凉膈散对内毒素肺损伤小鼠肺组织核因子-κB活性的影响

目的 :通过研究凉膈散在内毒素 (LPS)损伤小鼠肺组织中对肺组织核因子 -κB (NF-κB)的活性的影响 ,探讨凉膈散对机体保护作用的机理。方法 :小鼠随机分为内毒素损伤组及低、中、高剂量凉膈散组 (其中又分为LPS损伤后 2h、 4h、 8h三组 ) ,另设正常对照组。用电泳迁移率改变法 (EMSA)检测各组动物肺组织匀浆中NF -κB活性。结果 :与正常对照组相比较 ,LPS注射后 2h肺组织核蛋白NF -κB明显活化 ,4h达高峰 ,8h有所下降 ,但仍高于正常对照组。且各剂量中药组肺组织核蛋白NF -κB活化程度呈剂量相关性 ,表现为高剂量组最低 ,中、低剂量组活化有所下降。结论 :各剂量凉膈散均能有效抑制NF -κB活化 ,中药凉膈散保护机体免受LPS损伤作用的机理可能是通过抑制组织核蛋白NF -κB的活性 ,从而抑制各种炎症细胞因子的产生 ,而起到清热解毒的作用。     

凉膈散对内毒素致大鼠急性肺损伤的保护作用

目的:探讨凉膈散对内毒素(LPS)致急性肺损伤(ALI)的保护作用。方法:静脉注射内毒素5mg/kg制作大鼠急性肺损伤模型。将实验动物随机分为对照组、LPS组、LPS 3个不同剂量凉膈散组、LPS 地塞米松组,伤后1、2、4、8、16h观察各组大鼠的动脉血氧分压(PaO2)、肺组织通透性指数、肺组织含水量及肺系数、肺组织病理改变的差异。结果:LPS 4h后组肺间质水肿,肺泡腔内可见大量炎细胞浸润和血浆蛋白渗出;氧分压降低,肺湿干重比、肺系数及肺通透性指数均显著升高。地塞米松、凉膈散各组均较LPS组显著下降,氧分压值升高。结论:凉膈散对内毒素导致的急性肺损伤具有保护作用。     

凉膈散对内毒素致大鼠急性肺损伤T辅助细胞漂移的影响

目的 探讨凉膈散对内毒素致大鼠肺损伤时机体致炎、抗炎反应的分子机制.方法 用内毒素脂多糖(LPS)复制大鼠急性肺损伤模型.分别用高、中、低剂量的凉膈散水煎剂灌胃给药,并与地塞米松做对照,于不同时间点检测外周血及支气管肺泡灌洗液(BALF)中T辅助细胞1(Th1)和T辅助细胞2(Th2)的含量,观察Th1/Th2比值的变化.结果 模型组大鼠外周血与BALF中Th1/Th2比值逐渐降低,在4、8、16h时间点与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01),中、高剂量组与地塞米松组的Th1/Th2比值在8h和16h与模型组同时间点比较有所提高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 凉膈散在一定程度上纠正了Th1/Th2细胞比例失衡,这可能是其对急性肺损伤具有保护作用的机制之一.     

凉膈散对内毒素致急性肺损伤大鼠肺水肿的保护作用

目的 :探讨凉膈散对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤肺水肿及肺水通道蛋白(aquaporin,AQP)1、5表达的影响。方法:大鼠随机分成LPS组、LPS+三个不同剂量凉膈散组、LPS+地塞米松组、对照组,LPS造模动物,又分为注射LPS后1、2、4、8、16 h不同时相处死组。各组大鼠在相应时间点处死后取肺组织测定大鼠肺水含量、肺系数以及观察肺组织形态学的改变,采用蛋白免疫印迹分析(Western blot)法和免疫组化法(SP)检测大鼠肺组织中AQP-1、AQP-5蛋白表达和分布情况。结果 :与对照组相比,LPS组大鼠致损伤后2 h,肺水含量、肺系数持续增高,肺组织内AQP-1、AQP-5表达开始下降,损伤4 h后,AQP-1表达略有回升,而AQP-5表达随着损伤时间的延长持续降低;病理形态学显示肺泡隔增厚、肺间质及肺泡水肿,并有大量炎性细胞的浸润。与LPS组比较,凉膈散各剂量及地塞米松干预组大鼠病理损伤明显减轻,肺水含量、肺系数值显著降低(P<0.05,P<0.01),肺组织内AQP-1、AQP-5表达显著增加(P<0.05,P<0.01)。结论:凉膈散对内毒素诱导的大鼠急性肺损伤肺水肿有保护作用,其机制可能与上调急性肺损伤时肺组织内AQP-1、AQP-5蛋白的表达有关。     

凉膈散对内毒素诱导大鼠急性肺损伤模型Toll样受体4表达的影响

目的研究凉膈散对内毒(LPS)素诱导大鼠急性肺损伤(ALI)时Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法大鼠随机分成LPS组、LPS+3个不同剂量凉膈散组、LPS+地塞米松组、对照组,注射LPS后于1,2,4,8,16 h不同时相处死动物。采用蛋白免疫印迹分析(Western blot)法检测大鼠肺组织中TLR4蛋白表达的变化,光镜下观察肺组织病理学改变。结果与对照组比较,大鼠尾静脉注射LPS(5 mg.kg-1)后,LPS组大鼠肺组织TLR4表达开始增高,4 h达高峰(P0.01),随后表达逐渐下降,到16 h时其表达仍高于对照组。与LPS组比较,凉膈散和地塞米松预处理组在2,4,8 h可显著降低TLR4的表达(P0.05,P0.01),凉膈散各组及地塞米松组各组间比较均无显著性差异。结论 TLR4在大鼠肺组织内广泛分布,LPS刺激可使TLR4的表达增加,凉膈散可抑制TLR4的增加,这可能是凉膈散抗内毒素急性肺损伤的机制之一。     

凉膈散对小鼠内毒素血瘀模型微循环的影响

凉膈散煎剂２０ｇ／ｋｇｉｇ连续３天，对内毒素复制的小鼠血瘀模型肠系膜微循环障碍有明显的改善作用     

凉膈散对家兔内毒素温病模型的解毒作用研究

本用大肠杆菌内毒素复制家兔温病模型，观察凉隔散对该模型动物的解毒作用。结果表明，凉隔散可减少模型动物血浆内毒素含量，降低血浆肿瘤坏死因子（TNF-a）、血清过氧化脂质（LPO）水平，提高血清超氧化物歧化酶（SOD）活性，减轻脏器组织病理损害。提示凉隔散可通过多途径发挥解毒作用。     

凉膈散对LPS诱导的巨噬细胞丝裂素活化蛋白激酶p38活性的影响

目的:通过研究凉膈散对内毒素诱导的体内、体外细胞丝裂素活化蛋白激酶p38(P38MAPK)活性的影响,探讨凉膈散解毒作用的细胞信号转导调控机制.方法:分体内和体外实验两部分进行研究.体内实验部分采用凉膈散灌胃并用尾静脉注射制造内毒素损伤小鼠模型,采集腹腔巨噬细胞,用免疫沉淀及westernblot法测定磷酸化的p38MAPK(p-p38MAPK)活性.体外实验部分:制备凉膈散药物血清,培养巨噬细胞RAW264.7细胞.用免疫沉淀及放射自显影技术测定不同剂量药物血清对内毒素诱导的RAW264.7细胞p38MAPK活性的影响.结果:体内实验部分,与正常对照组相比,LPS损伤组的p-p38MAPK活性明显增强,各剂量药物组及地塞米松组均低于LPS损伤组,以高剂量药物组及地塞米松组最低,中低剂量组次之,呈剂量依赖性.体外实验部分:不同剂量药物血清组及阳性药物组RAW264.7细胞p38蛋白激酶活性均低于正常血清组,以高剂量药物组及阳性药物组最低,中低剂量次之,呈剂量依赖性.结论:不管在体内还是在体外,凉膈散都能明显抑制LPS诱导的磷酸化的p38MAPK活性的增强,并呈剂量依赖性.推断这是凉膈散解毒作用的细胞信号转导机制之一.     

凉膈散含药血清对内毒素刺激RAW264.7细胞CD14mRNA表达的影响

目的:研究凉膈散药物血清体外对内毒素刺激小鼠RAW264.7细胞CD14mRNA表达的影响.方法:大鼠以凉膈散灌胃,制备药物血清.以凉膈散药物血清或正常血清的培养液与LPS体外共同培养RAW264.7细胞,原位杂交法检测凉膈散药物血清对内毒素刺激RAW264.7细胞CD14mRNA表达变化.结果:与LPS刺激组比较,不同剂量药物血清组CD14mRNA表达量均比它低,呈剂量依赖性;正常血清组则无显著性差异.结论:凉膈散含药血清体外对LPS刺激小鼠单核细胞CD14mRNA转录具有抑制作用.减少LPS效应细胞的CD14mRNA的表达可能是凉膈散减轻LPS对机体损伤,发挥解毒作用的机制之一.     

凉膈散对内毒素血症小鼠的肝脏库普弗细胞CD14和清道夫受体表达的影响

目的:探讨凉膈散对内毒素血症小鼠的肝脏库普弗细胞CD14和清道夫受体(SR)的表达的影响以及肝脏(LPS)引起损伤的影响,从细胞信号转导途径阐明中药解毒机制。方法:建立内毒素血症小鼠动物模型,同时灌服凉膈散,在内毒素给药后不同时间点(2,4,8 h)杀动物取肝组织,免疫组化法观察肝脏库普弗细胞CD14及SR表达的变化,并进行图像分析和肝组织的病理检测。结果:注射LPS 2,4,8 h后,与正常对照组相比,LPS损伤组肝脏库普弗细胞CD14的表达均呈显著升高,SR表达均呈显著降低(P<0.01)。不同剂量凉膈散组及地塞米松组均介于正常对照组与LPS损伤组之间。与LPS损伤组比较,不同剂量凉膈散组及地塞米松组在两者的表达上均有显著性差异(P<0.01),以高剂量凉膈散最为明显,呈剂量相关性。肝脏损伤主要表现为空泡变性,肝脏库普弗细胞SR,CD14的表达变化与小鼠肝损伤程度呈平行关系。结论:凉膈散对内毒素血症小鼠的肝脏库普弗细胞表面CD14表达上调以及SR表达下调有明显的抑制作用,并能减轻内毒素所致的肝损伤。     

加味升降散对哮喘小鼠肺组织NF-кB表达的影响

目的探讨加味升降散对哮喘小鼠肺核因子-κB(nuclearfactor-kappaB,NF-κB)表达的影响。方法采用卵清白蛋白激发小鼠哮喘,然后采用加味升降散进行干预,免疫组织化学染色方法观察NF-κB在小鼠肺组织中的表达变化。结果NF-кB主要表达于气道壁上皮细胞及炎性细胞,各哮喘模型对照组小鼠肺支气管壁NF-кB面积及积分光密度值均明显高于正常组(P<0.01),各用药组小鼠支气管壁NF-кB面积及积分光密度值均显著小于模型对照组(P<0.01或P<0.05),且中药高剂量治疗组支气管上皮细胞及肺泡壁炎性细胞胞核阳性的细胞比例显著低于哮喘组(P<0.05)。结论加味升降散能显著降低哮喘小鼠气道壁细胞内NF-κB的表达,并有效抑制其核转位,提示抑制NF-κB的表达是加味升降散治疗哮喘的重要机制。     

谷氨酰胺对急性肺损伤大鼠核因子-κB及肿瘤坏死因子-α的影响

目的：探讨谷氨酰胺（GLN）对急性肺损伤核因子-κB（NF-κB）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响。方法：健康清洁级SD大鼠32只,随机分为4组,每组8只。A组为生理盐水组,B组为油酸组,C组为油酸后0小时谷氨酰胺治疗组。D组为油酸后1小时谷氨酰胺治疗组。于注射油酸后4小时处死大鼠,免疫组织化学染色检测NF—-κB、TNF-α在肺组织的表达并HE染色,观察肺组织变化。结果：在油酸诱导的急性肺损伤中,NF-κB和TNF-α表达上调,在油酸后0小时谷氨酰胺治疗组（组）NF-κB和TNF-α的表达明显低于油酸纽（B组）（P〈0．05）,而油酸组与油酸后1小时谷氨酰胺治疗纽（D组）无明显差异。结论：油酸性急性肺损伤时,肺组织NF-κB、TNF-α表达增强,谷氨酰胺早期给药可减轻这种影响,而减轻肺损伤。     

凉膈散对家兔内毒素温病模型的化瘀作用研究

用大肠杆菌内毒素ｉｖ复制家兔温病模型，观察凉膈散对模型动物的化瘀作用，结果凉膈散能够抑制内毒素所致家兔血小板计数（ＢＰＣ）、凝血酶原时间（ＰＴ）、血浆纤维蛋白原含量（Ｆｂ）及血液流变性的异常改变，并能抑制ＡＤＰ诱导的正常和模型家兔血小板聚集     

护津方对急性肺损伤大鼠肺组织核转录因子-κB mRNA表达的影响

目的 探讨护津方对细菌脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤大鼠肺组织核转录因子-κB mRNA(NF-κBmRNA)表达的影响.方法 40只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、地塞米松组和护津方组,每组再分为4h和8h两个亚组;分别用地塞米松和护津方在LPS诱导急性肺损伤模型前预处理大鼠.采用免疫组化法和定量RT-PCR检测大鼠肺组织NF-κB蛋白及NF-κB mRNA的表达,光镜观察肺组织病理形态.结果 与模型组相比,护津方组两个亚组大鼠肺组织NF-κB蛋白及NF-κB mRNA的表达均显著降低.病理学观察显示,模型组大鼠肺组织出现大片出血及坏死,护津方组大鼠肺组织病理损伤程度较模型组减轻.结论 护津方对内毒素致急性肺损伤大鼠有保护作用,其机制可能与其降低内毒素致急性肺损伤大鼠NF-κB蛋白及NF-κB mRNA的表达有关.     

基于斑马鱼炎症模型的凉膈散及其组分甘草不同极性部位的抗炎活性评价及作用机制

目的：采用脂多糖（LPS）诱导斑马鱼炎症模型,通过浸泡给药方式,评价凉膈散及其组分甘草不同极性部位的抗LPS活性。方法：利用相似相溶原理分离得到凉膈散及其组分甘草的不同极性部位,随机选择受精后3 d的斑马鱼,暴露于不同浓度的药物提取物中,进行为期24、48、72 h的毒性观察;斑马鱼卵黄囊显微注射0.5 g·L-1LPS造模,浸泡给予不同浓度的凉膈散及甘草提取物,统计72 h内斑马鱼的生存数目并在显微镜下观察12 h时斑马鱼卵黄囊中性粒细胞的聚集情况;苏木素-伊红（HE）染色对LPS显微注射斑马鱼卵黄囊进行组织病理学分析;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）进一步探讨凉膈散及甘草体内抗炎作用及其可能的机制。结果：凉膈散及甘草提取物毒性随着极性升高而降低,药物的毒性大小依次为石油醚部位>乙酸乙酯部位>正丁醇部位>水部位;与LPS模型组比较,各提取物均能提高LPS斑马鱼炎症模型的动物生存率,抑制斑马鱼卵黄囊中性粒细胞的聚集及炎症细胞浸润,其中凉膈散水部位与甘草乙酸乙酯部位的效果最为显著（P<0.01）;此外,与LPS模型组比较,凉膈散水部位与甘草...     

桂枝挥发油对LPS致大鼠急性肺损伤模型核因子κB信号通路的影响

目的:探讨桂枝挥发油对核因子κB信号通路的影响。方法:制作LPS诱导的大鼠急性肺损伤模型,通过桂枝挥发油治疗后,采用ELISA法检测肺组织细胞核蛋白NF-κBP65含量和肺组织溶浆中磷酸化IκB-α、IL-1β的含量。结果:正常大鼠肺组织中NF-κBP65、磷酸化IκB-α和IL-1β仅有微量表达,LPS尾静脉注射后6h各其表达显著增高,桂枝挥发油高、中、低剂量组NF-κBP65、磷酸化IκB-α和IL-1β的含量均较模型组显著降低。结论:桂枝挥发油对急性肺损伤时高度活化的核因子κB信号通路有显著的抑制或拮抗作用,提示核因子κB信号通路是桂枝挥发油抗炎作用的主要靶点之一。     

外燥对小鼠肺组织NF-κB活性的影响

目的:观察外燥对小鼠肺组织NF-κB活性的影响.方法:120只SPF级昆明种小鼠随机分为温燥组、凉燥组、常温常温组、常温燥组各30只,模拟外燥"温度-相对湿度-风"综合刺激进行造模,造模后第6、第12、第18天检测各组小鼠肺组织NF-κB活性.结果:温燥组、凉燥组第6、第12、第18天肺组织NF-κB活性均低于常温常湿...     

基于网络药理学探究凉膈散对急性胰腺炎肺损伤大鼠的保护作用

目的 基于网络药理学探究凉膈散对急性胰腺炎肺损伤(AP-ALI)大鼠的保护作用。方法 利用TCMSP、TCMID、GeneCards、DisGeNET及STRING数据库建立药物与疾病的靶点网络,使用Cytoscape筛选靶点,借助GO和KEGG富集分析阐释生物学机制,使用Autodock Vina 1.1.2和PyMOL计算并可视化成分和靶标的结合情况。大鼠随机分为对照组、模型组和凉膈散组,除对照组外,其余组大鼠经胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠(50 mg/kg)制备AP-ALI模型,凉膈散组于造模后2、12 h灌胃给予10 g/kg凉膈散。造模后24 h收集血浆、血清和胰腺、肺组织,测定肺组织湿/干重比,血浆PaO₂和PaCO₂值,血清淀粉酶活性和炎症因子TNF-α、IL-6水平,肺组织MDA、GSH水平和MPO活性,HE染色观察胰腺和肺组织病理损伤,TUNEL染色检测肺组织细胞凋亡情况,Western blot法检测肺组织PTGS2、cleaved caspase-3、HO-1、P53蛋白表达。结果 网络药理学分析筛得凉膈散活性成分155...     

宣白承气汤对急性肺损伤大鼠肺组织CD14 和NF-κB mRNA表达的影响

目的:探讨宣白承气汤对脂多糖( lipopolysaccharide,LPS)诱导的急性肺损伤(acute lung injury,ALI)大鼠肺组织CD14和核转录因子-κB (nuclear factor-κB,NF-κB) mRNA表达的影响.方法:健康雄性Wistar大鼠32只,随机分为正常对照组、模型对照组、地塞米松组、宣白承气汤组共4组,每组8只.模型组与各治疗组大鼠采用尾静脉注射LPS(6 mg·kg-1)复制ALI模型.正常对照组和模型组给等容积生理盐水ig,地塞米松组给药为5 mg· kg-1ip,宣白承气汤组给药为7 560 mg·kg-1ig.于3d末次给药后采用实时荧光定量PCR法测定肺组织CD14和NF-κB mRNA表达.观察肺组织病理变化.结果:与正常对照组比较,模型对照组的支气管肺泡灌洗液蛋白含量、肺体指数、CD14和NF-κB mRNA表达均明显升高(P＜0.01).与模型对照组比较,宣白承气汤组支气管肺泡灌洗液蛋白含量、肺体指数、CD14、NF-κB mRNA和CD14蛋白染色阳性细胞面积率表达均降低(P ＜0.05或P＜0.01).病理学观察,模型组大鼠肺泡腔内充满炎性渗出物和出血,宣白承气汤组大鼠肺组织病理改变明显轻于模型组,肺细支气管轻度间质性炎症.结论:宣白承气汤能减轻内毒素致ALI大鼠肺组织损伤,对肺损伤有保护作用,其机制可能与其抑制肺组织CD14和NF-κB mRNA表达有关.