基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路研究黄连素对小鼠巨噬细胞极化的干预作用

目的:基于Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子κB(NF-κB)信号通路研究黄连素对小鼠巨噬细胞极化的影响。方法:以小鼠巨噬细胞RAW264.7为对象,以阿托伐他汀钙为阳性对照,经脂多糖(LPS)诱导以复制炎症细胞模型,采用酶联免疫吸附测定法检测低、中、高剂量黄连素(5、10、20μmol/L)作用24 h后细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、NF-κB含量,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测细胞中TLR4、MyD88 mRNA的表达水平,采用Western blotting法检测细胞中TLR4、MyD88、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、CD206蛋白的表达水平。结果:与空白对照组比较,LPS诱导组细胞培养液中TNF-α、IL-6、NF-κB含量,细胞中TLR4、MyD88 mRNA的相对表达量以及TLR4、MyD88、iNOS蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05)。与LPS诱导组比较,阿托伐他汀钙组和黄连素中、高剂量组TNF-α、IL-6含量,TRL4、MyD88 mRNA及其蛋白的相对表达量以及各给药组NF-κB含量和i NOS蛋白的相对表达量均显著降低,且黄连素高剂量组NF-κB含量显著低于阿托伐他汀钙组(P<0.05);阿托伐他汀钙组和黄连素高剂量组CD206蛋白的相对表达量均显著升高,且黄连素高剂量组CD206蛋白的相对表达量显著高于阿托伐他汀钙组(P<0.05)。结论:不同剂量的黄连素均可不同程度地干预小鼠巨噬细胞极化,其机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。     

健脾清化中药复方对大鼠慢性萎缩性胃炎TLR4-MyD88依赖途径蛋白表达及TNF-α的影响

目的观察健脾清化中药复方对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠TLR4及下游My D88依赖途径相关蛋白表达及炎性因子TNF-α的影响,探讨健脾清化中药复方治疗CAG的分子机制。方法将53只Wistar大鼠随机分为空白组8只和CAG造模组45只,以"氨水+去氧胆酸钠+乙醇"法复制CAG大鼠模型。确认造模成功后,将造模组余下40只CAG大鼠随机分为模型组、维酶素组、中药低、中、高剂量组,各8只。各组给予相应药物灌胃,连续30 d。HE染色观察病理组织学改变,Western blot法检测TLR4、My D88、NF-κB、COX-2的蛋白表达量,ELISA法检测血清中TNF-α含量。结果模型组大鼠TLR4、My D88、NF-κB、COX-2蛋白表达水平明显增高(P<0.01),血清TNF-α含量明显增高(P<0.01)。与模型组比较,健脾清化中药复方低、中、高剂量组胃黏膜病变明显改善,TLR4、My D88、NF-κB、COX-2蛋白表达水平均明显下降(P<0.05或P<0.01),血清TNF-α含量降低(P<0.05或P<0.01)。结论健脾清化中药复方可有效改善CAG大鼠胃黏膜组织病理改变,其治疗机制可能与降低组织中TLR4-My D88依赖途径中相关蛋白表达,以及抑制炎症因子的表达有关。     

豆蔻明对TLR4/MyD88/NF-κB/iNOS信号通路的调节作用

目的探讨豆蔻明(cardamonin,CDN)对RAW264.7小鼠巨噬细胞Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)/My D88/NF-κB/i NOS信号通路的调节作用。方法利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理RAW264.7细胞建立炎性细胞模型并分组:正常对照组(Vehicle组)、模型组(LPS组)和药物处理组(LPS+CDN组);CCK-8方法检测细胞活力,Griess法检测细胞培养上清一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,RT-PCR检测诱导型NO合成酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)、环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-ɑ、白介素(interleukin,IL)-1β和IL-6的mRNA表达,Western blot检测i NOS、TLR4、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)、核因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)phosphorylated(p)-p65、inhibitorκBα(IκBα)和p-IκBα的蛋白表达。结果1~50μmol·L~(-1)豆蔻明对RAW264.7细胞没有毒性,但可以剂量依赖性抑制LPS诱导的NO分泌和i NOS、COX-2、MCP-1、TNF-α、IL-1β及IL-6的mRNA表达,25μmol·L-1豆蔻明可下调LPS诱导的i NOS、TLR4、My D88、p-NF-κB p65和p-IκBα蛋白表达及抑制IκBα降解。结论豆蔻明通过抑制TLR4/My D88/NF-κB/i NOS信号通路从而抑制NO的产生。     

芍药苷对AGEs刺激下RAW264.7巨噬细胞TLR2/4通路的影响

目的探讨芍药苷(paeoniflorin,PF)对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)刺激下RAW264.7巨噬细胞TLR2/4通路的影响。方法 AGEs在不同时间点刺激RAW264.7巨噬细胞,使用不同浓度的PF预先孵育细胞干预刺激,以优化实验条件;后将巨噬细胞随机分为对照组(DMEM培养基)、牛血清白蛋白(BSA)组(200 mg·L~(-1)BSA)、AGEs组(200 mg·L~(-1)AGEs)、PF组(200 mg·L~(-1)AGEs+10~(-5)mol·L-1PF)及TLR2/4抑制剂组(200 mg·L~(-1)AGEs+30 mg·L~(-1)人氧化磷脂)。Western blot检测各组TLR2、TLR4、髓样分化因子(My D88)、p-IRAK1、β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)、干扰素调节因子3(IRF3)、p-IRF3、NF-κB p-p65、NF-κB p65、iNOS、TNF-α、IL-1β和MCP-1蛋白表达,RT-PCR检测各组TLR2和TLR4mRNA表达,ELISA法测定各组细胞上清液中TNF-α、IL-1β及MCP-1水平。结果与对照组相比,AGEs能明显上调TLR2、TLR4、My D88、p-IRAK1、TRIF、IRF3、p-IRF3、NF-κB pp65、NF-κB p65、i NOS、TNF-α、IL-1β、MCP-1蛋白表达(P<0.01)及TLR2、TLR4 mRNA表达(P<0.01),增加细胞上清液中TNF-α、IL-1β、MCP-1水平(P<0.01);PF和TLR2/4抑制剂能明显下调AGEs诱导产生的效应(P<0.01)。结论 PF可通过抑制巨噬细胞TLR2/4信号通路而发挥抗炎作用,这可能为糖尿病肾病的治疗提供新的理论基础。     

麻杏石甘汤对流感病毒肺部感染小鼠肺组织TLR2/4-MyD88信号通路蛋白表达的效应机制

目的：探讨麻杏石甘汤对流感病毒肺部感染模型肺组织TLR2/4-MyD88信号通路蛋白表达的效应机制。方法：选取80只SPF级Balb/c小鼠为研究对象，根据随机数字表法分为对照组、模型组、奥司他韦组、麻杏石甘汤组，每组20只。比较各组肺组织TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB水平。结果：给药后3 d，与对照组相比，模型组TLR2、TLR4、NF-κB水平升高；与模型组相比，给药组TLR2水平降低，奥司他韦组和麻杏石甘汤组TLR4水平降低，麻杏石甘汤组NF-κB水平降低（P<0.05）。给药后7 d，与对照组相比，模型组TLR4、MyD88水平升高；与模型组相比，麻杏石甘汤组TLR4、MyD88水平降低，奥司他韦组MyD88水平降低（P<0.05）。结论：麻杏石甘汤通过调节TLR2/4-MyD88信号通路蛋白表达水平起到流感病毒肺部感染抗病毒的作用。     

半夏泻心汤对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中TLRs/NF-κB通路相关因子表达的影响

目的:观察半夏泻心汤对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织中核转录因子κB p65(NF-κB p65)、NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)及Toll样受体4(TLR4)表达的影响,探讨其治疗UC的可能机制。方法:将大鼠随机分为正常组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、柳氮磺吡啶肠溶片(SASP,阳性对照,0.3 g/kg)和半夏泻心汤低、中、高剂量组(3.9、7.8、11.7 g/kg),每组8只。除正常组外,其余各组大鼠均采用三硝基苯磺酸-乙醇法复制UC模型。成模后,ig给药,每天1次,连续3周。给药结束后,检测各组大鼠结肠组织中NF-κB p65、IκB-α、TLR4 mRNA及蛋白的表达。结果:与正常组比较,其余各组大鼠结肠组织中NF-κB p65、IκB-α、TLR4 mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。与模型组比较,各给药组大鼠结肠组织中NF-κB p65、IκB-α、TLR4 mRNA及蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);半夏泻心汤具有一定的剂量依赖性,且高剂量组大鼠结肠组织中上述水平的降低程度均高于SASP组(P<0.05)。结论:半夏泻心汤可下调UC大鼠结肠组织中NF-κB p65、IκB-α及TLR4 mRNA及蛋白的表达,这可能是其治疗UC的作用机制之一。     

盐酸青藤碱对实验性结肠炎小鼠TLR4/NF-κB信号通路的影响

摘 要 目的：研究盐酸青藤碱对葡聚糖硫酸钠诱导的实验性结肠炎小鼠的治疗作用。方法: 制备实验性结肠炎小鼠模型,随机分为空白对照组、葡聚糖硫酸钠（DSS）模型对照组、柳氮磺吡啶组及青藤碱低、中、高剂量组（n=6）。空白对照组与DSS模型对照组每天给予生理盐水0.2ml,柳氮磺吡啶组（100 mg·kg-1）,青藤碱低剂量组（30 mg·kg-1）、中剂量组（90 mg·kg-1）、高剂量组（270 mg·kg-1）,连续灌胃10d。评价各组小鼠疾病活动指数（DAI）和组织学损伤评分,Western blotting检测结肠组织中Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子（Myd88）表达,免疫组织化学法检测结肠组织中核转录因子 κB（NF-κB）的表达。结果:DSS模型对照组小鼠DAI和组织损伤评分、结肠组织中TLR4、Myd88、NF-κB表达均显著高于空白对照组（P＜0.01）,柳氮磺吡啶组和青藤碱低、中、高剂量组均能降低DAI和组织损伤评分,降低结肠组织中TLR4、Myd88、NF-κB表达（P＜0.01）,且呈浓度依赖性。柳氮磺吡啶组与青藤碱中、高剂量组间差异无统计学意义（P>0.05）。结论:青藤碱能通过影响实验性结肠炎小鼠TLR4/NF-κB信号通路,降低TLR4、Myd88、NF-κB表达,发挥治疗作用。     

瑞舒伐他汀对心肌肥厚大鼠TLR4信号通路的影响

目的研究瑞舒伐他汀(rosuvastatin,RSV)对压力负荷诱导心肌肥厚大鼠心肌中toll样受体4(TLR4)及其下游核转录因子NF-κB p65、IκBα、炎症因子TNF-α表达的影响。方法采用腹主动脉缩窄大鼠模型,♂Wistar大鼠随机分为假手术组(S)、模型组(M)、RSV给药组(R,10 mg·kg~(-1)·d~(-1))每组10只。行心脏超声学检查,采用RT-PCR、Western blot、免疫组化、ELISA等方法检测心肌组织中心肌肥大基因ANP及TLR4、NF-κB p65、IκBα、TNF-α的表达。将TLR4蛋白水平分别与ANP、NF-κB p65、TNF-α水平进行相关性分析。结果 M组与S组相比,心脏体积和心肌细胞横截面直径、ANP mRNA水平均明显增加(P<0.01),伴TLR4mRNA和蛋白、NF-κB p65及TNF-α的水平明显增加及IκBα蛋白水平减少(P<0.05)。RSV抑制心肌肥厚,下调心肌组织中TLR4mRNA和蛋白、NF-κB p65及TNF-α的表达及上调IκBα蛋白水平(P<0.05)。在M组和R组,TLR4蛋白水平分别与ANP、NF-κB p65、TNF-α水平呈正相关。结论 RSV抑制心脏压力负荷诱导的心肌肥厚的作用可能与其抑制TLR4信号系统有关。     

基于TLR2/MyD88/NF-κB信号通路探讨加味少腹逐瘀汤对寒湿瘀结证子宫内膜异位症痛经小鼠腹腔炎症微环境干预作用

目的 探讨加味少腹逐瘀汤对寒湿瘀结证子宫内膜异位症痛经小鼠腹腔炎症微环境的干预机制。方法 构建动物模型后随机分组。以自主活动次数、粪便含水率、热痛潜伏期评价证候;以子宫及异位病灶大小评价疗效;HE染色比较病理变化;免疫组化检测异位组织中NF-κB的表达及其入核情况;qPCR法和Western blot测定病灶中TLR2、MyD88、NF-κB的mRNA和蛋白表达;ELISA检测TNF-α、IL-6、PGE2、E2、P。结果 与假手术组对比,模型小鼠自主活动减少,热痛潜伏期缩短,粪便含水率增加;子宫体积增大,腹腔可见明显异位灶且HE染色显示炎症浸润;免疫组化显示NF-κB表达增加;异位组织TLR2、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达增加,外周血TNF-α、IL-6、PGE2、E2增高,P下降。与模型组相比,各治疗组子宫体积减小、异位灶重量减轻、疼痛潜伏期延长;中药高剂量组小鼠自主活动次数增加、粪便含水率减少;药物干预后炎症反应改善、NF-κB表达下降;TLR2、MyD88、NF-κB的mRNA及蛋白表达降低;且外周血TNF-α、IL-6、PGE2、E2降低、P升高。结论 加味少腹...     

基于TLR4/NF-κB/IL-1β通路研究人参皂苷Rg3对缓解慢性炎症痛的作用机制

目的 研究人参皂苷Rg3缓解慢性炎症痛的作用机制。方法 采用脚掌注射完全弗氏佐剂构建慢性炎症痛小鼠模型，鞘内注射人参皂苷Rg3进行脊髓给药。采用完全随机方法分为对照组、模型组和人参皂苷Rg3组，每组10只。连续给药3 d后观察小鼠足肿胀、痛觉行为及体能变化；采用免疫印迹法检测各组小鼠脊髓组织蛋白表达量。结果 给予完全弗氏佐剂干预后，小鼠各项指标均有不同程度变化，脊髓组织星形胶质细胞标志物——神经胶质纤维酸性蛋白、白细胞介素1β(IL-1β)、细胞Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88和核因子κB(NF-κB)蛋白表达水平均增加。人参皂苷Rg3鞘内给药后，减少了小鼠自发缩足次数，提高了机械痛阈值，延长了转棒停留时间及运动距离，使神经胶质纤维酸性蛋白、IL-1β、TLR4、髓样分化因子88、NF-κB蛋白表达水平被抑制。结论 人参皂苷Rg3通过降低TLR4/NF-κB/IL-1β炎症信号缓解慢性炎症痛。     

花青素通过TLR4/NF-κB通路对脂多糖诱导的血管内皮损伤的保护作用

目的探讨花青素(PC)对脂多糖(LPS)作用下血管内皮细胞损伤的影响及作用机制。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞,脂多糖作用于人脐静脉血管内皮细胞诱导其损伤,设置空白对照组、模型组(1000 ng/ml脂多糖处理)、不同浓度(100,50,25μg/ml)花青素组。使用MTT法检测各组细胞活力;ELISA检测各组细胞培养液中NO、TNF-α和IL-6的浓度变化;特定试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH-PX)含量;DHE荧光探针检测ROS的变化;Western blot法检测各组TLR4/NF-κB蛋白表达水平。结果与空白对照组相比脂多糖损伤组能够降低HUVECs的活力,增加ROS的含量,LDH、MDA含量显著增加,SOD、GSH-PX活性显著下降,同时降低NO分泌,诱导TNF-α和IL-6分泌及增加了TLR4/NF-κB的表达(P<0.01)。不同浓度花青素和脂多糖同时作用HUVECs时,细胞活力逐渐上升,ROS含量逐渐下降,LDH、MDA含量逐渐下降,SOD、GSH-PX活性随之上升,同时NO分泌增加,TNF-α和IL-6分泌及TLR4/NF-κB蛋白表达显著下降(P<0.01)。结论花青素能够提升脂多糖作用下HUVECs活力,恢复细胞分泌功能,增强细胞抗氧化能力,减少细胞的炎性反应;花青素可能部分地通过TLR4/NF-κB通路对血管内皮细胞发挥保护作用。     

灵孢多糖通过抑制TLR4/NF-κB通路改善EAE小鼠的髓鞘脱失北大核心CSCD

目的探究灵孢多糖(ganoderma lucidum polysaccharides,GLPS)对多发性硬化(multiple sclerosis,MS)动物模型实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠的保护作用及机制。方法将C57BL/6小鼠30只随机平均分为3组:正常对照组、EAE模型组、GLPS组(5 mg·kg^(-1))。采用结核分枝杆菌和MOG35-55建立小鼠EAE模型,观察GLPS对EAE小鼠体质量及神经功能障碍评分的影响;采用固蓝染色和HE染色观察小鼠脊髓冰冻切片髓鞘组织病理情况、免疫荧光观察MBP表达变化;利用流式细胞术检测小鼠脾脏、淋巴结中IL-17、Foxp3含量;通过Western blot检测小鼠脊髓组织中TLR4/NF-κB通路蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,EAE模型组小鼠神经行为学评分升高,并且伴随体质量降低,脊髓组织大范围髓鞘脱失,呈现大量炎性细胞浸润,髓鞘标志蛋白MBP表达下调,TLR4/NF-κB通路蛋白表达水平升高。经GLPS干预后,EAE小鼠神经功能评分降低、体质量上升,髓鞘脱失改善,炎性细胞浸润减少,Foxp3的表达增加,IL-17的含量降低,TLR4/NF-κB通路蛋白表达降低。结论GLPS能够抑制MS动物模型EAE的发病进程,其作用机制可能是通过抑制TLR4/NF-κB炎症通路改善髓鞘脱失,从而发挥对中枢神经系统的保护作用。     

基于TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路研究三叶香茶菜含药血清对枯否细胞活化的影响

目的 研究三叶香茶菜含药血清(isodon ternifolius-containing serum，ITS)通过Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)诱导的大鼠原代肝枯否细胞(Kupffer cell，KC)活化的影响。方法 分离培养大鼠原代KC，将LPS诱导的大鼠原代KC分为空白对照组、模型对照组、空白血清组、阳性对照组(秋水仙碱含药血清组)、ITS组、TLR4阻断剂组、TLR4阻断剂+ITS组。MTT法检测不同浓度ITS对KC增殖活性的影响；ELISA法检测KC细胞上清液白介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量；荧光定量聚合应(PCR)、Western blotting和免疫荧光检测KC中TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路中TLR4、核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、半胱肽氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、NLRP3 mRNA和TLR4、IκBα、磷酸化IκBα(p-IκBα)、Caspase-1、NLRP3、NF-κBp65蛋白表达情况。结果 与模型对照组相比，各药物组KC上清液中IL-1β、IL-18、TNF-α和IL-6含量，以及细胞中TLR4、IκBα、Caspase-1、NLRP3 mRNA和TLR4、IκBα、p-IκBα、Caspase-1、NLRP3、NF-κBp65蛋白的表达均下调或降低(P<0.05或P<0.01)；与TLR4阻断剂组比较，TLR4阻断剂+ITS组上述多数指标的改善更加明显。结论 三叶香茶菜可能通过下调TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路抑制KC活化，减少炎性因子的表达和释放，从而减轻肝脏炎症损伤。     

丹参酮ⅡA磺酸钠联合阿托伐他汀对冠心病患者外周血单个核细胞TLR4、MyD88、NF-κB表达的影响

目的：观察冠心病患者外周血单个核细胞 TLR4、MyD88、NF-κB 的表达,分析丹参酮ⅡA 磺酸钠联合阿托伐他汀对其表达的影响,以 TLR4炎症信号通路为靶点探讨丹参酮ⅡA 磺酸钠治疗冠心病的可能机制。方法选取诊治的冠心病患者160例,同期进行健康体检的正常人100例作为对照。采用 Real time-PCR 和 Western blot 测定外周血单个核细胞 TLR4、MyD88、NF-κB mRNA 和蛋白表达,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）测定血清高敏 C-反应蛋白（hs-CRP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。160例冠心病患者随机分为观察 A 组和观察 B 组,每组80例。观察 A 组在常规治疗基础上给予阿托伐他汀治疗,观察 B 组在观察 A 组基础上加用丹参酮ⅡA 磺酸钠注射液,疗程均为30 d,比较2组 TLR4、MyD88、NF-κB mRNA 和蛋白表达、hs-CRP、TNF-α水平。结果与对照组比较,冠心病患者组 TLR4、MyD88、NF-κB mRNA 和蛋白表达、hs-CRP、TNF-α水平显著升高（ P ﹤0.05）。TLR4、MyD88、NF-κB 蛋白表达与 hs-CRP、TNF-α呈正相关（ r ＝0.761和0.802,0.699和0.774,0.835和0.749,P 均﹤0.05）。与治疗前比较,治疗后观察 A 组和观察 B 组 TLR4、MyD88、NF-κB mRNA 和蛋白表达、hs-CRP、TNF-α水平均显著降低（ P ﹤0.05）;但观察 B 组降低程度更明显（ P ﹤0.05）。结论丹参酮ⅡA 磺酸钠联合阿托伐他汀通过抑制外周血单个核细胞 TLR4炎症信号通路的激活发挥抗炎作用,可能是丹参酮ⅡA 磺酸钠发挥治疗作用的机制之一。     

红景天苷对脂多糖诱导的小鼠心肌损伤保护作用的研究

目的:研究红景天苷对脂多糖诱导的小鼠心肌损伤的保护作用及其机制。方法:选取雄性Balb/c小鼠50只,随机分为对照组、模型组、地塞米松组、红景天苷低、高剂量组。地塞米松和红景天苷高、低剂量连续灌胃7 d,每天1次,最后一次灌胃后1 h,除对照组外,其余各组腹腔注射LPS,12 h后处死,取血和心脏。结果:红景天苷组小鼠心肌病理改变明显减轻于模型组;相比于模型组,红景天苷组能减少血清中TNF-α、IL-6的含量;减少心肌组织中TLR4、My D88和NF-κBp65蛋白的表达。结论:红景天苷减轻脂多糖诱导的小鼠心肌损伤,其机制可能通过调节TLR4/My D88/NF-κBp65信号通路,抑制炎症反应。     

吴茱萸次碱通过抑制TLR4/NF-κB信号通路保护大鼠心肌缺血/再灌注损伤

目的研究吴茱萸次碱是否通过抑制Toll样受体4(TLR4)/NF-κB信号通路保护大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤,以及其作用是否与促进降钙素基因相关肽(CGRP)释放有关。方法 SD大鼠在I/R前10 min静脉注射吴茱萸次碱和capsazepine(给吴茱萸次碱前2 min静脉注射),然后结扎左冠状动脉前降支缺血60 min,再灌注3 h。测定心肌梗死面积、血浆中CGRP浓度和血清中肌酸激酶的活性;RTPCR分析心肌组织TLR4 mRNA表达水平;免疫组织化学方法检测心肌组织TLR4和NF-κB蛋白表达水平。结果吴茱萸次碱(100、300μg·kg~(-1))能明显降低心肌梗死面积和血清肌酸激酶活性,增加血浆CGRP浓度(P<0.05)。与I/R组比较,预先给予吴茱萸次碱也能明显降低TLR4 mRNA和蛋白表达以及NF-κB蛋白表达(P<0.05)。这些作用可被预先给予选择性辣椒素受体拮抗剂capsazepine(1.5 mg·kg~(-1))所取消。结论吴茱萸次碱通过抑制TLR4/NF-κB信号通路保护心肌I/R损伤,此作用与促进CGRP释放有关。     

原花青素通过抑制 Toll样受体 4/核因子 -κB信号通路对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探究原花青素通过抑制Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对大鼠脑缺血再灌注(ischemia-reper-fusion,I/R)损伤的保护作用.方法 选取60只雄性SD大鼠,采用随机数字表法分为对照组、模型组、原花青素低剂量组(80 mg/kg)和原花青素高剂量组(160 mg/kg),每组15只;除对照组外,其他各组大鼠使用改良线栓法制成I/R模型,原花青素低剂量组和原花青素高剂量组分别使用80 mg/kg和160 mg/kg的原花青素灌胃处理,连续处理1周.比较各组大鼠脑含水量;采用神经行为学评估比较各组大鼠神经功能缺损评分;使用试剂盒检测各组大鼠超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)水平;采用蛋白质印迹法检测TLR4/NF-κB信号通路和凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)表达水平;采用苏木素染色观察神经细胞凋亡率.结果 与对照组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分、脑含水量、活性氧含量水平、TLR4蛋白、NF-κB蛋白、Bax蛋白和Caspase-3蛋白表达、神经细胞凋亡率升高,SOD含量水平、GPX含量水平、Bcl-2蛋白降低(P<0.05),其中TLR4蛋白和NF-κB蛋白分别为(1.80±0.20)和(1.85±0.21),显著低于对照组的(0.45±0.04)和(0.51±0.04);相比模型组,使用原花青素处理各组大鼠神经功能评分、脑含水量、活性氧含量水平、TLR4蛋白、NF-κB蛋白、Bax蛋白和Caspase-3蛋白表达、神经细胞凋亡率降低,且原花青素高剂量组低于原花青素低剂量组(P<0.05),其中原花青素高剂量组TLR4蛋白和NF-κB蛋白分别为(0.59±0.06)和(0.64±0.06),显著低于原花青素低剂量组的(1.00±0.10)和(0.98±0.09);与模型组比较,使用原花青素处理各组大鼠SOD含量水平、GPX含量水平、Bcl-2蛋白升高,且原花青素高剂量组高于原花青素低剂量组(P<0.05).结论 原花青素过抑制TLR4/NF-κB信号通路调控下游凋亡蛋白的表达抑制I/R后大鼠脑细胞的凋亡,缓解脑组织损伤.     

迷迭香酸通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对高糖诱发大鼠神经细胞损伤的保护机制

目的 分析迷迭香酸(RA)通过Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对高糖诱发大鼠神经细胞损伤的保护机制。方法 取大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤高分化PC12细胞作为神经元细胞模型，采用不同浓度的D-葡萄糖处理后，通过MTT法观察细胞活性变化筛选最佳葡萄糖浓度。收集对数生长期PC12细胞随机分为对照组、高糖组，在高糖组基础上分别加入不同浓度RA及TLR4激活剂-脂多糖(LPA),记为RA低浓度组(30μmol/L RA)、RA高浓度组(60μmol/L RA)、RA高浓度+LPA组(60μmol/L RA+2μg/ml LPA),MTT检测各组细胞存活率；Hoechst33258观察细胞凋亡变化；流式细胞术检测细胞凋亡率；Western blot检测5组细胞中TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及凋亡蛋白-Bax的表达水平。结果 100 mmol/L D-葡萄糖为本研究的最佳浓度。与对照组比较，高糖组细胞核严重皱缩，细胞形态发生明显变化，细胞活力明显下降，细胞凋亡率、Bax、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65/NF-κB p...     

脂氧素A4受体激动剂及白介素-1β在Toll样受体2/髓样分化因子88/核因子-κB信号通路对哮喘小鼠气道炎症的调控作用

目的:研究脂氧素(LX)A4受体激动剂及白介素-1β抗体在Toll样受体2(TLR2)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB（NF-κB)信号通路中对哮喘小鼠气道炎症的调控机制。方法:以卵清蛋白(OVA)致敏激发法制备小鼠哮喘模型,60只二级雄性Balb/c小鼠随机分为6组,分别给予脂氧素A4受体激动剂(BML-111)、白介素(IL)-1β抗体、BML-111载体、兔IgG治疗。末次激发后留取血清和肺组织标本,光镜下观察支气管周围炎症浸润情况;测定血清IL-1β、IL-4、IL-8、干扰素(IFN)-γ水平;检测肺组织TLR2、MyD88、NF-κB的表达。结果:OVA致敏的小鼠血清IL-1β、IL-4、IL-8水平升高,IFN-γ浓度降低; OVA致敏导致明显的支气管周围炎症细胞浸润,使支气管炎症分级指数有明显提高;BML-111或IL-1β抗体治疗均能明显阻止上述OVA介导的炎症变化(χ2=28.14,P<0.01)。OVA致敏使肺组织TLR2、MyD88 表达及NF-κB活性升高,BML-111及抗IL-1β抗体可抑制由OVA引发的上述表达变化。结论:OVA可诱导产生气道炎症,这一作用可能受TLR2/MyD88/NF-κB信号通路调控,IL-1β在这一过程中起了至关重要的作用。BML-111和IL-1β抗体可能通过对TLR2/MyD88/NF-κB信号通路的负调控而实现抑制OVA诱发的呼吸道炎症的作用。     

海参岩藻聚糖硫酸酯对巨噬细胞的调节作用及信号通路研究

目的研究海参岩藻聚糖硫酸酯(SC-FUC)对巨噬细胞的调节作用及相关信号通路,探究其调节机体免疫的作用机制。方法噻唑蓝(MTT)比色法检测巨噬细胞的增殖情况;中性红法检测吞噬活性;Griess试剂法测定培养上清液中NO含量;RT-PCR检测巨噬细胞下游细胞因子IL-6、IL-10、Toll样受体和相关信号分子My D88、TRIF、NF-κB的mRNA表达量。结果 SC-FUC对巨噬细胞增殖、吞噬能力和NO分泌均有促进作用,在作用前期(6h和12h)效果更为明显。SC-FUC能上调细胞因子IL-6和IL-10的mRNA表达量,上调TLR4、TLR5、TLR9的表达量,促进信号分子My D88、TRIF和NF-κB的mRNA表达量。结论 SC-FUC能够激活巨噬细胞,促进其分泌NO、IL-6、IL-10等细胞因子,从而发挥免疫调节作用。SC-FUC激活巨噬细胞的信号通路与细胞表面TLR4、TLR5、TLR9及NF-κB通路相关。