大肠埃希菌耐药基因的聚合酶链反应分析

目的了解临床分离大肠埃希菌中碳青霉烯酶的携带及耐药基因分布,为临床合理应用抗菌药物提供科学依据。方法采用VITEK-2型全自动微生物检测系统鉴定细菌,用微量稀释法筛选耐碳青霉烯类大肠埃希菌30株,通过Hodge试验检测碳青霉烯酶,以EDTA/IMP、EDTA/CAZ复合纸片,亚胺培南和头孢他啶为底物,进行协同试验检测B类碳青霉烯酶(金属酶),用聚合酶链反应(PCR)扩增耐碳青霉烯类抗菌药物的基因,以确定基因的种类。结果 25株大肠埃希菌对头孢菌素、碳青霉烯类和喹诺酮类抗菌药物耐药,5株大肠埃希菌对阿米卡星敏感;通过Hodge试验对30株大肠埃希菌表型的筛选,阳性菌株共28株,阳性率为93.0%;通过PCR基因分析,30株大肠埃希菌中检出28株KPC基因,阳性率达到93.0%,30株大肠埃希菌中未发现VIM和IMP基因。结论耐碳青霉烯类抗菌药物的大肠埃希菌主要在ICU和呼吸科,耐药原因主要是KPC基因,但是不能排除VIM和IMP基因。     

产NDM-l肺炎克雷伯菌引起的新生儿感染及其同源性检测

目的调查对碳青霉烯酶类抗菌药物耐药肺炎克雷伯菌的分子机制及其同源性,为新生儿感染的预防和监测提供参考依据。方法 5株肺炎克雷伯菌分离自2015年1-2月新生儿病房患儿吸痰标本;用法国生物梅里埃公司VITEK-2Compact系统对细菌进行鉴定和药敏;菌株产碳青霉烯酶的筛选是采用改良Hodge和金属酶试验;PCR和产物测序法检测以及确认菌株携带的超广谱β-内酰胺酶、AmpC酶和碳青霉烯酶耐药基因;脉冲场凝胶电泳分析细菌的同源性;质粒接合试验分析质粒的特性。结果除了氨曲南以外,5株肺炎克雷伯菌对二、三代头孢菌素和碳青霉烯类抗菌药物均耐药,且Hodge试验和金属酶试验均呈现阳性;每一株菌均携带blaNDM-1、blaCMY-6和blaDHA-1基因;脉冲场凝胶电泳显示5株菌的带型完全相同;质粒接合试验显示供体菌将携带blaNDM-1的质粒成功转移到受体菌。结论经检索,携带blaNDM-1、blaCMY-6和blaDHA-1基因的肺炎克雷伯菌在新生儿中的聚集流行为国际上首次报道,应加强医院感染的监测、预防和控制。     

血流感染产碳青霉烯酶大肠埃希菌的耐药基因及同源性研究

目的探讨血流感染中耐碳青霉烯类大肠埃希菌耐药机制和分析同源性。方法收集温州医科大学附属第一医院2015年6月-2016年5月门诊及住院患者血流感染中分离出的大肠埃希菌,共216株,常规方法进行细菌分离培养,进行菌种鉴定和药敏试验,对碳青霉烯类耐药株进行改良Hogde试验和金属酶初筛试验,聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)方法检测碳青霉烯酶耐药基因,测序确定其基因型,采用多位点序列分型(Multilocus Sequence Typing,MLST)和脉冲场凝胶电泳(Pulsed Field Gel Electrophoresis,PFGE)对碳青霉烯类耐药株进行同源性分析。结果在216株血流感染大肠埃希菌中,有6株耐碳青霉烯类抗菌药物,占2.8%,其中3株亚胺培南耐药株改良Hodge试验阳性,1株金属酶初筛试验阳性,3株厄他培南耐药株则均为阴性。3株亚胺培南耐药株中1株携带blaNDM-5基因,2株携带blaKPC-2基因。6株碳青霉烯类抗菌药物耐药大肠埃希菌临床分离株中,其克隆分型分别为ST648、ST5150、ST131、ST964、ST2003和ST38。PFGE共分为5个型别,其中C1与C6为同一型别,其余4株为不同型别。结论本研究中6株耐碳青霉烯类大肠埃希菌的主要耐药机制为产KPC-2酶和NDM-5酶,MLST和PFGE的结果显示属于不同的克隆型。     

耐碳青霉烯类大肠埃希菌分子流行病学机制研究

目的 研究重症监护病房(ICU)耐碳青霉烯类大肠埃希菌分子流行病学特征和耐药机制.方法 采用琼脂稀释法检测分离株的抗菌药物敏感性,采用PCR、DNA测序分析介导碳青霉烯类耐药的基因型,采用脉冲场琼脂糖凝胶电泳(PFGE)进行分子分型,研究耐碳青霉烯类大肠埃希菌的耐药机制和遗传关系.结果 临床分离的14株泛耐药菌株,均表现多药耐药性,碳青霉烯类耐药基因扩增显示,均带KPC-2型碳青霉烯酶基因,分子流行病学分析,14株菌分别属于10个流行克隆型.结论 医院出现耐碳青霉烯类大肠埃希菌,碳青霉烯酶KPC-2,是泛耐药大肠埃希菌介导,对碳青霉烯类耐药的主要原因.     

大肠埃希菌质粒介导的bla_(NDM-1)基因耐药及传播性研究

目的探讨某院携带bla_(NDM-1)基因大肠埃希菌的流行现况及传播机制。方法收集2016年1—12月南昌大学某附属医院对碳青霉烯类抗生素不敏感的大肠埃希菌92株,对其进行bla_(NDM-1)基因筛查,并对bla_(NDM-1)基因阳性的大肠埃希菌进行其他常见碳青霉烯酶基因检测。将bla_(NDM-1)基因阳性的大肠埃希菌(供体菌)与大肠埃希菌J53(受体菌)进行接合试验,采用药敏试验及mCIM试验对接合子进行表型验证,提取供体菌及接合子的质粒采用Southern blot技术对bla_(NDM-1)基因进行基因定位,并验证其水平转移的能力。结果在对碳青霉类抗生素不敏感的92株大肠埃希菌中发现2株携带bla_(NDM-1)基因,携带率2.2%。此2株大肠埃希菌未发现同时携带其他常见碳青霉烯酶基因。接合试验及Southern blot发现此2株大肠埃希菌的bla_(NDM-1)基因均位于菌株的质粒上,且有1株大肠埃希菌的bla_(NDM-1)基因可以通过质粒向大肠埃希菌J53转移。药敏试验结果显示,此2株大肠埃希菌对临床使用的多种抗菌药物耐药,且接合子获得了与供体菌相似的药敏结果。mCIM试验表明,此2株大肠埃希菌及接合子均产NDM-1型碳青霉烯酶。结论该院存在携带bla_(NDM-1)基因而产NDM-1型碳青霉烯酶的大肠埃希菌,携带bla_(NDM-1)基因的大肠埃希菌对临床使用的大多数抗菌药物耐药,质粒可介导bla_(NDM-1)基因的水平传播。     

腹腔感染分离大肠埃希菌耐药流行发展趋势及碳青霉烯类耐药机制研究

目的了解本院近5年腹腔感染相关患者分离的大肠埃希菌的流行发展趋势及碳青霉烯类耐药机制研究。方法收集2010年1月-2014年1月本院腹腔感染患者分离的大肠埃希菌,对碳青霉烯类耐药的大肠埃希菌采用EDTA协同试验及改良Hodge试验进行碳青霉烯酶表型检测;PCR法扩增碳青霉烯酶基因并进行序列分析。结果 5年共收集到腹腔感染大肠埃希菌共230株,其中碳青霉烯类抗菌药物亚胺培南具有高度的体外抗菌活性,其敏感率高达90.74%~94.44%,哌拉西林/他唑巴坦和阿米卡星次之。在分离的29株碳青霉烯类非敏感的大肠埃希菌中,改良Hodge试验阳性15株,而EDTA协同试验阳性7株,对所有阳性菌株进行PCR检测碳青霉烯酶种类,其中15株MHT阳性菌株携带bla KPC-2,7株EDTA协同试验阳性菌株携带bla NDM-1基因。结论本院腹腔感染大肠埃希菌碳青霉烯类耐药菌株中以bla KPC和bla NDM基因携带为主,其可通过质粒介导,应防止其发生暴发性的院内传播。     

1株同时携带mcr-1和NDM-5质粒介导耐药基因的泛耐药大肠埃希菌研究

目的对1株临床分离到的多黏菌素和碳青霉烯类均耐药的泛耐药大肠埃希菌的耐药机制进行研究。方法用梅里埃VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定系统进行细菌鉴定;微量肉汤稀释法检测常见抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC);对细菌全基因组进行测序,分析细菌耐药基因分布情况。结果该株大肠埃希菌除替加环素和阿米卡星敏感外,对β-内酰胺类、碳青霉烯类和喹诺酮类药物耐药且同时对多黏菌素类抗生素耐药。全基因组测序分析显示该菌株同时携带mcr-1和NDM-5耐药基因,其中mcr-1耐药基因位于大小为251.657 kb的质粒上,bla NDM-5基因位于大小为46.19 kb的质粒上。结论同时携带mcr-1和NDM-5质粒介导耐药基因的泛耐药大肠埃希菌已在临床出现,其来源可能与抗生素的选择相关,应引起高度重视,需加强抗生素的使用限制及耐药菌的监测力度。     

产KPC-2大肠埃希菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药机制研究

目的 探讨大肠埃希菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药机制及流行特点,为其治疗提供实验依据。方法 收集3家不同医院2018年—2020年门诊及住院患者分离大肠埃希菌1 025株,通过PCR法检测碳青霉烯酶相关耐药基因(bla_KPC、bla_NDM、bla_VIM和bla_IMP);应用微量肉汤稀释法检测产KPC-2大肠埃希菌药物敏感性;应用多克隆序列位点测定(Multilocus sequence typing,MLST)方法检测菌株克隆型别;通过凝胶脉冲场电泳进一步检测菌株克隆分型;应用接合实验验证耐药基因转移。结果共分离13株产KPC-2大肠埃希菌株,分离率为1.2%,MLST数据及脉冲场凝胶电泳显示这些菌株分为7个不同克隆型9个克隆簇。此外,4株携带bla_KPC-2基因菌株可以成功地将其对碳青霉烯类耐药的表型转移到大肠埃希菌J53菌株中。结论产KPC-2大肠埃希菌呈克隆播散模式,bla_KPC-2耐药基因可以借助质粒进行水平传播,应引起临床高度重视,迫切需要密切监测携...     

大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌产碳青霉烯酶的表型检测及耐药分析

目的了解临床分离的大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶和金属酶的携带情况,并进行相关耐药机制分析。方法采用VITEK-2型全自动微生物检测系统鉴定细菌;用微量稀释法筛选耐碳青霉烯类抗菌药物的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共36株;通过Hodge试验检测碳青霉烯酶,以EDTA/IMP、EDTA/CAZ复合纸片,亚胺培南和头孢他啶为底物,进行协同试验检测B类碳青霉烯酶(金属酶),统计分析16种抗菌药物的MIC。结果 36株病原菌对头孢菌素类、碳青霉烯类和喹诺酮类抗菌药物耐药,有5株肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类敏感;Hodge试验通过36株病原菌筛选,阳性菌株共30株,其中大肠埃希菌3株,阳性率为37.5%,肺炎克雷伯菌26株,阳性率为92.8%;只发现1株肺炎克雷伯菌金属酶阳性,A方法对金属酶的检测优于B方法。结论在ICU和呼吸科产碳青霉烯酶是细菌耐药的主要原因。     

耐碳青霉烯类大肠埃希菌耐药基因型检测与同源性分析

目的探讨医院感染耐碳青霉烯类大肠埃希菌的耐药传播机制及克隆流行,为临床治疗提供参考依据。方法收集2011年1月-2012年6月医院临床分离的19株耐碳青霉烯类大肠埃希菌,采用PCR及序列比对等方法检测耐药基因的分布;脉冲场凝胶电泳和多位点序列分型进行菌株同源性分析,数据采用SPSS 17.0进行统计分析。结果共19株耐碳青霉烯类大肠埃希菌,检出科室以EICU检出最多,共8株占42.11%;共检出产KPC-2型碳青霉烯酶菌株17株;11株细菌同时编码ESBLs基因,包括携带blaKPC-2、blaCTX-M-14和blaTEM-13种β-内酰胺酶基因;脉冲场凝胶电泳证实有9个克隆株,其中A克隆共8株细菌,是主要流行的克隆;多位点序列分型结果显示3株产KPC-2菌株均为ST131型。结论产KPC酶大肠埃希菌同时携带有其他耐药基因,CTX-M型超广谱β-内酰胺酶最为常见;ST131型产KPC-2大肠埃希菌在中国出现,同时也扩大了其在世界流行范围。     

Mapping EQ-5D-3L to EQ-5D-5L

ObjectivesThe original 3-level EQ-5D (EQ-5D-3L) includes 5 dimensions with 3 levels of problems per dimension. Since 2010, a more sensitive version with 5 levels of problems per dimension (EQ-5D-5L) has become available. Population value sets have been developed for both versions of the questionnaire. The objective of this research was to develop a mapping function to link EQ-5D-3L responses to value sets for the EQ-5D-5L.MethodsVarious algorithms were developed to link EQ-5D-3L and EQ-5D-5L responses using data from an observational study including members of 10 subgroups (N = 3580) who completed both versions of the questionnaire. Nonparametric and ordinal logistic regression models were fit to the data and compared using Akaike’s information criterion (AIC) as well as the mean absolute error and root mean squared error of predictions. Results were contrasted qualitatively and quantitatively with those of an alternative copula-based approach.ResultsIncluding indicants of problems for other EQ-5D-3L dimensions as regressors in the modeling yielded the greatest improvement in prediction accuracy. Adding age and gender lowered the AIC without improving predictions, while including a latent factor lowered the AIC further and slightly improved predictive accuracy. Models that conditioned on problems in other EQ-5D-3L dimensions yielded more accurate predictions than the alternative copula-based approach in subgroups defined by age and gender.ConclusionWe present novel algorithms to map EQ-5D-3L responses to EQ-5D-5L value sets. The recommended approach is based on an ordinal logistic regression that disregards age and gender and accounts for unobserved heterogeneity using a latent factor.     

Investigating 5-Level EQ-5D (EQ-5D-5L) Values Based on Preferences of Patients With Heart Disease

ObjectivesSeveral studies have shown that patients with heart disease value hypothetical health states differently from the general population. We aimed to investigate the health preferences of patients with heart disease and develop a value set for the 5-level EQ-5D (EQ-5D-5L) based on these patient preferences.MethodsPatients with confirmed heart disease were recruited from 2 hospitals in Singapore. A total of 86 EQ-5D-5L health states (10 per patient) were valued using a composite time trade-off method according to the international valuation protocol for EQ-5D-5L; 20-parameter linear models and 8-parameter cross-attribute level effects models with and without an N45 term (indicating whether any health state dimension at level 4 or 5 existed) were estimated. Each model included patient-specific random intercepts. Model performance was evaluated for out-of-sample and in-sample predictive accuracy in terms of root mean square error. The discriminative ability of the utility values was assessed using heart disease-related functional classes.ResultsA total of 576 patients were included in the analysis. The preferred model, with the lowest out-of-sample root mean square error, was a 20-parameter linear model including N45. Predicted utility values ranged from ?0.727 for the worst state to 1 for full health; the value for the second-best state was 0.981. Utility values demonstrated good discriminative ability in differentiating among patients of varied functional classes.ConclusionsAn EQ-5D-5L value set representing the preferences of patients with heart disease was developed. The value set could be used for patient-centric economic evaluation and health-related quality of life assessment for patients with heart disease.