编码百日咳毒素S1亚单位的DNA疫苗诱导的抗百日咳杆菌的保护作用[英]／Kamachi K，Konda T，Arakawa Y／／Vaccine.

百日咳毒素(PT)是百日咳杆菌的主要致病因子，由5个亚单位组成，S1亚单位具有酶活性，而S2～S5亚单位参与靶细胞的结合。研究发现抗S1亚单位的单克隆抗体可以预防百日咳杆菌感染，源自S1亚单位的重组蛋白和合成肽能诱导机体产生抗PT的保护性免疫应答，提示S1亚单位能用于百日咳疫苗的研制。     

抗百日咳毒素单克隆抗体的纯化及应用研究

目的纯化抗百日咳毒素(PT)的单克隆抗体(M cAb),并建立特异、准确的PT定量检测方法。方法采用辛酸-硫酸铵沉淀法和A蛋白亲和层析法纯化杂交瘤细胞腹水,并经阻断抑制试验筛选识别不同表位的M cAb,用于建立定量检测PT的ELISA方法。结果经SDS-PAGE分析,纯化M cAb的纯度均在90%以上,选择二株识别不同抗原位点M cAbs,应用于检测PT的双抗夹心ELISA方法,灵敏度为2.14μg/L,批内变异系数5.85%,批间变异系数9.27%,平均回收率为108.12%,应用该法测定了国内几大生产厂家送检的无细胞百日咳疫苗原液中PT含量。结论获得了纯度高的抗PT M cAb,建立了一种特异、准确的定量检测PT的ELISA方法,并用于无细胞百日咳疫苗原液中PT含量的检测,为无细胞百日咳疫苗的质量控制提供了有力的手段。     

百日咳杆菌毒素S1亚单位突变体的研究进展

百日咳杆菌毒素(PT)是目前无细胞百日咳疫苗中的主要保护性成分,其中PT的S1亚单位又是其主要的功能性亚基,具有免疫保护活性和多种毒性。在对多个S1突变体的生物学及免疫学研究后发现,其中的一个S1的双位点突变体(PTX-9K/129G)在保持有良好的免疫原性和免疫保护作用的基础上,大大降低了PT的毒性,有望成为理想的百日咳疫苗候补抗原。     

百日咳毒素S1亚单位在大肠杆菌中的表达及其生物学特性研究

本文采用PCR技术,以百日咳杆菌染色体DNA为模板,用质粒pCR2.1-TOPO作为载体克隆了编码百日咳毒素S1亚单位（Pertussis toxin S1 subunit)806bp的结构基因,分别在DH5α,和TOP10两株大肠杆菌中进行表达,并分别获得6株和5株表达rS1阳性的重组菌株,rS1的最高表达量分别占细胞总蛋白量的14％（DH2）和24．2％（H13）,重组菌中及粗制的rS1能被抗天然PTS1亚单位的单克隆抗体1B7识别,在小鼠主动免疫实验中,粗制的rS1免疫小鼠后,对百日咳杆菌18323株的脑腔攻击具有免疫保护作用,保护率可达56．3％,粗制的rS1免疫家兔所得血甭,用HP－PT及1B7－PT包被的ELISA测定效价,抗PT抗体的滴度为1：32000。该抗rB1血清在小鼠被动免疫保护实验中,对百日咳杆菌18323株的脑腔攻击的动免疫保护作用达到100％,证明本文获得的rS1亚单位有良好的抗原性和免疫原性,具有与天然S1相同的抗表位,有望成为百日咳基因工程单位疫苗的候选成分。     

检测百日咳毒素活性的中国仓鼠卵巢细胞簇集法的建立和初步应用

目的  建立检测百日咳毒素（pertussis toxin,PT）活性的中国仓鼠卵巢（Chinese hamster ovary,CHO）细胞簇集法,并将建立的方法应用于无细胞百日咳疫苗生产的质量控制。方法  将PT标准品系列稀释后与培养的CHO细胞混合,观察PT引起CHO细胞簇集的敏感度,并研究反应时间、反应溶液的pH值、缓冲液浓度、加样顺序等因素对PT引起CHO细胞簇集的影响。应用建立的方法检测百日咳疫苗生产过程中脱毒前后的PT活性及丝状血凝素和百日咳黏着素组分中残留的PT活性。    结果  PT使CHO细胞发生最佳簇集的理想反应时间是24 h,最适pH值是7~8,适宜氯化钠缓冲液浓度为0.15 mol/L,最优加样顺序是先加CHO细胞再加PT。建立的CHO细胞簇集法的检测敏感度为10 pg/ml PT,且重复性良好。结论  CHO细胞簇集法可用于PT活性检测。     

无细胞百日咳疫苗加强接种对百日咳流行病学的影响

百日咳仍是某些国家重要的公共卫生问题.儿童接种百日咳疫苗后发病率有所降低,但在某些国家仍未得到有效控制.为了进一步降低百日咳发病率,许多国家实施了学龄前无细胞百日咳疫苗加强接种.此文综述了学龄前加强接种百日咳疫苗的效果以及对百日咳流行病学的影响,并讨论了青少年和成年人加强接种对百日咳流行病学的影响.     

百日咳黏着素研究进展

百日咳黏着素(pertactin,PRN)是所有有毒力的百日咳杆菌产生的一种非纤毛性凝集原,存在于菌体外膜上,属于自主转运蛋白.它能产生保护水平的抗体,已经成为百日咳组分疫苗的重要抗原成分.近年来许多疫苗接种率较高的国家均有百日咳发病率增高的报告,其中一个因素就是百日咳杆菌的一些抗原(百日咳毒素、PRN、凝集原)型别的转换导致疫苗保护效果的下降.此文就PRN的分子结构、生物学特征、流行病学及纯化工艺方面作一综述.     

WHO关于百日咳疫苗的意见书

本文介绍了百日咳疫苗（全菌体疫苗和无细胞疫苗）的背景资料、免疫效果、不良反应以及WHO对该疫苗的意见.     

百日咳疫苗及其免疫接种

本文介绍了百日咳疫苗的效力、安全性及免疫策略.临床试验和流行病学监测证明百日咳疫苗能够有效预防严重百日咳,但不能阻断百日咳杆菌的传播.用反应原性低的无细胞百日咳疫苗对青少年、成人实施免疫接种,是控制百日咳流行乃至消灭百日咳杆菌传播的行之有效的方法.       

检测百日咳毒素的双抗体夹心ELISA法的建立

目的  建立白喉-破伤风-无细胞百日咳疫苗生产中百日咳毒素（pertussis toxin, PT）含量的测定方法。方法  免疫家兔制备高效价抗PT血清,纯化抗PT多克隆抗体并进行酶标记,建立双抗体夹心ELISA法并对其进行验证。结果  建立的方法在0~20 ng/ml PT测量区间呈现最佳线性,相关系数＞0.99,且重复性好。检测百日咳丝状血凝素和黏着素,结果均为阴性,说明该法特异性良好。试验内10次、不同试验间3次测定16.0、8.0、4.0、3.0 ng/ml PT,变异系数为2.8%~9.7%,回收率为95.7%~106.0%,精密度和准确度验证均符合常规质量控制要求,定量限度为3.0 ng/ml。结论  该方法能有效检测百日咳杆菌大罐发酵过程中分泌的PT,为PT质量控制奠定了重要基础。