HSV—1特异转移因子的抗原依赖活性

本实验以Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV—1)免疫小鼠制备TF_(HSV—1),在同系动物中鉴定TF_(HSV—1)的抗原特异活性.结果表明.TF_(HSV—1)可诱导正常鼠淋巴细胞出现抗原依赖的粘附抑制,并可将供体的抗原特异的皮肤迟发型超敏反应介导给正常受体,从而证实TF_(HSV—1)在体内、外均可介导特异细胞免疫反应.从非免疫供体制备的TF_n无上述效应。我们还观察到,TF_(HSV—1)能够有效地保护受到致死剂量HSV—1攻击的小鼠免于死亡(存活率为100%).本实验结果证实,我们获得了具有高免疫活性的HSV—1特异转移因子。     

HSP60口服耐受对小鼠脾细胞中调节性T细胞的影响

HSP60特异性免疫反应在许多炎症反应中起重要作用.近来口服耐受(oral tolerance)已成功用于许多自身免疫性疾病的实验研究和临床治疗.但能否通过口服诱导特异性调节性T细胞(Tr),目前国内外研究甚少.本研究通过HSP60口服耐受,观察其对小鼠脾细胞中Tr细胞的影响.     

表达ESAT-6-gpi和IL-21的B16F10瘤苗免疫鼠伴发自身免疫损伤初探

初步探讨B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗诱导抗肿瘤免疫的同时伴发自身免疫相关毒性作用。采用Western blot方法检测B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗免疫小鼠自身抗体产生情况;采用免疫荧光技术检测瘤苗免疫小鼠血清对正常小鼠眼、睾丸、皮肤、肝及肾组织冰冻切片的反应;瘤苗免疫小鼠的生殖功能检测。结果显示B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗免疫会引起部分C57BL/6小鼠发生鼠毛色素脱失现象,其免疫血清可同皮肤、睾丸等组织正常成分发生抗原抗体反应,瘤苗免疫过的雌雄小鼠合笼后能够正常繁育子代小鼠。实验说明B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗诱发小鼠产生抗肿瘤免疫反应的同时,部分受试鼠可伴发自身免疫损伤,但对机体并未产生危及生命的严重病理反应。本实验为全面评估B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗应用价值奠定了基础。     

含H5N1-HA基因重组腺病毒疫苗的构建及其诱导免疫应答的初步探讨

目的 构建包含H5N1-HA基因的重组腺病毒疫苗并探讨其免疫效果.方法 用Admax系统构建包含H5N1-HA基因的重组腺病毒疫苗,并用PCR、Western-Blot等方法对重组病毒疫苗进行鉴定;疫苗免疫小鼠后,通过HI实验和ELISPOT实验检测其体液免疫和细胞免疫反应,评价其免疫效果.结果 成功得到了含有H5N1-HA基因的重组腺病毒疫苗;基因表达鉴定表明,HA基因能够在细胞中进行表达;血凝抑制实验结果显示小鼠产生的针对HA抗体滴度在1:320和1:640之间;ELISPOT结果显示实验组和对照组(PBS)相比斑点数量差异有统计学意义(P<0.05),以上免疫结果表明重组腺病毒载体疫苗可以诱导小鼠产生良好的特异性体液和细胞免疫反应.结论 含H5NA-HA的重组腺病毒疫苗可以诱导小鼠产生良好的免疫反应,为研制人禽流感疫苗打下基础.     

静脉免疫树突状细胞疫苗激活抗小鼠黑色素瘤CTL反应机制初探

建立体外诱导分化骨髓来源树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗激活抗小鼠黑色素瘤CTL反应模型。体外分化小鼠骨髓来源树突状细胞并荷载鸡卵清白蛋白OVA257-264,静脉免疫小鼠1周之后接种表达OVA全长蛋白的小鼠黑色素瘤B16,观察成瘤情况并评价免疫效果。结果,体外分化小鼠骨髓来源树突状细胞并荷载OVA257-264肽段,表面表达肽段-主要组织相容性复合物(pMHC)作为第一信号以及共刺激分子CD80以及CD40;体内成瘤实验显示,静脉注射荷载OVA257-264能够抵抗B16-OVA的成瘤。DC疫苗静脉免疫后主要分布于肺部和脾脏。本研究通过静脉注射荷载OVA257-264肽段成熟DC,成功的诱导小鼠CTL免疫反应,抵抗黑色素瘤的成瘤。     

含密码子优化型HPV16 L1基因重组腺病毒的构建及其免疫效果的研究

目的 构建含密码子优化型HPV16L1基因的重组腺病毒,对其经不同接种途径所诱导的系统性及黏膜免疫效果进行研究.方法 使用Admax系统包装重组腺病毒,纯化的腺病毒以不同方式免疫C57BL/6小鼠,间接ELISA及体外中和实验检测免疫小鼠血清及阴道分泌物中的特异性抗体.结果 重组腺病毒滴鼻接种可同时诱导特异性的系统性及黏膜免疫反应,重组腺病毒肌注免疫仅能诱导系统性免疫反应,而阴道黏膜接种不能有效诱导系统性及黏膜免疫反应.结论 成功构建了含密码子优化型HPV 16 L1基因的重组腺病毒,重组腺病毒肌注可诱导高滴度的血清中和抗体,滴鼻接种可同时诱导特异性的系统性及黏膜免疫反应.     

同种特异T细胞疫苗诱导移植物存活期延长的研究——Ⅱ.抗独特型T细胞免疫反应

同种特异T细胞疫苗(TCV)免疫诱导出同种免疫反应低下,同种移植物存活时间显著延长,推测其作用机制可能是同种特异TCV免疫诱导机体抗同种特异TCV(独特型)T细胞的上调.实验证实了“抗TCV-T细胞”的存在.以同种特异TCV免疫动物可诱导出对TCV特异的细胞增殖反应.TCV免疫小鼠淋巴细胞能特异杀伤TCV细胞.将TCV免疫小鼠脾细胞作为调节细胞,观察到它能显著地抑制同种MLR,表明它是一“抑制性T细胞”.这些结果提示,同种特异TCV免疫可诱导机体免疫网络中独特型-抗独特型的上调,产生了同种反应T细胞的独特型T细胞,从而保护同种移植物免受同种反应性T细胞的攻击使同种移植物存活时间显著延长.     

慢性粘膜免疫应答诱导的小鼠自身免疫综合征

空弯菌(CJ-S131)慢性感染小鼠具有SLE样自身免疫综合征。本文进一步用甲醛化空弯菌(CJ-S131菌苗)经口免疫BALB/c小鼠,每周两次,持续14周.模拟慢性感染时的慢性肠道粘膜免疫应答.发现免疫小鼠也具有SLE样自身免疫综合征,且较该菌慢性感染小鼠更显著。主要表现有:(1)全身免疫系统的淋巴组织显著增生;(2)B淋巴细胞多克隆激活;(3)多种自身抗体(包括抗ds-DNA.ss-DNA和组蛋白抗体)显著升高;(4)免疫复合物性肾小球肾炎;(5)多器官性(如肝、肠等组织)慢性炎症;(6)血管炎和血管周围炎。在体外自身免疫应答诱导实验中,免疫小鼠的脾细胞培养上清中,免疫球蛋白(总Ig)和抗DNA抗体显著高于非免疫小鼠。上述结果证实.空肠弯菌慢性感染所致的自身免疫综合征.和该菌抗原诱导的慢性肠道粘膜免疫应答有关。本实验为研究感染和自身免疫的关系提供了实用的动物模型。     

氯喹可加重Con A诱导的自身免疫性肝损伤

氯喹(chloroquine,CQ)可抑制免疫反应,偶用于类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病的治疗,但氯喹对自身免疫性肝炎的影响目前尚不明确。本研究拟探讨CQ对小鼠自身免疫性肝损伤的影响及可能机制。小鼠尾静脉注射Con A建立小鼠肝损伤模型,1h后,腹腔注射CQ或等体积PBS。观察小鼠生存状况,在不同时间点收集血清和肝组织,采用赖氏法检测血清谷丙转氨酶(GPT)水平;ELISA方法检测血清细胞因子IFN-γ及TNF-α含量;HE染色观察肝脏病理损伤情况;免疫印迹检测小鼠肝脏自噬水平指标LC3-Ⅱ和P62。结果显示,Con A+CQ组小鼠血清中GPT水平显著高于Con A组,且病理切片染色显示Con A+CQ组肝脏损伤较Con A组更严重;Con A+CQ注射组小鼠的存活率明显低于仅注射Con A组(P0.0001);Con A+CQ组小鼠血清中炎性细胞因子IFN-γ和TNF-α的分泌高于Con A组;CQ可抑制Con A刺激诱导的小鼠肝脏自噬水平升高。氯喹可加重Con A诱导的自身免疫性肝损伤,其机制可能是通过抑制肝脏自噬水平从而加剧小鼠肝脏损伤。     

旋毛虫对三硝基苯磺酸和噁唑酮诱导肠炎小鼠结肠中Th1/Th2类细胞因子表达的影响

目的 研究旋毛虫(T. spiralis)对三硝基苯磺酸(TNBS)和噁唑酮(OXZ)诱导的实验性肠炎小鼠结肠中Th1/Th2类细胞因子表达的影响.方法 雌性BALB/c小鼠,随机分为50%乙醇对照组、T. spiralis应用组、TNBS(OXZ)诱导肠炎模型组、预先感染T. spiralis后诱导TNBS(OXZ)模型组(每组小鼠取材时保证6只以上).对各组小鼠肠黏膜固有层单个核细胞(LPMC)进行分离培养,采用ELISA方法观察感染T.spiralis和未感染T.spiralis小鼠于TNBS或OXZ诱导肠炎后3 d和7 d结肠中Th1/Th2类细胞因子蛋白的表达变化,包括IFN-γ、IL-12、IL-4、IL-10的表达量分析.结果 预先感染T. spiralis后诱导TNBS模型组小鼠在造模后3 d及7 d肠黏膜LPMC产生IFN-γ的水平均低于模型组(P＜0.05),而IL-4、IL-10的表达高于模型组(P＜0.05).预先感染T. spiralis后诱导TNBS模型组小鼠在造模后3 d肠黏膜LPMC产生IL-12的水平低于模型组(P＜0.05),第7天与模型组相比未见明显差异(P＞0.05).预先感染T. spiralis后诱导OXZ模型组小鼠在造模后3 d及7 d肠黏膜LPMC产生IFN-γ、IL-4及IL-10的水平均高于单纯造模组(P＜0.05).结论 T. spiralis对TNBS诱导的肠炎模型小鼠肠道局部免疫作用机制可能是通过诱导Th2型免疫反应及Tr1型细胞因子而抑制结肠炎小鼠Th1型过度免疫应答而实现的.在T.spiralis对OXZ模型小鼠的干预性研究中,没有按理论所设想的感染T.spiralis所产生的Th2型免疫反应会对OXZ诱导的Th2型炎症反应起叠加作用而加重病情.这提示我们,需要进一步探讨T.spiralis对拥有Th2型免疫应答的OXZ模型的具体作用机制.     

空肠弯曲菌与可提取核抗原的分子交叉反应

取空肠弯曲菌（ＣＪ－Ｓ１３１）免疫的Ｂａｌｂ／ｃ小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞ＳＰ２／Ｏ融合，制备出４种能与空肠弯曲菌和可提取核抗原（ＥＮＡ）起反应的单抗。以Ｈｅｐ－２细胞作基质的免疫荧光染色表明，４种单抗均呈阳性结果，证实为抗核抗体。当单抗腹水被空肠弯曲菌菌体吸收后，其抗ＥＮＡ的活性明显降低，证明这４种单抗与空肠弯曲菌ＣＪ－Ｓ１３１和ＥＮＡ存在交叉反应性。免疫印渍试验表明，４种单抗均与空肠弯曲菌ＣＪ－Ｓ１３１的４３ｋＤ外膜蛋白反应。这一结果提示：空肠弯曲菌ＣＪ－Ｓ１３１的４３ｋＤ外膜蛋白与ＥＮＡ之间可能存在相似的分子构象，这为自身免疫病发机制的分子模拟假说提供了实验的依据。     

空肠弯曲菌慢性感染诱致自身免疫反应的机理初探

用空肠弯曲菌CJ—S131株感染昆明种小鼠3个月,观察到:(1)感染鼠血清中,出现高滴度的抗ds—DNA和ss—DNA抗体;(2)Con A诱导的抑制细胞功能降低和TH/Ts细胞比值增加;(3)PFC形成和LPS诱致的淋巴细胞转化作用增强:(4)DTH和Con A及PHA诱致的淋巴细胞转化作用增强。提示,CJ—S131感染小鼠使其T_S细胞功能降低,导致T_H细胞功能偏亢,B细胞功能亢进,这可能与自身免疫反应的产生有关。     

T细胞接种对SLE样小鼠防治作用的探讨

本文在空肠弯曲菌（CJ-S131）免疫诱导的小鬼SLE样综合征模型上,观察了T细胞接种（T CellVaccination,TCV）的预防和治疗作用。用于 TCV的细胞为 CJ-S131预致敏的同系小鼠 T细胞。结果显示TCV可明显地抑制CJ-S131诱导的特异性迟发型超敏反应,相反却显著地增强抗dsDNA抗体和抗外膜蛋白抗体生成。因此TCV对SLE样小鼠没有预防及治疗作用。本文对此现象进行了讨论。     

影响空弯菌抗原诱导自身免疫应答的因素

利用慢性粘膜免疫应答小鼠模型,研究在空弯菌抗原(CJ-S131菌苗)诱导下,不同品系、性别的小鼠的自身免疫应答。经肠道,持续用CJ-S131菌苗免疫16周后,用ELISA或CELISA检测小鼠体内的抗ds-DNA,ss-DNA,组蛋白,ENA和胸腺细胞抗体。在五个品系小鼠中,四个品系小鼠(BALB/C,ICR,KM和SMMC/B)均有一种或多种被测的自身抗体升高。其中SMMC/B和KM小鼠的EI值较高,BALB/C和ICR小鼠次之。C57BL/6和对照组无显著性差异,提示对空弯菌抗原诱导的自身免疫应答不敏感。在遗传背景的制约下,性别也影响自身抗体的产生,有三种可能:(1)自身抗体升高主要见于雌性小鼠,如雌性KM小鼠被测的各种自身抗体均有升高;(2)雌性,雄性小鼠均有一种以上自身抗体升高,如SMMC/B和BALB/C小鼠;(3)雌、雄性小鼠的自身抗体均无升高,如C 57BL/6。本文结果表明,空弯菌苗诱导的自身抗体种类和水平,受小鼠的遗传背景和性别两个因素的相互制约和影响。     

褪黑素对系统性红斑狼疮样小鼠的影响

为了观察褪黑素 (MT )对CJ S13 1所致的SLE样小鼠改变的影响并探讨其作用机制。采用空肠弯曲菌CJ S13 1和CFA混合免疫动物 ,诱导SLE样小鼠改变。结果表明MT 0 0 1、 0 10、 1 0mg/kg/d× 2 8d ,ig能部分或完全拮抗血清抗ssDNA和组蛋白IgG型自身抗体水平的升高 ,抑制ConA及LPS诱导的淋巴细胞增殖反应的增强 ,降低动物尿蛋白水平 ,减轻肾组织病变程度。提示一定剂量的MT对SLE样小鼠改变具有一定的保护作用。     

甲醛化空肠弯曲菌菌苗诱导肠道免疫应答机理的初步研究

甲醛化空弯菌CJ-S131菌苗经口免疫小鼠,有效地诱导了肠道粘膜的特异性免疫应答。应用改良的免疫荧光技术,可检测到肠粘膜表面覆有一层空弯菌特异性的抗体及固有膜内的许多特异性抗体形成细胞(SACC)。此外,在空肠和回肠粘膜上皮细胞间有CJ-S131特异性荧光细胞;Peyer氏小结生发中心内可见大小不等,处于不同发育阶段的SACC;结肠固有层内SACC成群出现。用活菌攻击免疫小鼠,其各肠段的病理学检查可见以单核细胞、淋巴细胞和浆细胞浸润为主的炎症反应。     

空肠弯曲菌67KD 外膜蛋白的提取及其对淋巴细胞的多克隆激活作用

本室曾建立空肠弯曲菌诱导自身免疫综合征小鼠模型.本文用盐析法及离子交换层析法从空肠弯曲菌(CJ-S131)中提取了67KD 的外膜蛋白.免疫印迹法证实该蛋白为空肠弯曲菌的主要抗原成份之一,具有较强的免疫原性;体外对小鼠脾淋巴细胞具有明显的多克隆激活作用.本实验为从分子水平研究感染与自身免疫的关系提供了重要的物质基础和新的实验依据.     

应用免疫荧光搭桥法检测小鼠肠粘膜内特异性抗体形成细胞

肠粘膜固有膜内特异性抗体形成细胞(ACC)的检测是研究肠道粘膜免疫应答机理的重要指标之一,组织免疫荧光技术是检测粘膜固有膜内特异性ACC的主要方法。目前,在粘膜免疫应答机理的研究中,主要     

空弯菌抗原诱导的自身抗体产生动力学

用CJ-S131菌苗经口免疫小鼠16周,观察免疫小鼠体内的自身抗体(抗ds-DNA,ss-DNA,组蛋白和ENA抗体)产生动力学。在CJ-S131菌苗连续免疫的16周内,免疫小鼠有两个自身抗体产生峰。免疫后第6周,出现第一峰,抗组蛋白和ENA抗体的阳性率高于抗ds-DNA和ss-DNA抗体;在第16周,抗ds-DNA和ss-DNA抗体的阳性率高于抗组蛋白和ENA抗体。在正常小鼠体内,存在“自然”抗核酸抗体(抗ds-DNA和ss-DNA抗体),随年龄而增长,但个体差异较大;而抗核蛋白抗体(抗组蛋白和ENA抗体)始终测不出。上述结果提示,抗组蛋白抗体和抗ENA抗体在自身免疫病的发病机理和早期诊断中,具有潜在意义,值得进一步研究。