针刺对缺血再灌注大鼠海马脑源性神经营养因子mRNA的影响

目的 探讨针刺对缺血再灌注大鼠海马内脑源性神经营养因子（BONF）基因表达的影响，推测针刺改善缺血再灌注的可能机制。方法 采用4-血管阴断法制备大鼠全脑缺血再灌注模型，电针刺激百会、肾俞、足三里穴后，利用RT-PCR检测BDNF mRNA。结果 正常组大鼠海马BDNF mRNA表达极低，缺血再灌注组大鼠海马BDNF mRNA表达明显增高，治疗15d的针刺1、2组大鼠海马BDNF mRNA表达较缺血再灌注组更高，及早治疗且治疗时间为20d的针刺3组大鼠海马BDNF mRNA表达较降低。结论 缺血再灌注大鼠海马BDNF水平增高有利于损伤的神经元存活、恢复；针刺促进脑内细胞分泌内源性BDNF可能是针刺有效治疗缺血再灌注的机制之一。     

脑源性神经营养因子在大鼠脑缺血再灌注损伤过程中基因表达的变化

目的 :观察脑缺血再灌注损伤后脑皮层、梗塞区和海马神经元脑源性神经营养因子 (BDNF)水平的变化 ,及与脑病理变化的关联性 ;探讨 BDNF在脑缺血再灌注损伤中的可能作用机理。方法 :线栓法复制大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注模型 ,原位核酸分子杂交检测脑不同区域 BDNFm RNA,图象分析间接定量其水平。结果 :1.脑缺血及缺血再灌注均能诱导双侧脑皮层、海马和梗塞区及其对侧相应区神经元 BDNFm RNA水平增高。2 .梗塞区因缺血损伤过重 ,神经元 BDNFm RNA水平增高的幅度小。 3.再灌注后神经元 BDNFm RNA的水平继续升高 ;其变化规律在不同脑区大致相似。 4.神经元 BDNFm RNA基础水平与神经元抗损伤力呈正相关。结论 :脑缺血及缺血再灌注损伤均导致双侧大脑 BD-NFm RNA表达的变化 ,BDNFm RNA水平的提高能增强神经元的抗损伤能力。     

BDNF及其受体TrkB mRNA在脑缺血后适应大鼠模型中的表达变化

目的检测脑源性性神经营养因子(BDNF)及其受体酪氨酸激酶B(TrkB)在脑缺血后适应大鼠模型再灌注不同时间窗的表达,探讨BDNF/TrkB在脑缺血后适应中的作用。方法 Wistar大鼠随机分成对照组、缺血-再灌注组(IR)和缺血后适应组(IP),后两组根据再灌注时间的不同各分为6h、12h、24h、48h、72h 5个亚组。线栓法建立局灶性脑缺血-再灌注模型。TTC染色测定脑梗死体积,原位杂交法检测BDNF/TrkB mRNA的表达。结果 IP组大鼠梗死体积较IR组明显减小(P0.05)。IP组各时间点BDNF mRNA及TrkB mRNA表达较IR组均明显升高(P0.05)。结论脑缺血后适应能增加脑缺血-再灌注后BDNF及TrkB的表达,减轻脑梗死体积,BDNF/TrkB在脑缺血后适应后脑缺血-再灌注损伤中发挥了重要保护作用。     

脑缺血再灌注损伤模型大鼠大脑皮质BDNF mRNA表达减少

目的制备局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠模型,并观察大脑皮质脑源性神经营养因子(BDNF)mR-NA表达的变化。方法雄性SD大鼠,采用线栓法闭塞大脑中动脉2h后进行再灌注3d,制备局灶性脑缺血再灌注损伤模型。采用神经缺失评分观察大鼠的行为学表现;TTC染色检查脑组织梗死情况;HE染色观察大鼠脑组织形态结构;RT-PCR技术检测大鼠大脑皮质BDNF mRNA的表达。结果假手术组大鼠无神经功能障碍表现;脑组织未见梗死灶;脑组织神经细胞形态规则;大脑皮质BDNF mRNA的相对表达量,与正常组相比,未见明显变化。与假手术组相比,局灶性脑缺血再灌注损伤模型大鼠出现神经功能障碍;左侧半球可见梗死灶;梗死侧脑组织形态学观察显示神经细胞大量坏死脱落、胞质呈空泡变性、疏松、胞核浓缩深染;大脑皮质BDNF mRNA表达量明显减少。结论大脑中动脉闭塞2h后进行再灌注3d可造成脑缺血再灌注损伤,可能与大脑皮质BDNF mRNA的表达减少有关。     

C-fos反义寡脱氧核苷酸部分阻断MCAO大鼠缺血侧皮质内BDNF的表达

用c-fos反义寡脱氧核苷酸侧脑室微量注射和细胞免疫化学等技术和方法,探讨大鼠局灶性脑缺血(MCAO)模型中,即早反应基因c-fos表达与脑源性神经营养因子(BDNF)表达的关系.结果表明,局灶性脑缺血再灌注可引起c-fos和BDNF在缺血侧皮质的大量表达.侧脑室微量注射c-fos反义寡脱氧核苷酸后,脑内BDNF的部分表达明显被阻断,脑缺血损伤加重.提示脑缺血损伤后,脑内BDNF的表达对脑缺血再灌注损伤起一定的保护作用;脑缺血后BDNF的表达可能部分通过c-fos调控.     

C—fos反义寡脱氧核苷酸部分阻断MCAO大鼠缺血侧皮质内BDNF的表达

用c fos反义寡脱氧核苷酸侧脑室微量注射和细胞免疫化学等技术和方法 ,探讨大鼠局灶性脑缺血(MCAO)模型中 ,即早反应基因c fos表达与脑源性神经营养因子 (BDNF)表达的关系。结果表明 ,局灶性脑缺血再灌注可引起c fos和BDNF在缺血侧皮质的大量表达。侧脑室微量注射c fos反义寡脱氧核苷酸后 ,脑内BDNF的部分表达明显被阻断 ,脑缺血损伤加重。提示脑缺血损伤后 ,脑内BDNF的表达对脑缺血再灌注损伤起一定的保护作用 ;脑缺血后BDNF的表达可能部分通过c fos调控。     

健胃愈脑汤改善脑缺血再灌注大鼠认知功能的实验研究

目的观察健胃愈脑汤对脑缺血再灌注大鼠认知功能的影响。方法选取30只成年雄性SD大鼠为研究对象,随机分为对照组、假手术组和健胃愈脑汤组各10只,将假手术组和健胃愈脑汤组大鼠制成脑缺血再灌注模型,健胃愈脑汤组大鼠术后1d灌服健胃愈脑汤,其余2组同时灌服等量生理盐水,术后第21~25天行Morris水迷宫检查,评估大鼠认知功能的变化;术后第26天行Real time-PCR和Western blot检测BDNF mRNA和蛋白表达。结果随着大鼠训练时间的延长,潜伏期时间缩短,与假手术组相比,对照组潜伏期时间明显增长(P0.05),大鼠空间学习能力受损严重;与对照组相比,健胃愈脑汤组潜伏期时间明显缩短(P0.05),大鼠空间学习能力明显恢复。此外,健胃愈脑汤组大鼠在目标象限停留时间和圆台穿越次数明显多于对照组(P0.05),说明大鼠空间记忆能力得到显著改善。BDNF mRNA和蛋白检测结果显示,对照组对比于假手术组,BDNF mRNA和蛋白水平均明显下降(P0.05),而健胃愈脑汤组比对照组BDNF mRNA和蛋白表达水平有明显升高(P0.05)。结论健胃愈脑汤可明显改善脑缺血再灌注大鼠的认知功能,提高海马区脑源性神经营养因子的表达,促进脑损伤的恢复。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后BDNF mRNA及其蛋白的表达变化

目的 观察大鼠脑缺血再灌注后缺血半暗带皮质脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA和蛋白的表达变化.方法 采用线栓法制作局灶性脑缺血大鼠(MCAO)模型,用原位杂交法和免疫组化法观察脑缺血后3、6、12h及1、3、7d共6个时间点BDNF mRNA及其蛋白的表达变化.结果 缺血半暗带BDNF mRNA及其蛋白的表达均于缺血再灌注后3h开始明显上升,6h表达继续增强,12h达高峰,3d后表达开始减弱(P＜0.05或0.01),7d后降至基础水平.结论 脑缺血再灌注后缺血半暗带BDNFmRNA及蛋白表达均明显增加,提示其可能参与了脑缺血后神经保护.     

人工合成E-选择素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中血管细胞黏附分子-1及其mRNA表达的影响

目的探讨人工合成E-选择素对大鼠局部脑缺血再灌注损伤脑组织中血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)及其mRNA表达的影响。方法采用改良的Zea Longa法建立脑缺血再灌注损伤模型,60只雄性SD大鼠随机分为模型组、假手术组和治疗组。采用免疫组化法观察缺血区脑组织中微血管VCAM-1阳性细胞数,RT-PCR法观察其mRNA表达。结果①模型组VCAM-1阳性细胞在再灌注2 h后开始出现,并持续增多,24 h后达高峰,72 h开始下降,各时间点比假手术组明显增多(P<0.01);VCAM-1 mRNA在再灌注2 h后开始表达,12 h后达高峰,24 h开始降低,各时间点比假手术组明显增高(P<0.01)。②假手术组VCAM-1阳性细胞数少见,VCAM-1 mRNA表达水平低。③治疗组(24 h)VCAM-1阳性细胞数比假手术组增多(P<0.05),但较模型组少(P<0.05);VCAM-1 mRNA表达比假手术组高(P<0.05),但较模型组低(P<0.05)。结论大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后,VCAM-1及VCAM-1 mRNA表达增多;人工合成E-选择素可降低VCAM-1及VCAM-1 mRNA的表达从而抑制白细胞与血管内皮细胞黏附,减轻炎症反应和脑缺血再灌注损伤,发挥脑保护作用。     

丁香酚吸嗅对MCAO模型大鼠脑源性神经营养因子的影响

目的研究丁香酚吸嗅对MCAO模型SD大鼠认知和记忆能力的行为学的影响,评价其对脑缺血后再灌注损伤的干预作用及其可能的作用机制。方法将80只SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、丁香酚组和假手术组,每组20只。采用大脑中动脉内线栓阻断法(MCAO)制造大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2 h后再灌注24 h。给予相应处理3 w后,大鼠行神经行为学评分后处死,取大脑行2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色,计算脑梗死容积百分比;Morris水迷宫实验检测学习记忆能力;并利用免疫组织化学染色法观察脑源性神经营养因子(BDNF)在海马CA3区的表达。结果丁香酚吸嗅组干预3 w后与模型组比较神经功能评分差异有显著性(P<0.01);TTC染色梗死面积明显减少(P<0.01),Morris水迷宫实验差异有显著性(P<0.05);海马CA3区BDNF的表达显著性增多。结论丁香酚吸嗅对MACO模型大鼠的损伤有明显的保护作用,其机制可能是提高脑内BDNF含量,调节脑区功能,从而达到对脑缺血再灌注损伤的防治作用。     

脑缺血再灌注后脑内脑源性神经营养因子的基因表达与调节

探讨：探讨脑缺血再灌注损伤后脑内脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）ｍＲＡＮ水平的变化,推测ＢＤＮＦ对损伤病理的影响。方法线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模,原位交检测大鼠海马神经元内ＢＤＮＦｍＲＮＡ,图像分析间接定量ＢＤＮＦｍＲＮＡ水平。结果（１）脑缺血及缺血再灌注均能诱导双侧海马神经元ＢＤＮＦｍＲＮＡ水平增高;（２）缺血损伤过重后海马神经元ＢＤＮＦｍＲＮＡ水平增高的程度反而小;（３）再灌注后ＢＤＮＦｍＲＮ     

电针对MCAO大鼠皮层神经营养因子表达的影响

目的　应用免疫组织化学法观察电针对缺血皮层神经元脑源性神经营养因子 (BDNF)和神经生长因子 (NGF)表达的影响。方法　实验分缺血组和缺血 电针组 ,大脑中动脉线栓 (MCAO)造成局灶性缺血 75 m in,缺血 电针组在缺血后立即给予电针 1h。在缺血再灌不同时间分别处死 ,然后进行免疫组织化学染色。结果　 BD-NF和 NGF主要在缺血灶周围的皮层表达。在再灌后 8h内缺血 电针组 BDNF和 NGF免疫阳性细胞的表达高于缺血组 (P<0 .0 1)。结论　电针能够提高 NGF和 BDNF在缺血灶周围皮层的表达 ,这种高表达可能对脑缺血具有保护作用。     

大鼠局灶性脑缺血后再灌注期caspase—9 mRNA及Apaf—1mRNA表达的动态变化

目的探讨大鼠局灶性脑缺血后再灌注期caspase-9 mRNA及Apaf-1 mRNA表达的动态变化.方法采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血后再灌注模型,以逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测caspase-9 mRNA及Apf-1 mRNA的表达.结果缺血2 h后再灌注,缺血皮质中caspase-9 mRNA的表达在再灌注后24h达高峰,48h仍保持高水平,而Apaf-1 muRNA的表达无明显改变.结论局灶性脑缺血后再灌注48h内caspase-9 mRNA表达增强.     

Neurotrophic factor expression after focal brain ischemia preceded by different preconditioning strategies

BACKGROUND: Both prolonged brain ischemia and preconditioning (PC) induce expression of neurotrophic factors. However, the influence of PC on their expression after a long-term ischemia remains vague. Previously, we have found various effects of PC on mRNA levels of different cytokines after focal brain ischemia. Thus, we investigated mRNA expression of nerve growth factor, brain-derived neurotrophic factor (BDNF) and ciliary neurotrophic factor after 90-min middle cerebral artery occlusion (MCAo) preceded by ischemic or chemical PC. METHODS: MCAo was induced in rats using the suture method. PC had been carried out 3 days earlier. There were 4 experimental groups: MCAo alone; ischemic PC and MCAo; chemical PC and MCAo, and sham-operated rats. Expression of mRNAs in the ipsi- and contralateral cortex was studied by semiquantitative RT-PCR at 12 and 24 h after MCAo. RESULTS: Despite clearly neuroprotective effects of both PC strategies, mRNA levels of neurotrophic factors were similar in tolerant and nontolerant rats. Only BDNF mRNA expression, 12 h after reperfusion, was lower when ischemic PC was applied prior to long-term ischemia. CONCLUSIONS: These results suggest that PC generally does not change the expression of neurotrophic factor expression after a long-term focal brain ischemia compared to the nontolerant state.     

单核细胞趋化蛋白-1在大鼠脑缺血再灌注损伤中的表达变化

目的 观察大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）后再灌注不同时间点单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）与基因表达的变化．以探讨其在脑缺血再灌注损伤中的意义。方法 建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，用免疫荧光双标染色、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测MCP-1蛋白表达、mRNA转录水平。结果 （1）缺血再灌注后缺血脑组织中存在表达MCP-1／NSE和MCP-1／GFAP双阳性细胞．提示神经元和神经胶质细胞是产生MCP-1的细胞来源之一。（2）各缺血再灌注组MCP-1 mRNA表达均高于假手术组．再灌注1h MCP-1的mRNA转录即有升高．且随时间延长而进一步升高．24h达到高峰之后逐渐下降。结论 脑缺血再灌注引起MCP-1表达上调．提示MCP-1可能参与了局灶性脑缺血再灌注损伤。     

成年大鼠局灶脑缺血/再灌注后海马BDNFmRNA和bFGF mRNA的动态变化研究

目的观察局灶脑缺血/再灌注大鼠海马脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)mRNA和碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)mRNA的动态表达。方法将108只雄性Wistar大鼠随机分为正常组(NC组)、假手术组(SC组)、模型组(I/R组),每组再于缺血1h后再灌注于1,3,7,14,21,28d六个时间点进行观察,正常组和假手术组于相应时间点同步观察。采用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉局灶脑缺血/再灌注模型。应用原位杂交法检测大鼠缺血再灌注后1,3,7,14,21,28d缺血侧海马BDNF mRNA和b FGF mRNA表达。结果正常海马区可见少量BDNF mRNA和b FGF mRNA的阳性表达。BDNF mRNA阳性反应主要集中于齿状回颗粒细胞以及CA2、CA3中的锥体细胞胞浆中,b FGF mRNA主要位于海马锥体细胞层、CA1、CA2区。局灶脑缺血/再灌注后,I/R组缺血侧海马BDNF mRNA表达增加,主要见于齿状回颗粒细胞层和锥体细胞层。缺血/再灌注后1d时BDNF mRNA阳性反应即有增多,3d时达到高峰(P0.01),阳性产物染色较深,7d后迅速下降(P0.01),28d时接近正常水平。局灶脑缺血/再灌注后,I/R组缺血侧海马可见b FGF mRNA的强阳性表达,1d时开始增加(P0.05),3d即达一小高峰(P0.01),7d开始下降,21d时明显下降,28d时降到正常水平(P0.05)。结论局灶脑缺血/再灌注可上调BDNF mRNA和b FGF mRNA的表达,有利于脑缺血后神经功能恢复,具有神经保护作用。     

脑缺血再灌注时bcl-2蛋白的表达及药物干预作用的研究

探讨ｂｃｌ－２在脑缺血再灌注时脑损伤过程的作用,以及川芎嗪和尼莫通对其影响。方法：采用免疫组化法检测大鼠缺血再灌注不同时间内ｂｃｌ－２蛋白表达的水平,以及川芎嗪和尼莫通干预后ｂｃｌ－２蛋白表达的变化。结果（１）脑缺血再灌注时缺血侧皮层和基底节区均有ｂｃｌ－２阳性表达,其阳性表达率随再灌注时间不同而不同,于缺血２再灌注３ｈ阳性表达达高峰。（２）川芎嗪,尼莫通干预组脑缺血再灌注时层和基底节区ｂｃｌ－２