人血浆中伊立替康及其活性代谢物7-乙基-10羟基喜树碱浓度高效液相色谱-荧光测定方法的建立

目的:建立人血浆中伊立替康(CPT-11)及其代谢物7-乙基-10羟基喜树碱(SN-38)的浓度测定方法并进行方法学考证。方法:用Luna 5u CN100A(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,乙腈与醋酸铵缓冲溶液(50 mmol.L-1,pH4)为流动相梯度洗脱,CPT-11的检测波长为Ex/Em=368 nm/432 nm,SN-38的检测波长为Ex/Em=368 nm/535 nm。结果:CPT-11保留时间为(9.3±0.3)min,SN-38保留时间为(4.8±0.3)min。空白样品在CPT-11、SN-38及内标喜树碱出峰位置均无干扰。CPT-11在46.9～6 000.0nmol.L-1的范围内线性良好,SN-38在2.0～250.0nmol.L-1的范围内线性良好,r值均为0.998。低浓度点RSD均在20%内,其余浓度点的RSD均在15%内,准确度均在85%～115%之间。血浆样品长期冻存稳定性良好,反复冻融3次及提取后室温放置24 h条件下,样品浓度均无显著变化。结论:使用高效液相色谱-荧光检测方法简便,准确,灵敏,适用于伊立替康及其活性代谢物SN-38的血药浓度检测。     

HPLC法测定血浆中伊立替康及其代谢产物SN-38、SN-38G浓度及方法学研究

目的：建立同时测定晚期结直肠癌患者血浆中伊立替康（CPT-11）及其活性代谢产物7-乙基-10-羟基喜树碱（SN-38）和非活性代谢产物的SN-38葡萄糖醛酸化（SN-38G）的浓度测定方法,并进行方法学验证。方法：以Kromacil C₁₈为色谱柱,甲醇-水（含5 mmol·L^-1 KH₂PO₃,pH=3.0）=55∶45为流动相,激发波长λ_ex=385 nm、发射波长λ_em=535 nm。结果：CPT-11在20~5000 ng·mL^-1范围内线性良好,SN-38在2~500 ng·mL^-1范围内线性良好,r值均为0.999。CPT-11和SN-38的提取回收率分别为53.26%~59.86%和66.83%~71.30%。CPT-11低、中、高三种浓度的日间和日内精密度均小于6.32%;SN-38低、中、高三种浓度的日间和日内精密度均小于7.02%。血浆样品反复冻融3次、室温放置8 h、进样器中放置24 h及长期冻融,稳定性均良好,样品浓度均未见显著改变。结论：使用高效液相色谱-荧光定量检测法简便、准确、灵敏,适用于晚期结直肠癌患者血浆中伊立替康及其代谢产物SN-38、SN-38G的血药浓度测定。     

高效液相色谱法测定大鼠血浆中伊立替康及其活性代谢产物SN-38的含量

目的:建立同时测定大鼠血浆中伊立替康(CPT-11)及其活性代谢产物7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)浓度的高效液相色谱法。方法:以10-羟基喜树碱作为内标,先用7%高氯酸酸化血浆,再用7%高氯酸-乙腈(50∶50)沉淀蛋白。采用Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)进行分离;以0.05 mol·L-1的磷酸氢二钠-甲醇-三乙胺(50∶50∶0.025,磷酸调pH 3.0)为流动相;荧光检测波长:激发波长380 nm,发射波长550 nm。结果:大鼠血浆中CPT-11和SN-38线性范围分别是20～5000 ng·mL-1(r=0.9997)和2～500 ng·mL-1(r=0.9999)。两组分最低检出限分别为15 ng·mL-1和1.7 ng·mL-1。2组分平均相对回收率分别是98.7%和99.9%;平均绝对回收率分别87.2%和94.7%。2组分日内、日间精密度均小于12%。结论:本方法快速、简便、准确,灵敏度高,可用于CPT-11及其活性代谢产物SN-38药代动力学的研究。     

HPLC法测定注射用泮托拉唑钠中的有关物质

目的:建立测定注射用泮托拉唑钠中有关物质的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Kromasil Hypersil ODS,流动相为0.01 mol/L磷酸氢二钾溶液(调节pH为7.0)-乙腈(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为290 nm,柱温为40℃,进样量为20μL。结果:杂质A、B、C+E、D检测质量浓度线性范围分别为0.416 8~1.042 0μg/mL(r=0.999 8)、0.195 0~0.487 5μg/mL(r=0.999 9)、0.389 0~0.972 5μg/mL(r=0.999 8)、0.198 6~0.496 5μg/mL(r=0.999 8);定量限分别为0.834、0.780、1.556、0.794ng/mL,检测限分别为0.417、0.390、0.778、0.397 ng/mL;精密度试验的RSD<1.0%,重复性试验中总杂质峰面积的RSD<1.0%;回收率分别为98.81%~102.49%(RSD=1.18%,n=9)、95.31%~98.44%(RSD=0.91%,n=9)、96.88%~98.44%(RSD=0.52%,n=9)、97.87%~101.28%(RSD=1.05%,n=9)。结论:该方法简便、准确,可用于注射用泮托拉唑钠中有关物质的测定。     

UPLC-MS/MS法同时测定人血浆中卡马西平、文拉法辛、罗格列酮和硝苯地平的浓度

目的:建立同时测定人血浆中卡马西平、文拉法辛、罗格列酮和硝苯地平浓度的方法。方法:血浆样品经甲醇(含0.1%甲酸)沉淀蛋白后,以盐酸吡格列酮为内标,采用超高效液相色谱-串联质谱法测定。色谱柱为Waters ACQUITY UPLC HSS C_(18),流动相为含0.01%甲酸的水溶液-含0.01%甲酸的甲醇溶液(梯度洗脱),流速为0.3 mL/min,柱温为50℃,进样量为5μL;采用电喷雾离子源,以多反应监测模式进行正离子扫描,用于定量分析的离子对分别为m/z 237.00→194.05(卡马西平)、m/z 278.20→58.10(文拉法辛)、m/z 358.08→135.04(罗格列酮)、m/z 347.15→315.17(硝苯地平)、m/z 357.09→134.06(内标)。结果:卡马西平、盐酸文拉法辛、盐酸罗格列酮、硝苯地平血药浓度的线性范围分别为2.00~2 000.00、2.12~2 120.00、2.00~2 000.00、2.04~1 020.00 ng/mL(r分别为0.995 9、0.990 5、0.991 5、0.991 0,n=5),最低检测限分别为0.200、0.106、0.100、1.020 ng/mL;日内、日间RSD均小于15%,相对误差的绝对值小于15%;提取回收率为65.66%~96.36%(RSD<15%,n=5),基质效应为80.99%~114.33%。采用该法测得2例癫痫患者体内卡马西平的血药浓度分别为(1 500.41±169.11)、(1 159.01±59.24)ng/mL(RSD分别为11.27%、5.60%,n=3),2例高血压患者体内硝苯地平的血药浓度分别为(14.68±1.92)、(21.18±3.59)ng/mL(RSD分别为16.98%、13.10%,n=3)。结论:该方法操作简便,专属性强,灵敏度、准确度高,可用于上述药物的血药浓度监测及药动学研究。     

伊立替康及其主要活性代谢物血药浓度和药代动力学测定

目的 测定抗癌药物伊立替康(CPT-11)及其主要活性代谢物SN-38,SN-38G的血药浓度和药代动力学指标.方法 样品先经甲醇-乙腈(50 ∶ 50体积比)沉淀蛋白,并用盐酸酸化使内酯环开环.用高效液相色谱仪定量:以喜树碱作内标;Xterra RP18柱,激发波长370 nm,检测波长为470 nm和534 nm.结果 血浆CPT-11及其活性代谢物、酸性提取物在此条件下的稳定性较好.三种待测物线性范围皆为1～1000 ng/ml,检测限都是1 ng/ml.相对标准差为3.1％～11.7％的血浆.测定回收率为93.2％～109.8％.中位提取回收率为91％.结论 所建立的方法可用于测定CPT-11,SN38和SN38-G在人血浆中的药物浓度,可满足临床进行CPT-11人体药代动力学研究.     

UPLC-MS/MS法同时测定裸花紫珠干浸膏中5种有效成分的含量

目的:建立同时测定裸花紫珠干浸膏中5种有效成分含量的方法。方法:采用超高效液相色谱-串联质谱法。色谱条件:色谱柱为Zorbax Eclipse Plus C_(18),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为0.3 mL/min,柱温为40℃,进样量为2μL;质谱条件:多反应监测离子扫描模式,干燥气/雾化气为氮气,干燥气温度为325℃,干燥气流量为6 L/min,雾化气压力为45 psi,鞘流气温度为350℃,鞘流气流量为12 L/min,毛细管电压为4 000 V(+)、3 500 V(-),喷嘴电压为500 V。结果:木犀草苷、毛蕊花糖苷、槲皮素、木犀草素、芦丁检测质量浓度线性范围分别为0.504 8~252.4 ng/mL(r=0.999 9)、0.712 4~356.2 ng/mL(r=0.999 0)、0.509 4~254.7 ng/mL(r=0.996 2)、0.303 0~151.5 ng/mL(r=0.999 8)、0.602 2~301.1 ng/mL(r=0.999 6);精密度、稳定性、重复性试验的RSD<3.0%;定量限分别为0.42、0.87、0.33、0.12、0.76 ng/mL;加样回收率分别为97.99%~101.20%(RSD=1.3%,n=6)、96.50%~101.20%(RSD=1.7%,n=6)、94.81%~99.34%(RSD=1.7%,n=6)、97.54%~100.51%(RSD=1.2%,n=6)、93.37%~98.70%(RSD=1.9%,n=6)。结论:该方法操作简便,精密度、稳定性、重复性好,可用于裸花紫珠干浸膏中5种有效成分含量的同时测定。     

HPLC法同时测定小儿清咽颗粒中5种成分的含量

目的:建立同时测定小儿清咽颗粒中哈巴苷、哈巴俄苷、绿原酸、咖啡酸、连翘苷含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Zorbax SB-C_(18),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为210 nm(0~13 min,哈巴苷)、327 nm(13~25 min,绿原酸、咖啡酸)、277 nm(25~29 min,连翘苷)、210 nm(29~40 min,哈巴俄苷),柱温为30℃,进样量为10μL。结果:哈巴苷、哈巴俄苷、绿原酸、咖啡酸、连翘苷检测进样量线性范围分别为8.400~168.0 ng(r=0.999 6)、11.30~226.0ng(r=0.999 8)、128.8~257.6 ng(r=0.999 3)、8.110~162.2 ng(r=0.999 6)、29.69~593.8 ng(r=0.999 4);定量限分别为33.39、451.2、515.2、324.5、1 188 ng/mL,检测限分别为8.348、112.8、128.8、81.12、297.0 ng/mL;精密度、稳定性、重复性试验的RSD<2.0%;加样回收率分别为96.39%~98.64%(RSD=0.83%,n=6)、96.60%~98.89%(RSD=0.89%,n=6)、96.28%~99.22%(RSD=1.25%,n=6)、96.49%~99.54%(RSD=1.16%,n=6)、96.26%~99.70%(RSD=1.30%,n=6)。结论:该方法操作简单、结果准确,适用于小儿清咽颗粒中5种成分含量的同时测定。     

HPLC-FLD测定大鼠血浆中的10-羟基喜树碱方法学研究

目的 建立一种简单、准确的测定大鼠血浆中10-羟基喜树碱含量的高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FLD).方法 用1%冰醋酸-甲醇溶液处理血浆样品,采用高效液相色谱-荧光检测器,以喜树碱为内标.色谱柱:Phenomenex Luna C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相:以5%乙腈为流动相A,乙腈为流动相B,流速为1.2 mL·min-1,荧光检测器激发波长和发射波长分别为Ex=380 nm,Em=515 nm.采用室温梯度洗脱,进样体积为50μL.结果 本试验采用两条分段函数,大鼠血浆中10-羟基喜树碱在1.25~20 ng·mL-1及20~320 ng·mL-1范围内线性良好,线回归系数分别为0.9998和0.9995.方法 准确度为98.9%~103.8%,10-羟基喜树碱高、中、低3个浓度的提取回收率均大于80%.日内精密度RSD<4.2%,日间精密度RSD<4.8%.结论 该方法 操作简便,灵敏度高,精密度和准确度好,适用于大鼠血浆中10-羟基喜树碱含量的测定.     

HPLC法同时测定腰痛胶囊中4种成分的含量

目的:建立同时测定腰痛胶囊中芍药苷、桂皮醛、补骨脂素、异补骨脂素含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Agilent-C18,流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为240 nm(芍药苷、补骨脂素、异补骨脂素)、290 nm(桂皮醛),柱温为35℃,进样量为10μL。结果:芍药苷、桂皮醛、补骨脂素、异补骨脂素检测质量浓度线性范围分别为0.004 02~0.100 6 mg/mL(r=0.999 8)、0.024 50~0.612 7 mg/mL(r=0.999 8)、0.005 24~0.131 0 mg/mL(r=0.999 9)、0.005 11~0.127 8mg/mL(r=0.999 9);定量限分别为37.17、1.47、21.76、25.57 ng,检测限分别为11.15、0.44、6.53、7.67 ng;精密度、稳定性、重复性试验的RSD<2.0%;加样回收率分别为99.02%~100.83%(RSD=0.68%,n=6)、98.58%~100.99%(RSD=0.83%,n=6)、99.78%~101.69%(RSD=0.89%,n=6)、100.06%~102.46%(RSD=0.92%,n=6)。结论:该方法操作简单、结果准确,适用于腰痛胶囊中芍药苷、桂皮醛、补骨脂素、异补骨脂素含量的同时测定。