滴金免疫测定法用于检测囊虫病患者循环抗原的研究

目的　建立一种敏感、快速、简便的囊虫病诊断方法。方法　应用两株抗猪囊尾蚴囊液抗原的单克隆抗体(McAb) ,一株滴于硝酸纤维素膜上 ,另一株与胶体金结合为探针 ,建立了检测囊虫病患者血清中循环抗原 (CA)的滴金免疫测定法 ,抗原、抗体通过渗滤在膜上进行反应 ,10min内即可用肉眼观察结果。对不同稀释度的猪囊尾蚴囊液抗原进行检测 ,确定本法的最低抗原检出量 (0 .4 5ng/ml)。将本法与ELISA作了比较。 结果　对 78例囊虫病患者血清进行检测 ,循环抗原阳性率为 87.18%。其中活动型脑囊虫病患者 5 2例 ,循环抗原阳性率为 98.0 8% ;非活动型脑囊虫病患者 2 0例 ,循环抗原阳性率为 6 5 .0 0 % ;单纯皮肌型囊虫病患者 6例 ,循环抗原阳性率为 6 6 .6 7%。 4 0份健康人血清仅有 1例 (2 .5 0 % )出现假阳性 ,与10例华支睾吸虫病患者血清、15例血吸虫病患者血清及 2 3例非囊虫病的脑部疾病患者血清均无交叉反应。该方法检出最低猪囊尾蚴囊液抗原量为 0 .4 5ng/ml。本法与ELISA的符合率为 98.19%。结论　DIGFA简便、快速 ,结果客观 ,对囊虫病特别是活动型脑囊虫病敏感性高 ,特异性强 ,值得进一步推广应用。     

斑点ELISA在脑囊虫病免疫诊断中的应用

本文以猪囊尾蚴囊液为抗原作斑点 ELISA,105例脑囊虫病人血清和脑脊液的阳性率分别为93.3%(84/90)和93.4%(57/61),107例健康人血清均为阴性,与丝虫病、疟疾和华支睾吸虫病人血清无交叉反应。其他脑部疾病脑脊液的检测,全部阴性。结果表明此法诊断脑囊虫病具有较高的敏感性和特异性。     

应用多糖抗原酶联免疫吸附试验诊断包虫病的研究

本文应用包虫囊液多糖抗原对45例包虫病患者血清、77例其它寄生虫病患者血清和106例正常人血清进行ELISA测定,并与囊液热稳定抗原和粗抗原比较。其阳性率多糖抗原为93.33％,热稳定抗原为91.11％,粗抗原为95.55％。正常人血清的假阳性率分别为4.70％、3.77％和7.54％。结果显示3种抗原的敏感性无显著差异,而多糖抗原和热稳定抗原的非特异反应(假阳性率)则有所降低,尤以囊虫病更为明显。     

ELISA法间接检测囊虫患者血清特异抗原的探讨

目的 探讨简便的检测囊虫抗原的方法。方法 囊液抗原包被酶标板，ELISA法检测待检血清与含ELISA法1：8( )的囊虫抗体兔血清的混合液的抗体，滴度低于1：2(#)为阳性。结果 囊虫患者阳性率在82．69％-85．37％之间。讨论囊液抗原间接检测囊虫患者血清特异抗原结果稳定，方法简便，临床符合率较高。     

细粒棘球蚴原头节18 kU纯化抗原ELISA的建立及其对两型包虫病鉴别诊断的意义

目的用细粒棘球蚴原头节18ku纯化抗原建立ELISA诊断方法,用于两型包虫病的鉴别诊断.方法用18ku纯化抗原ELISA方法对44例泡型包虫病(AE)、70例囊型包虫病(CE)、29例囊虫病和30例健康人血清中特异性抗体进行检测,同时用羊包囊液抗原(Bu)常规ELISA法检测上述血清做比较.结果18ku纯化抗原检测不同血清的阳性率为AE90.91%、CE11.43%、囊虫病和健康人血清均为阴性;Bu抗原分别为AE97.73%、CE88.57%、囊虫病51.72%和健康人10.0%.18ku-ELISA对AE血清诊断敏感性为90.91%、特异性93.80%、阳性预示值为83.33%、阴性预示值96.80%.结论两型包虫病患者体内18ku抗体水平存在明显差异,纯化抗原18ku-ELISA可用于两型包虫病的鉴别诊断,较免疫印渍法简便快速.     

包虫和猪囊虫抗原免疫化学性质及酶联免疫印斑技术临床应用研究

用 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳和酶联免疫印斑技术分别对人源细粒棘球蚴囊液、棘球蚴砂、猪囊尾蚴囊液抗原组分进行分析研究,并对两种病血清学交叉反应进行了试验。结果显示包虫囊液抗原有29条蛋白区带,有两条糖蛋白带。猪囊虫囊液抗原显示36条蛋白带谱,两条糖蛋白带。棘球蚴砂显示23条蛋白带谱。包虫病人血清与印有包虫囊液抗原的硝酸纤维膜反应显示23条反应带,其中特异带为6条。包虫病人、猪囊虫病人血清与此膜反应显示4条共同反应带。包虫病人血清与棘球蚴砂抗原膜反应显示4条主要特异反应带,包虫病人血清、猪囊虫病人血清与此膜反应显示1条共同反应带。猪囊虫病人血清与猪囊虫囊液抗原膜反应显示22条反应带,其中有5条特异反应带;包虫病人和囊虫病人血清与此膜反应显示3条共同反应带。     

包虫与囊虫间共同抗原的实验探讨

本文用E.gCF和C.cCF致敏血球检测了四种抗原(E.gCF、E.gPS、C.cCF和C.cSCW)免疫的小白鼠。结果发现:囊虫头节及囊壁不仅是囊虫特异性抗原的载体而且是与包虫发生交叉反应的共同抗原的主要来源;原头节共同抗原较少。包虫囊液特异性抗原性比囊虫囊液要强。     

使用不同抗原的间接血凝试验在包虫病诊断中应用的评价

本文报告了使用不同抗原的包虫病间接血凝试验方法的实验结果。采用高浓度戊二醛化和1/20000鞣酸处理的绵羊红细胞,用绵羊肝包囊液粗抗原和部分纯化抗原致敏。用包虫病人血清进行方阵滴定,包囊液粗抗原,亲和层析抗原、Oriol氏法纯化抗原和Burstein氏法纯化抗原的最适致敏浓度分别为250、25、25和6.25μg/ml。血清终点稀释度的倒数皆为1024。用包囊液粗抗原对1295名健康人血清做间接血凝试验(IHA)结果,抗体滴度≥64者仅6例(0.46％)。95例牛肉绦虫病人血清的阳性率为1.05％(1/95)。这种致敏红细胞的冻干制剂,在室温下存放18个月后,仍保持稳定。囊液粗抗原、亲和层析抗原、Oriol氏法纯化抗原和Burstein氏法纯化抗原致敏红细胞,对47例包虫病人血清做IHA结果阳性率各为91.49％、44.68％、76.59％和85.12％,阳性血清抗体滴度的几何均值分别为389.29±2.55、247.69±4.20、271.21±2.45和343.65±2.43。29份囊虫病人血清IHA的结果为囊液粗抗原致敏红细胞的阳性率为27.5％,阳性血清的几何均值为128。其他三种抗原致敏的红细胞均为阳性。说明三种纯化抗原致敏红细胞与囊虫病人血清不发生交叉反应。根据本项实验结果建议将Burstein氏法纯化抗原致敏绵羊红细胞的间接血凝试验做为常规方法。     

western blot 法诊断囊虫病的应用研究

目的：探讨四种猪囊尾蚴（Ｃｙｓｔｉｃｅｒｃｕｓｃｅｌｕｌｏｓａｅ）特异性抗原ｃＣ１、ｃＣ２、ｃＰ１、ｃＨ１（分子量分别为２８ｋＤａ、１８ｋＤａ、１４ｋＤａ、３４ｋＤａ）混合应用诊断人囊虫病的价值。方法：以猪囊尾蚴ｃＤＮＡ表达文库中筛选出的β－半乳糖苷酶－猪囊虫特异性抗原ｃＤＮＡ编码的融合蛋白（ｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＦＰ）为抗原，作简化的Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ（ｉｍｐｒｏｖｅｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，ＩＷＢ）分析，检测１０７例囊虫病、４０例华支睾吸虫病、２４例包虫病和３４例健康人血清对融合蛋白的反应。同时应用粗制抗原（ｃｒｕｄｅａｎｔｉ－ｇｅｎ，ＣＡ）进行ＥＬＩＳＡ、ＩＨＡ对比检测。结果：在简化Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测中，ＦＰ被１０７例囊虫病患者血清中９４例（８７．９％）血清所识别，与华支睾吸虫病、包虫病患者及健康人血清无交叉反应，特异性为１００％。以粗制抗原作ＥＬＩＳＡ、ＩＨＡ检测囊虫病人血清中的ＩｇＧ抗体阳性率分别为８４．１％和７４．８％，与华支睾吸虫病患者血清存在交叉反应，假阳性率分别为２．５％、１２．５％；与包虫病患者血清存在交叉反应，假阳性率分别为８．３％、１６．７％；与健康人血清也存在交叉反应, 假阳性率分别为8. 8%、11. 8% 。结论: β－半乳糖苷酶2猪囊尾蚴FP 诊断囊虫病具有较高敏感性和高度的特异性。     

用间接酶标测定法评价不同猪囊尾蚴抗原在人囊尾蚴病免疫诊断中的价值

用硫酸铵分段沉淀法将猪囊尾蚴及其囊液的蛋白质分别分离为8种抗原,用间接酶标法检测猪囊尾蚴病病人、其他寄生虫病人及正常人血清中的相应抗体。结果表明,在8种抗原制品中,囊液部分提纯抗原P_1诊断囊尾蚴病的阳性率最高。囊尾蚴粗抗原的部分提纯成份P_(25-55)的阳性率次之。 P_1和囊液粗抗原对包虫病病人血清存在严重的交叉反应,而P_(25-55)交叉反应较低。P_1与肺吸虫病病人血清有交叉反应,但P_(25-55)与肺吸虫病人血清无交叉反应。P_25-55的来源比P_1丰富,是此病免疫诊断的实用抗原。     

18kDa抗原诊断泡型包虫病的评价

目的：评价１８ｋＤａ抗原在泡型包虫病（ＡＥ）诊断中的价值。方法：用免疫印渍法检测３３例泡型包虫病、６９例囊型包虫病（ＣＥ）、３０例囊虫病和８２例健康人血清对泡型棘球蚴（Ｅｍ）和囊型棘球蚴（Ｅｇ）原头节１８ｋＤａ抗原的抗体反应。同时用羊包囊液抗原常规ＥＬＩＳＡ法检测上述血清。结果：ＥＬＩＳＡ试验,ＡＥ血清阳性率为９３．９％、ＣＥ为８５．５％、囊虫病为５０％、健康人为６．１％。显示３种患者血清存在较强的交叉反应。免疫印渍试验,两种原头节的１８ｋＤａ抗原对ＡＥ血清阳性反应均为９０．９％、ＣＥ分别为１０．１％和１３％、囊虫病患者为１３．３％和１６．７％。与健康人血清不发生反应。结论：１８ｋＤａ抗原可以有效的鉴别两型包虫病。     

华支睾吸虫重组半胱氨酸蛋白酶用于血清学调查的效果评价

目的 以华支睾吸虫重组半胱氨酸蛋白酶(CsCp)为ELISA包被抗原检测流行人群血清特异性抗体水平,与成虫粗抗原比较,评价其用于华支睾吸虫病血清学调查的价值. 方法 以佛山市南海区的1个行政村为调查点,用改良加藤厚涂片法检查粪便华支睾吸虫虫卵.同时采集血清,分别以rCsCP与成虫粗抗原(CsCAA)的ELISA方法检测血清特异性抗体水平,对粪检及两种抗原的ELISA结果进行统计学分析. 结果 接受血清检测的97人中,华支睾吸虫虫卵阳性率60.8%,CsCAA-ELISA阳性率75.3%,rCsCP-ELISA阳性率76.3%,特异性抗体阳性率高于虫卵阳性率(P<0.05),不同抗原ELISA阳性率差异无统计学意义(P>0.05);CsCAA-ELISA、rCsCP- ELISA结果与粪检结果的符合率分别为56.7%和55.7%,两种抗原ELISA结果的符合率为82.5%.59例粪检阳性者CsCAA-ELISA和rCsCP-ELISA阳性率均为76.3%,38例粪检阴性者CsCAA-ELISA和rCsCP-ELISA阳性率分别为73.7%和76.3%. 结论 以rCsCP为包被抗原,用ELISA检测华支睾吸虫病流行区人群血清特异性IgG抗体与使用CsCAA的检测结果有较高的符合率,但同样不能区分现症与既往感染.     

检测包虫病患者血清特异IgG4诊断价值的研究

目的探讨检测患者血清特异IgG4诊断包虫病的效果.方法采用两种抗原(棘球蚴囊液粗抗原及其抗原B)通过ELISA法检测棘球蚴病病人、非棘球蚴病病人和健康对照血清特异IgG4.结果粗抗原和抗原B检测棘球蚴患者血清特异IgG4的阳性率分别为94.4%和89.8%;与部分猪囊尾蚴病患者血清出现交叉反应外,与肺吸虫病、旋毛虫病、血吸虫病、肝囊肿等患者的血清以及健康对照血清均未出现交叉反应.结论检测棘球蚴患者血清特异IgG4敏感性高,特异性强,具有较好的诊断价值.     

猪肉和人皮下猪囊虫囊液抗原的免疫印迹分析

应用SPA-ELISA、SDS-PAGE和IB(免疫印迹)技术对猪肉及人皮下结节内猪囊虫囊液的抗原成份进行了分析比较。结果表明,凝胶中考马氏亮蓝和氨基黑染色所示的蛋白条带以及血清抗体所识别的特异性抗原成份中,取自猪肉中的囊虫囊液较取自人体的囊液含量高,免疫反应性强。两种抗原用于SPA-ELISA诊断未见有明显差异。     

斑点ELISA和间接血凝试验诊断囊虫病的比较

我们应用Dot-ELISA和间接血凝试验(IHA)同时检测囊虫病患者血清。 材科和方法 抗原制备 猪囊尾蚴囊液先以3000rpm离心10min,再经10000rpm离心30min,上清液即为囊液粗抗原,蛋白含量为8.49mg/ml。     

单克隆抗体检测囊虫病人循环抗原及其在疗效考核中的应用

用单克隆抗体致敏绵羊红细胞作反向间接血凝试验，检测７７例囊虫病人血清循环抗原，阳性率为６４．９％；３０例正常人血清的假阳性率为０；２２例华支睾吸虫病人、２４例包虫病人和１７例弓形虫病人的交叉反应率分别为４．６％、４．２％和１１．８％。结果表明，该法较为敏感、特异，且稳定可靠、简单易行，尤适于在基层医疗单位推广应用。检测经治疗１～１０个疗程囊虫病人血清中循环抗原和抗体，发现随着疗程的增加循环抗原的消失明显快于抗体，且大部分患者的循环抗原和其临床症状、体征同时消失。表明循环抗原的检测对囊虫病的诊断和疗效考核有一定的实用价值。     

斑点免疫金银染色法诊断囊虫病的研究

用斑点免疫金银染色法(Dot-IGSS)和Dot-ELISA检测40份确诊为囊虫病患者的血清。两种方法检测的阳性率均为100％,用Dot-IGSS检测,40份血清的平均滴度为1:27470,显著高于用Dot-ELISA检测的平均滴度1:9069(P<0.01)。检测50份义务献血员血清,假阳性率分别为2％和4％。10份日本血吸虫病人血清分别有1份和2份出现假阳性。与肝吸虫病人血清无交叉反应,与包虫病人血清有明显的交叉反应。     

金标特异抗原单克隆抗体斑点免疫金染色用于检测脑囊虫病循环抗原的研究

应用金标记猪囊尾蚴囊液抗原为探针,以抗猪囊尾蚴抗原的McAb为联桥,建立了非常规Dot-IGS用于检测脑囊虫病患者CAg的方法,用4G_2McAb检测84例脑囊虫病人脑脊液(CSF),CAg阳性率为88.09％。检测63例其他疾病患者,出现2例假阳性。以1F_(11)McAb检测14例脑囊虫病人,13例检出CAg,阳性率为92.86％。检测其他疾病患者36例,均为阴性。用4G_2与1F_(11),株McAb可分别检出最小抗原量为1ng/ml和0.25ng/ml。本法敏感、特异、操作简单,可用于脑囊虫病的诊断。     

猪囊尾蚴液、固相多种抗原对囊虫病免疫诊断效果评价

目的　筛选适合多种寄生虫病流行区使用的特异性较高的囊虫病免疫诊断抗原。　方法　制备猪囊尾蚴各类型液相抗原和固相抗原 ,用ELISA或IEST检测囊虫病流行区患者阳性血清抗体 ,比较各种抗原的敏感性和特异性。　结果　猪囊尾蚴全囊及囊液尿素溶性抗原与水溶性纯化抗原ELISA检测囊虫抗体的特异性差异无显著性 (P >0 .0 5 )。固相抗原IEST有敏感性好、操作简易的特点。　结论　猪囊尾蚴全囊尿素溶性纯化抗原是较理想的囊虫病ELISA诊断抗原 ,有诊断应用价值。固相石腊切片抗原IEST较为适合流行区现场或基层应用。     

循环抗体和循环抗原检测诊断囊虫病的价值

本文对81例囊虫病人血清同时用 ELISA 和 Dot—ELISA 检测循环抗体和单抗抑制性 ELISA检测循环抗原,并评价了三法诊断该病的价值。前两法的阳性率均为96.3%,但特异性都较差,特别是与包虫病具有明显的交叉反应。81例中血清循环抗原的阳性率为69.1%。血或脑脊液的循环抗原有一项阳性的阳性率为91.1%。此法特异性高,75例正常人、30例包虫病、79例其他寄生虫病患者、5例非寄生虫病患者血清和10例非寄生虫病患者的脑脊液中循环抗原的测定均为阴性。对19例经肠虫清治疗半年到1年的患者(均为随机到本院复诊的患者)的血清检测,前二法的阳性率仍高达84.2%,而循环抗原的值除1例为0.64μg/ml 外,其余病例均为阴性。