小鼠肺炎链球菌psaA核酸疫苗的制备及其初免-蛋白加强免疫策略的研究

白加强免疫1次,对照组5只小鼠经pVAX1空载体免疫3次后,生理盐水加强免疫1次,分别采集血清测定两组抗PsaA抗体水平.结果 成功克隆出psaA基因并实现其亚克隆;所构建的psaA核酸疫苗序列正确,同时实现了PsaA蛋白的一步亲和纯化;psaA核酸疫苗可在293T真核细胞中成功表达;核酸疫苗初免后蛋白加强组的抗PsaA抗体滴度高于对照组(t=87.518,P＜0.05).结论 成功构建出psaA核酸疫苗,采用核酸疫苗初免-蛋白加强免疫策略能增强肺炎链球菌psaA核酸疫苗的免疫原性.     

小鼠肺炎链球菌psaA核酸疫苗的制备及其初免-蛋白加强免疫策略的研究

白加强免疫1次,对照组5只小鼠经pVAX1空载体免疫3次后,生理盐水加强免疫1次,分别采集血清测定两组抗PsaA抗体水平.结果 成功克隆出psaA基因并实现其亚克隆;所构建的psaA核酸疫苗序列正确,同时实现了PsaA蛋白的一步亲和纯化;psaA核酸疫苗可在293T真核细胞中成功表达;核酸疫苗初免后蛋白加强组的抗PsaA抗体滴度高于对照组(t=87.518,P＜0.05).结论 成功构建出psaA核酸疫苗,采用核酸疫苗初免-蛋白加强免疫策略能增强肺炎链球菌psaA核酸疫苗的免疫原性.     

肺炎链球菌表面蛋白主动免疫及局部应用抗体在实验性中耳炎中的作用

肺炎链球菌是急性中耳炎(AOM)最常见的致病菌。AOM复发率高,反复发作可达6次或更多,在儿童中的发病率约为5%～10%。通过实验复制大鼠急性中耳炎模型,研究用肺炎链球菌表面蛋白A(PspA)主动免疫及局部应用抗体治疗AOM。选取体重250g～300g的雄性SD大鼠,经听泡骨壁注入中耳3型肺炎链球菌(实验一)或6A型肺炎链球菌(实验二)制成AOM模型。实验一取鼠12只,在右侧中耳注入细菌悬液0.04ml(相当于2×10CFU),其中半数动物同时注入抗3型肺炎链球菌抗体悬液0.01ml(含抗体1μg)。另外半数动物注射等量生理盐水稀释的细菌悬液作为对照。注射后4、7…     

有中耳炎倾向和无中耳炎倾向的儿童接种肺炎链球菌疫苗前后的抗体活性

肺炎链球菌是儿童急性中耳炎(AOM)的常见病原菌,儿童AOM约有10％变为复发性中耳炎(rAOM),其中肺炎链球菌6群和19群最常见,约60％的rAOM儿童缺乏肺炎链球菌6A和19F抗体,表现为IgG1和IgG2抗体活性低下。本文选择10例rAOM儿童(1～3岁)及17例非中耳炎倾向的健康儿童(1～2岁9例,2～3岁8例),用酶联免疫(ELISA)方法测定接种14价肺炎链球菌荚膜多糖疫苗前后血清中抗体,包括抗肺炎链球菌6A、19F的IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、     

耳科学领域中的免疫学(II中耳和外耳免疫性疾病)

中耳免疫性疾病一、中耳炎的免疫学因素1 急性中耳炎与炎症反应和免疫防御作用:急性中耳炎的病因是复杂和多因素的,鼻咽部和咽鼓管的病原菌能引起中耳的炎症,其特点是中耳黏膜的炎症反应伴鼓膜下白细胞、巨噬细胞和肥大细胞等的浸润,中耳腔渗出液中含有大量炎性介质,如廿烷类(eicosanoids)、细胞因子和组胺,清除渗出液和病原菌基于非特异性因素(如黏液纤毛清除系统和吞噬细胞)和特异性免疫应答[1] 。中耳的免疫防御屏障是中耳的淋巴组织,其可产生局部特异性免疫应答,细菌和病毒等作为抗原可以引起炎症反应;B淋巴细胞(分泌IgG、IgA和IgM)…     

急性中耳炎早期中耳液中的抗肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和卡他布朗汉姆氏菌抗体

本文研究急性中耳炎(AOM)早期中耳渗出液(MEE)中抗肺炎链球菌(Pn)、流感嗜血杆菌(Hi)、卡他布朗汉姆氏菌(Br)的血清型抗体(IgG、IgM 和 IgA)及特异性分泌型抗体。85例 AOM 患儿为研究对象,男39例,女46例,年龄2个月～15岁(平均年龄3岁4个月)。全部病例均由同一耳鼻喉科医生诊治,均具有 AOM 的急性症状和体征,并经鼓膜切开术吸取到 MEE 确诊,凡近3月内有 AOM 发作或接     

大鼠急性中耳炎动物模型的建立

目的 建立大鼠急性中耳炎模型并探讨其应用价值.方法 36只健康雄性SD大鼠,麻醉后将50μl肺炎链球菌悬液(1×108CFU/ml)经听泡穿刺注入到大鼠左侧中耳腔(实验耳),右侧注入等量生理盐水(对照耳),分别于注入后1、3、5、7、10、14天各取6只大鼠,行鼓室声导抗测试,手术显微镜下观察鼓膜及中耳腔,中耳腔分泌物或灌洗液细菌培养鉴定,中耳黏膜骨壁HE染色切片检查,动态观察大鼠中耳炎的病理变化及病程转归.结果实验耳注入肺炎链球菌后,感染早期(1天、3天)为急性化脓期,见鼓膜充血,中耳黏膜部分坏死脱落,中耳腔蓄积以中性粒细胞浸润为主的大量炎性渗出物;感染中期(5天、7天)急性化脓性炎症减退,以淋巴细胞、浆细胞浸润为主,黏膜肉芽及纤维增生,中耳积液细菌培养阳性率100%;感染后期(10天、14天)部分实验耳鼓膜色泽恢复正常,听泡内脓液消失,但各有部分耳(2/6耳)转归成分泌性中耳炎表现.结论 本研究建立了急性中耳炎的大鼠模型,成功率100%,是研究人类中耳炎较为理想的动物模型,不仅可用于急性化脓性中耳炎的研究,也可用于急性分泌性中耳炎的研究.     

鼻腔吸入γ干扰素对大鼠变应性鼻炎的治疗作用

目的 探讨鼻腔吸入γ干扰素(interferon gamma,IFN-γ)对大鼠变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)的治疗作用及可能机制.方法 采用卵白蛋白、氢氧化铝建立大鼠AR模型,分为阳性对照组(B组)、IFN-γ组(c组)和丙酸倍氯米松组(D组),每组8只大鼠,分别于模型建立后第31～38天,每只每日每侧鼻腔滴入磷酸盐缓冲液50μl、IFN-γ1 μg和丙酸倍氯米松3.5 μg,另设阴性对照组(A组)大鼠8只.第39天取鼻腔灌洗液测定细胞成分、白细胞介素4和白细胞介素5浓度;取血测定血浆IgE水平;黏膜切片观察鼻腔组织病理学改变及GATA-3的表达.结果 C组鼻腔灌洗液中的嗜酸粒细胞数量(-x±s,下同)为(O.005±0.003)×104/ml,明显低于B组(0.225±0.060)x104/ml(P<0.01);C组鼻腔灌洗液中的白细胞介素4为(7.8±3.5)pg/ml,白细胞介素5为(12.5±4.3)pg/ml,均低于B组(P值均<0.01);C组血浆中总IgE为(38.5±9.6)μg/ml,卵白蛋白特异性IgE为(19.8±5.4)IU/ml,均低于B组(P值均<0.01).B组大鼠鼻腔黏膜充血、水肿,黏膜层增厚,并有嗜酸细胞为主的炎性细胞浸润,而c组大鼠上述炎性症状改变减轻.免疫组化显示B组鼻腔组织中GATA-3表达增加,而C组的表达减少.结论 鼻腔吸入IFN-γ可以抑制AR大鼠白细胞介素4和白细胞介素5的合成,抑制嗜酸粒细胞在鼻腔内的炎性浸润,降低血浆中总IgE和卵白蛋白特异性IgE水平,其机制可能与阻断GATA-3表达,从而继发抑制Th2型反应有关.     

变应原诱发大鼠渗出性中耳炎中耳核因子κB的表达

目的:探讨渗出性中耳炎(OME)大鼠中耳微环境中Th1/Th2极化趋向及核因子Kappa B(NF-κB)对Th1/Th2极化的作用.方法:选用SD大鼠16只,随机分为实验组和对照组,每组8只(16耳).实验组以卵清蛋白腹腔致敏后耳内激发制成OME模型,对照组以PBS替代卵清蛋白.耳内激发后2 d处死动物,采用ELISA法测定各组大鼠中耳腔灌洗液中Th2型细胞因子--IL-4和Th1型细胞因子--IFN-γ的含量,免疫组织化学染色检测中耳黏膜和骨髓腔中NF-κB p65的表达.结果:实验组与对照组比较,中耳灌洗液中IL-4含量、Th2/Th1(IL-4/IFN-γ)比值以及中耳黏膜组织和骨髓腔中NF-κB p65表达显著增高,差异均有统计学意义(均P<0.05);而IFN-γ在中耳灌洗液内的含量间差异无统计学意义(P>0.05).实验组NF-γB p6S蛋白表达与中耳灌洗液中IL-4含量呈显著正相关(r=0.727,P<0.05).结论:变应原可诱导大鼠OME形成,其中耳微环境中IL-4合成显著增高,而IFN-γ相对减少,Th2/Th1比值增高,存在以Th2细胞过度分化为特征的Th极化趋向,NF-κB在调控大鼠中耳微环境Th1/Th2极化过程中起一定作用.     

急性中耳炎小鼠咽鼓管管旁腺体中表面活性蛋白-A的表达

目的研究急性中耳炎期间咽鼓管管旁腺体中表面活性蛋白-A(SP-A)的表达,探讨咽鼓管管旁腺体在防止中耳感染中的作用。方法用免疫组织化学方法结合图像分析技术检测Ⅲ型肺炎链球菌悬液中耳腔注射后的不同时段的小鼠咽鼓管管旁腺体中SP-A的表达。结果实验组和对照组的咽鼓管管旁腺体中均有SP-A的表达,中耳感染急性期的表达较对照组呈现出时间依赖性增强(P<0.05)。结论咽鼓管管旁腺体在中耳感染的急性期可通过增加释放SP-A清除病菌,在防止中耳感染上可能起重要作用。