两种方法检测血清人附睾分泌蛋白在盆腔疾病诊断中的研究

  目的  探讨血清人附睾分泌蛋白(human epididymis protein 4, HE4)在盆腔疾病诊断及鉴别诊断中的应用价值, 比较电化学发光法(electrochemiluminescence immunoassay, ECLIA)及酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测人附睾分泌蛋白的诊断准确性。  方法  采用ECLIA检测211例患者血清HE4水平, 包括85例卵巢癌、42例子宫内膜癌、21例子宫内膜异位症、33例盆腔良性疾病及30例健康对照者。结果以中位数表示, 分析血清HE4在盆腔疾病诊断及鉴别诊断中的意义, 并分别探明诊断卵巢癌及子宫内膜癌的最佳判定值。采用ELISA对其中卵巢癌组及卵巢良性疾病组血清HE4进行检测, 绘制受试者工作特征曲线(ROC), 计算曲线下面积(ROC-AUC), 比较两种方法鉴别诊断卵巢良恶性疾病的准确性。  结果  卵巢癌组、子宫内膜癌组血清HE4水平显著高于健康对照组、卵巢良性疾病组及子宫内膜异位症组; 卵巢良性疾病组及子宫内膜异位症组与健康对照组比较, 无显著性差异; HE4在鉴别诊断卵巢良恶性疾病、子宫内膜良恶性疾病时, 其ROC-AUC分别为0.869和0.931, 最佳诊断点分别为86.02 pmol/L和74.6 pmol/L。以卵巢良性肿瘤组作为对照, ECLIA法及ELISA法检测卵巢癌患者血清HE4的ROC-AUC分别为0.869和0.794。  结论  HE4在盆腔疾病的诊断及良恶性鉴别中具有较高的诊断价值, ECLIA法检测卵巢癌的诊断准确性优于ELISA法。      

消癌平注射液下调MMP-9基因表达抑制卵巢癌细胞Caov-3迁移机制的研究

  目的  研究中药消癌平注射液下调MMP-9基因表达, 抑制卵巢癌细胞Caov-3迁移的机制。  方法  利用消癌平注射液干预体外培养的卵巢癌Caov-3细胞, 分别应用: 细胞划痕实验观察细胞的迁移水平; 肿瘤细胞侵袭实验(Transwell 小室法)观察细胞侵袭能力; RT-PCR实验检测卵巢癌细胞中金属蛋白酶MMP-9基因表达水平。以金属蛋白酶MMPs特异性抑制剂-Doxycyclin作为阳性对照, 同时应用PBS作空白对照。  结果  消癌平可有效抑制Caov-3细胞迁移, 与空白对照组相比差异有统计学意义(P < 0.05), 但与Doxycyclin组差异无统计学意义(P > 0.05);消癌平还可部分抑制血清诱导的Caov-3细胞穿过Transwell小室, 其抑制效果与Doxycyclin相似; 此外, 消癌平还能够下调MMP-9基因表达水平。  结论  消癌平下调MMP-9基因表达, 抑制卵巢癌Caov-3细胞迁移。      

正常CA125水平的卵巢癌患者血清和尿液中MMP-2水平变化

目的：探讨在正常和异常CA125水平的卵巢癌患者血清和尿液MMP-2水平的变化。方法：选取83例卵巢癌患者（CA125正常的卵巢癌患者38例,CA125异常的卵巢癌患者45例）,50例健康体检妇女为研究对象。用ELISA方法测定血清和尿液中MMP-2的水平。结果：CA125正常和异常的卵巢癌组血清和尿液中MMP-2水平明显高于对照组（P〈0.01）。血清MMP-2和尿液MMP-2诊断卵巢癌的ROC曲线下面积分别为0.846和0.860（P〈0.01）;血清MMP-2和尿液MMP-2在CA125正常情况下诊断卵巢癌的ROC曲线下面积分别为0.814和0.853（P〈0.01）。尿液MMP-2和CA125的联合诊断达到最高灵敏度96.7%和特异度92.5%。结论：血清与尿液中MMP-2的检测可以用于卵巢癌的辅助诊断。     

卵巢上皮性癌组织中DAPK基因启动子甲基化及其蛋白表达的研究

  目的  研究卵巢上皮性癌组织中DAPK基因启动子甲基化及其蛋白表达在卵巢癌发生发展过程中的作用及意义。  方法  应用甲基化特异性PCR(MSP)检测55例卵巢上皮性癌(恶性组)、25例卵巢交界性上皮性肿瘤(交界组)、30例卵巢良性上皮性肿瘤(良性组)、25例正常卵巢上皮组织(正常组)的石蜡包埋组织中DAPK基因启动子的甲基化情况。应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(S-P)法检测上述蜡块组织中DAPK蛋白的表达情况。  结果  DAPK启动子在正常组、良性组、交界组、恶性组的甲基化率分别为0(0/25)、6.7%(2/30)、16.0%(4/25)、47.3%(26/55), 差异有统计学意义(P < 0.001), 恶性组的甲基化率高于其他三组; DAPK蛋白在正常组、良性组、交界组、恶性组的阳性表达率分别为96.0%(24/25)、90.0%(27/30)、48.0%(12/25)、30.9%(17/55), 差异有统计学意义(P < 0.001), 恶性组、交界组的阳性表达率均低于正常组和良性组; DAPK基因启动子甲基化和DAPK蛋白表达呈负相关。  结论  DAPK基因启动子甲基化导致基因沉默、失活, 引起蛋白表达下调或缺失, 并参与了卵巢上皮性癌的发生发展。      

卵巢癌腹腔微环境中肿瘤相关巨噬细胞表型特点及其TLR表达谱的研究

  目的  探讨卵巢癌腹水微环境中肿瘤相关巨噬细胞(TAM)浸润情况及其表型特征和TAM的Tol样受体表达情况。  方法  应用免疫组织化学方法及流式细胞术检测卵巢癌及妇科良性病变腹水中CD68+TAM及其亚型的比例情况。应用Real-timePCR检测不同亚型TAM的Tol样受体的表达情况。  结果  23例卵巢癌腹水细胞CD68+TAM平均值为73.6个/HP, 20例良性病变平均计数为50.2个/HP。两组间CD68+TAM浸润差异无统计学意义(P > 0.05)。CD68+TAM在卵巢癌及对照组腹水中所占比例无差异, 分别为31.7%和18.8%(P > 0.05)。卵巢癌腹水中M2型TAM占全部巨噬细胞54.3%, 明显高于对照组10.0%(P < 0.05);对照组M1型TAM占优势, 为53.3%, 明显高于卵巢癌组的30.5%(P < 0.01)。不同亚型巨噬细胞Toll样受体表达差异无统计学意义。  结论  卵巢癌腹腔微环境中同时存在M1和M2型TAM, 但M2型TAM在卵巢癌中占优势, 而M1型TAM在良性病变中占优势。Toll样受体不能区分M1-TAM与M2-TAM。      

彩色多普勒超声对卵巢肿瘤的诊断价值

  目的  探讨彩色多普勒超声检查在卵巢肿瘤中的临床诊断价值。  方法  选取2009年4月至2011年4月本院诊断为卵巢肿瘤患者114例, 所有患者均行彩色多普勒超声检查且资料完整, 均经手术和病理证实。  结果  114例卵巢肿瘤患者经手术后病理明确诊断为: 良性卵巢肿瘤83例, 恶性卵巢肿瘤31例, 多普勒超声检查诊断良性卵巢肿瘤76例, 恶性卵巢肿瘤27例, 诊断符合率为90.35%;良、恶性卵巢肿瘤内部血流信号测出比例相差9.21%, 经统计学软件处理, 其差异统计学有意义(P < 0.05);两组间R1、PI差异比较明显, P值均 < 0.05, 差异具有统计学意义; 两组间的PSV、HV、LV、MV、S/D值差异无统计学意义(P>0.05)。  结论  彩色多普勒超声检查对卵巢肿瘤良恶性的鉴别诊断具有重要的意义。      

卵巢癌中PGRMC1基因表达与微血管密度的关系

  目的  检测人卵巢癌组织中PGRMC1（progesterone receptor membrane component-1）基因表达情况,探讨PGRMC1基因在卵巢癌发生发展过程中的作用。  方法  利用免疫组织化学方法检测78例不同病变卵巢组织蜡块中PGRMC1基因及蛋白表达情况;以TBP（TATA box binding protein）为内源性对照基因,利用实时定量PCR方法检测了10例正常新鲜卵巢组织和30例新鲜卵巢癌组织中PGRMC1基因的mRNA表达水平。  结果  采用免疫染色强度加着色面积的积分标准判断免疫组织化学结果,与正常卵巢（0.20±0.71）及卵巢良性肿瘤组（0.75±1.12）相比,卵巢交界性肿瘤中PGRMC1蛋白表达（3.60±1.14）和卵巢癌（7.30±2.12）显著增高（P < 0.01）。实时定量PCR方法证实卵巢癌组PGRMC1 mRNA表达（3.526±1.386）显著高于良性卵巢病变组（0.936±0.725）（P < 0.01）,是良性卵巢病变组织表达的3.51倍。PGRMC1蛋白阳性表达的卵巢组织中,正常卵巢组MVD为（18.6±6.7）条;良性卵巢病变组MVD为（20.9±7.9）条;交界性卵巢肿瘤组MVD为（22.4±4.7）条;卵巢癌组MVD为（28.4±8.1）条,卵巢癌组与正常卵巢组、良性卵巢肿瘤组间差异有统计学意义（P < 0.01）。  结论  PGRMC1高表达可能与卵巢癌的发生、发展有关,并可能促进血管生成。      

高迁移率族蛋白在卵巢癌的诊断价值及其对卵巢癌疾病进展的调控功能

  目的   研究高迁移率族蛋白（HMGB1）在上皮性卵巢癌、卵巢良性疾病及健康人血清中的表达情况及与临床治疗的关系，通过RNA干扰抑制探讨HMGB1对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。   方法   ELISA检测47例卵巢癌患者手术前及术后1个月血清中HMGB1表达水平，30例卵巢良性疾病患者作为良性肿瘤组，30例健康女性作为正常对照组；靶向HMGB1基因的慢病毒载体转染卵巢癌细胞，并利用RT-PCR和Western Blot方法检测干扰效果，CCK-8法检测细胞增殖情况，Transwell小室模型检测细胞侵袭迁移能力。   结果   卵巢癌组HMGB1水平明显高于良性肿瘤组与正常对照组（P < 0.01），卵巢癌术后HMGB1较术前明显降低（P < 0.01），抑制HMGB1的表达可以降低卵巢癌细胞的增殖、侵袭、迁移能力。   结论   HMGB1水平与卵巢癌进展密切相关，其表达下调可显著抑制卵巢癌细胞的增殖和迁移侵袭能力，有望对卵巢癌的临床检测及治疗提供新思路。      

糖类抗原125、骨桥蛋白、D-二聚体联合检测在卵巢癌诊断中的临床价值

目的探讨糖类抗原125(CA125)、骨桥蛋白(OPN)、D-二聚体(D-D)指标水平在卵巢癌患者血清中的表达情况,并分析三者联合检测对卵巢癌的诊断价值。方法选取2018年2月至2021年2月在我院确诊卵巢癌患者(恶性组,n=40)、卵巢良性肿瘤患者(良性组,n=40)及我院同期健康体检者(对照组,n=40)为研究对象,根据国际妇产科联盟分期标准将恶性组再分为Ⅰ~Ⅱ期亚组(n=22)与Ⅲ~Ⅳ期亚组(n=18),比较各组血清糖类抗原125(CA125)、骨桥蛋白(OPN)、D-二聚体(D-D)水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)分析各指标单独及联合诊断卵巢癌的价值。结果恶性组血清CA125、OPN、D-D水平明显高于良性组与对照组(P<0.05),良性组血清CA125水平明显高于对照组(P<0.05),良性组与对照组血清OPN、D-D水平比较差异无统计学意义(P<0.05)。Ⅲ~Ⅳ期亚组患者血清CA125、OPN、D-D水平均明显高于Ⅰ~Ⅱ期亚组(t=2.652,P=0.013;t=2.215,P=0.033;t=3.758,P=0.001)。CA125、OPN、D-D联合诊断卵巢癌的AUC值(0.990)明显高于单独检测单独(0.893、0.841、0.874)。结论血清CA125、OPN及D-D水平在卵巢癌患者体内呈高表达,且表达水平与卵巢癌临床分期密切相关,3项指标联合诊断卵巢癌具有较高的临床应用价值。     

Role of serum-derived hyaluronan-associated protein-hyaluronan complex in ovarian cancer

The objective of this study was to determine if the level of serum hyaluronan (HA), serum-derived HA-associated protein (SHAP)-HA complex, and urinary trypsin inhibitor (UTI) correlate with the clinical outcome of ovarian cancer patients. The relationship of metalloproteinase and its inhibitor with HA and the SHAP-HA complex was also examined. Serum and urine samples were obtained from 45 patients with ovarian cancer, 22 patients with benign ovarian tumors and 50 healthy women. Concentrations of serum HA and UTI were measured by an inhibitory sandwich enzyme-linked immunosorbent assay, and concentrations of the serum SHAP-HA complex were measured by a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay. Concentrations of MMP-2, MMP-9 and TIMP-1 were measured by a one-step enzyme immunoassay. The levels of HA, SHAP-HA complex, MMP-9 and TIMP-1 were higher in the ovarian cancer group than in the benign ovarian tumor group. In ovarian cancer patients, the levels of HA, SHAP-HA complex and MMP-9 were higher in the stage III/IV group than in the stage I/II group, and the levels of SHAP-HA complex, MMP-9 and TIMP-1 were higher in the non-responder group than in the responder group. The serum concentration of SHAP-HA complex had a significant correlation with HA, MMP-9 and TIMP-1 in ovarian cancer patients. The patients with elevated SHAP-HA complex had a shorter disease-free survival compared with those with normal levels of SHAP-HA complex. The multiple regression analysis revealed that SHAP-HA complex is the significant independent variable for progression-free survival. The elevated level of SHAP-HA complex may indicate the prognosis of recurrence and reflect the tumor metastasis associated with MMP-9 in ovarian cancer patients.     

乳腺癌中MUC2和MMP-9的表达及其临床意义

  目的  探讨MUC2和MMP-9在乳腺癌中的表达及其与临床病理特征之间的关系。   方法  应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测68例乳腺良性疾病和186例乳腺癌中MUC2和MMP-9基因的表达,免疫印迹法观测MUC2和MMP-9蛋白表达情况。分析两者与乳腺癌临床病理特征之间的关系及两者的相关性。   结果  MUC2和MMP-9 mRNA在乳腺癌中的表达明显高于乳腺良性疾病组。乳腺良性疾病组织中MUC2和MMP-9 mRNA的表达率分别为2.9%（2/68）、13.2%（9/68）,均显著低于癌组织39.8%（53/186）、73.1%（136/186）（P < 0.05）。类似于基因表达,MUC2和MMP-9蛋白在乳腺癌中的表达相对较高。MUC2和MMP-9基因在乳腺癌中的表达与病理类型、淋巴结转移相关（P < 0.05）,MMP-9表达还与肿瘤大小和组织学分级有关（P < 0.05）,两者均与患者年龄无关（P>0.05）。乳腺癌组织中MUC2和MMP-9 mRNA的表达呈负相关（r=-0.814,P < 0.001）。   结论  MUC2和MMP-9联合检测可作为诊断乳腺疾病的指标之一,为乳腺癌诊断和治疗提供参考。      

MicroRNA-100在胃癌患者血清中的表达及临床意义

  目的  探讨MicroRNA-100（miR-100）在胃癌患者血清中的表达及临床意义。  方法  选择蚌埠医学院第一附属医院手术及随访资料完整的胃癌患者（40例）和健康对照者（40例）为研究对象,提取血清总miRNA,在建立了稳定、敏感的血清miR-100绝对定量检测方法（qRT-PCR）的基础上,检测胃癌和健康对照者血清中miR-100表达水平。分析胃癌和健康对照者血清中miR-100表达差异及血清中miR-100表达水平与胃癌临床病理参数的关系。  结果  胃癌患者血清中miR-100的表达水平为（2.78±1.92）fmol/L,显著高于健康对照者[（0.19±0.15）fmol/L,P < 0.01],同时miR-100的受试者工作特征曲线显示,血清miR-100对胃癌诊断具有良好的特异度和敏感度（曲线下面积0.985）;进一步分析发现:血清中miR-100的表达与性别、年龄、肿瘤直径大小、浸润深度、分化程度、淋巴结转移数量、TNM分期等无明显差异（P > 0.05）。  结论  血清miR-100的检测可能有助于胃癌的诊断。      

基于iTRAQ标记结合2D nano HPLC-ESI-OrbiTrap MS/MS技术筛选卵巢癌血清标记物

  目的  利用相对和绝对同位素标记（iTRAQ）和纳升级两维高效液相色谱-电喷雾-OrbiTrap质谱（2D nano HPLC-ESI-OrbiTrap MS/MS）蛋白组学方法探寻卵巢癌血清标记物,以提高早期卵巢癌诊断率。  方法  收集卵巢癌患者血清20例（卵巢癌组）,CA125异常的卵巢良性囊肿16例（良性囊肿组）,健康者20例（正常对照组）,每组取10例组内等量混合后去除高丰度蛋白,iTRAQ试剂标记,进行强离子交换柱分离多肽、nanoLC分离并在线连接电喷雾串联OrbiTrap质谱分析,筛选出重要的差异蛋白。随后采用Western blot方法,将筛选出的重要差异蛋白进行56例临床血清样本逐例验证。  结果  共鉴定出差异蛋白326个。其中重点筛选出了8个重要的差异蛋白:蛋白PARD3、SRP1-alpha、LAMA4、LRP16、IgSF2、NRAMP1、NF-E2-related factor 1和APOA4;验证了3个重要差异蛋白:PARD3、NRAMP1、APOA4。  结论  应用iTRAQ标记的定量蛋白质组学技术筛选出了8个重要的差异蛋白,可能是潜在的肿瘤标记物。其中APOA4蛋白有可能成为区分恶性与良性卵巢疾病的生物标志物。      

开胸手术对非小细胞肺癌患者血清VEGF、MMP-9水平变化的影响分析

目的 分析开胸手术对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer)患者血清VEGF、MMP-9水平变化的影响.方法 将非小细胞肺癌患者79例作为观察组;良性肺部疾病患者56例和健康志愿者25例作为对照组.观察组患者和良性肺部疾病患者均进行了开胸肺切除手术,然后按照病理类型和TNM分期对观察组患者治疗前的VEGF、MMP-9水平进行检测统计,并与健康对照组比较分析,并对治疗前后观察组和良性对照组患者的VEGF、MMP-9水平进行统计分析.结果 按照患者病理类型检测VEGF水平为:腺癌(332.3±82.3)pg/ml,鳞癌(364.5±81.8)pg/ml,其他病理类型(375.8±88.6)pg/ml;所有患者的MMP-9水平分别为腺癌(199.4±82.2)ng/ml,鳞癌(183.2±102.6)ng/ml,其他病理类型(185.1±112.9)ng/ml,所有肺癌患者的VEGF水平和MMP-9水平均显著高于健康对照组(P<0.05).Ⅰ期患者的VEGF水平和MMP-9水平分别为(245.4±54.3)pg/ml和(141.2±58.2)ng/ml,明显低于其他分期患者VEGF水平和MMP-9水平(P<0.05).观察组患者治疗前后VEGF水平和MMP-9水平均显著高于良性对照组患者(P<0.05).结论开胸手术治疗非小细胞肺癌患者,术后患者的VEGF水平和MMP-9水平明显升高,但没有明显的相关性.患者术前VEGF水平和MMP-9水平也明显高于良性肺部疾病患者,且与患者的分化程度相关.