温阳通窍中药复方含药血清对C6脑胶质瘤细胞增殖影响的实验研究

[目的] 观察温阳通窍中药复方含药血清对C6脑胶质瘤细胞增殖的影响。[方法] 采用MTT法测定样品对体外培养的肿瘤细胞生长的抑制作用,并在药物代谢不同时间(2 h,4 h,6 h)检测不同剂量的温阳通窍中药复方对C6脑胶质瘤细胞的抑制作用,同时进行空白组对照比较。[结果] 温阳通窍中药复方对C6细胞的IC₅₀值约为30.29 μg/mL,细胞毒效果欠佳。10%血清浓度下,药物代谢2、4、6 h后,高、低剂量组对C6脑胶质瘤细胞的抑制率分别为30.22%、21.6%、28.3%和32.87%、9.86%、47.98%.[结论] 温阳通窍中药复方对C6脑胶质瘤细胞的增殖具有一定抑制作用,但其抑瘤作用不存在时间与剂量依赖关系,这一结果或许与药物在体内代谢、次生活性产物的出现相关。     

大鼠C6脑胶质瘤生长规律的MRI与病理学观察

目的建立稳定可靠的大鼠C6脑神经胶质瘤模型,并运用1.5 TMRI观察脑胶质瘤瘤体生长的变化规律,为进行脑胶质瘤的在体实验研究提供基础。方法C6胶质瘤细胞培养后,采用立体定向仪尾状核种植C6胶质瘤细胞,建立C6脑胶质瘤大鼠模型50只,分为4组,分别于第7 d(n=10),第14 d(n=10),第21 d(n=10)处死,最后1组自然死亡(n=20)用于生存分析。用1.5 TMRI作扫描成像动态观察接种后第7、14、21 d时肿瘤的MRI瘤体生长变化,并于MRI检查后立即处死各组大鼠将大体病理结果同MRI瘤体积进行比较。结果本研究应用立体定向尾状核接种C6胶质瘤细胞,所有接种大鼠均有胶质瘤生长(100%),免疫组化GFAP染色阳性,肿瘤在14～21 d生长迅速,25 d后大鼠开始出现死亡。1.5 TMRI能够较好地显示大鼠大脑正常组织及结构、瘤体和瘤周水肿区。MRI测量瘤体和大体病理结果相近。结论采用立体定向法向大鼠尾状核接种C6神经胶质瘤细胞成功率达100%;1.5 TMRI能够较好地反映大鼠脑胶质瘤生长的变化,为脑胶质瘤的在体实验研究提供基础;于第14～21 d之间行相关医学干预是合适时机。     

土槿皮乙酸对大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖的抑制作用

目的研究土槿皮乙酸(pseudolaric acid B,PAB)对大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖的抑制作用。方法采用MTT法检测0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、8、16 μg/ml PAB对C6细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测碘化丙啶(PI)染色后细胞周期的变化;皮下注射C6细胞建立C6种植瘤大鼠模型并测量种植瘤体积;免疫组化法测定大鼠脑胶质瘤C6细胞种植瘤组织中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达变化。结果体外实验结果表明,PAB呈剂量依赖性地抑制胶质瘤C6细胞生长,半数致死剂量(IC50)为0.03 μg/ml,同时,可使C6细胞周期阻滞于G2/M期;体内实验结果表明,PAB给药后大鼠种植瘤体积有所降低,种植瘤组织中PCNA表达呈下降趋势。结论PAB可抑制大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖,阻滞细胞周期中G2/M期、下调PCNA表达为其可能的作用机制。     

蒿甲醚对大鼠原位脑胶质瘤抑瘤及抗血管生成的实验研究

目的探讨蒿甲醚是否在选择性地杀伤SD大鼠原位脑胶质瘤的同时还具有抑制血管生成的作用.方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度蒿甲醚对大鼠C6脑胶质瘤细胞株的生长抑制作用,计算半数抑制浓度(IC5)0;采用立体定位仪在48只SD大鼠大脑皮质层接种C6脑胶质瘤细胞(1×106个/μL),雌、雄各半;随机分为3组,每组8只.分别为空白对照组、阳性对照和实验组.在接种第3天后,实验组各组采用灌胃给药法连续给药10 d;于接种后的第20天解剖大鼠,经活体左心室灌注4%多聚甲醛,固定肿瘤的全脑标本.在大鼠脑部接种穿刺点做冠状切口,按垂直和水平方向测量肿瘤大小.肿瘤体积=a2bπ/6(a为肿瘤的短径,b为肿瘤的长径).采用免疫组化方法检测移植瘤组织微血管密度.结果实验组各组对SD大鼠原位脑胶质瘤的抑瘤率分别为:54.5%、61.0%、64.5%和69.8%,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);各实验组血管计数均明显少于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05、P<0.01).各实验组SD大鼠原位脑胶质瘤体积较空白对照组显著减小.结论在一定剂量范围内,口服蒿甲醚对SD大鼠脑部原位接种C6脑胶质瘤有明显的抑制作用;蒿甲醚抑制原位脑胶质瘤生长的机制之一可能是透过血脑屏障抑制脑胶质瘤血管生成.     

冰片联合顺铂对大鼠C6胶质细胞瘤的治疗作用

[目的]探讨冰片联合顺铂对大鼠C6胶质细胞瘤的治疗作用。[方法]建立大鼠C6胶质瘤细胞模型,于治疗组给予灌服冰片及静脉注射顺铂,21天后分析治疗组与对照组胶质瘤横截面积。[结果]治疗组脑胶质瘤的横截面面积明显小于对照各组(P0.05)。[结论]冰片能增加血脑屏障对顺铂的通透性,从而提高顺铂对胶质细胞瘤的治疗作用。     

大鼠C6脑胶质瘤瘤体和瘤周水肿增长的磁共振观察

目的探讨建立可靠的大鼠C6脑胶质瘤模型,用临床MRI观察脑胶质瘤瘤体生长及瘤周水肿的变化规律。方法采用立体定向仪种植C6胶质瘤细胞,建立C6脑胶质瘤大鼠模型16只,用1.5T MRI作扫描成像,进行T1加权扫描(T1WI)、T2加权扫描(T2WI)和T1WI增强扫描,观察接种后第1、2、3、4周末肿瘤的瘤体生长及瘤周水肿体积变化。并同大体病理结果进行比较。结果大鼠接种C6胶质瘤细胞后两周T2WI和T1WI增强扫描可显示有肿瘤瘤体生长和瘤周水肿的影像,两周后肿瘤瘤体和水肿体积呈指数增长,瘤周水肿体积的增长大于瘤体体积的增长,肿瘤瘤体生长和大体病理结果相近。结论临床MRI T1WI增强扫描和T2WI可以较好地反映大鼠脑胶质瘤生长和瘤周水肿的变化,为脑胶质瘤的活体实验研究提供基础。C6脑胶质瘤瘤体和瘤周水肿增长规律为胶质瘤的实验研究提供基础。     

血管内皮细胞生长因子抗体对胶质瘤生长的影响

探讨血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfctor,VEGF)对胶质瘤生长的抑制作用。方法应用vEGF抗体作用于C6胶质瘤细胞动物肿瘤模型,观察其抑瘤作用;应用SABC免疫组化技术检测体内生长胶质瘤中微血管密度。结果VEGF抗体对体内生长的胶质瘤有显著抑制作用且呈剂量依赖关系,押瘤率可达82.8％(P<0.01)。经VEGF抗体治疗的胶质瘤中微血管密度较对照组降低(P<0.01)。结论vEGF抗体通过抑制血管生成而抑制胶质瘤生长。     

碱性成纤维细胞生长因子在脑内的分布和作用

碱性成纤维细胞生长因子 (basic fibroblast growth fac-tor,b FGF)是成纤维细胞生长因子 (fibroblast growth factor,FGF)家族中的一种。在各种动物的不同组织内均有广泛的分布 ,具有促进细胞和组织的分裂、生长 ,保护细胞免受损伤等重要的生物学作用 ,而且其靶细胞范围也非常广泛 ,因此 ,它的临床应用前景和经济效益非常可观。本文对其在脑内的分布和作用研究进展综述如下。1　碱性成纤维细胞因子在脑内的分布1.1　成年动物脑内分布　 Pettmann等 [1 ]于 1986年首先应用免疫细胞化学方法在神经系统内进行 FGF的定位研究。由于当时所用…     

清脑和血方治疗大鼠脑胶质瘤的药效作用及其初步机制研究

目的观察清脑和血方对大鼠脑胶质瘤的药效作用,并初步探讨其作用机制。方法 Wistar大鼠45只,采用脑立体定位注射鼠源性C6胶质瘤细胞(C6细胞)建立大鼠胶质瘤模型;将成模大鼠随机分为模型组、顺铂组、清脑和血方组,每组10只;另设10只大鼠为空白对照组。连续给药25天,检测各组大鼠血清白细胞介素(IL)-2、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ水平;依次剥离脑组织与胶质瘤组织,称重,计算瘤重占脑组织重百分比;HE染色观察胶质瘤组织病理;免疫印迹法检测胶质瘤组织中环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)的表达情况。结果与模型组比较,清脑和血方组大鼠的瘤重[(0.0121±0.0050)g比(0.0779±0.0390)g]、瘤重占脑组织重百分比[(0.49±0.0075)%比(3.07±0.0176)%]、血清中IL-2[(91.14±10.33)pg/mL比(160.42±15.98)pg/mL]、IL-10[(49.58±6.79)pg/mL比(92.17±7.71)pg/mL]含量均明显降低(P0.01);血清IFN-γ[(198.54±11.83)pg/mL比(111.53±17.50)pg/mL]、TNF-α[(209.41±21.82)pg/mL比(119.00±20.21)pg/mL]含量明显升高(P0.01)。结论清脑和血方能够明显抑制大鼠C6胶质瘤细胞的颅内生长,其作用机制可能与调节机体免疫因子水平,抑制肿瘤相关蛋白CREB的表达有关。     

SD大鼠与Wistar大鼠脑胶质瘤动物模型的建立及比较

目的比较利用SD大鼠、Wistar大鼠建立脑胶质瘤动物模型的不同,为研究脑胶质瘤的发病机制及治疗方法提供操作平台。方法利用立体定向仪建立SD大鼠、Wistar大鼠大脑皮层接种C6细胞(2.5×105个细胞/只),建立脑胶质瘤动物模型,利用组织病理学、免疫组织化学以及核磁共振成像等技术,比较两种动物模型在成瘤率、肿瘤生长状况、死亡率以及动物一般情况等方面的异同。结果SD大鼠组、Wistar大鼠组的成瘤率均为100%,两组均未见转移;但SD大鼠组肿瘤成瘤时间较长,且部分肿瘤有自愈倾向,而Wistar大鼠组则未出现类似情况。结论Wistar大鼠大脑皮层脑胶质瘤动物模型的肿瘤性状更接近于人的脑胶质瘤,因此更适合探索和研究脑胶质瘤的发病机制和治疗方法;而SD大鼠的肿瘤由于性状类似转移瘤,且有自愈倾向,不适合作为上述相关研究的动物模型。     

通窍散瘀方微乳的制备及评价

[目的]该实验制备通窍散瘀方微乳,并对其含量、理化性质、刺激性进行评价。[方法]实验以葛根素溶解度为指标,筛选出合适的乳化剂、助乳化剂、油相。再通过伪三元相图,优化微乳处方。[结果]得到制剂处方为EL35,2丙二醇-IPM-水,四者比例为29.23∶29.23∶5.18∶36.34(W∶W∶W∶W)。得到的O/W型微乳,外观澄清透明,PH均值约为5.31。透射电镜下观察,圆整、均匀。激光粒径测定仪测定平均粒径约为17.86 nm,Zeta电位约为-4.90。葛根素载药量约为:68.64 mg/g,芍药苷载药量约为26.96 mg/g。通过大鼠鼻中隔切片,研究通窍散瘀微乳和通窍散瘀溶液对鼻黏膜的刺激性、损伤性作用及可逆性。[结论]结果显示通窍散瘀微乳能显著提高难溶性药物葛根素的载药量,并且形成均一稳定的体系。可为通窍散瘀方给药提供新的剂型。微乳的刺激性小于溶液,且微乳损伤是可逆的。     

清热利湿外治法对宫颈癌荷瘤裸鼠抗肿瘤作用与MARK信号通路的关系

[目的] 探讨清热利湿外治法对HPV（+）宫颈癌荷瘤裸鼠模型抗肿瘤作用及对ERK及P38/MAPK信号通路的影响。[方法] 建立人宫颈癌Siha细胞荷瘤裸鼠皮下移植瘤模型,裸鼠成瘤后,按随机数字表法分为5组,即顺铂组、空白对照组和清热利湿外治法高剂量（0.942 8 mg/kg）、中剂量（0.471 4 mg/kg）、低剂量组（0.235 7 g/kg）,连续用药观察28天。停药24小时后处死裸鼠,完整取出肿瘤组织,测量肿瘤体积及体质量,计算抑瘤率。将肿瘤组织切片后,HE染色法观察肿瘤的形态学变化,运用免疫组化SP的方法,检测肿瘤组织中的p-ERK及p-p38蛋白表达水平。[结果] 清热利湿外治法用药组的移植瘤体积均明显小于空白对照组（P<0.05）,高、中、低剂量组抑瘤率分别为36.23%、31.24%和14.94%;HE染色法显示清热利湿外治法用药组裸鼠的移植瘤组织出现明显坏死改变;清热利湿外治法中剂量、高剂量治疗组的p-ERK及p-p38蛋白水平明显下降,与空白对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。[结论] 清热利湿外治法对人宫颈癌Siha细胞移植瘤的生长具有明显抑制作用;其作用机制可能与下调ERK/P38 MARK（丝裂原活化蛋白激酶）信号转导通路的磷酸化水平有关。     

温阳除痹汤对硬皮病模型小鼠皮肤结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

目的:研究温阳除痹汤对硬皮病小鼠结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、Ⅰ型胶原蛋白(collagen-Ⅰ,COL-Ⅰ)表达的影响。方法:将博来霉素诱导的硬皮病小鼠随机分为3组:模型组、生理盐水组和温阳除痹汤组,以正常BALB/c小鼠作为对照。生理盐水组和温阳除痹汤组分别灌服生理盐水和温阳除痹汤,连续给药1个月。观察皮肤和肺组织病理学变化,并采用免疫组化技术检测各组硬皮病小鼠皮损中CTGF和COL-Ⅰ蛋白含量。结果:造模组小鼠皮肤CTGF和COL-Ⅰ免疫组化指数较对照组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与灌服生理盐水的模型小鼠比较,温阳除痹汤组小鼠皮肤和肺组织学有明显改善(P<0.05);温阳除痹汤组CTGF及COL-Ⅰ蛋白含量较生理盐水组亦显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CTGF及COL-1在硬皮病小鼠皮肤组织中具有较高表达,温阳除痹汤可明显降低CTGF、COL-Ⅰ含量,改善皮肤硬化。     

通窍散瘀滴鼻液与微乳刺激性及其中药效成分葛根素大鼠在体鼻循环吸收比较研究

[目的]本课题拟研究通窍散瘀滴鼻液和通窍散瘀微乳的刺激性,并比较通窍散瘀滴鼻液和通窍散瘀微乳的大鼠鼻腔吸收速率。[方法]该研究采用蟾蜍上颚纤毛实验比较通窍散瘀滴鼻液和通窍散瘀微乳的刺激性。该研究以体积校正法,采用大鼠在体鼻循环吸收比较研究通窍散瘀滴鼻液与通窍散瘀微乳中有效成分葛根素大鼠鼻腔吸收特性。[结果]结果表明,通窍散瘀滴鼻液的刺激性大于通窍散瘀微乳。通窍散瘀滴鼻液中葛根素吸收速率常数为(3.658±0.25)×10~(-3)/min,通窍散瘀微乳中葛根素吸收速率常数为(2.732±0.29)×10~(-3)/min。通窍散瘀微乳和通窍散瘀滴鼻液中葛根素的大鼠鼻腔吸收符合一级速率过程,为被动吸收。[结论]通窍散瘀滴鼻液中葛根素的鼻腔吸收较通窍散瘀微乳快,但是刺激性大,为通窍散瘀鼻用制剂的开发提供了一定的依据。     

大黄藿苓汤对慢性肾衰大鼠成纤维细胞生长因子表达的影响

[目的]探讨大黄藿苓汤对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏的保护作用及机制。[方法]采用腺嘌呤造模,设空白组、模型组、治疗1、2组。[结果]治疗1、2组肾脏病理改变较模型组轻,尿素氮、肌酐、尿酸、成纤维细胞生长因子(bFGF)表达治疗1组较模型组减少(P<0。05),治疗2组与模型组相比bFGF表达无明显差异。[结论]大黄藿苓汤对腺嘌呤致慢性肾衰大鼠肾脏有保护作用,且早期用药优于晚期用药,其机制可能是抑制bFGF表达。     

清热化痰法对抗菌药物在AECOPD痰热证患者肺组织转运能力的影响及疗效评价

[目的] 研究清热化痰法对抗菌药物在慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)痰热证患者肺组织转运能力的影响、作用机制及疗效评价。[方法] 将61例AECOPD患者随机分为治疗组和对照组。2 组均给予抗感染、平喘、必要时机械通气治疗。治疗组在基础治疗的基础上口服清热化痰中药复方;对照组在基础治疗的基础上给予氨溴索针剂,每次30 mg静脉注射,每日2次,疗程1周。观察治疗前后患者的症状、COPD评估测试(CAT)量表、深部痰中抗菌药物浓度、血清中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)水平。[结果] 1)临床症状方面:两组在总有效率比较方面均无统计学差异;第7天所有症状及主要症状比较差异有统计学意义(P<0.05),治疗组优于对照组, 第4天无统计学差异;单一症状方面咳嗽及痰量比较差异有统计学意义(P<0.05),治疗组优于对照组;咳痰难易度及胸闷改善比较差异有统计学意义(P<0.05),对照组优于治疗组;CAT量表评分比较差异有统计学意义(P<0.05),治疗组优于对照组。2)痰样本中药物浓度:两组之间比较无统计学差异,但治疗组中位数较对照组为高。3)NE:治疗组与对照组NE差值无统计学差异,治疗后两组均在一定程度上降低NE的水平。[结论] 清热化痰中药复方同氨溴索一样具备协助提高局部病灶组织中药物浓度的潜在趋势,其作用机制可能是通过影响NE,减少黏液分泌,减轻气道阻塞,促进抗菌药物在肺组织中的正相扩散。此外,两者均有助于改善AECOPD患者的临床症状,在单一症状方面各具优势,但清热化痰法更有助于改善患者治疗1周后的生活质量。     

温阳活血法治疗HBV相关性肝衰竭的临床疗效分析

[目的] 分析温阳活血法治疗HBV相关性肝衰竭的临床疗效,进一步探讨其作用机制。[方法] 选取本院住院诊断为病毒性肝炎,乙型,慢性或慢加亚急性肝衰竭的患者,随机分成中西医结合组和西医组,中西医结合在西医组西医综合治疗的基础上加用以温阳活血法为主要治法的中药,观察患者的生化指标、临床症状积分及有效率的情况。[结果] 治疗后两组丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆汁酸（TBA）均较治疗前显着下降,白蛋白（ALB）、凝血酶原活动度（PTA）较治疗前升高。治疗后第4周和第8周,中西医结合组患者血清总胆红素（TBIL）水平低于西医组,组间比较,第8周差异有统计学意义（P<0.05）。治疗后患者症状积分较治疗前下降,第4周、第8周分别与治疗前比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。治疗后两组有效率、无效率比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。[结论] 温阳活血法是治疗HBV相关性肝衰竭有效、可行、可靠的方法之一。     

心复康对心肌梗死大鼠心室重塑促血管生成的影响*

[目的]观察中药心复康对心肌梗死大鼠促血管新生的影响,探讨中药对心室重塑的保护作用.[方法]采用冠状动脉结扎法制作心肌梗死模型,术后随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组和中剂量组,每组12只.中药高剂量[81g/(kg·d)]和中剂量组[40.5g/(kg·d)]给予中药心复康水煎剂灌胃,假手术组和模型组每天等量生理盐水灌胃.28d后处死动物,病理切片观察心脏微观结构改变;免疫组化方法计数心肌梗死灶、边缘区新生血管数.[结果]中药组大鼠心肌梗死面积明显缩小,梗死灶及周围组织中微血管密度、明显高于模型组及假手术对照组.[结论]在大鼠心肌梗死模型中,中药组能够有效促进微血管新生,减少胶原纤维的生成,减轻心肌梗死后心室重塑.     

中药复方治疗慢性肺源性心脏病患者生存质量的调查

[目的]通过观察中药复方治疗慢性肺源性心脏病气虚血瘀兼痰阻患者生存质量的影响,探讨中西医结合联合干预治疗对患者生存质量的优势和特色。[方法]共纳入慢性肺源性心脏病气虚血瘀兼痰阻240例患者,分为对照组、治疗组各120例,常规治疗包括给予吸氧、抗感染等,对照组予常规治疗基础上加硝苯地平口服,治疗组予常规治疗加中药复方,疗程2周。记录治疗前后两组的肺功能指标、生活质量评分、6分钟步行距离等,及治疗期间不良反应。[结果]1)两组治疗前后肺功能的参数、圣乔治呼吸调查问卷的评分结果、6分钟步行距离,差异有统计学意义(P<0.05)。2)治疗后:治疗组与对照组肺功能的参数、圣乔治呼吸调查问卷的评分结果、6分钟步行距离差异有统计学意义(P<0.05)。说明在改善肺功能、生活质量、6分钟步行距离等方面治疗组优于对照组。3)圣乔治呼吸问卷(SGRQ)3个部分(症状、疾病影响、活动)、总分与用力呼气1秒时间的肺活量(FEV1)占预计值存在负相关关系,其中活动部分与FEV1占预计值相关性最好(相关系数=-0.742)。[结论]中药复方对于慢性肺源性心脏病气虚血瘀兼痰阻患者可以改善其生理的、物理的及社会的参数,改善其肺功能、6分钟步行距离,并可提高其生活质量。     

石斛合剂调控老年糖尿病大鼠GLP-1的研究

[目的] 观察石斛合剂(DC)对老年糖尿病大鼠胰高血糖素样多肽-1(GLP-1)的影响,探讨石斛合剂治疗衰老糖尿病大鼠的作用机制。[方法] 老年Wistar雌性大鼠分为正常对照组、模型组、DC低剂量组、DC高剂量组、二甲双胍对照组,检测0.5、2.5 h血清GLP-1,免疫组化法检测小肠GLP-1.[结果] DC低剂量组0.5、2.5 h GLP-1的差值低于模型组(P<0.05),DC高剂量组差值显着高于模型组(P <0.01),小肠未发现GLP-1.[结论] 低剂量DC可能具有减缓GLP-1代谢的作用,高剂量DC可能具有促进0.5 h GLP-1分泌的作用。