白芦藜醇对牙周炎大鼠OPG/RANKL/RANK信号通路的影响

目的 考察白芦藜醇(Resveratrol, RSV)对牙周炎大鼠骨保护素(osteoprotegerin, OPG)/核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand, RANKL)/核因子-κB受体活化因子(receptor activator of NF-κB,RANK)(OPG/RANKL/RANK)信号通路相关蛋白的影响。方法 采用不同浓度的RSV对牙周炎大鼠进行干预，采用RT-PCR和Western blot分别检测牙周组织细胞OPG、RANKL、IL-1、IL-6、TNF-α和基质金属蛋白酶8(matrix metalloproteinase 8,MMP-8)的mRNA水平和蛋白表达水平。结果 牙周炎模型组大鼠牙周组织中OPG、RANKL、IL-1、IL-6、TNF-α和MMP-8的mRNA表达强度和蛋白水平高于空白对照组(P<0.05),RSV低剂量组、RSV中剂量组、RSV高剂量组则依次低于牙周炎模型组(P<0.05)。结论 RSV可以降低牙周炎大鼠牙周组织中OPG、RANKL、IL-1、IL-6、TNF-...     

RANK/RANKL/OPG系统及其相关疾病和抗RANKL疗法的研究进展

骨骼是一个动态组织,在生物的整个生命周期中不断地进行构建、吸收、重建,核因子(nuclear factor,NF)κB受体活化因子(receptor activator of NF-κB,RANK)/NF-κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)/护骨素(osteoprotegerin,OPG)系统是调控这一过程的关键系统.RANK/RANKL/OPG属于肿瘤坏死因子及其受体超家族,三者通过调控破骨细胞的分化和活化来影响骨吸收和重建的过程.另外,免疫细胞也参与和调节RANK/RANKL的表达和分泌,而免疫细胞本身亦受到该系统的影响,因此,RANK/RANKL/OPG系统成为骨和免疫之间的重要关联.RANK/RANKL/OPG系统的失衡与多种骨代谢性疾病及免疫系统疾病引发的继发性骨病密切相关,该系统的发现为研究相关疾病的病理机制和治疗方法提供了基础.由此建立的抗RANKL疗法已经开始应用于临床试验和研究.此文对RANK/RANKL/OPG系统、系统相关疾病以及抗RANKL治疗的进展做一综述.     

金雀异黄酮酊对去卵巢骨质疏松大鼠OPG/RANKL/RANK通路的影响

目的观察金雀异黄酮酊对去卵巢骨质疏松大鼠骨密度、血清骨代谢生物标志物以及骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体活化因子(receptor activator of NF-κB,RANK)和破骨细胞分化因子(receptor activator of NF-κB,RANKL)表达的影响,探讨其抗骨质疏松的作用机制。方法将30只3月龄SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组和金雀异黄酮酊组,通过去卵巢法构建骨质疏松大鼠模型,给予金雀异黄酮酊外用喷涂,治疗8周后分别测定大鼠股骨骨密度,采用Elisa法检测血清骨碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)及血清Ⅰ型胶原交联C-末端肽(S-CTX)等骨代谢生物标志物,采用Western Blot法检测OPG和RANKL蛋白表达水平。结果与假手术组比较,去卵巢组大鼠子宫质量、血清雌激素水平、股骨骨密度、血钙、血磷和OPG蛋白表达水平均降低,而体质量、ALP、OC、S-CTX和RANKL蛋白表达水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05);采用金雀异黄酮酊治疗8周后,与模型组比较,金雀异黄酮酊组体质量、ALP、OC、S-CTX和RANKL蛋白表达水平降低,而子宫质量、血清雌激素水平、股骨骨密度、血钙、血磷和OPG蛋白表达水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论金雀异黄酮酊可调节骨代谢,显著提高骨质疏松大鼠的骨密度,可能与调控OPG/RANKL/RANK通路蛋白表达水平有关。     

柚皮素对破骨细胞特异性基因及OPG/RANKL/RANK表达的影响

目的 观察柚皮素对破骨细胞特异性基因组织蛋白酶-K(CATK)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)及骨保护素/核因子-κB受体活化因子配体/核因子-κB受体活化因子(OPG/RANKL/RANK)表达的影响.方法 采用全骨髓细胞诱导法培养破骨细胞,细胞分5组:空白对照组、HG-DMEM诱导组、HG-DMEM+0构.1μmol/L柚皮素组、HG-DMEM+1μmol/L柚皮素组、HG-DMEM+10μmol/L柚皮素组.HE染色、TRAP染色观察破骨细胞形态;分光光度计检测TRAP阳性细胞数;Real time-PCR和Western-blot检测CATK、MMP-9、TRAP及OPG/RANKL/RANK mRNA和蛋白表达.结果 与空白对照组比较,HG-DMEM诱导组TRAP阳性细胞数、TRAP、MMP-9、CATK、RANKL、RANK mRNA和蛋白表达明显增加,OPG mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05).与HG-DMEM诱导组比较,柚皮素预处理24 h能够明显降低TRAP阳性细胞数、CATK、MMP-9、TRAP、RANKL、RANK mRNA和蛋白表达,增加OPG mRNA和蛋白表达(P<0.05),呈剂量依赖性.结论 柚皮素能够抑制破骨细胞的生成和分化,该作用可能是通过OPG/RANKL/RANK信号通路抑制TRAP、MMP-9、CATK表达实现的.     

中医药介导OPG/RANK/RANKL信号通路防治类风湿关节炎的研究进展

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）是一种临床常见的以滑膜炎为主的自身免疫性疾病。炎性细胞因子和破骨细胞刺激滑膜组织增生、炎症反应、骨质破坏及关节功能障碍等，在RA的致病因素中占据关键位置。本文对中药单体及其提取物、中药复方及制剂、中药配伍，以及中医治疗通过调控骨保护蛋白（osteoprotegerin,OPG）/NF-κB受体激活因子（receptor activator of NF-κB, RANK）/NF-κB配体激活因子（receptor activator of NF-κB ligand, RANKL）信号通路干预RA的相关研究进行综述。结果表明，中药中的有效分子机制不同，但是可以起到调控信号通路的作用，刺激成骨细胞活性，抑制炎性细胞因子分泌，减少破骨细胞分化，从而防治RA，为中医药多靶点、多途径治疗RA提供理论依据。     

金合欢素对糖尿病肾病大鼠肾损伤及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨金合欢素对糖尿病肾病（DN）大鼠肾损伤及Toll样受体4（TLR4）/核因子-κB（NF-κB）信号通路的影响。方法 通过高脂高糖饲料喂养及ip链脲佐菌素（STZ）建立DN大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组,金合欢素低、高剂量（40、80 mg ·kg^-1）组,金合欢素（80 mg ·kg^-1）＋脂多糖（LPS,0.1 mg ·kg^-1）组,缬沙坦（20 mg ·kg^-1）组,每组10只,并以正常喂养且不ip STZ的10只大鼠作为对照组。干预结束后,尾静脉取血,检测大鼠空腹血糖含量;收集大鼠24 h尿液,分析尿蛋白含量;腹部主动脉取血,ELISA法检测血清中血肌酐、血尿素氮水平及肿瘤坏死因子-α （TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平;分离双肾组织,透射电镜及HE染色检测肾组织损伤情况;Western blotting检测Toll样受体4（TLR4）/核因子-κB（NF-κB）通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组肾组织严重受损,血糖、尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、血清TNF-α和IL-6水平、肾组织TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著增加（P<0.05）;与模型组比较,缬沙坦和金合欢素低、高剂量组肾组织损伤得到缓解,血糖、尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、血清TNF-α和IL-6水平、肾组织TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著降低（P<0.05）;与金合欢素高剂量组相比,金合欢素＋LPS组肾组织损伤加剧,血糖、尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、血清TNF-α和IL-6水平、肾组织TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著增加（P<0.05）。结论 金合欢素通过抑制TLR4/NF-κB信号通路改善DN大鼠肾损伤。     

基于RANKL/RANK/OPG信号通路探讨土贝母苷甲对糖尿病性骨质疏松大鼠骨质流失的影响

目的 探讨土贝母苷甲对糖尿病性骨质疏松(OP)大鼠骨质流失及核因子κB受体活化因子配体(RANKL)/核因子κB受体活化因子(RANK)/骨保护蛋白(OPG)信号通路的影响。方法 采用高脂高糖饮食+链脲佐菌素腹腔注射法构建大鼠糖尿病性OP模型，将60只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、土贝母苷甲低剂量组(1μmol/L)、土贝母苷甲高剂量组(5μmol/L)、OPG组(3 mg/kg)、土贝母苷甲高剂量+OPG组(5μmol/L土贝母苷甲+3 mg/kg OPG)。酶联免疫吸附(ELISA)法测定大鼠血清核心结合因子α1(CBF-α1)、Ⅰ型前胶原氨基端原肽(PINP)、骨钙素(OC)水平；Micro-CT测定骨密度(BMD)及骨小梁微结构参数；TRAP染色测定股骨表面破骨细胞数量(N.Oc/BS);HE染色观测大鼠骨组织病理变化；qRT-PCR法与Western blot法分别测定骨组织RANKL、RANK、OPG mRNA与蛋白水平。结果 与对照组相比，模型组大鼠血清CBF-α1、PINP、OC水平、股骨最大负荷、断裂挠度、BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th、OPG m...     

吴茱萸次碱抗骨质疏松作用研究

骨保护素(osteoprotegerin,OPG)是骨转换的标志物,由成骨细胞等分泌.OPG与核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)结合发挥抑制破骨细胞作用.本研究发现吴茱萸次碱(rutaecarpine,RUT)具有上调...     

RANK-RANKL-OPG系统及其治疗骨质疏松相关药物的研究进展

骨骼是一种动态组织，由大约70%的矿物质和30%的有机成分组成，并通过持续的骨形成和骨吸收来维持。骨形成和骨吸收障碍可导致代谢性骨病，如骨坏死和骨质疏松症等。相关研究结果表明，骨保护素（osteoprotegerin，OPG）、核因子κB受体活化因子（receptor activator of nuclear factor-κB，RANK）及其配体（RANK ligand，RANKL）相关细胞因子参与或调节这一动态平衡。此文就RANK-RANKL-OPG系统及其治疗骨质疏松相关药物的研究进展作一综述。     

槲皮素对去卵巢大鼠股骨OPG与RANKL表达的影响

目的观察槲皮素对去卵巢大鼠股骨骨保护素（osteoprotegerin, OPG）及核因子κB受体活化子配体（ligand of receptor activator of NF κB,RANKL）表达的影响。方法健康雌性SD大鼠48只,按体质量随机分为6组：假手术组（SHAM组）、单纯去卵巢组（OVX组）、17β-雌二醇组（ERT组,0.1 mg&#8226;kg^-1&#8226;d^-1）、高剂量槲皮素组（QH组,300 mg&#8226;kg^-1&#8226;d^-1）、中剂量槲皮素组（QM组,150 mg&#8226;kg^-1&#8226;d^-1）、低剂量槲皮素组（QL组,75 mg&#8226;kg^-1&#8226;d^-1）。除假手术组外其余各组均切除双侧卵巢,术后1周开始给药,给药 16周后处死所有大鼠,测定腰椎及股骨骨生物力学性能：弹性模量（ELASTIC） 、刚度（STIFFNESS）、最大应力（M STRESS）及最大承载力（M LORD）,用免疫组织化学染色方法观察股骨OPG、RANKL表达情况。结果 槲皮素高、中剂量均能上调股骨OPG、下调RANKL表达,部分改善股骨、腰椎生物力学性能。结论 槲皮素可通过调节骨组织中OPG、RANKL的相对含量而抑制骨吸收,防止骨质疏松。     

LC/MS/MS与GC/MS法分析鉴定小鼠尿中沙美特罗的代谢产物

目的:鉴定沙美特罗在小鼠尿中的主要代谢产物.方法:ig给药后,收集小鼠尿液,经固相提取,葡萄糖醛酸酶水解,进行LC/MS/MS分析和硅烷化后进行GC/MS分析同时分离鉴定沙美特罗代谢产物.结果和结论:在给药后尿样中发现沙美特罗原型和4种代谢产物M1～M4,其结构推测为19-羟基沙美特罗(M1)、2-羰基沙美特罗(M2)、19-羰基沙美特罗(M3)和19-羟基-8-甲氧基沙美特罗(M4).     

Advanced glycation end-products/peptides: a preliminary investigation by LC and LC/MS

An investigation on AGE-peptides, originating by proteolysis of in vitro glycated proteins, was carried out by LC methods with different detection applied to the mixture produced by proteinase K digestion of in vitro glycated human serum albumin (HSA). Classical approaches, like spectroscopic (UV, fluorescence) and mass spectrometric methods (MALDI, LC/ESI/MS), show that the digestion mixture is highly complex. However, there are clearcut differences between the digestion mixtures of glycated and unglycated HSA, in the former case allowing identification of possible glycated peptides belonging to the AGE-peptide class. MS/ MS experiments on selected species seem to be promising as regards structural information.     

Primary Socialization Theory and a Bio/Psycho/Social/Spiritual Practice Model for Substance Use

This article supports primary socialization theory as a theory for practitioners to use in drug-user treatment and prevention interventions. Primary socialization theory is compatible with the bio/psycho/social/spiritual practice model and targeting the individual within his or her etiological domains/situation to initiate specific interventions. Governmental institutions are posited as an additional secondary socialization factor for primary socialization theory. Gender is stressed as important for primary socialization theory and is emphasized for carrying out interventions.     

高效液相色谱-质谱联用测定人血浆中辛伐他汀浓度

目的建立测定人血浆中辛伐他汀浓度的方法。方法血浆样品中加入内标,用乙醚提取,浓缩后采用高效液相色谱-质谱联用进行测定。结果血浆样品中辛伐他汀线性范围为0.1～20ng·mL-1(r=0.9999);萃取回收率为94.3%。结论本方法灵敏度高、专属性强、重现性好、准确,可用于辛伐他汀片人体药动学及生物等效性研究。     

HPLC/MS/MS联用技术测定全血中的瑞芬太尼

目的:建立全血中瑞芬太尼的HPLC／MS／MS测定方法,并测定围麻醉期患者体内瑞芬太尼的血药浓度。方法:全血样品中加入枸橼酸芬太尼作内标,用1-氯丁烷进行提取。以乙腈与三氯甲烷(V乙腈:V三氧甲烷= 1:1)混合液加乙酸铵(2 mmol·L-1)为流动相,色谱柱为Intersil ODS-3(50 mm×2．1 mm,3μm),流速0．3 mL·min-1。三级四极杆质谱采用正离子模式,离子采集方式为多反应监测模式(MRM),离子源温度200℃,离子源电离电压为5 000 V,雾化气流速8 L·min-1。采集离子(母离子／子离子)为瑞芬太尼377／228,芬太尼337／188。结果:瑞芬太尼在0．5～50．0 ng·mL-1浓度范围内呈良好的线性(r=0．9994)。日内、日间精密度均在15％以内,提取回收率大于67．3％,方法回收率在95．0％～97．6％。结论:本方法灵敏、准确,适合瑞芬太尼的体内分析。     

Copper induces oxidative stress and apoptosis of hippocampal neuron via pCREB/BDNF/ and Nrf2/HO-1/NQO1 pathway

Disordered copper metabolism has been suggested to occur to several neurological conditions, including Alzheimer's disease and Parkinson's disease. However, the underlying mechanism was still unclear. This might link to copper-induced hippocampal neuronal apoptosis and decrease in neurons viability. Our vitro experiment showed copper exposure induced oxidative stress and promoted apoptosis of HT22 murine hippocampal neuronal cell. Mechanistically, we found copper, on the one hand, prevented phosphorylation of cAMP response element binding protein (CREB) to decrease expression its downstream target protein Brain-derived neurotrophic factor (BDNF), and to decrease mitochondrial membrane potential and Bcl-2/Bax ratio; on the other hand, copper-induced reactive oxygen species (ROS), promoted lipid peroxidation, reduced antioxidant enzyme activity of GSH-Px. Copper-induced oxidative damage further decreased the phosphorylation of CREB, decreased expression of Bcl-2, enhanced expression of Bax, and accelerated the dissociation of keap1-Nrf2 complex, promoted the nuclear translocation of Nrf2, stimulate the expression of antioxidant molecules HO-1 and NQO1. In conclusion, we found copper inhibited pCREB/BDNF signaling pathway by prevent CREB from phosphorylation, further found that oxidative damage not only inhibited neuroprotective signaling pathways and induced apoptosis, but activated antioxidant protection signals Nrf2/HO-1/NQO1 signaling pathway.     

氯吡格雷在人血浆浓度的液质联用测定法

目的建立测定人血浆中氯吡格雷(抗心肌及抗脑梗死药)血药浓度的HPLC/MS/MS法。方法血浆样品用叔丁基甲醚提取,内标为噻氯匹定;色谱柱用X-Terra MS C_(18)(2.1 mm×50 mm,5μm),柱温30℃,流动相:乙腈-水(含10 mmol·L~(-1)醋酸铵,调pH为4.0)为70:30,流量为0.3 mL·min~(-1);质谱用ESI离子源,定量分析的离子反应分别为m/z 322→z 212 (氯吡格雷),m/z 264→m/z 154(内标噻氯匹定)。结果氯吡格雷的线性范围为10×10~4～1.2×10~4pg·mL~(-1)(γ=0.9993),日内、日间RSD均小于10%,提取回收率约为80%。结论该方法快速、准确、灵敏度高,可用于氯吡格雷血药浓度测定。     

液相色谱-质谱联用法测定人血浆双氢青蒿素浓度

目的:建立液相色谱-质谱联用法测定健康人血浆中双氢青蒿素浓度的方法。方法:以青蒿素为内标,血浆样品采用液-液萃取法处理。用电喷雾离子化和正离子多离子反应监测方式检测双氢青蒿素。结果:该方法双氢青蒿素线性范围为1.01~2020 ng.ml-1;定量下限为1.001±0.072 ng.ml-1;方法回收率在93.0%~98.2%;批内、批间变异系数均<10%。结论:该方法准确、灵敏、特异、简便,适用于健康人血浆双氢青蒿素浓度的测定。     

血塞通注射液指纹图谱研究

目的采用超高效液相色谱-紫外检测器-质谱(UPLC/UV/MS)法对血塞通注射液进行指纹图谱研究,并对其有效成分进行定性。方法采用Waters Acquity UPLCTM BEH C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以乙腈-10 mmol/L醋酸铵溶液进行二元线性梯度洗脱,流速0.2 mL/min。离子化模式为ESI+。结果得到了分离度和重现性均较好的血塞通注射液超高效液相色谱-紫外检测器-质谱指纹图谱,标示了8个共有峰。结论超高效液相色谱-紫外检测器-质谱法可以用于血塞通注射液的快速鉴定及质量控制。