蛋白激酶C在热休克基因表达中的作用

热休克（４２℃,２ｈ）或Ｈ２Ｏ２预处理,均能在蛋白翻译合成水平使牛肺动脉内皮细胞（ＢＰＡＥＣｓ）中的ＨＳＰ７０增多;在基因围录水平使ＢＰＡＥＣｓ中ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ含量增加。蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂－－Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴＰ）能显著减少热休克和Ｈ２Ｏ２诱导的ＨＳＰ７０合成及ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ转录的增加。提示ＰＫＣ在热休克和Ｈ２ＯＳ诱导的热休克基因表达的信息传递中具有重要作用。     

蛋白激酶C介导磷脂酶C-γ1参与高温诱导热休克蛋白70表达

目的 研究蛋白激酶C(PKC)是否介导磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)参与高温诱导成纤维细胞热休克蛋白70(HSP70)表达的信号转导通路.方法 以基因敲除方法建立的缺失PLC-γ1基因(plcgl-/-)及野生型PLC-γ1基因(plcgl+/+)小鼠胚胎成纤维细胞为模型,Western免疫印迹-增强化学发光法检测高温诱导时PLC-γ1的磷酸化激活,PKC激酶检测试剂盒测定PKC激活程度,并以酶联免疫吸附(ELISA)法及MTT法测定PKC抑制剂白屈莱红碱(chelerthrine chloride,CH)和激活剂佛波醇-12-豆蔻酰-13乙酸(phorbol12-myristate 13-acetate,PMA)对HSPT0表达及细胞热耐力的影响.结果 plcgl+/+细胞经高温处理,PIE-γ1出现磷酸化激活、PKC活性显著增强(P<0.01);plcgl-/-细胞PKC活性也有所增强,但明显低于plcgl+/+细胞(P<0.01).PKC抑制剂或激活剂能增强或降低两种细胞热耐力,对高温引起的两种细胞HSP70合成都有明显抑制或促进作用.结论 蛋白激酶C可介导磷脂酶C-γ1参与高温诱导成纤维细胞热休克蛋白70表达的信号传递.     

热休克基因表达对过氧化氢所致肺泡巨噬细胞损伤的保护作用

经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析发现热休克预处理使肺泡巨噬细胞中热休克蛋白（ＨＳＰ）７０ｍＲＮＡ增多，ＨＳＰ７０合成增加，且获得抵抗Ｈ２Ｏ２损伤的能力，用效放线菌酮和放线菌素Ｄ分别从蛋白合成及基因转录水平阻断热休克蛋白基因的表达，能取消热休克对Ｈ２Ｏ２所致ＰＡＭｓ损伤的保护效应。提示热休克系通过使热休克蛋白基因表达增强，ＨＳＰ７０合成增多，从而保护Ｈ２Ｏ２所致的ＰＡＭｓ损伤 。     

热休克蛋白与细胞凋亡的关系

就热休克蛋白(heat shock protein，HSP)与细胞凋亡的关系及HSP参与细胞凋亡的机制作一综述。     

蛋白激酶C在非心脏器官预处理中的作用

目的探讨蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）在心脏以外组织器官缺血或缺氧预处理（ＰＣ）保护中的作用及其机理。方法分别在原位灌流的大鼠小肠、肢体缺血再灌注模型和培养的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）缺氧复氧模型上观察ＰＫＣ对于器官缺血或细胞缺氧ＰＣ作用的影响。结果ＰＫＣ抑制剂Ｈ７和多粘菌素Ｂ完全消除缺血ＰＣ对小肠和肢体的保护作用;缺氧ＰＣ激活ＶＳＭＣ内ＰＫＣ,并使ＰＫＣ介导的蛋白磷酸化反应加强。结论ＰＫＣ激活是心脏以外组织器官ＰＣ保护的重要环节,其机制可能与底物蛋白的磷酸化有关。     

热休克基因表达对过氧化氢所致肺泡巨噬细胞损伤的保护作用

经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析发现热休克预处理（４２℃，２ｈ）使肺泡巨噬细胞（ＰＡＭｓ）中热休克蛋白（ＨＳＰ）７０ｍＲＮＡ增多，ＨＳＰ７０合成增加，且获得抵抗Ｈ２Ｏ２损伤的能力。用放线菌酮和放线菌素Ｄ分别从蛋白合成及基因转录水平阻断热休克蛋白基因的表达，能取消热休克对Ｈ２Ｏ２所致ＰＡＭｓ损伤的保护效应。提示热休克系通过使热休克蛋白基因表达增强，ＨＳＰ７０合成增多，从而保护Ｈ２Ｏ２所致的ＰＡＭｓ损伤。     

热休克蛋白70在人胶质瘤耐药过程中的作用

目的 应用热休克人胶质瘤细胞的方法,观察热休克蛋白70(HSP 70)在人胶质瘤细胞耐药过程中的作用.方法 经43 ℃热处理2 h的人胶质瘤细胞,应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组化技术检测HSP 70 mRNA及蛋白的表达情况;应用hoechst 33258荧光染色的方法观察化疗药物阿霉素(adriamycin,ADM)作用后,不同处理组人胶质瘤细胞的凋亡情况.结果 HSP 70免疫组化,HS ADM组阳性率为(61.5±18.3)%,与HS组(61.0±14.1)%比较没有统计学意义,但显著高于对照组(8.50±4.09)%(P＜0.05),RT-PCR结果与免疫组织化学一致;ADM组凋亡细胞比率为(52.7±19.1)%,显著高于对照组(6.5±3.6)%(P＜0.05),HS ADM组(25.0±10.7)%高于对照组但显著低于ADM组(P＜0.05),HS组(7.2±3.6)%与对照组没有明显差异(P＞0.05).结论 热休克的方法可以诱导人胶质瘤细胞HSP 70的表达;HSP 70可能是引起人胶质瘤细胞耐受ADM的机制之一.     

缺血性脑损伤与热休克蛋白基因表达

<正>脑缺血时除引起一系列生理和神经化学变化外,还可导致核酸、蛋白质代谢及合成异常.当前对脑缺血引起的脑内热休克蛋白(HSP)基因表达与脑细胞功能状态、损伤时程以及保护机制之间关系的研究日益受到重视.本文就脑缺血性损伤与HSP70KD基因表达研究进展综述如下.1 HSP发现、命名、分类及生物学特性     

蛋白激酶C在高胆固醇血症引起内皮功能障碍中的作用

以高胆固醇饮食喂养的新西兰兔为实验对象 ,观测蛋白激酶C抑制剂 (H 7)及蛋白激酶C激动剂 (PMA) ,对乙酰胆碱 (acetylcholine,Ach)诱导的离体胸主动脉舒张反应的影响 ,及其对血栓素A2 和前列环素代谢产物生成的影响 ,探讨蛋白激酶C激活在高胆固醇血症引起的动脉内皮依赖性血管舒张功能障碍中的作用。结果显示 :H 7可显著改善高胆固醇组动脉条乙酰胆碱诱导的舒张功能障碍 ,并可显著减少有内皮高胆固醇组动脉条血栓素B2 的生成 ;PMA可显著抑制普通饮食组动脉条乙酰胆碱诱导的舒张功能 ,并可显著增加有内皮普通饮食组动脉条血栓素B2 的生成量 ;H 7及PMA对 2组动脉条 6 酮 前列腺素F1a的生成量均无显著影响。提示高胆固醇血症可激活动脉内皮蛋白激酶C ,增加内皮血管收缩性前列腺素类物质血栓素A2 的生成 ,进而引起动脉内皮依赖性舒张功能障碍。     

蛋白激酶C在心肌细胞肥大中的作用

目的 :要探讨蛋白激酶 C(PKC)在心肌细胞肥大中的作用机制。方法 :在培养新生大鼠心肌细胞上 ,通过测量心肌细胞表面积和 [3 H] -Leu的掺入量来判断心肌细胞肥大。结果 :肾上腺素能明显增加心肌细胞表现积和 [3H] -L eu的掺入量 ,PKC抑制剂 (Calphostin C)可抑制肾上腺素诱导的心肌细胞表面积和 [3 H] -L eu掺入量增加。结论 :PKC在肾上腺素诱导的心肌细胞肥大反应中起重要作用     

哺乳动物组织中蛋白激酶C抑制剂的研究

Ca~( 2)及磷脂依赖性蛋白激酶是从脑中发现的。最近,我们在哺乳动物组织中发现了一种蛋白抑制剂。蛋白激酶C的活性可被其抑制,这一蛋白抑制剂的等电点约为4.4,该抑制剂可能在受精卵的发育中起作用。     

蛋白激酶C的分子异种研究

蛋白激酶C是一具有多种亚型的大蛋白族,这些亚型虽有相近似的结构,但在活化方式、动力学性质及催化特性上是不同的。DE-52的小峰也可被Ca~( 2)、甘油二酯及磷酯活化。等电点约为5.6,也是蛋白激酶C。     

蛋白激酶C的活化机制及在细胞调节中的作用

蛋白激酶C通常以无活性型存在于细胞的可溶性部分。如用H_1组蛋白为底物,此酶活化需要Ca及磷脂,当用鱼精蛋白为底物时,活化就不需要Ca~( 2)及磷脂,且活性远高于以H_1组蛋白为底物。但蛋白激酶C的抑制剂氯丙嗪,此时也有抑制作用。     

HSP70基因转染对人心肌细胞的保护作用

目的探讨利用热休克蛋白70(HSP70)基因转染技术保护人心肌细胞的可行性。方法用指质体介导的基因转移技术,研究了外源性HSP70基因高表达对人心肌细胞的保护作用。结果转染的心肌细胞在正常温度(37℃)下,可高水平表达HSP70,模拟缺血实验后,心肌肌酸激酶(CK-MB)释放量为(159.5±24.1)IU／L几,细胞生存率为(33.78±5.4)％,其抗模拟缺血能力明显高于对照组,而与热休克预处理后24小时组无显著差异。结论基因转染造成的HSP70高表达可保护人心肌细胞。     

两种分化诱导剂对人肝癌细胞株丝氨酸蛋白激酶的影响

１０μｍｏｌ／Ｌ视黄酸（ＲＡ）或０．５ｍｍｏｌ／Ｌ双丁酰环磷酸腺苷（ｄｂ－ｃＡＭＰ）在体外都可使ＳＭＨＣ－７７２１人肝癌细胞株生长抑制，使增殖指标γ－谷氨酰转肽酶活力下降；而分化指标碱性磷酸酶（ＡＬＰ）活力上升，故这两类化合物都是ＳＭＭＣ－７７２１细胞的分化诱导剂。ＲＡ处理１～３ｄ可引起胞液中蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）上升，而膜性ＰＫＡ下降；但５ｄ后相反，胞液ＰＫＡ明显下降，而膜性ＰＫＡ显著上升，可能与ＰＫＡ在细胞内转位有关。ＲＡ处理１～５ｄ尚可使胞液和膜性蛋白激酶Ｃ活力下降，两亚细胞组分的下降程度接近，提示未发生ＰＫＣ的转位作用。但ｂｄ－ｃＡＭＰ处理１～５ｄ，胞液或膜性的ＰＫＣ均未见明显变化，提示ＲＡ和ｄｂ－ｃＡＭＰ使细胞分化的机制不同，前者可能与ＰＫＣ有关。     

GM_3促进人白血病J6-2细胞分化时蛋白激酶C活性的变化

本研究用自行提纯的GM_3观察了它对人单核样白血病细胞的促分化作用,以及促分化前后蛋白激酶C活性的影响。根据电镜观察、吞墨试验及NBT还原试验的结果,表明GM_3确能促使J6-2细胞分化;另外GM_3在促分化后,J6-2细胞的总PK-C活性下降。作者讨论了GM_3抑制蛋白激酶C的可能机理。     

牛精子中蛋白激酶C抑制剂的纯化

在牛精子中发现了蛋白激酶C抑制剂。并用Sephadex G-200及等电聚焦柱将其纯化,这一蛋白激酶C的蛋白抑制剂的分子量约为63000,等电点为pH4.5左右。