长期不进展人类免疫缺陷病毒-1感染者准种膜蛋白V3环氨基酸特点分析

目的 了解长期不进展HIV-1感染者HIV-1准种膜蛋白V3环氨基酸序列特征及变异特点.方法 应用终点有限稀释套式PCR方法,对5例长期不进展HIV-1感染者不同时间点单个HIV-1前病毒env基因c2-v3-c3区域进行扩增和序列测定,用序列确证分析技术分析env基因区V3环氨基酸序列特征.结果 5例患者不同随访时间点获得的准种序列中,V3环35个氨基酸中出现多样性的位点分别有1～10个不等,同一患者不同随访时间点准种优势株序列完全一致或仅有1～2个位点不同;4例患者V3环顶端四肽为GPGR,1例患者为GPGK,同一患者不同随访时间点V3环顶端四肽一致;根据V3环11和25位氨基酸及V3环的电荷推测HIV-1辅助受体均为趋化因子受体(CCR)5.结论 长期不进展HIV-1感染者V3环序列存在不同程度变异,顶端四肽稳定性高,感染的HIV-1毒株可能为非合胞体诱导型毒株.     

长期不进展人类免疫缺陷病毒-1感染者准种膜蛋白V3环氨基酸特点分析

目的 了解长期不进展HIV-1感染者HIV-1准种膜蛋白V3环氨基酸序列特征及变异特点.方法 应用终点有限稀释套式PCR方法,对5例长期不进展HIV-1感染者不同时间点单个HIV-1前病毒env基因c2-v3-c3区域进行扩增和序列测定,用序列确证分析技术分析env基因区V3环氨基酸序列特征.结果 5例患者不同随访时间点获得的准种序列中,V3环35个氨基酸中出现多样性的位点分别有1～10个不等,同一患者不同随访时间点准种优势株序列完全一致或仅有1～2个位点不同;4例患者V3环顶端四肽为GPGR,1例患者为GPGK,同一患者不同随访时间点V3环顶端四肽一致;根据V3环11和25位氨基酸及V3环的电荷推测HIV-1辅助受体均为趋化因子受体(CCR)5.结论 长期不进展HIV-1感染者V3环序列存在不同程度变异,顶端四肽稳定性高,感染的HIV-1毒株可能为非合胞体诱导型毒株.     

深圳地区艾滋病患者HIV-1毒株膜蛋白V3环的氨基酸变异分析

目的了解深圳地区艾滋病患者体内不同HIV-1亚型膜蛋白V3环的氨基酸序列特征及变异特点.方法采用逆转录套式聚合酶链反应（RT-nested-PCR）对艾滋病患者血浆HIV RNA进行扩增,对扩增产物直接测序并进行序列对比、翻译和分析.结果深圳地区艾滋病患者感染HIV病毒分属B与CRF01-AE亚型,病毒V3顶端的四肽特征主要为：GPGQ 48%、GPGR 36%、其他形式16%;其中AE亚型GPGQ百分比为76.9%,B亚型GPGR百分比为75%;还发现DQDR、DQGQ等少见V3环顶端四肽组成形式.V3环发生与SI表型有关的氨基酸突变形式高达80%.结论深圳地区艾滋病患者感染病毒V3环顶端四肽主要为GPGQ与GPGR,V3环序列高度变异,出现一些少见的V3环顶端四肽组成形式值得进一步研究.     

静脉药瘾者人类免疫缺陷病毒核酸测定及亚型分析

目的：了解静脉药瘾者人类免疫缺陷病毒（HIV）感染情况及感染亚型，追踪传染源，预测未来流行株。方法：对1997年从新疆至杭州的15例静脉药瘾者血清进行抗－HIV的初步筛选，结果为阳性者再行免疫印迹（Western blot)、套式聚合酶链反应（Nest-PCR)及HIV核酸序列分析，结果：15例新疆籍静脉药者均感染了HIV－1，其中有2例E亚型，其余均为C亚型。结论：静脉吸毒者主要感染HIV－1C亚型，我国HIV－1主要流行株可能已经发生变化。     

人类免疫缺陷病毒1型相关痴呆的临床研究现状

人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)1型(HIV-1)相关痴呆或HIV相关痴呆(HIV associated dementia,HAD),也称获得性免疫缺陷综合征(AIDS)痴呆复     

低水平病毒载量长期不进展人类免疫缺陷病毒-1感染者的人类免疫缺陷病毒-1的遗传分析

目的 分析低水平病毒载量长期不进展(LTNP)HIV-1感染者HIV-1的遗传特征.方法 采用有限稀释套式PCR、终点PCR和序列确证分析等技术对5例低病毒载量LTNP HIV-1感染者不同随访时间点HIV-1前病毒enw基因c2-v3-c3区域和gag基因p17区域进行扩增和序列分析.分别计算不同时间点内以及不同时间点与用于分析的最早时间点之间上述两个基因区域的基因多样性和基因离散率,依据基因离散率计算基因的进化率,统计学分析用GraphPad Prism 5软件.结果 5例患者在21个随访时间点共获得115条c2-v3-c3序列和173条p17序列.进化树分析表明,不同患者的序列分开,同一患者的序列特异地聚集,序列质量可靠.5例患者env基因c2-v3-c3区域不同时间点基因多样性为0～6.38%,平均为2.1%,病例1、3和5基因多样性随感染时间的增加逐渐升高(r=0.7257、0.4954、0.3288),病例2和4基因多样性随感染时间的增加逐渐下降(r=-0.3759、-0.5028);基因离散率为0.1%～6.5%,平均为2.9%,除病例1外,基因离散率均随感染时间间隔的增加逐渐升高,进化率分别为每年每位点-0.13%、0.81%、0.09%、0.14%和0.16%,平均为0.21%.gag基因p17区域基因多样性为0～2.5%,平均为1.2%,基因离散率为0.2%～2.7%,平均为1.4%,除病例3基因多样性和基因离散率随感染时间或时间间隔的增加下降外,其余病例均随感染时间或时间间隔的增加而逐渐升高,进化率分别为每年每位点0.087%、0.064%、-0.014%、0.081%和0.087%,平均为0.061%.结论 低水平病毒载量LTNP HIV-1感染者HIV-1有复制能力,病毒基因维持较低水平的进化;HIV-1 env基因变化的程度大于gag基因.     

人类免疫缺陷病毒-1感染者血清趋化因子的检测及克隆构建

目的 探讨调节活化正常T细胞表达与分泌趋化因子(RANTES)及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在HIV-1感染中的作用.方法 以ELISA检测HIV-1感染者(治疗组和未治疗组)和健康对照组人群外周血清RANTES及MCP-1的浓度;构建hRANTES-pcDNA3.1,hMCP-pcDNA3.1及hMCP/hRANTES-pcDNA3.1重组质粒,在CHO细胞中体外高效表达,获得重组蛋白,并研究三者对人外周血单个核细胞的趋化功能.结果 RANTES在健康对照组为(164.3±21.3)pg/mL,未治疗组为(1 224.1±62.0)pg/mL,治疗组为(475.3±36.2)pg/mL;MCP-1分别为(90.6±28.5)、(335.0±30.3)和(807.2±62.6)pg/mL.HIV-1感染后RANTES和MCP-1均升高,有效抗病毒治疗后RANTES有所下降,而MCP-1则明显上升.重组蛋白经Western印迹鉴定,能与各自单克隆抗体结合,且三者对人外周血单个核细胞都有趋化作用,MCP/RANTES融合蛋白的趋化作用更强.在重组蛋白浓度为50、200、400和800 pg/mL时,MCP/RANTES融合蛋白趋化外周血单个核细胞数分别为52×104/mL、102×104/mL、132×104/mL和184×104/mL;RANTES趋化外周血单个核细胞数分别为27×104/mL、51×104/mL、65×104/mL和96×104/mL;MCP-1趋化外周血单个核细胞数分别为18×104/mL、44×104/mL、54×104/mL和74×104/mL.结论 RANTES和MCP-1可能都参与了HIV-1的感染和机体对HIV-1的免疫反应.     

静脉吸毒致获得性免疫缺陷病毒-1型感染者合并丙型肝炎病毒亚型的分析

目的了解静脉吸毒致获得性免疫缺陷病毒1型(HIV1)感染者混合HIV感染丙型肝炎病毒(HCV)亚型的分布情况。方法采用abbott公司的MurexHCVSerotyping16Assay检测12例单纯HCV感染者及25例静脉吸毒导致HIV1感染者(其中重叠HCV感染的患者12例)HCV不同亚型的抗体,确定HCV的基因亚型。结果12例单纯HCV感染者中HCV1型7例(58.3%),3型2例(25%),4 6型1例(8.33%),6型(包括重叠4型)2例(16.67%)。12例静脉吸毒者中HCV1型7(58.33%),6型4例(33.3%),1 3型1例(8.33%),3型(包括重叠1型)3例(25%)。结论单纯HCV感染者和合并HIV1感染的HCV感染者体内HCV以1型为主,并且均存在2种亚型共感染的现象。     

中国人类免疫缺陷病毒-1感染者细胞毒性T淋巴细胞特异性应答

目的 探讨中国人类免疫缺陷病毒（HIV）／艾滋病（AIDS）患者HIV特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）应答的特征。方法 以HIV-1 B、C亚型构建的2个全基因组肽库作为抗原，通过酶联免疫斑点（ELISPOT）法检测HIV／AIDS患者HIV特异性CTL应答。结果 无论HIV-1 B亚型还是HIV-1 C亚型所构建肽库的应答效应和频率主要集中在Gag和Nef蛋白，其他蛋白也有不同程度的应答。HIV-1 B、C亚型间应答比较，整体范围大致相同，但单个肽段水平还存在着一定差异，B亚型应答频率最高的是Nef的GPKEPFRDYVDRFYKTLR（5／17，29．4％）和Gag的LWVYHTQGYFPDWQNY（5/17，29．4％），C亚型应答频率最高的是Gag的GPKEPFRDYVDRFFKTLR应答频率为35．29％。结论 中国人群CTL应答多集中在Gag和Nef蛋白，B、C亚型在单个肽段水平略有差异。提示中国人群的CTL应答研究对设计针对中国人群的HIV疫苗有较重要的意义。     

人类免疫缺陷病毒-1的核酸遗传学特点

目的研究人类免疫缺陷病毒（HIV）-1膜蛋白基因（env）的准种与变异特点.方法采用套式聚合酶链反应（PCR）对5例艾滋病患者血浆HIV-1 env基因C2～V3区进行PCR扩增,产物经纯化后克隆至pMD-18T载体中,每例患者分别挑取5～8个克隆,共34株,完成阳性克隆的鉴定、抽提纯化和测序,将获得的DNA序列及核苷酸序列进行分析,并计算其核苷酸同源替换率（ds）与非同源替换率（dn）的比值.结果同一患者体内HIV准种株平均为83.5%,各克隆株之间的核苷酸同源性在88%～99%之间;不同患者之间的核苷酸同源性在75%～91%;34株序列的V3区平均变异频率明显高于C2～C3区（P＜0.05）;而V3区和C2～C3区的ds/dn比值均＞1.结论艾滋病患者体内有大量HIV准种存在,基因的变异在V3区发生较频繁,免疫选择压力在该区变异中不起主要作用.     

Ⅰ型人类免疫缺陷病毒包膜糖蛋白修饰体表达载体的构建及鉴定

目的构建V3环完全或部分缺失的I型人类免疫缺陷病毒(hauman immunodeficiency virus type I,HIV-1)ADA株包膜糖蛋白表达体系。方法分别设计包膜糖蛋白两端及V3环删除区域两端的引物,采用重叠延伸剪接法进行HIV-1 ADA株包膜糖蛋白V3环修饰体的构建。得到的PCR产物经EcoR I和Xho I双酶切,将酶切产物与pSM载体连接,转化大肠埃希菌后筛选阳性克隆,经PCR及基因序列测定进行鉴定。结果获得HIV-1 ADA株包膜糖蛋白V3环修饰体PCR产物,构建了其表达载体pSM-ADA△V3和pSM- ADAmV3,经转化和筛选获得了重组质粒,经PCR及基因测序鉴定显示重组质粒序列正确,为预期目的片段。结论成功构建了V3环修饰的HIV-1 ADA株包膜糖蛋白的表达载体。此结果为进一步构建伪病毒,观察V3环完全或部分缺失对病毒侵入靶细胞过程的影响,为开发阻止HIV-1进入靶细胞的药物或疫苗打下基础。     

浙江省北部区域人类免疫缺陷病毒1型的分子传播特征

目的:通过构建浙江省北部区域(嘉兴市和湖州市)人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)流行株的分子传播网络,探索HIV-1在该区域的传播特征。方法:以2017年嘉兴市和湖州市新诊断的371例人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency ...     

人类免疫缺陷病毒感染/艾滋病患者169例的颈动脉超声检查特点及影响因素分析

目的探讨人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染/艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)患者出现颈动脉异常的发生情况和影响颈动脉异常发生的相关危险因素。方法选取2003年4月至2019年12月在北京协和医院感染内科AIDS门诊规律随诊,并于2015年7月至2019年12月完善颈动脉超声检查的169例HIV感染/AIDS患者,按年龄分为青年(≤44岁)和中老年(≥45岁),收集纳入患者的体格检查资料。统计学方法采用logistic回归分析和单样本t检验。结果169例HIV感染/AIDS患者中,颈动脉异常40例(23.7%),颈动脉无异常129例(76.3%)。中老年[比值比(odds ratio,OR)=3.85,95%可信区间(95%confidence interval,95%CI)1.54~9.65,P<0.01]、高血压(OR=6.24,95%CI 1.95~20.00,P<0.01)、高脂血症(OR=2.44,95%CI 1.00~5.93,P<0.05),以及人类白细胞抗原(human leucocyte antigen,HLA)-DR⁺CD8⁺/CD8⁺增高(OR=1.03,95%CI 1.01~1.06,P<0.05)可增加发生颈动脉异常的风险。HIV感染/AIDS患者中Ⅰ组(20~30岁)、Ⅱ组(31~40岁)、Ⅲ组(41~50岁)的颈总动脉内中膜厚度(inner medium film thickness,IMT)分别为(0.0610±0.0012)、(0.0629±0.0014)、(0.0656±0.0026)cm,分别厚于对照组的(0.051±0.003)、(0.056±0.004)、(0.063±0.002)cm,差异均有统计学意义(t=5.119、4.775、1.739,均P<0.05)。HIV感染/AIDS患者中A组(30~44岁)、B组(45~59岁)的颈总动脉IMT分别为(0.0626±0.0011)、(0.0723±0.0034)cm,分别厚于对照组的(0.052±0.011)、(0.064±0.015)cm,差异均有统计学意义(t=9.520、3.012,均P<0.01)。结论相对年轻的HIV感染/AIDS患者较同龄HIV阴性人群发生颈动脉异常的概率更高,发生心血管疾病的风险可能更大。提示对于HIV感染/AIDS患者特别是青年患者,应早期进行颈动脉超声检查,尽早发现异常并进行干预和治疗。     

HIV-1早期感染婴儿病毒亚型及env区V3环氨基酸特征分析

目的分析中国I型艾滋病病毒（HIV-1）感染婴儿基因亚型的分布情况,以及env区V3环氨基酸序列特征。方法利用巢式聚合酶链反应（nPCR）扩增HIV-1前病毒脱氧核糖核酸（DNA）env区和pol区的基因序列,使用ChromasPro、MEGA 4.0、BioEdit软件进行HIV-1基因分型以及env区V3环氨基酸序列的特征分析。结果对65名HIV-1感染婴儿的100份干血斑样本（DBS）分别进行HIV-1 env区和pol区扩增,最终扩增成功的样本为63份和84份;其中45名感染婴儿的59份DBS两基因区均扩增成功。依据两基因区域均扩增成功的45名感染婴儿样本进行基因分型,结果为：CRF_BC亚型占73.3%（33/45,包括CRF_07-BC 21份,CRF_BC-08 11份）,CRF01-AE亚型占20.0%（9/45）,B′亚型占4.4%（2/45）,G亚型占2.2%（1/45）。对env区扩增成功的63份样本的V3环顶端四肽特征序列进行分析,结果显示存在5种类型,分别为GPGQ、GPGR、GPGS、GLGR和GQGR,以GPGQ为主。53份样本可能使用CCR5作为辅助受体,3份样本可能使用CXCR4作为辅助受体,7份样本不能做出预测。结论婴儿感染的HIV-1亚型呈现多样性分布;HIV-1V3环顶端氨基酸序列以GPGQ为主;大部分婴儿样本可能使用CCR5作为辅助受体。     

中国内地获得性免疫缺陷综合征合并结核感染者的临床研究

目的了解中国内地HIV／AIDS合并结核感染的概况,总结分析HIV／AIDS合并结核感染者的临床表现、实验室检查以及治疗转归情况。方法采用统一调查表格收集中国内地不同省份的9家医院HIV／AIDS合并结核感染者的各项指标并进行统计分析。结果HIV／AIDS合并结核感染者241例,以男性（75．9％）青壮年为主。新疆和云南以静脉注射毒品感染为主,其他省市以输血及血制品（上海、河南、山西闻喜县）和性传播（福州、上海、深圳、云南德宏傣族景颇族自治州）为多。单纯肺结核占59．3％,肺外结核21．2％,肺内合并肺外结核19．5％。痰结核培养阳性率2．9％,痰抗酸染色阳性率9．5％,胸水或脑脊液标本抗酸染色阳性率10．8％,PPD大多显示阴性或弱阳性。CD4^＋T淋巴细胞计数〈200个／μl的有76．8％,〈100个／μl的有58．5％。80．5％的患者接受抗结核治疗,69．7％的患者接受高效联合抗反转录病毒治疗（HAART）。存活203例（84．2％）,死亡38例（15．8％）。结论9家医院的241例HIV／AIDS合并结核感染者以肺结核为多,临床表现多样,CD4^＋T淋巴细胞计数低下,免疫功能差。结核相关的实验室检查指标阳性率低,对诊断帮助不大。虽然大多数患者接受HAART和（或）抗结核治疗,但病死率达15．8％。