RNA干扰Caspase-3基因抑制大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的 观察RNA干扰(RNAi)Caspase-3基因对大鼠肝脏缺血再灌注损伤(IRI)的保护作用.方法 构建针对大鼠Caspase-3基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体.肝脏IRI前48 h经门静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS)或Caspase-3 shRNA,实验随机分为3组,假手术组、PBS组和shRNA组.阻断大鼠70%入肝血流40 min,再灌注6,12,24 h,3,5,7 d检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,肝组织Caspase-3 mRNA的表达,细胞凋亡情况,丙二醛(MDA)以及超氧化物歧化酶(SOD)的含量.结果 与PBS组比较,shRNA组再灌注6,12,24 h血清ALT和AST水平显著降低(P<0.05),shRNA组大鼠肝组织的Caspase-3 mRNA水平、肝细胞凋亡指数(25.21%±3.18%vs 35.24%±2.33%,P<0.05)和肝组织中MDA含量[(96.3±12.8)nmol/mg vs(133.5±12.4)nmol/mg,(P<0.05)]显著降低,SOD活性显著升高[(22.5±3.4)U/mg vs(12.2±3.1)U/mg,(P<0.05)].结论 RNA干扰Caspase-3基因可以抑制细胞凋亡的发生,保护肝脏缺血再灌注损伤.     

Caspase-3和Caspase-8基因沉默保护大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的 观察Caspase-3和Caspase-8基因沉默对大鼠肝脏缺血再灌注损伤((IRI)的保护作用.方法 分别构建针对大鼠caspase-3和caspase-8基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体.肝脏IRI前48 h经门静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS)、空载体或Caspase-3和Caspase-8shRNA,实验随机分为4组,假手术组、PBS组、空载体组和shRNA组.阻断大鼠70%入肝血流40min,再灌注6、12、24 h、3、5、7 d检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,肝组织Caspase-3和Cmpase-8 mRNA的表达,Caspase-3和Caspase-8蛋白活性,细胞凋亡情况,丙二醛(MDA)以及超氧化物岐化酶(SOD)的含量.结果 与PBS组和空载体组比较,shRNA组再灌注6、12、24 h、3、5 d血清ALT和AST水平显著降低(P＜0.05),Caspase-3和Caspase-8 mRNA水平、Caspase-3和caspase-8蛋白活性(Cmpme-3活性:0.18±0.03比0.36±0.03和0.38±0.02,P＜0.05;caspase-8活性:0.16±0.03比0.32±0.02和0.34±0.03,P＜0.05)、肝细胞凋亡指数[(22.46±3.25)%比(35.24±2.33)%和(37.36±2.51)%,P＜0.05]和肝组织中MDA含量[(76.2±15.3)比(123.5±12.4)、(136.7±13.6)nmol/mg,P＜0.05)显著降低,SOD活性显著升高[(24.1±3.2)比(12.2±3.1)、(11.4±2.9)U/mg,P＜0.05].结论 Caspase-3和Caspase-8基因沉默可以抑制细胞凋亡的发生,从而起到保护肝脏IRI的作用.     

氨溴索对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨氨溴索对大鼠肝脏缺血再灌注损伤（I/RI）的保护作用及其机制。方法：18只雄性Wistar大鼠被随机均分为假手术组、肝I/RI模型组（模型组）、氨溴索预处理+肝I/RI模型组（氨溴索预处理组）。肝I/RI模型采用阻断入肝血流30 min后再灌注方法诱导,氨溴索预处理组于缺血前20 min尾静脉注射氨溴索（100 mg/kg）,而模型组给予等体积生理盐水。术后6 h处死大鼠,检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）水平和肝组织病理学改变,同时检测肝组织超氧化物岐化酶（SOD）,谷胱甘肽（GSH）,丙二醛（MDA）含量,caspase-3的活化水平。结果：与假手术组比较,模型组与氨溴索预处理组血清ALT和AST水平明显升高（均P<0.05）;肝组织出现明显的病理学改变;肝组织SOD和GSH含量明显下降,而MDA水平明显升高（均P<0.05）;肝组织caspase-3活化水平明显升高（均P<0.05）。与模型组比较,氨溴索预处理组以上各项指标的变化均明显减弱（均P<0.05）。结论：氨溴索预处理能减轻大鼠肝脏I/RI,机制可能与其调控抗氧化和抗凋亡信号通路有关。     

黄芪甲苷对大鼠肝脏缺血再灌注损伤和Caspase途径的影响

目的探讨黄芪甲苷对大鼠肝脏缺血再灌注损伤（HIRI）的保护作用以及相关机制。 方法将75只纯系SD大鼠随机分为Sham组（假手术组）、HIRI组（缺血再灌注组）以及黄芪甲苷低剂量组、中剂量组、高剂量组,建立大鼠HIRI模型,于再灌注4、8、16 h后取下腔静脉血及肝左外叶组织。全自动生化分析仪检测血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）水平;光学显微镜下观察肝细胞显微结构变化;Western Blotting及免疫组化染色分析肝组织中Caspase-3、8、9的表达;流式细胞仪检测肝细胞凋亡率。 结果HIRI组的ALT和AST水平升高,而黄芪甲苷组明显降低,且肝细胞损伤明显减轻。高剂量组Caspase-3、8、9蛋白的表达水平以及细胞凋亡率明显低于HIRI组。 结论黄芪甲苷预处理可减轻大鼠HIRI,其作用机制可能与其抑制Caspase-3、8、9的表达,从而抑制细胞凋亡有关。     

落新妇苷通过下调caspase-3、-8、-9蛋白的表达来减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的探讨落新妇苷对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法 SD大鼠,分为Sham组(假手术组)、HIRI组(缺血再灌注组)、落新妇苷(低剂量组、中剂量组、高剂量组),建立大鼠肝脏缺血再灌注模型,分别于再灌注4 h、8 h、16 h后取血液及肝脏标本。检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST);光镜下观察肝细胞显微结构变化;免疫印迹试验(Western Blot)分析肝组织中IL-1、caspase-3、-8、-9的表达;流式细胞仪检测肝细胞凋亡率。应用SPSS l5.0统计软件进行分析,计量资料以均数±标准差(±s)表示,对各组大鼠血清ALT、AST,肝组织中IL-1、caspase-3、-8、-9蛋白的表达及细胞凋亡情况进行比较采用单因素方差分析和t检验,以P0.05、P0.01为差异有统计学意义。结果 HIRI组ALT和AST水平升高,而药物组明显降低。光镜结果显示药物组肝细胞损伤明显减轻。Western Blot结果显示,高剂量组IL-1、caspase-3、-8、-9蛋白的表达较HIRI组明显减轻。高剂量组的细胞凋亡率也较HIRI组降低。结论落新妇苷预处理可减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤,其作用机制可能与其抑制caspase-3、-8、-9的表达,从而抑制细胞凋亡有关。     

RNA干扰技术对小鼠肝脏缺血再灌注中肝细胞损伤的保护作用及其机制

由于在病理状态下 ,肝细胞表面大量表达Fas蛋白 ,因此 ,Fas介导的凋亡是各种原因 (炎症、免疫、病毒、肝移植 )引起的肝脏损害的主要原因[1] 。我们通过肝缺血再灌注细胞凋亡现象及小干扰RNA(siRNA)对Fas基因沉默机制的研究 ,为经基因调控对肝细胞的保护提供依据。一、材料和方法1.SiRNA的剂型 :SiRNA制剂由宋尔卫博士提供 ,fas (sequence 4) :开始于第 5 0 1个核苷酸序列 ,(sense) 5’ P .AUCGCCUAUGGUUGUUGACdTdT 3’ ;5’ PGUCAACAACCAUAGGCGAUdTd T 3’(antisense) ;fas(sequence 5 ) :开始于第 667个核苷酸序…     

超氧化物歧化酶对大鼠肝脏缺血再灌注损伤保护作用的体外实验

目的：探讨氧自由基清除剂对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机理。方法：将Wistar大鼠分成三组，各组通过门静脉插管，对肝脏进行原位灌洗，心脏搏动组以4℃HTK液灌洗；心脏停跳组在心脏搏动停止60min后，以同样方法灌洗肝脏；SOD实验组灌洗方法同心脏停跳组，但灌洗液中含有超氧化物歧化酶（SOD）7500IU。灌注结束后，快速切取肝脏，于4℃HTK液中保存24h，然后在体外以Krebs-Henseleit缓冲液再灌注45min。测定再灌注过程中的门静脉压力，收集再灌注液，进行血气分析，测定其中丙氨酸转氨酶（ALT）、谷氨酸乳酸脱氢酶（GLDH）及脂质过氧化物（LPO）的含量；切取肝组织，检测其能量底物总和（TAN）及细胞凋亡情况。结果：再灌注期间，SOD实验组的门静脉压力为（6．4±0．9）cmH20，明显低于心脏停跳组的（12．1±0．7）cmH20（P〈0．01）。随着再灌注时间的延长，灌注液中AL]r和GLDH的浓度不断升高，但SOD实验组明显低于心脏停跳组（P〈0．05）。心脏停跳组肝脏氧消耗量明显低于心脏搏动组（P〈0．01），而SOD实验组氧消耗量明显增加（P〈0．01）。SOD实验组的TAN为（7．6±0．4）μmol／g，明显高于心脏停跳组的（5．3±0．7）,μmol／g（P＜0．05）。SOD实验组灌注液中LPO的含量为（0．42±0．10）nmol／g，明显低于心脏停跳组的（0．98±0．18）nmol／g（P＜0．01）。心脏搏动组只有极少量的肝窦内皮细胞和肝细胞凋亡，SOD实验组中凋亡细胞的数量也非常有限，而在心脏停跳组，则有大量的肝窦内皮细胞发生凋亡。结论：在体外，SOD能显著减轻大鼠肝脏的缺血再灌注损伤，这可能与SOD抑制了氧自由基所致的细胞凋亡有关。     

RNA干扰Kupffer细胞肿瘤坏死因子-α减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的 观察RNA干扰肝脏Kupffer细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用.方法 构建针对大鼠TNF-α基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体.肝脏缺血再灌注损伤前48 h经门静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS)、空载体或TNF-α shRNA.实验随机分为4组,假手术组、PBS组、空载体组和shRNA组.阻断大鼠70%入肝血流40 min,再灌注6 h检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肝脏Kupffer细胞TNF-α mRNA、血清TNF-α、肝组织中丙二醛(MDA)以及超氧化物岐化酶(SOD)含量.结果 与PBS组和空载体组比较,shRNA组再灌注6 h后血清ALT和AST水平显著降低(P＜0.05),Kupffer细胞TNF-α mRNA水平、血清TNF-α水平(56.6±6.7 pg/ml比87.8±8.7 pg/ml和96.5±7.3 pg/ml,P＜0.05)、肝组织中MDA含量(93.4±13.3 nmol/mg比133.5±12.4 nmo1/mg和136.7±13.6 nmol/mg,P＜0.05)显著降低,SOD活性显著升高(22.4±4.6 U/mg比12.2±3.1 U/mg和11.4±2.9 U/mg,P＜0.05).结论 RNA干扰Kupffer细胞TNF-α基因的表达可以减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤.     

预缺血对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

已有较多的实验证明,预缺血处理对多种缺血再灌注器官有保护作用.本文综述了预缺血对缺血再灌注肝脏的保护作用及其机理.     

预缺血对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

已有较多的实验证明,预缺血处理对多种缺血再灌注器官有保护作用.本文综述了预缺血对缺血再灌注肝脏的保护作用及其机理.     

肝硬变大鼠肝脏缺血再灌注损伤

为比较硬化肝与正常肝在缺血再灌注损伤时的差异和意义。作者采用四氯化碳复制大鼠肝硬变模型,通过大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型,检查不同时限大鼠门静脉血内毒素、肝静脉血一氧化氮。结果显示：肝硬变大鼠再灌注时门静脉内毒素水平更高;肝脏ＮＯ合成释放显著增加。作者认为肝硬变时对缺血再灌注损伤反应与正常大鼠不同,可能是肝硬变时对缺血再灌注损伤更敏感,更易发生肝功能衰竭的重要原因。     

缺血再灌注损伤对肝脏免疫原性的影响

目的 观察缺血再灌注损伤对肝脏免疫原性的影响.方法 30只大鼠均分为3组,利用免疫荧光及Western blol检测缺血30min再灌注组及缺血60min再灌注组及对照组的肝脏中共刺激分子B7蛋白的表达水平.结果 正常肝脏B7-1、B7-2表达处于极低水平(0.035±0.005、0.025±0.004),缺血再灌注后肝脏B7-1、B7-2的蛋白表达明显升高(P<0.01),缺血再灌注60min组的B7-1、B7-2的表达水平明显高于缺血30min再灌注组(B7-1:0.070±0.017比0.051±0.008,B7-2:0.042±0.004.比0.037±0.004,P<0.01).结论 缺血再灌注损伤使共刺激分子B7蛋白表达升高,提示缺血再灌注损伤可使移植肝免疫原性升高,这些均能促进急性排斥反应的发生.     

缺血预处理对肝大部切除术中残肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察缺血预处理对大鼠肝大部切除术中残肝缺血再灌注损伤的保护作用。方法 健康的雌性SD大鼠随机分为3组：即单纯肝叶切除组（PH组）、缺血再灌注损伤状态下肝叶切除组（IR组）及缺血预处理组（IP组）。分别取术前及术后0．5、6、12、24、48h等时间点，应用全自动生化分析仪检测血清ALT、AST含量，通过免疫组织化学法检测残肝组织中Ki67和Cyclin D1表达变化，采用放免法检测血清中透明质酸（HA）含量。结果 IP组术后24h内各检测点的AST和ALT值明显高于PH组和IR组（P〈0．05）。术后早期IP组大鼠的血清HA表达量明显高于PH组和IR组（P〈0．05）。PH组大鼠肝细胞Ki67和Cyclin D1表达在术后24h达到峰值，并且明显高于IR组和IP组大鼠（P〈0．05）。其中IP组大鼠术后Ki67和Cyclin D1表达量降低地最显著。结论 在合并肝组织大部缺失时，缺血预处理对残留肝组织的缺血再灌注损伤的保护效应消失，它损害了大鼠残肝再生功能。     

灯盏花素预处理供肝减轻大鼠肝移植后早期缺血再灌注损伤

目的 研究应用灯盏花素对供肝进行预处理,减轻大鼠肝移植术后早期缺血再灌注损伤的作用.方法 以SD大鼠作为肝移植供、受者,采用随机数字表法将受鼠分为4组.A组和C组供肝未经灯盏花素预处理,B组和D组供肝经含20 mg/L灯盏花素的UW液预处理;A组和B组供肝冷缺血时间为30～40 min,C组和D组为12 h.术后检测各组受鼠的凝血功能、肝功能、血清血栓调节蛋白(TM)含量、凋亡蛋白酶-3 (Caspase-3)活性及核因子-kB(NF-kB)相对表达量,观察各组移植肝组织病理学变化和肝细胞凋亡情况.结果 术后3d,C组与D组受鼠死亡率分别为40.0％(8/20)和29.4％(5/17),差异无统计学意义(P＞0.05);术后4组间凝血功能无明显变化(P＞0.05).与C组比较,术后早期D组肝功能、肝组织病理学改变及肝细胞凋亡均明显改善(P＜0.01),血清TM含量、Caspase-3活性及NF-kB表达量均明显降低(P＜0.01).术后A组和B组的缺血再灌注损伤明显较轻,两组间上述指标的差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 应用灯盏花素对供肝进行预处理,能够减轻大鼠肝移植术后由冷保存时间较长引起的缺血再灌注损伤,其机制可能与抑制凋亡相关的信号通路和减轻肝脏微循环内皮细胞损伤有关.     

内毒素血症加重实验大鼠肝缺血再灌注损伤

目的探讨内毒素血症对肝缺血再灌注(I／R)损伤的影响。方法对24只大白鼠于术前1h静脉注射0．8mg／kg的LPS，检测肝门血流阻断30min的情况下复流后2h、6h、12h和24h4个时间点血清ALT与AST值，用ELISA法检测了复流后2h和6h2个时间点的循环TNF-α水平和肝组织中TNF-α含量，于复流后24h取缺血部分肝组织行组织病理学检查。24只未注射LPS的I／R肝损伤模型大鼠作为对照组。结果实验组大鼠术后各时刻ALT和AST升高幅度均明显大于对照组，并且下降缓慢；循环和肝组织中的TNF-α也明显高于对照组，复流后24h的肝组织存在片状坏死，伴大量多形核细胞浸润。结论内毒素通过升高循环和肝组织局部的TNF-α加重了缺血后再灌注肝损伤。     

牛磺酸对大鼠肝缺血再灌注后小肠损伤的保护作用

目的探讨牛磺酸对大鼠肝缺血再灌注(I/R)后小肠损伤的保护作用。方法将大鼠随机分成假手术组,肝I/R组,牛磺酸预处理+肝I/R组;采用阻断肝动脉、门静脉30min后再灌注的方法,制作肝I/R模型。各组于再灌注3,6,24h分别采血,测定二胺氧化酶(DAO)数值,检测小肠功能;同步切取小肠,测定肠道组织中的SOD及MDA含量,评价肠道自由基损伤程度;切片后行苏木素-伊红(HE)染色,观察病理形态学改变;原位末端标记法(TUNEL)测定细胞凋亡;免疫组化法测定caspase-3表达。结果与假手术组比较,肝I/R组SOD水平明显降低(P<0.05),MDA和DAO水平明显升高(P<0.05),小肠病理损伤严重,凋亡指数明显升高(P<0.05),caspase-3阳性率明显增加(P<0.05)。与I/R组同时间点比较,牛磺酸预处理+I/R组各项指标均明显改善(均P<0.05)。结论牛磺酸对肝I/R后小肠损伤具有保护作用。     

肾上腺髓质素对大鼠肾缺血再灌注损伤中肾小管上皮细胞凋亡的影响及机制研究

目的 观察肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)对大鼠肾缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)中肾小管上皮细胞凋亡的影响,并探讨其机制.方法 Wistar大鼠32只,随机分为4组:假手术组和IRI组各6只,转染空质粒组和转染AM质粒组各10只.大鼠右肾切除后1周,用超声微泡造影剂介导的基因转染方法将大鼠AM真核表达质粒转染大鼠肾脏,1周后采用免疫组织化学方法检测转染效率.转染成功后夹闭左肾动脉45 min制作肾IRI模型,于再灌注24 h后留取肾组织标本.TUNEL染色检测肾组织细胞凋亡,RT-PCR检测肾组织Bcl-2、Bax和Fas的mRNA表达,蛋白质印迹法检测caspase-3、caspase-8和caspase-9蛋白质表达.结果 转染AM质粒组的AM表达显著高于转染空质粒组(0.51±0.09和0.23±0.05,P＜0.05).与假手术组相比,IRI组肾组织细胞凋亡率明显增加[(38.79±7.52)%和(2.89±0.52)%,P＜0.05];肾组织Bax、Bcl-2、Fas、caspase-3、caspase-8和caspase-9表达上调,分别为0.72±0.18和0.23±0.04、0.80±0.12和0.38±0.06、1.24±0.25和0.39±0.09、0.76±0.13和0.38±0.08、0.92±0.14和0.32±0.06、0.89±0.12和0.42±0.09(P＜0.05),Bax/Bcl-2升高(0.91±0.18和0.61±0.08,P＜0.05).转染AM质粒组肾组织凋亡细胞数、Bax、Fas、caspase-3、caspase-8和caspase-9表达下调,分别为(19.36±6.78)%、0.48±0.11、0.62±0.07、0.53±0.08、0.46±0.08、0.51±0.12,与IRI组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);Bcl-2表达进一步上调为1.23±0.25,Bax/Bcl-2降低为0.44±0.12,与IRI组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).转染空质粒组和IRI组比较,上述各指标差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 AM能减轻肾IRI引起的肾小管上皮细胞凋亡,其部分机制可能是通过抑制caspase依赖的内、外源性凋亡途径实现的.

Abstract：

Objective To investigate the effect and mechanism of adrenomedullin (AM) on apoptosis of renal tubular epithelial cell in rats induced by renal ischemia reperfusion injury. Methods Thirty-two Wistar rats were randomly divided into 4 groups: control group, IRI group, empty plasmid group and AM group. One week after removing the right kidney, eukaryotic expression vector encoding rat AM gene was transfected into the left kidney using an ultrasound-microbubble mediated system. After 1 week the transfer efficiency was detected by immunohistochemical method . Renal IRI model induced by clamping left renal arteries for 45 min followed by reperfusion for 24 h. Tubular cell apoptosis was detected by TUNEL assay. Bcl-2, Bax and Fas expressions were examined by RT-PCR. The expressions of caspase-3, caspase-8 and caspase-9 were determined by Western bolt analysis. Results The expression of AM in the AM group was significantly higher than the empty plasmid group (0.51±0.09 vs 0.23±0.05; P<0.05). Compared with the control group, the apoptosis rate of renal tubular cell in the IRI group was significantly higher [(38.79±7.52)% vs (2.89±0.52)%; P<0.05]. The expressions of Bax, Bcl-2, Fas, caspase-3, caspase-8 and caspase-9 were also significantly increased (0.72±0.18 vs 0.23±0.04, 0.80±0.12 vs 0.38±0.06, 1.24±0.25 vs 0.39±0.09, 0.76±0.13 vs 0.38±0.08, 0.92±0.14 vs 0.32±0.06, 0.89±0.12 vs 0.42±0.09; P<0.05). Bax/Bcl-2 was also significantly increased (0.91±0.18 vs 0.61±0.08; P<0.05). Compared with the IRI group, AM pretreatment significantly decreased the apoptosis rate of renal tubular cells [(19.36±6.78)% vs (38.79±7.52)%; P<0.05]. AM inhibited the up-regulation of Bax, Fas, caspase-3, caspase-8 and caspase-9, while promoting the up-regulation of Bcl-2 (0.48±0.11 vs 0.72±0.18, 0.62±0.07 vs 1.24±0.25, 0.53±0.08 vs 0.76±0.13, 0.46±0.08 vs 0.92±0.14, 0.51±0.12 vs 0.89±0.12, 1.23±0.25 vs 0.80±0.12; P<0.05). Bax/Bcl-2 significantly decreased (0.44±0.12 vs 0.91±0.18; P<0.05). The above parameters had no significant diffe-rence between the empty plasmid group and the IRI group (P>0.05). Conclusion AM can reduce apoptosis of renal tubular epithelial cell induced by renal IRI, the mechanism of which might be achieved by inhibiting caspase-dependent intrinsic and extrinsic pathways.     

内毒素预处理诱导大鼠供肝缺血再灌注交叉耐受机制的研究

目的探讨以内毒素耐受为基础诱导的移植肝脏对缺血再灌注损害（I／RI）交叉耐受的相关机制。方法雄性SD大鼠，随机分为正常对照组、缺血再灌注组（I／R组）和内毒素耐受组（ET组）。以未经任何处理的大鼠肝脏为正常对照；ET组供体第1天经尾静脉给予脂多糖0.1mg／kg体重，第2、3、4、5天给予0.5mg／kg体重；I／R组供体给予等体积0．5ml无菌PBS液。第8天，切取供体，以未经任何处理的大鼠为受体，两袖套法建立大鼠原位肝移植模型。按门静脉血流恢复后第0、60及180min分为3个亚组。逆转录-聚合酶链式反应及蛋白免疫印记法测定肝组织的白细胞介素-1受体相关激酶-4（IRAK-4）mRNA和蛋白表达水平；酶连免疫吸附法检测肝组织核因子-κB出（NF-κB）活性及血清TNF-α含量。结果再灌注后0、60及180rain．I／R组与ET组的IRAK-4蛋白与mRNA表达水平，NF-κB活性以及TNF-α含量均高于正常对照组（P〈0．01）；再灌注后0min，I／R组与ET组的NF-κB活性以及TNF-α含量差异无统计学意义（P〉0．05），但IRAK-4蛋白与mRNA表达水平高于ET组（P〈0．01）；再灌注60min及180min，I／R组的上述各指标均明显高于后者（P〈0．01）。结论抑制IRAK-4表达是以内毒素耐受为基础诱导的移植肝脏对I／RI交叉耐受的相关原因，但能否以IRAK-4为减轻I／RI基因治疗的理想靶点尚有待进一步的研究。     

大鼠肺早期缺血再灌注损伤时线粒体DNA的表达及意义

目的 探讨线粒体DNA(mtDNA)在大鼠肺缺血再灌注损伤过程中的表达变化及意义.方法 32只雄性SD大鼠,分为4组:缺血再灌注1组(IR1组)大鼠按照原位缺血再灌注模型的制作方法缺血1h,再灌注0.5 h;缺血再灌注2组(IR2组),采用相同方法,缺血1h,再灌注1h;假手术对照1组(Con1组),开胸1.5h;假手术对照2组(Con2组),开胸2h.实验结束时分别处死各组大鼠,心脏采血,完整取下左肺.行HE染色,观察各组肺组织病理变化;测量肺湿重/干重,计算肺含水量;提取外周血DNA,荧光定量实时聚合酶链法测定各组大鼠外周血循环mtDNA表达量;酶联免疫吸附法测定各组大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)含量.结果 与Con1组和Con2组相比较,IR1组和IR2组大鼠肺组织损伤加重,炎症细胞浸润、肺泡腔内渗出显著增多,肺水含量也升高(P＜0.01).IR1组大鼠外周血中mtDNA含量高于Con1组,IR2组大鼠外周血中mtDNA含量高于Con2组,差异均有统计学意义(P＜0.01,P＜0.01).与Con1组相比较,IR1组大鼠肺组织MMP-9和MCP-1的表达的差异无统计学意义(P＞0.05);而与Con2组相比较,IR2组大鼠肺组织MMP-9和MCP-1的表达升高(P＜0.01).结论 大鼠原位肺缺血再灌注损伤早期,循环中mtDNA明显升高,其表达与肺组织中MMP-9、MCP-1的表达具有相关性.     

黄腐酸钠对肝硬化大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的　观察黄腐酸钠对肝硬化大鼠肝脏的缺血再灌注损伤的保护作用。方法　用四氯化碳橄榄油制作肝硬化大鼠模型后 ,术前 3d灌胃 2 %黄腐酸钠 10 0mg/ (kg·d) ,每天两次。两次肝门阻断后于下腔静脉取血 ,检测血清ET 1、TNF α、IL 6值 ,同时取肝左叶肝脏组织病理检查。结果　术后黄腐酸钠组血清ET 1、TNF α、IL 6值均较对照组降低。与对照组比较均有显著性意义 (P <0 0 5 )。光学显微镜检查 ,黄腐酸钠组的肝细胞病理损伤程度比对照组轻。结论　术前用黄腐酸钠对肝硬化大鼠的肝缺血再灌注损伤有明显的保护作用。