺血再灌注损伤,可能与其抑制细胞凋亡内源性和外源性途径有关。     

大鼠肝脏缺血再灌注过程中信号转导与转录激活子1的表达变化及其意义

目的 观察JAK-STAT信号通路蛋白STAT1和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3在大鼠肝脏缺血再灌注不同时限的表达及丹参对两者表达的影响.方法 将80只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、缺血再灌注组和丹参组,建立肝缺血再灌注模型,采用免疫组织化学方法 检测STAT1及Caspase-3在肝缺血45 min再灌注0、3、12、24、72 h时的表达.结果 STAT1、Caspase-3在正常及假手术组中未见明显表达.缺血再灌注组STATI在再灌注0 h即有表达(PU=10.29±0.92),再灌注12～24 h表达最明显(PU=38.73±1.59～38.90±2.29),Caspase-3在再灌注0 h亦有表达(PU=8.18±0.95),峰值出现在再灌注24 h(PU=38.06±2.85).丹参组STAT1在各时限点均较同期缺血再灌注组低(P＜0.05),除再灌注72h外丹参组Caspase-3在各时限点均较同期缺血再灌注组低(P＜0.05).结论 STAT1在大鼠肝缺血再灌注损伤中被激活,丹参可能通过抑制STAT1的表达减轻缺血再灌注对肝的损伤.     

缺血预处理对大鼠肝脏缺血/再灌注早期核因子κB活性及细胞凋亡的影响

目的 观察缺血预处理对大鼠肝脏缺血/再灌注早期核因子KB活性、促凋亡基因Fas和FasL蛋白表达以及肝细胞凋亡的影响,以进一步阐明肝脏缺血预处理的抗凋亡作用机制.方法 建立SD大鼠肝缺血(40min)再灌注(120 min)损伤及肝缺血预处理的模型.24只大鼠随机分成3组(n=8).①假手术对照组(C组),仅分离肝十二指肠韧带,不阻断肝门,不进行其他干预处理.②缺血再灌注组(IR组),在第一肝门用小血管夹阻断尾状叶及左肝叶血流40 min松开血管夹肝脏再灌注2 h,再灌注开始后关腹.③缺血预处理组(IP组),先行3个循环的缺血预处理,阻断第一肝门10 min,开放再灌注10 min为1个循环,随后操作同缺血/再灌注组.实验结束后全自动生化分析仪检测血清谷草转氨酶和血清谷丙转氨酶活性:TUNEL法检测肝组织的细胞凋亡指数(AI):EMSA法测定肝组织核因子κB的结合活性:Western blotting免疫印迹法检测Fas及FasL蛋白的表达水平.结果 IR组和IP组的ALT、AST及细胞凋亡指数(AI)均明显高于S组(P<0.01),但与IR相比,IP组则明显较低(P<0.01).与C组比较,IR组的核因子κB活性、促凋亡基因Fas和FasL蛋白表达水平明显增高,而IP组仅轻度增高.结论 缺血预处理可通过降低肝脏缺血/再灌注早期核因子κB的转录活性,并下调促凋亡基因Fas及FasL的表达,从而发挥抗细胞凋亡和损伤保护效应.     

胰岛素样生长因子-Ⅰ在肝缺血再灌注不同时限的表达及意义

目的 观察肝缺血再灌注不同时限中胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)及细胞凋亡蛋白酶-3(Caspase-3)的表达特点并探讨IGF-Ⅰ与肝脏功能及细胞凋亡的关系.方法 75只大鼠分为正常对照组、假手术组及缺血再灌注组,每组25只.采用免疫组化方法检测IGF-Ⅰ及Caspase-3的表达,并采用全自动生化仪检测AST、ALT水平,以光学显微镜及电子显微镜观察组织形态学变化.结果 肝缺血45min再灌注后IGF-Ⅰ表达水平在再灌注3、12、24h 3组降低,与同期对照组和假手术组差异有统计学意义(P<0.01),不同肝组织结构表达水平亦不同.Caspase-3缺血45min再灌注3h时表达开始增多,在24h组表达水平最高,与对照组和假手术组差异有统计学意义(P<0.01),至72h表达水平接近于正常组(P>0.05).外周血清AST、ALT浓度在再灌注后0、3、12、24h较同期正常对照及假手术组高(P<0.01),72min接近正常.结论 IGF-Ⅰ可以作为肝脏缺血再灌注时反映肝脏功能的一项指标,它在此期不同时限的表达具有空间特异性,并有可能对缺血再灌注损伤引发的细胞凋亡有拮抗作用.     

胃饲乙醇预处理增强肝脏对缺血再灌注损伤耐受性的实验研究

目的　探讨胃饲乙醇预处理能否延长大鼠肝脏耐受入肝血流阻断的安全时限。方法　Wistar大鼠随机分组 ,动物乙醇预处理后制作缺血再灌注模型 ,于手术后 0h～ 7d内不同时相活杀大鼠 ,留取血及肝脏标本保存待检。结果　入肝血流阻断 12 0min时 ,胃饲乙醇预处理组 14d存活率为10 0 % ,缺血组存活率为 70 % ,差异显著 ;预处理组和缺血组较正常组ALT值明显升高 ,72h后基本恢复 ,缺血末期和再灌注 6h ,预处理组和缺血组两者间差异显著 ;预处理组和缺血组ATP值均低于正常组 ,预处理组再灌注 12h后恢复 ,缺血组再灌注 72h恢复正常 ;病理观察见预处理组较缺血组表现为较轻的病理损害 ;免疫组化结果 :正常肝脏仅见弱阳性表达 ,散在分布于库普弗细胞。预处理组和缺血组表现为肝细胞阳性表达 ,术后随再灌注时相的延长 ,HO 1表达逐渐增强 ,预处理组表达明显强于缺血组 ,相差显著。结论　胃饲乙醇预处理能够增强肝脏对缺血再灌注损伤的耐受性 ,大鼠肝脏耐受入肝血流阻断的安全时限可延长至 12 0min     

异丙酚后处理联合缺血后处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨异丙酚后处理联合缺血后处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响.方法 健康雄性sD大鼠30只,体重200～250 g,随机分为5组(n=6),假手术组(Ⅰ组)仅开腹;缺血再灌注组(11组)肝脏缺血1 h再灌注4 h;缺血后处理组(Ⅲ组)肝脏缺血1 h后,再灌注10 8,缺血10 8,重复6次进行缺血后处理;异丙酚后处理组(Ⅳ组)肝脏缺血1 h后经尾静脉注射异丙酚10 mg/kg,随后静脉输注异丙酚40 mg·kg~(-1)·h~(-1) h;异丙酚后处理+缺血后处理组(V组)肝脏缺血1 h后进行异丙酚后处理及缺血后处理.于再灌注4 h时测定血清ALT活性、肝组织MDA含量、SOD活性、Bcl-2及Bax的蛋白表达水平,电镜下观察肝细胞超微结构.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组～Ⅴ组血清ALT活性及肝组织MDA含量升高,肝组织Bcl-2蛋白表达上调,Ⅲ组-Ⅴ组肝组织SOD活性升高,Ⅱ组、Ⅲ组及Ⅴ组肝组织Bax蛋白表达上调(P<0.05或0.01);与Ⅱ组比较,Ⅲ组-Ⅴ组血清ALT活性及肝组织MDA含量降低,肝组织SOD活性升高,Bcl-2蛋白表达上调,Bax蛋白表达下调(P<0.05或0.01);与Ⅲ组比较,Ⅳ组血清ALT活性及肝组织MDA含量降低(P<0.05或0.01).Ⅲ组-Ⅴ组肝组织病理学损伤较Ⅱ组明显减轻.结论 异丙酚后处理联合缺血后处理可减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤,与异丙酚后处理单独应用时效果相同,其机制可能与抑制肝组织脂质过氧化反应及细胞凋亡有关.     

二氮嗪对幼龄大鼠深低温脑缺血再灌注后氧自由基及细胞凋亡的影响

目的 探讨二氮嗪对幼龄大鼠深低温脑缺血再灌注后氧自由基和细胞凋亡的影响及相关的脑保护作用机制.方法 将54只3周龄健康sD大鼠随机分为假手术组、模型组和二氮嗪组,每组18只,建立深低温脑缺血再灌注模型.于术后24 h处死大鼠,检测脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛的含量,Western Blot法检测脑组织细胞质细胞色素C含量,免疫组化法检测脑组织细胞质Caspase-3含量.结果 模型组脑组织中SOD含量为(198±41)U/mg,低于假手术组的(321±36)U/rag(P<0.01);丙二醛含量为(212±21)nmol/mg,高于假手术组的(100±23)nmol/mg(P<0.01);细胞色素C蛋白表达(0.72±0.09)和Caspase-3蛋白表达(83±10)均高于假手术组(0.17±0.02和115±9)(P<0.01).二氮嗪组脑组织SOD含量为(264±34)U/rag,高于模型组(P<0.05);而丙二醛含量(174±19)nmol/mg、细胞色素C蛋白表达(0.41±0.05)和Caspase-3蛋白表达(99±11)均低于模型组(P<0.05).结论 二氮嗪对幼龄大鼠深低温脑缺血再灌注损伤具有脑保护作用,其机制与抑制氧自由基产生和细胞凋亡有关.     

血红素氧合酶-1基因转染对大鼠供肝缺血再灌注损伤的抗凋亡作用

目的 应用转染血红索氧合酶-1(HO-1)基因研究其在大鼠供肝缺血再灌损伤(IRI)中的抗凋亡作用.方法 将转染HO-1基因的腺病毒载体和空载体分别注入供体大鼠腹腔(n=8),36 h后取肝冷保存4 h行大鼠原位肝移植.缺血再灌注6 h检测肝功能、肝细胞凋亡率和肝组织HO-1、bcl-2、hel-xl和Caspase-3的表达.结果 (1)实验组的肝功能明显改善、肝细胞凋亡率显著低于对照组[(1.09±0.28)%比(8.30±1.08)%,P<0.01].(2)Western blot检测肝组织HO-1、bel-2和bcl-xl,灰度比值实验组显著高于对照组(HO-1:0.275±0.065比0.035±0.03;bcl-2:0.275±0.025比0.06±0.07;bcl-xl:(0.099±0.041比0.064±0.064,P<0.01),而Caspase-3则显著低于对照组(0.08±0.04比0.21±0.09,P<0.01).结论 HO-1在供肝IRI中通过上调bel-2、bel-xl和下调Caspase-3对供肝有显著的抗凋亡保护作用.     

大鼠部分肝缺血再灌注损伤后切除对肝再生的影响

目的 观察大鼠部分肝缺血再灌注损伤后切除对残肝再生的影响.方法 将75只健康雄性SD大鼠随机分为5组:肝脏左叶和中叶(约占全肝70%)切除组(Control组)、肝脏左叶和中叶缺血10min再灌注30min后切除组(I10R30组)、类推得到I60R30组、I90R30组、I90R60组.术后6、12、24h等时间点,测定再生肝重量(RLW);自动生化分析仪检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)含量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;通过免疫组织化学法检测残肝增殖细胞核抗原(Ki-67)表达.结果 术后12h,I60R30、I90R30和I90R60组RLW值分别为(1.80±0.03)%、(1.82±0.10)%、(1.87±0.05)%;Ki-67值分别为(58.35±2.18)%、(59.73±3.06)%、(62.65±2.24)%,均明显高于对照组(P<0.05).缺血再灌注干预各组ALT和AST明显高于对照组(P<0.05).术后6h和12h,I60R30、I90R30和I90R60组TNF-α明显高于对照组(P<0.05).结论 大鼠即将被切除的肝脏先缺血再灌注后切除,对残肝再生具有促进作用;诱导产生的TNF-α表达量增多是促进肝再生的原因之一.

Abstract：

Objective To investigate the effects of ischemia reperfusion injury before partial hepatectomy on liver regeneration in rats. Methods Seventy-five male healthy SD rats were randomly classified into 5 groups: group control, in which rats were only subjected to 70% hepatectomy; group I10R30, 70% liver hepatectomy after 10 min of ischemia and 30 min of reperfusion in the resected liver; By analogy, group I60R30, group I90R30 and group I90R60 were constructed. At 6th, 12th and 24th h after operation, RLW was determined; serum alanine aminotransferase (ALT) and aspartate transaminase (AST) activities were measured by using autoanalyzer; the levels of serum tumor necrosis factor (TNF)-α were determined by ELISA and the expression level of Ki-67 was detected by using immunohistochemical methods in the residual liver tissues. Results At 12th h after partial hepatectomy, the rate of RLW in group I60R30, group I90R30 and group I90R60 was (1.80±0.03)%, (1.82±0.10)%, (1.87±0.05)% respectively; the rate of Ki-67 was (58.35±2.18)%, (59.73±3.06)%, (62.65±2.24)% respectively, which was significantly higher than that in the group control (P<0.05). The levels of ALT and AST in rats with ischemia reperfusion injury were higher than in the group control (P<0.05). At 6th h and 12th h after operation, the expression levels of TNF-α in groups I60R30, I90R30 and I90R60 were significantly higher than those in the group control (P<0.05). Conclusion Ischemia reperfusion injury in the resected liver before partial hepatectomy could improve liver regeneration of the remnant liver in rats. The high expression of induced TNF-α may be one of the reasons.     

氯化钆在肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用

目的：探讨在肝脏缺血再灌注损伤过程中,氯化钆对巨噬细胞的作用以及与细胞凋亡之间的相互关系。方法：将100只雄性Wistar大鼠（7～8周龄,180～220g）随机分为实验组（Gd组）和对照组（tR组）,Gd组第1、2天经鼠尾静脉注射O.2％氯化钆溶液（10mg／kg）,IR组给予等量生理盐水,第3天建立左半肝缺血再灌注模型,缺血均为60min,按再灌注后O．5、1、6、12和24h时相点采集标本,测定血清ALT、AST、TNF-α水平,测定肝细胞线粒体内MDA含量,TUNEL法测定肝细胞凋亡发生率,免疫组织化学法测定Caspase-3表达,电子显微镜观察细胞凋亡的相关形态学改变。结果：与IR组相比,Gd组再灌注0．5、1、6和12h的ALT水平,6和12h的AST水平均较低（P〈0．05）;Gd组各时相点TNF－α水平均低于IR组（P〈O．05）;6、12、24hMDA含量低于IR组（P〈O．05）;Gd组Caspase－3染色O．5、1、6和12h的IOD值低于lR组（P〈0．05）;Gd组TUNEL染色0．5、1、6和12h的IOD值低于IR组（P〈O．05）;电子显微镜下Gd组细胞凋亡率少于IR组。结论：肝脏缺血再灌注过程中,氯化钆的保护作用可能是通过抑制巨噬细胞和肝细胞凋亡而实现的。     

肾上腺髓质素对大鼠肾缺血再灌注损伤中肾小管上皮细胞凋亡的影响及机制研究

目的 观察肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)对大鼠肾缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)中肾小管上皮细胞凋亡的影响,并探讨其机制.方法 Wistar大鼠32只,随机分为4组:假手术组和IRI组各6只,转染空质粒组和转染AM质粒组各10只.大鼠右肾切除后1周,用超声微泡造影剂介导的基因转染方法将大鼠AM真核表达质粒转染大鼠肾脏,1周后采用免疫组织化学方法检测转染效率.转染成功后夹闭左肾动脉45 min制作肾IRI模型,于再灌注24 h后留取肾组织标本.TUNEL染色检测肾组织细胞凋亡,RT-PCR检测肾组织Bcl-2、Bax和Fas的mRNA表达,蛋白质印迹法检测caspase-3、caspase-8和caspase-9蛋白质表达.结果 转染AM质粒组的AM表达显著高于转染空质粒组(0.51±0.09和0.23±0.05,P＜0.05).与假手术组相比,IRI组肾组织细胞凋亡率明显增加[(38.79±7.52)%和(2.89±0.52)%,P＜0.05];肾组织Bax、Bcl-2、Fas、caspase-3、caspase-8和caspase-9表达上调,分别为0.72±0.18和0.23±0.04、0.80±0.12和0.38±0.06、1.24±0.25和0.39±0.09、0.76±0.13和0.38±0.08、0.92±0.14和0.32±0.06、0.89±0.12和0.42±0.09(P＜0.05),Bax/Bcl-2升高(0.91±0.18和0.61±0.08,P＜0.05).转染AM质粒组肾组织凋亡细胞数、Bax、Fas、caspase-3、caspase-8和caspase-9表达下调,分别为(19.36±6.78)%、0.48±0.11、0.62±0.07、0.53±0.08、0.46±0.08、0.51±0.12,与IRI组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);Bcl-2表达进一步上调为1.23±0.25,Bax/Bcl-2降低为0.44±0.12,与IRI组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).转染空质粒组和IRI组比较,上述各指标差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 AM能减轻肾IRI引起的肾小管上皮细胞凋亡,其部分机制可能是通过抑制caspase依赖的内、外源性凋亡途径实现的.

Abstract：

Objective To investigate the effect and mechanism of adrenomedullin (AM) on apoptosis of renal tubular epithelial cell in rats induced by renal ischemia reperfusion injury. Methods Thirty-two Wistar rats were randomly divided into 4 groups: control group, IRI group, empty plasmid group and AM group. One week after removing the right kidney, eukaryotic expression vector encoding rat AM gene was transfected into the left kidney using an ultrasound-microbubble mediated system. After 1 week the transfer efficiency was detected by immunohistochemical method . Renal IRI model induced by clamping left renal arteries for 45 min followed by reperfusion for 24 h. Tubular cell apoptosis was detected by TUNEL assay. Bcl-2, Bax and Fas expressions were examined by RT-PCR. The expressions of caspase-3, caspase-8 and caspase-9 were determined by Western bolt analysis. Results The expression of AM in the AM group was significantly higher than the empty plasmid group (0.51±0.09 vs 0.23±0.05; P<0.05). Compared with the control group, the apoptosis rate of renal tubular cell in the IRI group was significantly higher [(38.79±7.52)% vs (2.89±0.52)%; P<0.05]. The expressions of Bax, Bcl-2, Fas, caspase-3, caspase-8 and caspase-9 were also significantly increased (0.72±0.18 vs 0.23±0.04, 0.80±0.12 vs 0.38±0.06, 1.24±0.25 vs 0.39±0.09, 0.76±0.13 vs 0.38±0.08, 0.92±0.14 vs 0.32±0.06, 0.89±0.12 vs 0.42±0.09; P<0.05). Bax/Bcl-2 was also significantly increased (0.91±0.18 vs 0.61±0.08; P<0.05). Compared with the IRI group, AM pretreatment significantly decreased the apoptosis rate of renal tubular cells [(19.36±6.78)% vs (38.79±7.52)%; P<0.05]. AM inhibited the up-regulation of Bax, Fas, caspase-3, caspase-8 and caspase-9, while promoting the up-regulation of Bcl-2 (0.48±0.11 vs 0.72±0.18, 0.62±0.07 vs 1.24±0.25, 0.53±0.08 vs 0.76±0.13, 0.46±0.08 vs 0.92±0.14, 0.51±0.12 vs 0.89±0.12, 1.23±0.25 vs 0.80±0.12; P<0.05). Bax/Bcl-2 significantly decreased (0.44±0.12 vs 0.91±0.18; P<0.05). The above parameters had no significant diffe-rence between the empty plasmid group and the IRI group (P>0.05). Conclusion AM can reduce apoptosis of renal tubular epithelial cell induced by renal IRI, the mechanism of which might be achieved by inhibiting caspase-dependent intrinsic and extrinsic pathways.     

肝移植术后初始肝功能不良的危险因素分析

目的 分析肝移植术后导致初始肝功能不良(IPGF)的危险因素.方法 随机选取2004年4月至11月行肝移植的32例患者为观察对象;将肝移植术后3 d内血清丙氨酸转氨酶(AI一)和/或天冬氨酸转氨酶(AST)峰值≥1 500 U/L的受者分为IPGF组,<1 500 U/L的受者分为非IPGF组.受者肝移植前分析指标为:年龄和MELD评分;供者分析指标为:年龄,供肝冷保存时间(CIT),供肝冷保存末期(Pr)、门脉灌注后4 h(Po)以及缺血再灌注损伤(IRI)的活检病理学评分;手术中的分析指标为:受者手术时间和移植肝复温缺血时间(RWIT).结果 所有受者术后均获得长期随访.32例受者中,IPGF组有10例,非IPGF组有22例.IPGF组和非IPGF组移植肝复温缺血时间分别为(55.00±12.91)min和(41.55±8.55)min,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01);IPGF组术后肝功能恢复时间显著长于非IPGF组(P<0.01);IPGF组受者术后感染率明显高于非IPGF组(P<0.05).两组移植肝总体存活率分别为90.0%和95.5%,差异无统计学意义.两组移植肝按P0评分和IRI评分中的重度损伤标准发生IPGF的概率与轻、中度损伤比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 经二项分类logistic回归分析发现,移植肝复温缺血时间和缺血再灌注损伤是引起IPGF的危险因素.     

前列地尔对兔肝缺血再灌注时肝细胞凋亡的保护作用

目的 探讨前列地尔对兔肝脏缺血再灌注损伤时,有效减少肝细胞凋亡的机制.方法 将健康新西兰兔36只随机分为3组:对照组、缺血再灌注组和前列地尔组,3组分别在再灌注60min和90min时,检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶 (AST)、乳酸脱氢酶(LDH)水平.取肝中叶检测兔诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、髓过氧化物酶(MPO)以及bcl-2、bax和Caspase-3蛋白表达;并用原位缺口末端标记法(TUNEL)染色比较各组肝细胞凋亡.结果 与对照组比较,缺血再灌注组和前列地尔组在再灌注后ALT、AST、LDH 水平均大幅上升(P<0.05);但前列地尔组兔在再灌注60、90min时ALT、AST、LDH 水平明显低于缺血再灌注组(P<0.05);与对照组比较,缺血再灌注组肝细胞bcl-2、bax、Caspase-3的表达明显增强;前列地尔组与缺血再灌注组比较表达均减弱,但仍强于对照组.TUNEL 法显示前列地尔组、缺血再灌注组与对照组比较凋亡细胞数增多,前列地尔组与缺血再灌注组比较凋亡细胞数减少;与对照组比较,缺血再灌注组与前列地尔组iNOS 与MPO的活性明显增强,前列地尔组与缺血再灌注组比较,该两者活性明显减弱.结论 前列地尔在肝脏缺血再灌注损伤时能有效地保护肝功能,减少肝细胞的损伤,其作用机制可能是通过减少细胞脂质过氧化,从而降低bcl-2、bax、Caspase-3等凋亡基因的表达.

Abstract：

Objective To study the protective the positive effects of alprostadil Hepatocyte Apoptosis by Liver Ischemia-Reperfusion Injury in rabbits. Methods Thirty-six rabbits were made the model of liver ischemia-reperfusion injury, and randourly divided into three groups:Control group, Ischemia-Reperfusion Injury group and Alprostadil intervention group. The alanine aminotransferase (ALT) , aspartate aminotransferase (AST) , lactate dehydrogenase (LDH) were determined; Each group inducible nitric oxide synthase (iNOS) , myeloperoxidase (MPO) and bcl-2, bax, Caspase-3 and apoptosis of the hepatocyte by TUNEL were assayed at 60 and 90 min after reperfusion. Results The ALT, AST, LDH concentration in plasma in Ischemia-Reperfusion Injury group and Alprostadil intervention group were increased obviously at 60, 90 min after reperfusion and it was significantly higher than that in the Control group in the same time point (P<0.05). And the ALT, AST, LDH concentration in plasma in Alprostadil intervention group was significantly lower than that in the in Ischemia-Reperfusion Injury group in the same time point (P<0.05). The level of bcl-2, bax, Caspase-3 in the liver tissue in the Control group was smaller, but the obvious increase of the expression those was found in the Ischemia-Reperfusion Injury group and Alprostadil intervention group. Compared with those in the Ischemia-Reperfusion Injury group group, the expression of bcl-2, bax, Caspase-3 in the Alprostadil intervention group werw obviously smaller (P<0.05). The contents of iNOS and MPO in liver tissue in the Ischemia-Reperfusion Injury group and Alprostadil intervention group were significantly higher than that in the Control group (P<0.05). Conclusion Alprostadil could be used to protect liver ischemia-reperfusion injury, it could decrease oxygen free radicals generation, inhibit neutrophils aggregating and activating in the liver, thereby inhibiting expression of bcl-2, bax, Caspase-3.     

去铁胺对自体肝移植大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨去铁胺预处理对大鼠自体肝移植缺血再灌注损伤的保护作用及其可能机制.方法 建立大鼠自体肝移植模型,将96只健康雄性SD大鼠随机分为去铁胺预处理(deferoxamine,D组),注射用水对照组(control group,C组)和假手术模型(shsm operation,S组)各32只.分别于术后0.5 h、2 h、6 h、24 h各时间点处死大鼠,检测血清ALT和AST水平和肝组织SOD活性与MDA含量;做病理组织学检查,免疫组化检测HIF-1α、TNF-α及IL-1蛋白的表达.结果 在30 min、2 h、6 h及24 h各个时间点,D组大鼠血清ALT及AST水平、肝组织MDA含量及IL-1、TNF-α蛋白表达量明显低于C组,再灌注后2 h、6 h、24 h,D组大鼠肝组织SOD含量(411±70;384±53;379±46)和各时间点HIF-1α蛋白表达量(0.0413±0.0040;0.0684±0.0032;0.0583±0.0032;0.0491±0.0026)明显高于C组[SOD(341±21;323±25;303±25)和HIF-1α(0.0254±0.0024;0.0312±0.0022;0.0381±0.0022;0.0257±0.0015)](F>59.881;P<0.01).结论 去铁胺预处理对大鼠自体肝移植缺血再灌注损伤具有保护作用,可能与促进HIF-1α表达上调,减轻氧化损伤和降低炎性因子水平有关.