6-羟基多巴定向注射建立帕金森病大鼠模型的实验研究

目的探讨立体定向间隔注射6-羟基多巴(6-OHDA)毁损黑质致密部(SNc)和中脑腹侧被盖(VTA)建立类似于人类帕金森病(PD)中晚期的PD大鼠模型方法。方法近交系Wistar大鼠50只,脑立体定向将6-OHDA注入大鼠右侧VTA及SNc,间隔两周,对阿朴吗啡(Apo)诱发旋转后旋转不明显或无稳定左侧旋转模型再次制模,并观察大鼠行为学改变,免疫组化检测黑质多巴胺(DA)能神经元的数量以及高效液相-荧光法检测黑质纹状体中DA含量的变化。结果(1)50只大鼠中有41只经APO诱导表现为恒定左侧旋转且结果稳定,旋转圈数>210r/30min,视为成功PD大鼠模型,部分大鼠伴有震颤、活动迟缓、嗅探、觅食、竖尾等异常行为改变,并且可持续存在16周;(2)免疫组化结果:PD大鼠模型毁损侧黑质区多巴胺能神经元较对侧及对照组减少大于90%;(3)PD大鼠右侧黑质纹状体中DA含量较左侧及对照组减少90%以上。结论6-OHDA毁损SNc及VTA间隔注射法可有效建立模拟人类PD中晚期的大鼠PD模型。     

高剂量灵芝孢子粉干预戊四氮致痫模型大鼠海马及皮质区神经细胞Bcl-2、Bax的表达

采用中药灵芝孢子粉低、中、高剂量（150, 300, 450 mg/kg）干预戊四氮致癫痫模型28 d，并设空白对照组。经免疫组织化学染色和TUNEL检测后发现，与模型相比，灵芝孢子粉高剂量组大鼠海马和皮质区神经细胞TUNEL阳性细胞数及Bax阳性细胞数均减少，而Bcl-2阳性表达细胞数增加。Morris水迷宫实验检测结果显示，灵芝孢子粉高剂量组大鼠逃避潜伏期缩短，跨过原平台次数增加。说明高剂量灵芝孢子粉上调癫痫模型大鼠海马和皮质区神经细胞Bcl-2蛋白的表达，抑制Bax免疫反应及癫痫所致的神经细胞凋亡，明显改善其学习记忆功能。     

纹状体内注射6-羟基多巴制备帕金森病大鼠模型的实验研究

目的　研究纹状体内双靶点注射 6 -羟基多巴 (6 - OHDA)制备帕金森病大鼠模型的方法。方法　将2 2 0± 10 g雄性 Wistar大鼠随机分为 3组 :模型制备组 30只 ,假手术组 10只 ,正常对照组 10只。应用立体定向仪将6 - OHDA分两点注入大鼠右侧纹状体 ,每点 10 μg/5 μl。假手术组注射等量生理盐水。术后以阿朴吗啡检测旋转行为 ,平均每分钟逆时针旋转大于 7转者为成功模型。术后 2个月处死大鼠 ,行纹状体和黑质的 HE染色和 TH免疫组化染色 ,观察病理形态学变化。结果　 30只模型制作鼠中 ,共有 2 2只在阿朴吗啡多次注射后 ,恒定地转向左侧 ,每分大于 7转 ,为成功模型。光镜下 ,HE及 TH免疫组化染色可见模型组左侧黑质内有胞浆浓染、形状不一的 DA能神经元存在 ,数量较多 ,呈带状斜行排列。右侧 SNc区内 DA能神经元几乎消失 ,残存细胞萎缩。左右侧黑质内DA能神经元数目有显著差异 (P<0 .0 5 )。结论　纹状体内注射 6 - OHDA是一种有效的制备帕金森病模型的方法 ,模型制作成功率高。     

大鼠脑缺血再灌注损伤后的细胞凋亡与Bcl-2、Bax的表达

目的:观察脑缺血再灌注损伤中的细胞凋亡与Bcl2家族的关系。方法:参照ZeaLonga线栓法制作急性大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,观察脑缺血再灌注后大鼠缺血脑组织中的凋亡细胞变化情况及Bcl2、Bax蛋白表达情况,同时通过透射电镜观察缺血侧脑组织神经元超微结构变化。结果:同对照组相比缺血再灌注组凋亡神经元细胞增多(TUNEL阳性细胞)(P<0.05);Bax、Bcl2阳性细胞均升高(P<0.01),同时Bcl2/Bax比值降低;电镜观察神经元超微结构出现凋亡早期改变。结论:Bcl2/Bax比值影响脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡。     

大鼠局灶性脑缺血后Bcl-2、Bax的表达与细胞凋亡的关系

目的探讨缺血性脑损伤中bcl－2基因家族与细胞凋亡的关系。方法用线栓法制成Wistar大鼠大脑中动脉（MCA）阻塞-再通模型，应用免疫组化方法和TUNEL法，分别对大鼠局灶性缺血脑组织Bcl－2、Bax免疫反应阳性细胞和凋亡细胞的分布进行观察。结果大鼠MCA闭塞2h再通48h后，TUNEL阳性细胞主要分布在梗死灶周围的内侧尾壳核和额顶部皮层，与Bcl－2和BaX阳性细胞数在该区域的明显增加基本一致。同时，额顶部皮层Bcl－2／Bax阳性细胞数的比例较其他脑区及对照组明显降低。结论Bcl－2和Bax在缺血后表达的比例对缺血性脑损伤中细胞生存与凋亡可能起重要的调控作用。     

亚低温治疗对大鼠脑梗死后Bax和Bcl-2表达的影响

目的探讨亚低温对大鼠急性脑梗死Bax、Bcl-2表达的影响。方法清洁级（SPF）雄性健康SD大鼠,采用线栓法建立局灶性脑梗死模型,分别于缺血3、6、12 h给予亚低温治疗,缺血24 h取材观察。实验分常温组（大鼠10只）、亚低温3、6、12 h组（每组大鼠各10只）,假手术组（大鼠6只）,用TTC染色测定脑梗死体积,用免疫组化的方法检测Bax、Bcl-2的表达水平。结果与常温组比较,亚低温组脑梗死体积明显减少（P〈0.01）、Bcl-2表达上调、Bax表达下调（P〈0.05）。亚低温组脑梗死体积3 h〈6 h〈12 h组,Bcl-2表达3 h〉6 h〉12 h、Bax表达3 h〈6 h〈12 h（P〈0.05）。结论亚低温治疗可能通过抑制Bax和Bcl-2表达,从而抑制神经元凋亡、降低脑梗死体积,脑缺血后越早期给予亚低温治疗效果越好。     

缺氧-复氧对大鼠海马培养神经元Bcl-2、Bax表达和神经元凋亡的影响

目的 观察缺氧-复氧对体外培养海马神经元Bcl-2和Bax表达和神经元凋亡的影响。方法 取培养12d的海马神经元，置于恒温(36℃)密闭容器内，连续充以无氧气体[90％(体积分数)N2、10％(体积分数)CO2]，在缺氧条件下继续培养4h后，再于常氧培养箱内复氧培养24h和72h。于不同时间观察神经元存活数，并分别用抗Bcl-2和Bax抗血清进行免疫组织化学染色，观察缺氧-复氧后大鼠海马培养神经元Bcl-2和Bax表达。并用原位末端标记(TUNEL)法和流式细胞术分别检测缺氧-复氧对体外培养海马神经元凋亡的影响。结果 缺氧-复氧后24～72h,海马神经元对Bcl-2的表达逐渐减弱，对Bax的表达逐渐增强，对Bax／Bcl-2比值逐渐增大，凋亡神经元百分率逐渐增多。结论 缺氧-复氧后24～72h神经元凋亡的发生与神经元Bcl-2表达逐渐减弱，Bax表达逐渐增强，Bax／Bcl-2比值逐渐增大有关。     

阿扑吗啡对6-羟基多巴损伤的黑质纹状体大鼠的保护

摘要：目的本研究旨在评定6-羟基多巴损伤纹状体后黑质和腹侧被盖区的变化,并探讨阿扑吗啡在该模型中可能存在的神经保护作用。方法 6-羟基多巴损伤纹状体模型：在造模前15分钟,连续22天皮下注射阿扑吗啡10mg／kg．d。在第5周时,观察大鼠行为学（安啡他明诱导的旋转数目）、组织化学（TH／Nissl染色后黑质和腹侧被盖区的多巴胺细胞）、神经化学（高压液相法测定纹状体的多巴胺含量）改变。结果阿扑吗啡不仅消弱安啡他明诱导的旋转数日,而且,显著减少黑质的损伤（与对照组相比,多巴胺细胞达到69％,细胞形态恢复正常）和腹侧被盖区的损伤（多巴胺细胞增加了60％,细胞形态恢复正常）;并且,阿扑吗啡显著消弱6-羟基多巴损伤纹状体的多巴胺含量,使DOPAC／DA率恢复正常。结论在6-羟基多巴损伤纹状体模型中,阿扑吗啡不仅有神经保护作用,而且有神经营养作用。但神经营养作用局限于腹侧被盖区,并随着用药时间延长而增加。     

MPTP所致帕金森病模型黑质区TNF-α、IL-1 β的表达及灵芝孢子油的调控作用

目的 研究1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病模型中脑黑质区的免疫应答情况,探讨灵芝孢子油对MPTP引起的神经炎症反应的调节作用.方法 C57BL 小鼠分为MPTP组(组1)、灵芝孢子油 MPTP组(组2)、正常对照组(组3).组1皮下注射MPTP 30 mg/kg,连续6 d.组2在注射MPTP前两天开始鼻饲灵芝孢子油每日1.5g/kg,连续8 d.于末次注射MPTP后第8天用Western免疫印迹法检测中脑腹侧部肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白含量;用荧光半定量RT-PCR法检测中脑腹侧部TNF-α、白细胞介素-1 β(IL-1β) mRNA表达量.结果 ①TNF-α蛋白的相对含量:组1比组3明显增多,组2比组3略高,三组组间比较有明显差异(P＜0.01).②TNF-α mRNA、IL-1 β mRNA的表达量:组1比组3明显增高,组2比组3减少,组1与组2比较有显著性差异.结论 MPTP所致帕金森病模型黑质区炎症因子表达明显增高,灵芝孢子油能有效下调MPTP引起的神经炎症反应.     

骨髓基质干细胞静脉移植治疗大鼠脊髓损伤模型后Bcl-2、Bax的表达

目的 通过静脉移植绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓基质干细胞治疗大鼠脊髓挫伤模型,研究骨髓基质干细胞的移植对Bcl-2、Bax表达变化的影响,探讨静脉移植骨髓基质干细胞治疗脊髓损伤的可行性.方法 SD成年雌性大鼠,随机分成正常组、对照组、静脉移植组(后2组再分为术后1、3、7、14、21、28d组).用自制改良的Allen 装置使不锈钢杆自由落下,造成T12脊髓节段挫裂伤.在术前及术后对大鼠进行BBB评分和爬网格试验.术后第2d移植绿色荧光蛋白转基因小鼠的MSCs.之后,分别于1、3、7、14、21、28d取损伤(T12脊髓节段)节段上下约3cm固定,制作15～20μm厚的连续冰冻切片,每隔5片取一片组织进行荧光细胞观察及Bcl-2、Bax抗体免疫组织化学ABC染色.在荧光显微镜下观察细胞移植组灾光细胞,在Olympus光学显微镜下对脊髓灰质前角进行阳性细胞计数,利用HPLAS-1000高清晰图文分析系统检测Bcl-2、Bax免疫阳性反应物的平均灰度值.应用SPSS11.0软件包进行组间多个样本均数比较的单因素方差分析、q检验.结果 在正常组脊髓灰质的前角可见Bcl-2、Bax阳性神经元的表达,Bcl-2免疫阳性产物主要定位于核膜中.Bax主要分布于位于神经元胞浆中.Bcl-2和Bax阳性细胞伤后7d达高峰,随后开始下降.细胞移植后该规律不变.对照组Bcl-2阳性神经元表达与各移植组比较有显著性差异(P＜0.05).结论 与损伤对照组相比细胞移植治疗组7、14d组Bcl-2阳性细胞数上升、Bax阳性细胞数下降,灰度值升高2组间有显著性差异,说明移植骨髓基质干细胞下调,7d及14d组Bax而上调Bcl-2的表达.     

6-羟基多巴帕金森病大鼠双侧纹状体提取液对骨髓基质细胞的诱导作用

目的 评价6-羟基多巴(6-OHDA)帕金森病(PD)大鼠纹状体提取液在体外对骨髓基质细胞(BMSCs)的诱导分化作用.方法 建立单侧(右侧)PD大鼠模型,分别配制成毁损侧纹状体诱导液(L-SC)和未毁损侧纹状体诱导液(I-SC).三代BMSCs培养至第3天进行试验.诱导组分别取L-SC和I-SC培养BMSCs,相差显微镜下观察细胞生长状态和细胞形态变化;48 h后收集细胞,免疫细胞化学染色检测细胞表面神经标记物巢蛋白(nestin)、神经特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和酪氨酸羟化酶(TH),计数阳性率.另取部分BMSCs分别在含血清培养液(Ser-C)和无血清培养液(F-SerC)中培养,设为对照组.结果 镜下观察,L-SC组和I-SC组BMSCs部分脱落,仍然贴壁的细胞失去原有外观,有的细胞具有突起样结构.Ser-C组BMSCs生长良好,F-SerC组中的BMSCs则不能继续贴壁生长.免疫细胞化学染色显示,Ser-C组仅GFAP有阳性表达.诱导后,L-SC诱导组nestin和GFAP阳性率明显升高,I-SC诱导组NSE和GFAP阳性率明显升高,其中GFAP阳性率与Ser-C组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),L-SC诱导组与I-SC诱导组之间GFAP阳性率差异无统计学意义(P＞0.05).各组均无TH表达.结论 PD大鼠纹状体提取液可以引起BMSCs形态学改变.与Ser-C相比,诱导后GFAP阳性细胞显著增多,同时出现nestin和NSE阳性细胞.     

依达拉奉对大鼠脑外伤后细胞凋亡率及Bcl-2／Bax表达的影响

目的研究依达拉奉对大鼠脑外伤（TBI）后细胞凋亡率及Bcl-2／Bax表达的影响,探讨其对脑外伤后脑组织损害的保护作用。方法成年SD大鼠36只随机分为假手术组、脑外伤组、依达拉奉组。Allen＇s改良法制作脑外伤的模型;流式细胞仪检测伤侧海马细胞凋亡率的变化,免疫组化法检测海马细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达,图象分析仪进行灰度定量分析。结果假手术组没检测到明显的细胞凋亡;脑外伤组检测到较高的细胞凋亡率;依达拉奉组细胞凋亡率较外伤组明显下降。外伤组脑细胞Bcl-2、Bax蛋白表达水平均明显高于假手术组;与外伤组相比,依达拉奉组Bcl-2蛋白表达水平显著增高,Bax蛋白表达水平明显下降。结论依达拉奉可有效抑制大鼠外伤后神经细胞凋亡,此作用可能与其有效清除氧自由基、上调Bcl-2和下调Bax蛋白表达水平有关。     

大鼠全脑缺血再灌注损伤后调控基因Bcl-2、Bax的表达及与细胞凋亡的关系

目的:本研究旨在探讨Bcl-2及Bax蛋白在大鼠全脑缺血再灌注损伤中的变化及与细胞凋亡的关系。方法:雄性Wistar大鼠56只,随机分为假手术组、缺血15分钟再灌注1、6、12、24、48、72小时组。采用大鼠四条血管阻断方法制备大鼠全脑缺血再灌注模型。采用TUNEL法观察不同再灌注时间组海马CAl区细胞凋亡的变化。采用免疫组化法观察Bcl-2及Bax蛋白表达水平的变化。结果:脑缺血损伤后随再灌注时间延长凋亡细胞逐渐增多,至再灌注48小时达到高峰,72小时后减少。Bcl-2表达至再灌注12小时达高峰,再灌注24~72小时组逐渐减弱。Bax表达至48小时达高峰,再灌注72小时减少。结论:Bcl-2于再灌注早期表达增强,Bax于再灌注中期表达增强,Bcl-2/Bax比例失衡可能是大鼠全脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的机制之一。     

3-硝基丙酸预处理对大鼠局灶性脑缺血Bcl-2和Bax mRNA表达的影响

目的探讨3-硝基丙酸(3-NPA)预处理对大鼠局灶性脑缺血半暗带Bc l-2和Bax mRNA表达的影响。方法将大鼠腹腔注射3-NPA 20 mg/kg,3 d后制作局灶性脑缺血再灌注模型;采用逆转录聚合酶链反应,观察3-NPA预处理对脑缺血再灌注1 h、6 h、12 h、24 h及48 h额顶部皮质Bc l-2和Bax mRNA表达的影响,并与假手术组和缺血再灌注组比较。结果与假手术组比较,缺血再灌注组和3-NPA预处理组各时间点Bc l-2和Bax mRNA表达极显著增强(均P<0.01);与缺血再灌注组比较,3-NPA预处理组各时间点Bc l-2mRNA表达显著增强(均P<0.05),再灌注12~48 h Bax mRNA的表达显著降低(均P<0.05)。结论增强Bc l-2的表达、抑制Bax的表达,可能是3-NPA预处理抑制细胞凋亡、诱导脑缺血耐受的机制之一。     

脑源性神经营养因子对脑梗死大鼠神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的 探讨侧脑室内立体定向注射脑源性神经营养因子(BDNF)对脑梗死大鼠神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法 32只SD大鼠成功制作大脑中动脉闭塞模型,随机分为BDNF组(n=16)和对照组(n=16),在两组大鼠侧脑室内分别注射10μ1 BDNF溶液(0.5 μmol)和10μl磷酸盐缓冲液(PBS液).注射2周后,2组大鼠分别行神经功能严重性评分(mNSS)及梗死面积测定,应用免疫组化染色、Western blot分析脑组织Bcl-2、Bax蛋白的表达,Tunel检测细胞凋亡.结果 与对照组比较,BDNF组脑梗死面积缩小,神经细胞凋亡数少,Bax蛋白表达低,Bcl-2蛋白表达高,短期内神经功能恢复好,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 BDNF可能通过调节Bcl-2、Bax蛋白表达,减少神经细胞凋亡,改善脑缺血大鼠的功能.     

淋巴滞留性脑病大鼠脑组织超微结构及Bax、Bcl-2表达的变化

目的 研究淋巴滞留性脑病(LE)脑组织超微结构及大脑皮质Bax、Bcl-2表达的变化.方法 用阻断颈部淋巴引流的方法制作LE大鼠模型,观察术后1 d、2 d、3 d、5 d、7 d和14 d脑组织超微结构的变化;免疫印迹法检测大脑皮质Bax和Bel-2蛋白的表达;并与正常对照组比较.结果 电镜下见LE组大鼠脑组织有水肿,血管周围出现半月形间隙、细胞肿胀,可见神经细胞凋亡和坏死,以LE 5 d组最明显.LE 3 d、5d、7 d组大脑皮质Bax和Bcl-2蛋白的表达明显高于正常对照组(均P＜0.01),LE 5 d组为最高;Bax/Bcl-2的变化与此相同.结论 LE大鼠出现脑部水肿及神经细胞凋亡和坏死,大脑皮质Bax和Bcl-2表达增高.     

高压氧对成年大鼠持续性局灶脑缺血细胞凋亡及Bcl-2、Bax的影响

局灶性脑缺血引起的组织缺氧是直接性和间接性神经元死亡的主要因素，因此提高局部梗死组织氧的供给，一直被认为是有潜力的治疗方法。高压氧（HBO）能有效增加血浆中的氧含量，减小梗死灶体积，改善预后。但HBO治疗脑缺血的确切机制还不清楚。本研究通过建立大鼠持续性局灶     

大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达

目的探讨大鼠脑缺血再灌注后caspase-3、Bcl-2和Bax在脑皮质神经元中的表达。方法将动物随机分为假手术组及缺血组,参照zea longa线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,各组大鼠分别在左侧MCAO2h再灌注不同时间点断头取脑,脑皮质神经元中caspase-3、Bcl-2和Bax的表达通过免疫组化法来测定。结果缺血组大鼠脑皮质caspase-3的表达较假手术组显著增强(P<0.01),缺血组大鼠脑皮质Bcl-2的表达较假手术组显著增强(P<0.01),缺血组大鼠脑皮质Bax的表达较假手术组显著增强(P<0.01)。结论短暂性脑缺血再灌注上调脑皮质神经元中caspase-3和Bax的表达促细胞凋亡,上调脑皮质神经元中Bcl-2的表达抗细胞凋亡。     

女贞子对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡及Bcl-2、Bax的表达影响

目的 通过观察女贞子对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响,探讨其对脊髓损伤的保护作用.方法 选用90只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组,制成脊髓损伤动物模型.治疗组取女贞子液3.0 g/(kg·d)腹腔注射,假手术组与模型组取等量生理盐水腹腔注射,于各时间点制成脊髓切片,行苏木素一伊红(HE)...     

阿扑吗啡对6-羟基多巴损伤的黑质纹状体大鼠的保护(英文)

目的本研究旨在评定6-羟基多巴损伤纹状体后黑质和腹侧被盖区的变化,并探讨阿扑吗啡在该模型中可能存在的神经保护作用。方法6-羟基多巴损伤纹状体模型:在造模前15分钟,连续22天皮下注射阿扑吗啡10 mg/kg·d。在第5 周时,观察大鼠行为学(安啡他明诱导的旋转数目)、组织化学(TH/Nissl 染色后黑质和腹侧被盖区的多巴胺细胞)、神经化学(高压液相法测定纹状体的多巴胺含量)改变。结果阿扑吗啡不仅消弱安啡他明诱导的旋转数目,而且,显著减少黑质的损伤(与对照组相比,多巴胺细胞达到69%,细胞形态恢复正常)和腹侧被盖区的损伤(多巴胺细胞增加了60%,细胞形态恢复正常); 并且,阿扑吗啡显著消弱6-羟基多巴损伤纹状体的多巴胺含量,使DOPAC/DA率恢复正常。结论在6-羟基多巴损伤纹状体模型中,阿扑吗啡不仅有神经保护作用,而且有神经营养作用。但神经营养作用局限于腹侧被盖区,并随着用药时间延长而增加。