局部热化疗对大鼠胶质细胞移植瘤血管再生及VEGF表达的影响

目的　研究局部热化疗对鼠胶质细胞移植瘤血管再生及血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响 ,探讨其治疗胶质瘤的机制。方法　在鼠胶质细胞移植瘤动物模型上 ,分组进行局部热疗、化疗和热化疗。用FⅧ RA染色标记血管内皮细胞 ,以微血管密度作为定量检测指标。用免疫组化S P法检测VEGF蛋白表达 ;电镜观察肿瘤微血管结构的变化。结果　热疗、化疗、热化疗组与对照组比较 ,VEGF蛋白表达减低(P <0 .0 1) ,且热化疗有协同作用 (P <0 .0 1)。VEGF表达与MVD间呈正相关 (r=0 .9798,P <0 .0 0 1)。热化疗后肿瘤微血管外径变小 ,血管壁变厚 ,血管减少 ,血管内皮细胞紧密连接增多 ,细胞连接间隙减小 ,有的血管甚至只能发现完整的基膜而缺乏内皮细胞。结论　①热疗、化疗和热化疗能抑制肿瘤血管再生 ,且阿霉素与热疗有协同作用 ;②热化疗能降低肿瘤VEGF合成与分泌 ,破坏与减少肿瘤血管再生 ,作为胶质瘤辅助治疗有良好的临床应用前景     

局部热化疗对鼠胶质细胞移植瘤细胞增殖及其蛋白表达的影响

目的　研究局部热化疗对鼠胶质细胞移植瘤细胞增殖及PCNA、IGF I表达的作用 ,探讨其作为胶质瘤辅助治疗的可行性。方法　将传代培养的C6细胞接种于大鼠背部皮下 ,肿瘤生长至直径为 1.5～2 .0cm时 ,分组进行局部热疗、化疗和热化疗。继续观察皮下肿瘤生长情况 ,测量瘤体体积和重量 ;用免疫组化S P法检测PCNA、IGF I蛋白表达 ;用HE染色法、电镜观察肿瘤增殖状况。结果　热疗、化疗、热化疗与对照组比较 ,瘤体缩小 ,瘤重减轻 (分别为 2 .95 ,1.95 ,1.86和 1.0 9g ,P值均 <0 .0 1) ;PCNA蛋白和IGF I蛋白表达降低 (P <0 .0 1) ,且热化疗较单纯热疗和化疗降低更明显 (P <0 .0 1)。出现核染色质凝聚 ,凋亡小体 ,细胞增殖明显受抑制。结论　①热疗、化疗、热化疗能抑制肿瘤增殖 ,且热化疗有协同作用。②热疗、化疗、热化疗能减低PCNA、IGF I蛋白表达。③热化疗抑制胶质瘤的PCNA合成与表达 ,抑制IGF I的合成与分泌 ,是其治疗肿瘤的机制之一。     

人脑胶质瘤手术加局部热化疗研究

目的　探讨脑胶质瘤手术加局部热化疗的可行性和安全性。方法　回顾性分析脑胶质瘤手术加术中、术后间断热化疗等综合治疗 2 4例患者 (综合组 )的资料 ,与同期手术治疗的 46例未行热化疗的脑胶质瘤患者 (对照组 )进行比较。热化疗方法是术中用双极电凝直接加热瘤体残腔化疗药 ,43～ 44℃ ,持续2 5min。术后第 2天始 ,隔日将化疗药注射入埋置于头皮下的Ommaya药囊中 ,并用微波辐射加温 45min ,共 9次。结果　综合组平均生存 3 0 .75个月 ,对照组平均生存 8.85个月 ,综合组较对照组生存年限延长 (P <0 .0 0 1) ,而并发症并未增加。结论　脑胶质瘤术中和术后间断局部热化疗可提高手术疗效 ,减少肿瘤复发 ;微波辅助术后局部化疗药液加温是安全可行的     

热化疗对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨表阿霉素(EADM)热化疗对人胆管癌细胞(QBC939)的增殖和凋亡的作用。方法以体外培养的人胆管癌细胞株为研究对象,采用水浴加热法进行体外细胞毒实验(MTT)、透射电镜观察及流式细胞仪检测,观察热疗、化疗、热化疗对人胆管癌细胞的生长抑制和凋亡的影响。结果42℃以上单纯热疗对QBC939细胞有明显杀伤作用(P<0.01),42℃以上热化疗对QBC939细胞有明显的协同或相加作用(P<0.01)。透射电镜和流式细胞术均观察到热疗、化疗、热化疗诱导细胞凋亡的作用(P<0.01);热化疗有协同作用(P<0.01)。结论热疗、化疗、热化疗均抑制QBC939细胞增殖;热疗、化疗、热化疗诱导细胞凋亡为其抗癌机制之一;热疗提高化疗药物的细胞毒作用。     

氧化低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞早期凋亡的影响

目的：观察低密度脂蛋白(ox—LDL)对培养血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的影响，探讨ox—LDL致VSMC调亡的相关机制。方法：体外培养Wistar大鼠VSMC并确认细胞指数生长期，用苔盼蓝拒染计数方法观察ox—LDL刺激VSMC对增殖的影响，流式细胞分析检测ox—LDL刺激VSMC凋亡以及COx—2抑制剂NS—398对凋亡的影响。结果：体外培养的VSMC正常生长后，用35mg儿和50mg／Lox—LDL可使培养VSMC的生长期提前到12—24h，表现出明显细胞增殖；NS—398干预ox—LDL组VSMC增殖受到减弱。流式细胞分析ox—LDL组VSMC早期凋亡率较对照组明显增加，而NS—398、ox—LDL刺激VSMC凋亡阳性率亦较对照组明显增加。结论：ox—LDL刺激可使培养VSMC表现明显细胞增殖，虽NS—398可减弱VSMC的增殖，但却协同ox—LDL导致凋亡作用的增强。     

野生型p53基因转移对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的：血管平均滑肌细胞的凋亡在球囊损伤后３０分钟内即已经开始,用基因转移的方法加速这一经过是控制再狭窄的途径之一。选择野生型ｐ５３作为目的基因,观察其对血管平滑骨细胞生长及凋亡的影响。方法：构建了野生型ｐ５３基因重组反转录病毒载体ｐＬＸＳＮ－ｐ５３。重组载体转染培养的大鼠主动脉增滑肌细胞,测定转染效率和ｐ５３基因的表达,用细胞存活曲线、流式细胞仪和ＤＮＡ “ｌａｄｄｅｒ”法检测了细胞生长和凋亡状况     

大鼠脑出血模型中神经细胞凋亡的特征及Bcl-2蛋白对细胞凋亡的调控

目的：研究大鼠脑出血灶周围是否存在细胞凋亡及Bcl-2蛋白的表达。方法：SD大鼠50只，随机分为5组，10只为对照组，其余40只建立大鼠脑出血模型，分别于模型制备后12，24，48，72h取脑组织，应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡，免疫组化SP法检测Bcl-2蛋白。结果：正常细胞对照中未见TUNEL及Bcl-2阳性细胞，其余各组中TUNEL及Bcl-2阳性细胞均有不同程度表达。凋亡率随出血后时间不同而发生相应改变，在出血后48～72h达到高峰，TUNEL阳性细胞率峰值为(24．50&;#177;2．69)％，实验组与对照组间差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。Bcl-2蛋白在出血灶周围细胞中亦有表达，其阳性表达率峰值为(20．76&;#177;1．97)％，且Bcl-2蛋白的表达与凋亡细胞之间并无明显线性关系。结论：细胞凋亡参与了脑出血后神经细胞的继发损伤过程，其在出血后的表达存在一个时间窗，对临床及时治疗有一定指导意义；Bcl-2蛋白在出血后一定时间内持续升高，但与细胞凋亡不同步，表明了bcl-2的抑制细胞凋亡的作用。     

热化疗对膀胱癌BIU-87细胞侵袭能力的影响及机制

目的观察不同温度下吉西他滨(GEM)热化疗对膀胱癌BIU-87细胞株侵袭能力的影响,并探讨其可能的机制。方法将处于对数生长期的BIU-87细胞分为4组,A组为对照组,B组为热化疗1组[(38±0.2)℃],C组为热化疗2组[(40±0.2)℃],D组为热化疗3组[(43±0.2)℃],GEM的工作浓度为1μg/ml。用Transwell小室实验检测各组细胞的侵袭能力;用RT-PCR检测MMP-9m RNA的表达情况;用ELISA法检测各组细胞的MMP-9蛋白的表达情况;用EMSA检测各组细胞NF-κB的活性。结果 Transwell小室实验显示相对于A组,B、C、D组对BIU-87细胞的穿透能力均可产生抑制作用,热化疗组与对照组之间的差异均有统计学意义(P<0.05),其中D组的抑制作用最为明显。ELISA检测结果显示与对照组相比,实验组各组均能抑制MMP-9蛋白的表达,热化疗组与对照组之间的差异有统计学意义(P<0.05),其中D组的抑制最为明显。EMSA实验结果显示实验组NF-κB的活性明显降低,与对照组之间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论热化疗能够抑制BIU-87细胞的侵袭,并且随着温度的升高抑制作用越明显,其机制可能是通过抑制NF-κB的活性,降低MMP-9蛋白的表达来发挥作用的。     

局部微波热疗对热休克蛋白表达的影响

目的：探讨骨肉瘤术中热疗对热休克蛋白表达的影响。方法：对61例骨肉瘤组织进行免疫组化染色，观察热休克蛋白HSP－60、HSP－70及GP－94的表达。结果：骨肉瘤组织中GP－94表达最高，阳怀率为100％，其 次为HSP－60，阳性率为94．5％，HSP－70弱表达，阳性率41．8％。热疗后HSP均不同程序增多，以HSP－70较明显，阳性率上升到72％。体外骨肉瘤细胞株加热后热休克蛋白也明显增多。结论：局部微波热疗后，3种热休克蛋白在骨肉瘤组织均有表达。     

热化疗诱导胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的 研究热化疗对C6细胞凋亡的影响，评价热化疗抑制细胞增殖的价值。方法 将不同浓度的丝裂霉素直接作用于体外培养的C6胶质瘤细胞，接种后20h,48h接种后42．7℃恒温箱中加温2次，每次30min。观察丝裂霉素对C6细胞的抑制率，生长曲线的影响及热疗，化疗，热化疗对C6细胞凋亡的诱导作用。结果 丝裂霉素在1.5μg/ml浓度时杀伤作用达高峰（P＜0．001），再加大浓度并不增加杀伤作用（P＞0．05）；透射电镜，FCM，TUNEL均观察到热疗，化疗，热化疗诱导细胞凋亡的作用（P＜0．001），热化疗有协同作用（P＜0．001）。结论 （1）热疗，化疗，热化疗均抑制C6细胞增殖。（2）热疗，化疗，热化疗诱导细胞凋亡为其抗癌机制之一。（3）热疗能提高化疗药物的细胞毒性作用。     

对比剂稳态磁化率MR灌注成像评价大鼠C6胶质瘤抗血管生成治疗的疗效

目的 探讨对比剂稳态磁化率MR成像技术评估大鼠C6胶质瘤抗血管生成治疗疗效的价值.方法 17只荷瘤大鼠随机分成治疗组(n=8)和对照组(n=9).治疗组腹腔注射人重组内皮抑素(10 mg/kg),对照组腹腔注射相同剂量的生理盐水,共7天.治疗前、后分别行MR检查,测量肿瘤周边区、肿瘤中央区及对侧相应正常脑实质区的血容量(BV)和血管管径指数(VSI_(MRI))值,并与病理结果相对照.结果 治疗后治疗组与对照组肿瘤体积差异有统计学意义(t=5.26,P<0.05).治疗后肿瘤中心区及周边区BV和VSI_(MRI)值均有下降,以肿瘤周边区下降更为明显(t=4.14、3.66,P均<0.01).结论 对比剂稳态磁化率MR成像技术评估人重组内皮抑素治疗鼠C6脑胶质瘤具有可行性,能够准确反映治疗前后肿瘤BV和VSI的变化.     

大蒜素抑制人脑胶质瘤U251细胞生长的实验研究

目的探讨大蒜素对体外培养的人脑胶质瘤U251细胞增殖及诱导凋亡的作用。方法用不同浓度大蒜素作用于体外培养的U251细胞12h、24h及48h,CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞术(FCM)检测细胞周期及细胞凋亡。结果大蒜素能明显抑制细胞生长,呈量-效和时-效关系(P<0.001);FCM检测表明,细胞主要被阻滞在G0/G1期;大蒜素诱导细胞凋亡率较对照组明显增加(P<0.001),有浓度依赖性。结论大蒜素能抑制U251细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

对比剂稳态磁化率MR成像动态观察大鼠C6胶质瘤血管生成

目的 使用对比剂稳态磁化率MR成像技术观察不同时间段大鼠C6胶质瘤血管生成过程中微血管结构和功能变化.方法 30只荷瘤大鼠按种植周数分成1、2、3周组,分别行对比剂稳态磁化率对比MR成像,测量肿瘤周边区、中央区及对侧相应正常脑实质区的BV和VSIMRI值,并与病理结果对照.结果 随种植周数增加,肿瘤中心区的BV先升后降,与组织学上肿瘤中央区宿主血管退缩、血管密度下降及出现明显坏死区有关;周边区BV持续上升,与周边区具有活跃的血管生成有关;肿瘤中心区及周边区的VSIMRI值均逐渐增大,以中心区增大更为明显,且同时间段比较二者之间差异有统计学意义.相同时间段、相同ROI内MR与组织学测量的VSI均明显相关(P<0.01).结论 对比剂稳态磁化率MR成像所测量的BV和VSIMRI值能准确地反映胶质瘤生长、发展过程中微血管生成的形态学和功能学信息.     

熊果酸诱导脑胶质瘤U251细胞株凋亡及其机制

目的：探讨熊果酸(Ursolic acid, UA)诱导脑胶质瘤U251细胞株凋亡的作用及机制。方法：培养脑胶质瘤细胞株(U251)，应用流式细胞仪观察UA对细胞周期的影响；琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA的变化；Western-blot测定COX-2及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达。放射免疫分析法测定COX-2催化产物前列腺素E2(prostaglandin E2, PGE2)。结果：流式细胞术及琼脂糖凝胶电泳均显示UA诱导U251细胞凋亡，细胞核DNA 呈梯状降解。同时COX-2蛋白表达及其催化生成产物PGE2浓度下降，凋亡相关蛋白Bcl-2表达减少，而Bax无明显变化。结论：熊果酸能明显诱导U251细胞凋亡，其机制可能与阻滞细胞周期、抑制COX-2表达、减少PGE2生成及下调凋亡抑制蛋白Bcl-2表达有关。     

通心络胶囊对脑梗死大鼠脑皮质血管新生和皮层神经元凋亡的影响

目的:探讨通心络胶囊对大鼠脑梗死皮层血管新生与神经元凋亡的影响。方法:M C A o大鼠分成通心络干预组与对照组,于梗死后第4天处死大鼠,免疫组化检测脑缺血皮质V E G F、V III因子及凋亡蛋白酶caspase-3表达,W estern blot半定量检测V E G F、caspase-3蛋白表达情况,TU N E L法检测梗死皮层神经元凋亡。结果:通心络干预组缺血皮质血管密度和V E G F阳性细胞数量均较对照组为高(P均<0.01)。W estern blot显示脑缺血皮层同侧V E G F121、V E G F165有明显表达,而缺血对侧表达很少;与对照组相比,通心络组缺血侧V E G F121、V E G F165蛋白表达均较对照组显著增高(P<0.01)。caspase-3免疫组化显示通心络组缺血侧阳性细胞数量较对照组为低;两组大鼠缺血侧与对侧皮层W estern blot均可显示出pre-caspase-3和活化的caspase-3两条带,以活化的caspase-3分析,对照组缺血侧caspase-3含量明显增高,而通心络组caspase-3含量明显降低,与对侧等其他各组间没有明显差异;TU...     

色素上皮细胞衍生因子对脑胶质瘤细胞凋亡的影响

目的 本研究试图通过检测人脑胶质瘤U87细胞中色素上皮细胞衍生因子(PEDF)以及凋亡相关蛋白的表达,探讨其表达在胶质瘤的增殖和细胞凋亡调控中的作用.方法 将100μg/ml的PEDF加入U87细胞中(PEDF处理组),同时以未加PEDF蛋白的胶质瘤细胞作对照组(U87con),采用四甲基偶氮唑蓝法榆测PEDF对胶质瘤细胞U87增殖率的影响;流式细胞术检测胶质瘤细胞是否凋亡;Western-blot(免疫印迹)检测PEDF处理组凋亡相关蛋白p16的变化.结果 实验数据显示:与对照组相比,当PEDF浓度为100μg/ml时,对U87的抑制率为(54.29±0.62)%,PEDF处理组胶质瘤细胞的增殖明显减慢(t=2.63,P＜0.05);PEDF处理过的凋亡细胞产生明显增多,annexin V+和PI-的细胞为(21.84±0.36)%,提示胶质瘤细胞处于凋亡早期(t=2.86,P＜0.05);PEDF诱导的发生凋亡的胶质瘤细胞中,p16蛋白的表达量明显增加(0.82±0.09),与对照组相比(0.43±0.03),差异具有统计学意义.结论 PEDF与p16协同作用,可能在胶质瘤细胞凋亡的调控中起着重要的作用,从而抑制胶质瘤细胞增殖.