肝微粒体体外温孵法与基因重组P450酶系在药物体外肝代谢研究中的应用进展

目的 介绍肝微粒体体外温孵法与基因重组P450酶系在药物体外肝代谢中应用进展。方法 根据近几年的文献资料进行分析、综合、归纳，分别按肝微粒体体外温孵法与基因重组P450酶系进行介绍。结果与结论 两种方法在药物体外代谢研究上既有统一又可互补，二者相结合可更有效的应用于药物的高通量筛选、代谢物种选择及代谢物生成等研究领域。     

肉豆蔻木脂素的体外代谢初步研究

目的建立诱导的大鼠肝微粒体药物代谢酶体外转化模型,评价肉豆蔻木脂素的体外代谢情况,为规模化制备肉豆蔻木脂素的代谢产物提供方法.方法将肉豆蔻木脂素与苯巴比妥诱导的大鼠肝微粒体药物代谢酶共温孵,用高效液相色谱法检测肉豆蔻木脂素及其代谢产物.结果肉豆蔻木脂素在苯巴比妥诱导的大鼠肝微粒体药物代谢酶作用下,可以被代谢,并且发现了7个代谢产物.结论建立的肝微粒体药物代谢酶模型可靠有效,可用于肉豆蔻中肉豆蔻木脂素的体外代谢研究.     

去氢厄弗酚在小鼠肝微粒体中代谢产物及CYP450酶亚型的鉴定

目的建立去氢厄弗酚(DHE)小鼠体外肝微粒体孵育方法,鉴定DHE在小鼠肝微粒体中的代谢产物及参与DHE代谢的CYP450酶亚型。方法采用UPLC-Q-TOF-MS/MS分析鉴定DHE在体外肝微粒体共温孵后的代谢产物,筛选7种CYP450酶亚型,并通过特异性化学抑制剂法,鉴别参与DHE代谢的主要CYP450酶亚型。结果在体外肝微粒体共温孵后,检测到4个代谢产物;所筛选的7种CYP450酶亚型中,CYP1A2、CYP2C8和CYP2D2对DHE体外肝微粒体代谢的参与度较高。结论在肝脏中,有多种代谢酶亚型参与DHE的代谢,表明DHE在临床上不易与其他药物产生相互作用。     

离体肝灌流技术在药物和毒理学研究中的应用

肝脏在外源性化学物药物、毒物的代谢和处置中起着十分重要的作用,绝大多数药物和毒物进入体内经肝脏进行代谢后,转化为大极性的化合物排出体外或者被激活而导致毒性增加.在药物毒物代谢和毒理学研究中,原代肝细胞培养、肝组织切片、肝灌流、肝微粒体制备物温孵和基因工程细胞模型等体外实验被广泛应用[1-2].     

力达霉素的体外代谢

旨在研究力达霉素在血浆和肝微粒体中的体外代谢性质,指导临床合理用药。选择HPLC-MS/MS测定方法,通过测定力达霉素的活性成分,考察力达霉素在大鼠、比格犬、猕猴和人血浆及肝微粒体中的代谢稳定性以及在人肝微粒体中对细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)各亚型酶的抑制作用。结果表明,力达霉素在4个种属血浆中均有代谢,其代谢速率为大鼠>比格犬>人>猕猴;在4个种属肝微粒体中,只有在猕猴肝微粒体中代谢;在浓度为0.000 5～10 ng·mL-1时,对人肝微粒体中细胞色素P450各亚型酶几乎无抑制作用。可见力达霉素在人体内的代谢性质与比格犬体内较相似,而且临床上当力达霉素与通过CYP450酶代谢的药物合用时,不会导致这些药物的代谢减慢。     

CYP450酶抑制效应常用检测技术的研究进展

目的综述细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)酶抑制效应常用检测技术。方法查阅国内外近几年相关文献73篇,对CYP450酶抑制效应常用检测技术进行分析和归纳总结。结果检测CYP450酶抑制效应常用体内及体外两种模型,体内模型主要通过临床实验或动物实验联合高效液相色谱质谱联用或其他检测方法,测定给药前后CYP450酶探针底物代谢产物的变化量,反映药物对酶的抑制效应;体外模型中,常用肝微粒体与药物及相应探针底物共孵育后,检测探针代谢产物变化量初步反应药物对酶抑制效应,再利用药物处理原代或转基因细胞,通过相应检测技术测定细胞内CYP450酶相应的基因及蛋白表达量来研究药物对酶抑制机制。结论 CYP450酶抑制效应检测技术已趋于完善,为药物药代动力学和药效学研究提供了良好的保障。     

左旋一叶萩碱的代谢转化

目的　研究一叶碱 [securinine ,( - )SE]在大鼠体内外的代谢转化。方法　采用大鼠肝微粒体体外温孵法对 ( - )SE的代谢转化进行了研究 ,优化了代谢体系 ,建立了反相HPLC法同时分离检测 ( - )SE及其体外代谢产物的分析方法。用液液萃取 ,制备TLC及半制备HPLC分离纯化了 4个代谢产物并进行了光谱鉴定。在此基础上 ,建立了生物体液中 ( - )SE及其代谢物的反相HPLC分析方法 ,并用该法检测了ip给药后大鼠的胆汁、尿样及其经 β 葡糖醛酸苷酶水解后的样品。结果　代谢物分别鉴定为 6 位羟基 ,6 位羰基及 5 位α及 β羟基取代的 ( - )SE ,还证实了体内 6 位羟基代谢物进一步形成了二相结合型产物。结论　基本阐明 ( - )SE在大鼠体内外代谢转化的途径     

左旋一叶碱的代谢转化

目的研究一叶碱［securinine,(-)SE］在大鼠体内外的代谢转化。方法采用大鼠肝微粒体体外温孵法对(-)SE的代谢转化进行了研究,优化了代谢体系,建立了反相HPLC法同时分离检测(-)SE及其体外代谢产物的分析方法。用液液萃取,制备TLC及半制备HPLC分离纯化了4个代谢产物并进行了光谱鉴定。在此基础上,建立了生物体液中(-)SE及其代谢物的反相HPLC分析方法,并用该法检测了ip给药后大鼠的胆汁、尿样及其经β-葡糖醛酸苷酶水解后的样品。结果代谢物分别鉴定为6-位羟基,6-位羰基及5-位α及β羟基取代的(-)SE,还证实了体内6-位羟基代谢物进一步形成了二相结合型产物。结论基本阐明(-)SE在大鼠体内外代谢转化的途径。     

体外代谢体系中中药及其成分对肝脏CYP450代谢酶抑制作用的研究进展

细胞色素P450 (CYP450)是肝微粒体中参与体内I相代谢反应的酶,临床上90%以上的药物都经CYP450氧化代谢,其被诱导或抑制是引起药物相互作用的主要机制。通过离体器官、细胞或酶系统进行的体外代谢研究以其精准、简化等特点近年来发展迅速。中药的体外代谢研究可推断药物可能的代谢途径和参与代谢的CYP450酶,研究药物的相互作用,更好地解释中药及其成分的作用机制,促进临床合理用药。本文就中药、中药成分、中药提取物在不同种属肝微粒体中对CYP450代谢酶活性的抑制作用进行综述,以期为中药-中药、中药-化学药物之间相互作用研究提供借鉴与参考。     

抗焦虑新药AF-5及其代谢物在人肝微粒体体外温孵体系中代谢研究

目的研究一类抗焦虑新药AF-5及其代谢物(I,II)在人肝微粒体体外温孵体系中代谢情况.方法自制人肝微粒体,用Lowry法测定酶活性为8.79mg·mL^-1.以此配制人肝微粒体体外温孵体系,加入药物,温孵后,提取分离,GC-MS测定.结果鉴定了AF-5在人肝微粒体体外温孵体系中的两个主要代谢物,并阐明了其体外代谢途径为AF-5的4位首先氧化为羟基,然后氧化成羰基.结论AF-5在体外人肝微粒体温孵体系中,100min后完全代谢成羟基代谢物I及羰基代谢物II,以羟基代谢物为主要代谢产物.AF-5代谢物I在人肝微粒体温孵体系中,可转化为代谢物II,而代谢物II在人肝中则不再代谢.     

羟基喜树碱的代谢与CYP450的相关性研究

目的：研究羟基喜树碱（HCPT）在体外小鼠肝微粒体中对 CYP450活性的影响,为临床合理联合用药提供参考。方法：在小鼠体外肝微粒体中分别加入六种亚型酶的探针药物对乙酰氨基酚、非那西丁、双氯芬酸钠、睾酮、酒石酸美托洛尔、奥美拉唑和羟基喜树碱溶液,在优化的孵育体系下温孵。用 HPLC 法测定各空白对照组和羟基喜树碱溶液中各探针药物代谢产物的浓度并比较代谢率的差异,以评价羟基喜树碱对各亚型酶活性的影响。结果：在代谢反应过程中,在50~200μmol·L-1内,羟基喜树碱的浓度与孵育体系中 CYP3A4的特异性底物睾酮、CYP2E1的特异性底物对乙酰氨基酚的剩余药量呈正比例关系,且具显著性差异（P＜0.05）,与其他四种探针药物的剩余药量无明显的浓度依存关系（P＞0.05）。结论：HCPT 在肝微粒体的代谢反应过程中受代谢酶 CYP3A4和 CYP2E1的作用,竞争性地抑制了睾酮和对乙酰氨基酚在肝微粒体中的代谢。     

蓝萼甲素在大鼠体内外的代谢转化

目的研究蓝萼甲素在大鼠体内外的代谢转化。方法采用大鼠肝微粒体体外温孵法,研究对蓝萼甲素的代谢转化。采用RP-HPLC法同时分离检测蓝萼甲素及其体外代谢产物。结果用液-液萃取、制备HPLC法,从大鼠胆汁中分离了一个代谢产物,经质谱分析推测结构为羟基化蓝萼甲素,并采用HPLC-MS连用,分析了肝微粒体体外温孵样品中的代谢产物,推测了蓝萼甲素的可能代谢转化途径。结论蓝萼甲素在大鼠肝微粒体和胆汁中可被代谢转化,主要代谢产物为羟基化蓝萼甲素。     

去氢土莫酸在大鼠体外肝微粒体体系中的生物转化研究

目的:研究中药茯苓中主要化学成分之一的去氢土莫酸在大鼠肝微粒体中的生物转化.方法:用大鼠肝微粒体体外温孵法进行去氢土莫酸的生物转化,优化了温孵体系;高效液相色谱法检测和制备原形化合物去氢土莫酸及其生物转化产物,核磁共振波谱法和质谱法确定生物转化产物的结构.结果:去氢土莫酸在苯巴比妥诱导的大鼠肝微粒体药物代谢酶作用下,产生2个转化产物,分别为土莫酸和去氢茯苓酸.结论:去氢土莫酸可被苯巴比妥诱导的大鼠肝微粒体药物代谢酶转化为土莫酸和去氢茯苓酸.     

新型抗慢性肾功能不全药硝克柳胺在大鼠肝微粒体和胞浆的代谢

目的：研究硝克柳胺在大鼠肝微粒体和胞浆中的代谢动力学及参与硝克柳胺体外代谢的药物代谢酶鉴定。方法：硝克柳胺分别与大鼠肝微粒体和胞浆温孵一定时间后，应用HPLC方法测定硝克柳胺含量，计算体外代谢速率和动力学参数（Kin，Vmax）。在微粒体或胞浆中加入选择性CYP抑制剂、硝基还原酶抑制剂，鉴定参与硝克柳胺代谢的药酶类型。结果：硝克柳胺在肝微粒体代谢是依赖NADPH／NADH的酶促反应，缺氧代谢高于有氧代谢，微粒体代谢明显快于胞浆。CYP2C6特异性抑制剂西米替丁、NADPH-细胞色素C还原酶特异性抑制剂2‘-单磷酸腺苷（2’-AMP）和细胞色素b5还原酶特异性抑制剂6-丙基-2-硫脲嘧啶（PTU）可明显抑制肝微粒体中硝克柳胺的代谢，其它CYP特异性抑制剂对硝克柳胺的代谢无明显影响。NAD（P）H脱氢酶特异性抑制剂双香豆素和黄嘌呤氧化酶特异性抑制剂别嘌呤醇也可显著抑制肝胞浆中硝克柳胺的代谢。结论：硝克柳胺的体外代谢是依赖多个药物代谢酶参与的酶促反应，包括微粒体NADPH-细胞色素C还原酶、细胞色素b5还原酶和CYP2C6以及胞浆NAD（P）H脱氢酶和黄嘌呤氧化酶。     

人肝微粒体中尼莫地平代谢的酶动力学及其抑制(英文)

目的:在体外研究人肝微粒体中尼莫地平代谢的酶动力学及选择性的细胞色素P-450(CYP450)酶抑制剂对尼莫地平代谢的影响。方法:采用人肝微粒体研究尼莫地平脱氢酶的代谢动力学,运用Eadie-Hof-stee方程估算其动力学参数。在体外运用CYP450酶的选择性抑制剂探讨其对尼莫地平代谢的影响及人肝微粒体中参与尼莫地平二氢吡啶环脱氢代谢的CYP450酶。结果:尼莫地平在人肝微粒体中的代谢存在较大的个体差异,尼莫地平脱氢酶的K_m为(36±11)μmol,其V_m为(17±7)μmol·g~(-1)·min~(-1)。酮康唑和三乙酰竹桃霉素竞争性地抑制尼莫地平二氢吡啶环脱氢代谢,其K_i值分别为0.59和122.2μmol。非那西丁、奎尼丁、DDC、Sul和Tra对尼莫地平二氢吡啶环脱氢代谢没有明显的影响。结论:尼莫地平在体内的药物动力学个体差异与其在肝中的代谢存在多态性有关。CYP3A参与了尼莫地平二氢吡啶环脱氢代谢,CYP3A的抑制剂可能会与尼莫地平发生代谢相互作用。     

CYP2B和CYP3A参与药物代谢的影响因素及对氯胺酮代谢的影响

目的:为进一步研究氯胺酮在成瘾动物体内代谢动力学规律及细胞色素P_(450)活性的调控和相关性研究提供参考。方法:以"细胞色素P_(450)""性别""氯胺酮""CYP2B""CYP3A""Sex""Ketamine"等为关键词,组合查询1980-2016年在Pub Med、Elsevier、中国知网、万方、维普等数据库中的相关文献,对CYP2B和CYP3A参与药物代谢的诱导、抑制和性别等影响因素及对氯胺酮代谢的影响进行综述。结果与结论:共检索到相关文献256篇,其中有效文献62篇。CYP2B和CYP3A是重要的细胞色素P_(450),二者参与代谢了临床大多数药物,包括氯胺酮。诱导、抑制和性别差异等因素主要是通过改变细胞色素P_(450)的基因表达和蛋白表达来影响药物在动物体内代谢的。氯胺酮是一种被广泛滥用的药物,具有成瘾性和个体的耐受差异性。通过研究细胞色素P_(450)的基因表达和蛋白表达有利于指导研究氯胺酮在成瘾动物体内的特殊代谢动力学规律,以及为阐释成瘾动物体内的细胞色素P_(450)活性的调控机制和相关性研究提供理论支持。     

藁本内酯在大鼠肝微粒体中代谢的酶动力学

研究体外大鼠肝微粒体藁本内酯代谢的酶动力学及选择性CYP450酶抑制剂对其代谢的影响。建立测定肝微粒体孵育液中藁本内酯含量的LC-MS法,以尼群地平为内标,二者的定量离子m/z分别选择173和315。考察确定最佳温孵条件,进行藁本内酯代谢的酶促反应动力学研究,通过特异性抑制试验,探讨参与藁本内酯代谢的主要同工酶。结果显示,酮康唑、甲氧苄啶、α-萘黄酮显著抑制藁本内酯的体外代谢,而奥美拉唑、4-甲基吡唑、奎尼丁对其体外代谢影响不大。可见CYP3A4、CYP2C9和CYP1A2是参与藁本内酯代谢的主要代谢酶,CYP2C19、CYP2E1和CYP2D6没有明显参与催化其代谢。

     

DHDK肝微粒体代谢动力学研究

目的 研究抗肿瘤候选药物DHDK在人和大鼠肝微粒体的代谢动力学特征,比较种属差异,为临床前研究提供依据。方法 建立HPLC法测定DHDK在肝微粒体孵育体系中的含量,用于考察DHDK体外代谢稳定性和酶动力学,进而推算其在体内的肝清除率(CL_h)与肝提取率(ER)。结果 肝微粒体孵育试验表明DHDK在两个种属之间的体外代谢稳定性和酶动力学行为无显著性差异(P>0.05),但在人体内的肝清除率显著低于大鼠(P<0.05)。结论 DHDK体外代谢主要依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸和肝微粒体酶,属于中等程度代谢消除。     

环丙沙星对人肝微粒体药物酶活性的影响

目的：观察环丙沙星对人肝微粒体药物代谢酶活性的影响。方法：用正常人新鲜肝组织低温匀浆,低温超速离心分离肝微粒体,测定肝微粒体细胞色素P450（CP450）的含量。以环丙沙星为处理因素,作肝微粒体药物代谢活性测定的体外试验。反应体系中微粒体蛋白的终浓度为1．0g/L,环丙沙星的终浓度为400mg/L。结果：环丙沙星对人肝微粒体药物代谢酶的活性抑制有选择性,对不同酶其抑制强度不同。对多种酶的抑制强弱顺序为：戊巴比妥侧链羟化酶＞苯并芘羟化酶＞乙基吗啡N－脱甲基酶, 其抑制率分别为0．34、0．30、和0．18。结论：环丙沙星对人肝微粒体多种药物代谢酶活性有明显的抑制作用。提示对肝功异常者、使用戊巴比妥钠麻醉的病人、经常服用吗啡类药物及高苯比芘含量环境工作人员该类药物应慎用。     

大鼠肝微粒体中葛根素的液相色谱-质谱测定法及药物代谢动力学

目的建立大鼠肝微粒体中葛根素及其代谢物的液相色谱质谱测定法,并研究葛根素在大鼠肝微粒体中的药物代谢动力学。方法色谱柱为Waters C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇水(体积比为50∶50),通过电喷雾电离源(ESI),以正离子方式进行检测。结果方法的回收率为95.6%~96.8%,其日内、日间的RSD分别为4.9%~7.6%和3.7%~6.2%,葛根素的质量浓度在0.5~20 mg.L-1内与峰面积呈良好的线性关系。在温孵时间0~40 min内、微粒体蛋白质量浓度在0.5~2.0 g.L-1内,葛根素呈线性消除,随着肝微粒体蛋白质量浓度的增大,葛根素呈线性消除,葛根素可被肝微粒体代谢成大豆苷元。其代谢机理为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)依赖性的氧化代谢。还原型烟酰胺二核苷酸(NADH)对葛根素代谢基本没有催化作用。结论葛根素在大鼠肝微粒体内被迅速代谢,大鼠肝微粒体P450酶参与了葛根素的代谢。