小鼠肺炎链球菌psaA核酸疫苗的制备及其初免-蛋白加强免疫策略的研究

白加强免疫1次,对照组5只小鼠经pVAX1空载体免疫3次后,生理盐水加强免疫1次,分别采集血清测定两组抗PsaA抗体水平.结果 成功克隆出psaA基因并实现其亚克隆;所构建的psaA核酸疫苗序列正确,同时实现了PsaA蛋白的一步亲和纯化;psaA核酸疫苗可在293T真核细胞中成功表达;核酸疫苗初免后蛋白加强组的抗PsaA抗体滴度高于对照组(t=87.518,P＜0.05).结论 成功构建出psaA核酸疫苗,采用核酸疫苗初免-蛋白加强免疫策略能增强肺炎链球菌psaA核酸疫苗的免疫原性.     

CTB增强PsaA疫苗对肺炎链球菌急性中耳炎的保护作用

目的研究以霍乱毒素B(CTB)作为PsaA蛋白疫苗黏膜佐剂经鼻腔黏膜途径免疫在BALB/c小鼠体内诱导的特异性免疫应答能力以及对肺炎链球菌急性中耳炎的保护作用。方法 6~8周龄的BALB/c小鼠随机分为3组,分别接受PsaA蛋白免疫(PsaA组,15μg PsaA蛋白),PsaA蛋白及CTB免疫(PsaA/CTB组,15μg PsaA/4μg CTB),CTB免疫(CTB组,4μg CTB),经鼻腔途径免疫,相同剂量和方法每周免疫两次,连续三周,末次免疫后两周收集鼻腔灌洗液、中耳灌洗液及支气管肺泡灌洗液检测特异性IgA抗体反应;收集血清,检测特异性IgG、IgG1及IgG2a抗体反应;末次免疫后2周,小鼠经鼓膜注射14型肺炎链球菌,攻毒后5天组织病理学评估中耳炎症程度。结果PsaA/CTB组鼻腔黏膜免疫获得了较高水平的全面免疫应答:鼻腔、中耳和支气管肺泡灌洗液中特异性IgA抗体水平明显高于PsaA组和CTB组(P<0.05);血清中特异性IgG、IgG1、IgG2a抗体水平明显高于PsaA组和CTB组(P<0.05);攻毒后5天PsaA/CTB组中耳炎症细胞数少于PsaA和CTB组(P<0.05)。结论 CTB是肺炎链球菌蛋白疫苗PsaA有效的黏膜免疫佐剂,黏膜免疫也是PsaA有效的免疫途径,该免疫策略研究为新一代肺炎链球菌疫苗的设计提供了实验基础。     

Th17细胞在小鼠变应性鼻炎模型中的表达及调控作用

目的:通过探讨变应性鼻炎小鼠与正常小鼠、抗IL-17抗体治疗后的变应性鼻炎小鼠的行为学、组织病理学,Th1、Th2、Th17细胞因子的数量以及Th17细胞特异性转录因子的表达水平,评价Th17细胞在变应性鼻炎发病机制中的作用.方法:以卵清蛋白致敏模型组和治疗组小鼠建立BALB/c小鼠变应性鼻炎模型,造模成功后治疗组予IL-17抗体治疗.对照组以生理盐水对照.采集外周血ELISA法测IL-17、IL-4和IFN-γ.并取黏膜行苏木精-伊红染色及RT-PCR法测孤儿核受体(RORγt)mRNA的表达水平.结果:卵清蛋白造模成功,治疗后症状及炎症病理缓解.模型组IL-17、IL-4及RORγt mRNA表达水平均较对照组明显增高,IFN-γ降低;治疗后前三者降低而后者升高(P<0.05).结论:Th17细胞与Th2细胞在变应性鼻炎中大量表达,说明两者可能与其发病机制有关,本实验从IL-17抗体局部治疗有效方面提出治疗依据,通过调控Th17细胞可能成为有效阻止变应性鼻炎的治疗方法.     

肺炎球菌溶血素基因的克隆

目的应用基因工程技术克隆肺炎球菌溶血素（pneumolysin,Pn）基因,为研制中耳炎蛋白多糖结合疫苗奠定基础.方法根据Walker等肺炎球菌溶血素基因序列（GenBank accession no.X52474）,设计一对各带有一个限制性酶切位点的引物,运用PCR从肺炎球菌的染色体DNA扩增出肺炎球菌溶血素基因.对该PCR产物进行酶切、回收,并将其克隆入表达载体pET-28a,然后转化至大肠杆菌JM109（DE3）宿主细胞中.结果通过常规基因克隆方法和PCR技术,成功构建重组体,酶切鉴定和基因测序证实构建正确.结论利用基因工程技术成功克隆了肺炎球菌溶血素基因.     

与内耳免疫反应有关的耳蜗病理生理

近年临床研究表明内耳功能障碍与多种免疫性疾病存在着明显的关系,但其病理生理机制不明,因此有必要建立适当的动物模型进行深入的研究。作者用健康、或龄豚鼠分为对照组(12只)、初次免疫反应纽(初免组11只)和再次免疫反应组(再免组9只),接种KLH(钥孔槭血蓝素)前抽血测抗KLH抗体和测CM(耳蜗微音电位)和AP(Ⅷ脑神经N_1复合动作电位)。于右侧耳蜗基部钻一直径250μm的小孔进入鼓阶,抽外淋巴15～20μl作抗KLH测定,换管缓注     

小RNA干扰细胞周期蛋白Y基因表达对喉癌Hep-2细胞增殖的影响

目的 利用RNA干扰技术下调细胞周期蛋白Y(Cyclin Y,CCNY)基因的表达,观察其对喉癌Hep-2细胞增殖的影响.方法 构建针对CCNY基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,包装慢病毒感染喉癌Hep-2细胞.将细胞分为2组,对照组和实验组(感染CCNY shRNA慢病毒组).运用Real-time PCR检测CCNY在RNA水平的变化;四甲基偶氮唑蓝法和平板克隆形成实验检测CCNY表达下调对细胞增殖的影响.结果 成功包装表达CCNYshRNA的慢病毒并感染Hep-2细胞,shRNA下调CCNY的表达后,与对照组相比CCNY在mRNA水平的表达显著下降,抑制率为75.3％ (P ＜0.05).表达CCNY shRNA的慢病毒感染5d后,继续培养6d,细胞的生长明显受到抑制(P ＜0.001).细胞在体外培养10 d后形成克隆的潜力降低了60％.结论 靶向CCNY基因RNA干扰能够阻抑喉癌Hep-2细胞的CCNY表达,抑制细胞增殖,CCNY基因有望成为喉癌基因治疗靶点.     

大鼠Atohl真核表达载体pAtoh1-IRES2-EGFP的构建及转染293T细胞的研究

目的:利用基因工程方法克隆SD大鼠Atohl基因编码区序列,构建Atohl的真核表达载体pA-tohl-IRES2-EGFP,并验证其在293T细胞中的表达.方法:通过RT-PCR从SD大鼠结肠组织内扩增出Atohl基因全长CDS序列,并TA克隆于PMD-19T载体中.纯化回收的目的片段测序后连接于真核细胞表达载体pIRES2-EGFP中,构建pAtohl-IRES2-EGFP真核表达载体.再次测序后脂质体介导重组质粒转染293T细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达.结果:测序后将扩增得到的大鼠Atohl CDS序列与GeneBank公布的参考序列对比,有两处碱基发生突变,但克隆序列编码的氨基酸序列与参考序列完全一致,两处碱基应为单核苷酸多态性,突变为无义突变,不影响蛋白表达.双酶切和测序结果证明Atohl已正确地克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中,重组质粒转染293T细胞24 h后荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白表达.结论:获得正确Atohl编码序列,真核表达载体pAtohl-IRES2-EGFP构建成功并可以在293T细胞中表达,为进一步对感音神经性聋的基因治疗奠定了基础.     

卡介菌多糖核酸注射液对血管运动性鼻炎的疗效观察

目的:观察卡介菌多糖核酸注射液对血管运动性鼻炎的临床治疗效果和安全性.方法:60例临床拟诊为血管运动性鼻炎患者按随机单盲对照试验方法分为卡介菌多糖核酸组和对照组(2组各30例),卡介菌多糖核酸组给予卡介菌多糖核酸注射治疗,每次1.0 mg,每周2次,共2个月,必要时予氮卓斯汀鼻喷剂对症治疗.对照组单独给予氮卓斯汀鼻喷剂.每日2次,症状缓解后酌减.均随访至停药后6个月.观察并记录治疗后症状得分、药物评分及不良反应.结果:卡介菌多糖核酸注射治疗2个月刚结束时,卡介菌多糖核酸组症状得分及药物评分均明显低于对照组(P＜0.01).至6个月后末次随访时,卡介菌多糖核酸组较对照组症状得分稍低但差异无统计学意义(P＞0.05),药物评分明显低于对照组(P＜0.01).卡介菌多糖核酸注射时不良反应仅1例诉有局部疼痛.结论:卡介菌多糖核酸是血管运动性鼻炎的一种安全有效的治疗方法.     

低氧对Hep-2细胞肿瘤干细胞特性和化疗抵抗的影响及其作用机制

目的 探讨低氧对Hep-2细胞肿瘤干细胞特性和化疗抵抗的影响,并分析其相关机制.方法 构建针对低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1 alpha,HIF-1α)的短发夹RNA重组质粒,转染Hep-2细胞,经筛选建立HIF-1 α基因敲除的Hep-2细胞并检测HIF-1α表达的变化;观察低氧条件培养的Hep-2细胞增殖、克隆形成、细胞周期、凋亡及CD133表型等细胞生理学特性变化;流式细胞仪分选CD133+细胞,观察CD133+细胞克隆形成及顺铂杀伤情况,并检测相关基因Oct-4、p53及survivin表达变化.用方差分析及两样本均数比较的t检验进行统计分析.结果 成功建立HIF-1α基因敲除Hep-2细胞,HIF-1 α在mRNA和蛋白水平上的表达明显下调;低氧培养Hep-2细胞具有较高的增殖活性及克隆形成能力,凋亡率降低,细胞周期GO/G1期阻滞、CD133表达升高,而HIF-1α基因敲除后上述变化减弱;成功分选出Hep-2细胞中的CD133+细胞,CD133+细胞克隆形成能力高、顺铂杀伤抗性强,而HIF-1α基因敲除后上述能力降低,并出现Oct-4表达下调,p53表达上调,survivin表达下调.结论 低氧能够诱导和强化Hep-2细胞的肿瘤干细胞特性,增强CD133+细胞的增殖分化和化疗抵抗能力,其作用机制可能与HIF-1α及其诱导的相关基因表达变化相关.     

Bmi-1基因RNAi对喉癌细胞Hep-2生物学行为的影响

目的:构建Bmi-1基因的RNAi表达载体,观察其对喉癌细胞Hep-2增殖、侵袭能力的影响。方法:利用慢病毒表达体系pHelper1.0/pHelper2.0/pGCL2GFP,构建Bmi-1基因的RNAi重组质粒vshRNA-Bmi-1。实时定量PCR和蛋白质印迹法分别检测稳定转染vshRNA-Bmi-1后喉癌细胞中Bmi-1mRNA及蛋白的表达;克隆形成实验及小室侵袭实验检测喉癌细胞增殖和侵袭能力的变化。结果:稳定转染vshRNA-Bmi-1后Hep-2细胞Bmi-1mRNA表达均明显下降,Hep-2细胞中Bmi-1蛋白表达明显下降。抑制率分别为79%及88%。Bmi-1干扰后Hep-2细胞增殖减慢、侵袭能力减弱。结论:成功构建Bmi-1基因的RNAi表达载体,vshRNA-Bmi-1重组质粒明显下调Bmi-1mRNA和蛋白在喉癌细胞Hep-2中的表达。Bmi-1基因的RNAi能抑制喉癌细胞Hep-2的增殖和侵袭能力。     

耳廓开放性外伤的治疗方法探析

目的 探讨耳廓开放性外伤的治疗方法。方法 23耳耳廓开放性外伤经彻底清创，肝素生理盐水冲洗伤口后，对位缝合。术后用抗生素抗感染、丹参扩张血管、罂粟碱改善微循环。结果 23耳中2耳失访，18耳完全成活，1耳部分成活，2耳完全坏死。结论 耳廓撕裂伤、断伤、带有皮蒂的耳廓离断伤，由于断端双侧血管丰富，经对位缝合后容易成活。但耳廓完全离断伤由于缺乏血供，经对位缝合后不易成活，可采用去皮血管植入包埋法，带肌蒂皮瓣移植法或尝试显微外科技术施行血管吻合，以提高耳廓完全离断伤的成活率。     

诊治7例鼻腔嗅神经母细胞瘤的体会

目的：提高临床对鼻腔嗅神经母细胞瘤的认识及治疗效果。方法：７例患者按Ｋａｄｉｓｈ分期，Ｂ期２例，Ｃ期５例，单纯放疗３例，术前放疗４例，放射剂量为５０００￣７０００ｃＧｙ。均随访至１９９７年１２月，结果：存活５例，存活时间分别为２０，２２，２３，２９及７６个月；结论：放疗对该肿瘤有效；放疗与化疗结合的方法值得探讨，该瘤病理上可能存在不同的亚型。     

急性化脓性耳廓软骨膜炎手术疗效分析

目的 探讨能够缩短化脓性耳廓软骨膜炎疗程,降低耳廓畸形发生率且具个体化的局部治疗方法.方法 回顾分析1 989年4月～2010年2月我科诊治的25例化脓性耳廓软骨膜炎的临床资料.除进行抗生素治疗外,局部治疗方法包括清创术后重新行耳甲腔成行术;脓腔穿刺置静脉留置针进行持续负压引流;清创后创腔置管引流.结果 自定义疗效评定...     

Effects of time of contact and concentration of caustic agent on generation of injuries

OBJECTIVES: Solid caustic soda (CS) ingestion levels continue high in Brazil. The aggressiveness of a caustic agent depends, among other factors, on its concentration and time of contact with mucosa. However, the interdependence of these factors in the production of caustic lesion in the esophageal mucosa is not known, especially regarding CS as the strongest corrosive agent. We analyze the effects of concentration and time of contact on the aggressiveness of CS to the esophagus of live animals. STUDY DESIGN/METHODS: One milliliter of CS at concentrations between 1.83% and 73.33% was applied to rats. The solution was kept in contact with the mucosa for 10 to 120 minutes. Internal and external organ aspects were analyzed and the epithelium, submucosa, muscle layer, and adventitia were analyzed microscopically RESULTS: Epithelial necrosis was observed at all concentrations. Among the necrotic layers, the submucosa was observed starting at the 7.33% concentration, and the muscular layer and adventitia were observed at 14.66% concentration. Damage to the pulmonary parenchyma and trachea occurred at 33.66% after 10 minutes, and perforation of the esophagus was observed only after 120 minutes. After 10 minutes, important corrosive lesions installed in the esophageal layers, expanding in depth and superficial extension. The use of heparin had no effect on the production of lesions. CONCLUSIONS: Ten minutes were sufficient to provoke necrosis, and longer contact increased the area of necrosis. Solution concentration levels were more important in damage production: 1.83% was sufficient for epithelial necrosis, 7.33% caused submucosal necrosis, and 14.66% muscle and adventitia necrosis; 33.66% solutions caused lung and trachea damage after 10 minutes and esophageal perforation after 120 minutes.     

Scales of degree of facial paralysis: analysis of agreement

IntroductionIt has become common to use scales to measure the degree of involvement of facial paralysis in phonoaudiological clinics.ObjectiveTo analyze the inter- and intra-rater agreement of the scales of degree of facial paralysis and to elicit point of view of the appraisers regarding their use.MethodsCross-sectional observational clinical study of the Chevalier and House & Brackmann scales performed by five speech therapists with clinical experience, who analyzed the facial expression of 30 adult subjects with impaired facial movements two times, with a one week interval between evaluations. The kappa analysis was employed.ResultsThere was excellent inter-rater agreement for both scales (kappa > 0.80), and on the Chevalier scale a substantial intra-rater agreement in the first assessment (kappa = 0.792) and an excellent agreement in the second assessment (kappa = 0.928). The House & Brackmann scale showed excellent agreement at both assessments (kappa = 0.850 and 0.857). As for the appraisers’ point of view, one appraiser thought prior training is necessary for the Chevalier scale and, four appraisers felt that training is important for the House & Brackmann scale.ConclusionBoth scales have good inter- and intra-rater agreement and most of the appraisers agree on the ease and relevance of the application of these scales.     

术前使用布地奈德对声带息肉手术疗效的影响

目的 研究术前使用布地奈德雾化吸入治疗对手术疗效的影响。方法 按病程将3个月以内和1年以上患者随机分为两组,一组术前给予布地奈德雾化治疗,一组没有,术后两周复诊。分别于初诊、手术前和复诊时使用嗓音测试仪对病人进行测试并记录参数。结果 病程3个月以内患者术前给予雾化治疗后,其术后声学参数明显改善。结论 病程3个月以内患者术前给予雾化治疗能缩短术后恢复时间。     

A national audit of sinus surgery. Results of the Royal College of Surgeons of England comparative audit of ENT surgery

The results of a national audit of sinus surgery are presented. Forty-six consultant ENT surgeons reported on over 2500 sinus procedures. There has been an exponential rise in the number of surgeons in England and Wales performing functional endoscopic sinus surgery (FESS) in recent years. Sixty-five per cent of surgeons in our study used the FESS technique and 81% had formal or other training. Outpatient sinus endoscopy and CT scans have become more routine pre-operative investigations, whilst the use of plain films has waned. There was a wide variation in the numbers of FESS procedures performed by individual surgeons in the 6-month period (between 5 and 85). The overall complication rate was 0.75% for conventional surgery and 1.41% for functional surgery but no major complications were recorded. The primary symptom of blockage was most successfully treated by both conventional and functional surgery (70% and 84% asymptomatic or improved at 6 months). Pain was relieved in 75% of functional procedures and 47% of conventional procedures and discharge relieved in 76% of FESS procedures and 47% of conventional procedures.     

磷霉素在减轻卡那霉素耳中毒过程中的作用

本文采用磷霉素笔卡那霉素联合应用，经扫描电镜、透射电镜、耳蜗铺片和组织化学反应观察，了解磷霉素减轻卡那霉素耳毒性的机制以及卡那霉素所致耳毒性的发展过程。通过实验可以看到磷霉素有保护溶酶体膜的作用，所以能减轻卡那霉素的耳毒性，但由于它不能直接对抗AmAn耳毒性作用机制，因而不能完全预防其耳毒性。     

CT对鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤起源的探讨

目的 探讨鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤起源的CT影像学特点。 方法 回顾性分析47例经鼻内镜手术及术后病理组织学确诊的鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤患者的CT影像学资料。对肿瘤病变在CT上的骨质变化进行分析,并与术中发现的肿瘤起源根蒂部位进行对比,分析CT影像中骨质改变与肿瘤起源之间的关系。 结果 47例患者中,39例有骨质增生影像表现,其中37例骨质增生部位与肿瘤起源的根蒂部位一致,一致性达78.7%,提示可根据骨质增生部位推测肿瘤起源位置。 结论 CT影像中的骨质增生与鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤的根蒂起源部位有较高的一致性,有助于术前评估肿瘤起源和指导术前制定合理的手术方案。     

慢性鼻窦炎病原学变迁的研究

目的:了解慢性鼻窦炎病原学分布的变迁。方法:术中收集2010年全年111例(实验组)上颌窦或筛窦脓性分泌物,分别进行需氧菌和真菌培养,同时以30例健康受试者作为对照组,其培养结果与2005年的各种数据比较,分析病原微生物的分布变化。结果:实验组共培养出15种病原微生物,主要为肺炎克雷伯菌、甲型链球菌、鲍曼不动杆菌、表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌等;需氧菌和真菌培养阳性率为81.8%,其中革兰阳性菌37.8%,革兰阴性菌54.4%,各种真菌7.8%;对照组检测出表皮葡萄球菌、流感嗜血杆菌、甲型链球菌、卡他布兰汉菌和金黄色葡萄球菌5种细菌,与实验组比较差异有统计学意义(χ2=0.009,P<0.01);与2005年数据(革兰阳性菌56.3%,革兰阴性菌43.7%,真菌阳性率1.4%)比较,其分布特征有明显差异。结论:细菌感染是慢性鼻窦炎的重要原因之一;细菌分布结构从原来的革兰阳性菌变成现在的以革兰阴性菌为主,真菌感染也不容忽视。应用抗生素治疗宜先进行细菌培养与药敏试验。