Keap1-Nrf2信号通路相关表观遗传调控的研究进展

Kelch样ECH联合蛋白1-核转录因子E2相关因子2(Keap1-Nrf2)信号通路是细胞抵御氧化损伤和电子损伤的重要调控途径,激活Nrf2的表达被认为可以预防慢性病。机体内除了基因突变对Keap1-Nrf2信号通路有调控作用以外,表观遗传被认为是另一种重要的调控机制。本文综述了表观遗传(包括DNA甲基化、组蛋白修饰和微RNA)对Keap1-Nrf2信号通路的调控作用,为Keap1-Nrf2信号通路相关的表观遗传调控的深入研究提供参考。     

煤焦沥青提取物对BEAS-2B细胞Keap1-Nrf2/ARE通路的作用机制

目的研究煤焦沥青烟提取物对BEAS-2B细胞Nrf2、Keap1、NQO1的基因及其蛋白表达的影响,以探讨煤焦沥青烟提取物在造成细胞氧化损伤过程中Nrf2-Keap1/ARE通路的作用机制。方法设立未处理对照组、0.1%DMSO溶剂对照组、5μg/ml B(a)P阳性对照组、6μmol/L全反式维甲酸组、6μmol/L全反式维甲酸预处理0.5 h后5μg/ml CTP染毒组和CTP染毒组(1、5、10和20μg/ml),染毒3、6、12和24 h后提取总RNA;RT-PCR检测Nrf2、Keap1、NQO1 mRNA的相对表达量;Western blot测定Nrf2、Keap1、NQO1蛋白的相对表达量。结果不同CTP染毒剂量作用后各个基因mRNA相对表达量差异无统计学意义(P0.05),而不同时间点相对表达量差异有统计学意义(P0.05)。Western blot结果显示,随着CTP烟提取物染毒浓度的增加,Keap1蛋白无明显变化,NQO1蛋白表达量逐渐上升;Nrf2蛋白在5μg/ml染毒浓度时表达最高,在5μg/ml CTP染毒浓度作用下,BEAS-2B细胞Nrf2蛋白表达量随时间逐渐升高,在染毒6 h后达到最高,之后表达量又呈下降趋势。结论煤焦沥青烟提取物作用于BEAS-2B细胞后,代谢酶NQO1表达上调,推测Keap1-Nrf2/ARE通路可能通过上调细胞保护性基因NQO1的表达而对抗煤焦沥青毒性作用,降低细胞氧化损伤。     

穿心莲内酯对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用

目的探讨穿心莲内酯对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用及其作用机制。方法采用噻唑蓝比色(MTT)法分析穿心莲内酯对RAW264.7细胞活力的影响。通过脂多糖处理RAW264.7细胞24 h建立细胞炎症模型,造模前1 h用穿心莲内酯2.5、5、10、20μmol/L预处理。荧光定量PCR法检测RAW264.7细胞内相关抗氧化应激酶基因和i NOS水平。穿心莲内酯单独处理RAW264.7细胞24 h,Western blotting法检测Keap1/Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白和Keap1、Nrf2、HO-1蛋白水平。免疫荧光检测转录因子Nrf2在胞质及核内的分布情况。结果与对照组比较,穿心莲内酯剂量相关性地抑制RAW264.7细胞活力,差异具有统计学意义(P0.05、0.01、0.001)。穿心莲内酯显著抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞的i NOS水平(P0.001),增加相关抗氧化酶基因HO-1、NQO1 m RNA水平。穿心莲内酯抑制Keap1表达,增加Nrf2和HO-1蛋白水平的表达。结论穿心莲内酯可抑制脂多糖诱导的炎症反应,其作用机制可能与激活Keap1/Nrf2/HO-1信号通路从而调控抗氧化酶HO-1、NQO1 m RNA表达水平相关。     

转录因子Nrf2的神经保护作用及其机制

NF-E2相关因子2(Nrf2),感受体内反应活性氧(Reactive oxygen species,ROS)变化后,与体内的锚定蛋白Keap1解聚,发生核转位并调控下游多种抗氧化应激蛋白,解毒酶及转运体基因的表达,参与抗氧化应激生理及病理过程.目前,许多研究发现,Nrf2转录调控的下游靶基因可以对抗由脑中风氧化应激引起的神经系统病变,阿尔茨海默病(Alzheimer's disease),帕金森病(Parkinson's disease),侧索硬化(Amyotrophic lateral sclerosis,ALS).本文对近年来Nrf2在神经保护方面的作用及其机制,以及Nrf2作为药物治疗靶点治疗神经退行性病变的最新研究成果进行总结.     

番茄红素调节Keap1/Nrf2/ARE信号通路对精神分裂大鼠认知障碍和氧化应激反应的影响

目的 探究番茄红素调控Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1（Keap1）/核因子E2相关因子2（Nrf2）/抗氧化反应元件（ARE）通路,影响精神分裂症大鼠的氧化应激反应和认知功能。方法 构建精神分裂症大鼠模型,将大鼠随机分为对照组、氯丙嗪组、模型组以及番茄红素高、低剂量组和番茄红素+Nrf2抑制剂组,每组各10例。Morris水迷宫实验检测各组大鼠认知功能;Tunel染色观察并计算各组大鼠海马组织中神经元凋亡率;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清中过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）水平;Western blotting法检测各组大鼠海马组织中Keap1、Nrf2和ARE下游抗氧化蛋白HO-1的表达水平。结果 与模型组相比,番茄红素组大鼠水迷宫实验中逃避潜伏期明显缩短（2～5d）,海马组织细胞凋亡率显著降低,血清CAT、GSH-Px、SOD水平和海马组织Keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达量显著升高（P<0.05）;与番茄红素高剂量组相比,番茄红素低剂量组、番茄红素+Nrf2抑制剂组大鼠水迷宫实验中逃避潜伏期明显延长（2～5d）,海马组织细胞凋亡率显著升高,血清CAT、GSH-Px、SOD水平和海马组织Keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达量显著降低（P<0.05）。结论 番茄红素可通过调控Keap1/Nrf2/ARE通路,促进Keap1、Nrf2、HO-1的表达,缓解氧化应激,改善认知功能,从而缓解精神分裂,改善病情。     

布比卡因对发育期大鼠认知功能和海马神经元毒性的影响

目的 研究布比卡因(Bupivacaine,BPV)对发育期大鼠认知功能和海马神经元毒性的影响与其调节Kelch样相关蛋白1/核因子2相关因子/血红素加氧酶(Keap1/Nrf2/HO-1)信号通路的关系.方法 选取SPF级雄性SD大鼠27只,用随机数字表法将其分为3组:正常组、布比卡因组、布比卡因+通路抑制剂(鸦胆子...     

茯苓酸调节Nrf2/Keap1/ARE信号通路改善脂多糖诱导肺泡上皮细胞氧化应激损伤研究

摘要：目的:研究茯苓酸（PA）对脂多糖（LPS）诱导的人肺泡上皮细胞氧化应激损伤的影响,以及核因子红细胞2相关因子2/Kelch样ECH关联蛋白1/抗氧化反应元件（Nrf2/Keap1/ARE）信号通路在此过程中的作用。方法:培养人肺泡上皮细胞HPAEpiC,使用CCK-8法筛选适合的PA处理浓度。将HPAEpiC细胞分为Control组、LPS组、LPS+PA组、LPS+PA+sh-NC组和LPS+PA+sh-Nrf2组。TUNEL染色法检测各组HPAEpiC细胞凋亡情况;检测各组HPAEpiC细胞中活性氧（ROS）的产生、丙二醛（MDA）水平以及总超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性;Western blot检测各组HPAEpiC细胞中p53、B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白（Bax）、Nrf2、Keap1和血红素氧化酶1（HO-1）蛋白表达情况。结果:根据CCK-8结果选用4μmol·L-1的PA用于后续研究。LPS诱导后HPAEpiC细胞中TUNEL阳性细胞率与p53和Bax蛋白水平均升高;ROS的产生、MDA水平均增高,SOD和GSH-Px活性降低;Nrf2、HO-1蛋白质水平减少,Keap1蛋白质水平增加（P＜0.05）。使用PA处理可以减轻LPS诱导对以上指标的影响（P＜0.05）。敲低Nrf2可部分逆转PA处理对LPS诱导的HPAEpiC细胞的影响（P＜0.05）。结论:PA可抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞氧化应激损伤和凋亡反应,其机制可能与激活Nrf2/Keap1/ARE信号通路有关。     

核因子2相关因子2激动剂dh404对异氟醚诱导认知功能障碍大鼠脑海马组织的影响

目的 探讨核因子2相关因子2(Nrf2)激动剂激活Nrf2信号通路后对异氟醚诱导认知功能障碍大鼠脑海马组织的影响。方法 该研究起止时间为2018年12月至2019年8月。选择清洁级SD雄性大鼠24只，按照随机数字表法分为三组：对照组、异氟醚组、Nrf2激动剂dh404+异氟醚组（dh404组），每组8只。dh404组在吸入异氟醚前30 min腹腔注射Nrf2激动剂dh404(1.5 mg/kg)，对照组和异氟醚组注射等量的生理盐水。麻醉结束后24 h后各组大鼠进行Morris水迷宫测试；测试结束后立即处死大鼠，取脑海马组织。采用免疫组织化学法检测各组大鼠脑海马组织Nrf2表达情况；采用蛋白质印迹法检测各组大鼠脑组织中血氧合酶1(HO-1)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)的蛋白表达；采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各组大鼠Nrf2、HO-1、Keap1的mRNA表达水平；采用TBA法检测丙二醛；采用WST-1法检测超氧化物歧化酶（SOD）；采用分光光度法检测谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的表达水平。结果 与对照组相比，异氟醚组大鼠逃避潜伏期长，...     

Nrf2/Keap1/ARE信号通路与难治性呼吸系统疾病研究进展

Nrf2/Keap1/ARE是重要的抗氧化信号通路,对维持体内抗氧化物与过氧化物平衡有重要作用。氧化应激发生时,Nrf2/Keap1/ARE信号通路被激活,调控下游抗氧化蛋白表达,减轻氧化应激对机体的损伤并减弱氧化应激的程度。近年来的研究发现,Nrf2/Keap1/ARE信号通路与肺纤维化、肺癌、慢性阻塞性肺病等难治性呼吸系统疾病的发生发展有密切联系,该通路可能作为治疗这类疾病的潜在靶点。该文就Nrf2/Keap1/ARE信号通路在难治性呼吸系统疾病中的作用进行综述,进一步了解其在难治性呼吸系统疾病中的作用机制,为这类疾病发病机制和治疗方案的研究提供可靠的参考。     

磷霉素对万古霉素致肾损伤模型大鼠Keap1-Nrf2/ARE通路的影响

目的 探讨磷霉素对万古霉素致肾损伤模型大鼠的保护作用及其机制。方法 SD大鼠60只,随机分为模型对照组、正常对照组、磷霉素组和万古霉素联合磷霉素小、中、大剂量组(联合-L、联合-M、联合-H组),每组10只。正常对照组给予等剂量0.9%氯化钠注射液,模型对照组给予万古霉素0.2 g·kg^-1,磷霉素组给予磷霉素0.25 g·kg^-1,联合-L组、联合-M组、联合-H组分别给予磷霉素0.125,0.25,0.5 g·kg^-1,30 min后再给予万古霉素0.2 g·kg^-1,均腹腔注射,连续21 d。酶联免疫吸附实验(ELISA)测定大鼠尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、肾损伤因子1(KIM-1)含量,考马斯亮蓝法测定24 h尿蛋白,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾组织Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、核因子E2相关因子(Nrf2)、抗氧化反应元件(ARE)信号通路Nrf2、Keap1及下游靶蛋白谷胱甘肽过氧化物酶-1(GPX-1)mRNA表达。结果 与正常对照组...