眼镜蛇毒分泌型磷脂酶A_2的研究进展

眼镜蛇毒分泌型磷脂酶A2(sPLA2)作为眼镜蛇毒中的一个重要成分,有着广泛的生物学活性,近年来的研究热点正日益从眼镜蛇粗毒转向毒素中的某个单体,如sPLA2的研究。该文简要综述了眼镜蛇毒sPLA2的结构特征、分离纯化以及分子生物学特性,着重论述了sPLA2多样的药理毒理作用,并对其作用机制和发展前景进行了探讨。     

分泌型磷脂酶A2Ⅱa型在动脉粥样硬化大鼠主动脉的表达

目的了解分泌型磷脂酶A2Ⅱa型（sPLA2Ⅱa）在动脉粥样硬化大鼠模型主动脉的表达及分布,通过测定肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）等相关细胞因子探讨sPLA2Ⅱa的作用机制,并了解他汀类药物对sPLA2Ⅱa的影响。方法将雄性Wistar大鼠30只完全随机分为正常对照组、高脂饮食组、辛伐他汀组,各10只。正常对照组喂食基础饲料,高脂饮食组喂食高脂饲料,辛伐他汀组喂食高脂饲料及辛伐他汀悬液（5mg／kg）灌胃,正常对照组和高脂饮食组大鼠给予等容积的0．9％氯化钠注射液灌胃,连续6周,取材。采用免疫组织化学sP法检测主动脉组织中sPLA2Ⅱa的表达及分布,酶联免疫吸附测定法检测血清IL-6、TNF-α水平。结果①与正常对照组相比,高脂饮食组大鼠血清TC、TG、LDL—C含量明显升高[TG：（1．9±0．5）mmol／L比（1．5±0．6）mmo]／L,TC：（5．82±1．13）mmol／L比（1．98±0．26）mmol／L,LDL—C：（3．97±0．78）mmol／L比（0．50±0．16）mmol／L,均P〈0．01];与高脂饮食组比较,辛伐他汀组血清TC、TG、LDL—C[TC：（3．78±0．59）mmol／L,TG：（0．84-0．4）mmo]／L,LDL—C：（1．49±0．62）mmol／L]明显降低（均P〈0．05）。②高脂饮食组大鼠血清TNF—d、IL-6水平明显高于正常对照组[TNF—d：（15．48±1．03）ng／L比（8．40±0．28）ng／L,IL-6：（72．0±7．5）ng／L比（25．1±2．3）ng／L,均P〈0．01];辛伐他汀组TNF—ft．、IL-6水平[TNF．d：（10．54±1．96）ng／L,IL一6：（40．2±20．2）ng／L]明显低于高脂饮食组（均P〈0．05）。③高脂饮食组sPLA2Ⅱa呈强阳性表达,主要位于血管壁动脉粥样硬化斑块区域无定形物质,与正常对照组比较表达均明显升高;辛伐他汀组sPLA2Ⅱa表达较高脂饮食组明显下调。结论动脉粥样硬化大鼠主动脉sPLA2Ⅱa表达明显升高,可能与TNF—α、IL-6共同参与动脉粥样硬化斑块的形成及发展过程,辛伐他汀可以降低sPLA2Ⅱa表达水平。     

血清分泌型磷脂酶A2与肺炎支原体肺炎患儿疾病严重程度的关系

目的 探讨血清分泌型磷脂酶A2(sPLA2)与肺炎支原体肺炎(MPP)患儿疾病严重程度的关系.方法 回顾性分析2018年2月至2021年2月湖南省儿童医院收治的256例MPP患儿的病历资料,根据患儿疾病程度分为重症组(136例)和轻症组(120例).比较2组患儿的实验室检查指标,采用多因素Logistic回归模型分析影...     

阿托伐他汀对Ⅱa型分泌型磷脂酶A2与核转录因子-kB在动脉硬化大鼠表达的影响

目的探讨阿托伐他汀对动脉硬化模型大鼠Ⅱa型分泌型磷脂酶A2（sPLA2Ⅱa）与核转录因子（NF）-KB表达的影响。方法健康雄性Wistar大鼠30只完全随机分为3组,即正常对照组（n=10）、模型组（n=10）、阿托伐他汀组（n=10）。模型组大鼠饲以高脂饲料建立食饵性动脉粥样硬化模型,阿托伐他汀组大鼠饲以高脂饲料并予阿托伐他汀[40mg／（kg·d）]灌胃,持续8周,正常对照组饲以普通饲料。采用免疫组织化学法检测3组大鼠主动脉中sPLA2Ⅱa及核转录因子-kB蛋白的表达及分布,RT-PCR法检测sPLA2ⅡamRNA的表达情况。结果与正常对照组相比,模型组大鼠主动脉sPLA2Ⅱa与核转录因子．KB蛋白表达[分别为（0．202±0．015）OD／μm2,（0．209±0．066）OD／μm2）]以及sPLA2Ⅱa基因表达（0．578±0．158）较正常对照组sPLA2Ⅱa与核转录因子-KB蛋白表达[分别为（0．159±0．013）OD／μm2,（0．130±0．055）OD／μm2]、sPLA2Ⅱa基因表达（0．320±0．080）显著增加,差异有统计学意义（P〈0．01）。与模型组相比,阿托伐他汀组大鼠主动脉与sPLA2Ⅱa与核转录因子．KB蛋白表达[分别为（0．167±O．011）OD／μm2,（0．142±0．051）OD／μm2]以及sPLA2IIa基因表达（0．413±0．115）减少,差异有统计学意义（P〈0．05）,各组大鼠主动脉中sPLA2ⅡamRNA的表达与核转录因子．KB蛋白表达呈正相关,相关系数为正常对照组r=0．06,P〈0．05,阿托伐他汀组r=0．70,P〈0．05,模型组r=0．78,P〈0．01。结论sPLA2Ⅱa表达的增加可能是导致动脉粥样硬化的重要原因之一;阿托伐他汀可通过抑制核转录因子-KB的表达进而降低sPLA2Ⅱa基因及蛋白的表达,从而减轻动脉粥样硬化。     

急性心肌梗死患者脂蛋白相关磷脂酶A2水平与冠脉病变的相关性分析

目的分析急性心肌梗死(AMI)患者脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)水平与冠脉病变程度的相关性。方法选取2014年1月-2015年1月该院收治的AMI且行冠脉造影患者74例为AMI组,同期行冠脉造影或冠脉CTA除外冠心病的患者61例为对照组,使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测患者Lp-PLA2水平。根据冠脉损害严重程度用Gensini评分方法进行评分,再以冠脉病变支数、Gensini积分将AMI患者分成不同的亚组,用统计学方法比较各组Lp-PLA2水平的不同。结果 AMI组患者血浆Lp-PLA2水平较对照组高,但差异无统计学意义(P>0.05)。Lp-PLA2水平与冠脉病变支数有明显相关性(P<0.05),且与冠脉Gensini积分呈正相关(r=0.713,P<0.01)。结论AMI患者Lp-PLA2水平与冠脉病变弥漫程度无明显关系,但可在一定程度上反映冠脉管腔狭窄程度。     

分泌型磷脂酶A2在人皮肤黑素瘤细胞和组织中的表达和分布

目的：比较分泌型磷脂酶A2（sPLA2）在人恶性黑素瘤A375细胞、黑素瘤组织与健康人皮肤细胞、组织中的表达和分布。方法：分别采用ELISA法和Western Blot法检测细胞上清液和细胞内sPLA2的表达,免疫组化法考察人皮肤组织中sPLA2的表达和分布。结果：恶性黑素瘤A375细胞上清液的sPLA2浓度为（177．27±13．57）pg／mL,明显高于人表皮HaCaT细胞的（21．42±5．05）pg/mL（P〈0．05）和真皮成纤维细胞的（2．75±1．23）pg／mL（P〈0．05）;其细胞内sPLA,／GAPDH的灰度比值为7．03±1．31,亦明显高于HaCaT细胞的1．45±0．37（P〈0．05）和成纤维细胞的0．31±0．11（P〈0．05）;黑素瘤组织中呈现大量sPLA2阳性细胞和颗粒,而健康人表皮和真皮组织中则未见该阳性细胞和颗粒。结论：sPLA2在人恶性黑素瘤A375细胞和黑素瘤组织中较健康皮肤细胞和组织均有较高表达和分布,提示sPLA2有可能成为皮肤黑素瘤靶向给药的新靶点。     

灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注损伤时分泌型磷脂酶A2的影响

目的探讨灯盏花素在脑损伤时对脑细胞凋亡及分泌型磷脂酶A2(sPLA2)及其相关介质的影响。方法将雄性Wistar大鼠18只分为模型组(IR组)、灯盏花素组及假手术组各6只。用线栓法制成大脑中动脉缺血再灌注(MCA-IR)模型,用TUNEL法检测脑细胞凋亡,用免疫组织化学法检测sPLA2在脑细胞中的表达,用[3H]标记大肠杆菌膜为底物的液闪方法和ELISA法分别检测血清中sPLA2活性和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)水平。结果缺血0.5h再灌注24h,IR组海马与皮质凋亡细胞数均多于假手术组和灯盏花素组(P<0.01)。缺血0.5h再灌注12h,IR组海马sPLA2阳性细胞数及皮质sPLA2细胞数多于假手术组和灯盏花素组,差异有统计学意义(P<0.01)。缺血0.5h再灌注12h,IR组TNF-α、sPLA2及PGE2水平均高于假手术组和灯盏花素组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论灯盏花素对MCA-IR脑损伤有良好的保护作用,其机理在于抑制sPLA2的激活、表达及其相关介质的水平。     

灯盏花素对大鼠肝纤维化分泌型磷脂酶A2和细胞因子的影响

目的探讨灯盏花素通过抑制分泌性磷脂酶A2(sPLA2)及其相关细胞因子对肝纤维化的影响。方法将健康雄性Wistar大鼠18只随机分为3组:灯盏花素组、CCl4模型组及对照组各6只。PBS灌胃作为对照组;5%CCl4橄榄油按5ml/kg灌胃,每3天1次共15次,作为CCl4模型组;每次CCl4灌胃同时腹腔注射灯盏花素5mg/kg,作为灯盏花素组。于预定时间处死大鼠,对大鼠肝脏分别进行HE染色、电镜观测、sPLA2免疫组化,并且检测大鼠血清sPLA2、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)、血清Ⅲ型前胶元(PCⅢ)和透明质酸(HA)水平。结果灯盏花素组胶原纤维、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、HA及PCⅢ水平高于CCl4模型组,CCl4模型组高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。灯盏花素组第2周、第4周、第6周时PGE2、TNF-α及sPLA2水平低于CCl4模型组,CCl4模型组高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。灯盏花素组sPLA2阳性细胞数为(10.2±3.5)个/mm2少于CCl4模型组的(37.2±7.3)个/mm2,CCl4模型组多于对照组的(1.3±0.8)个/mm2,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论灯盏花素具有抗肝纤维化作用,其作用机制与抑制sPLA2、TNF-α、PGE2水平相关。     

脂蛋白相关磷脂酶A2和非对称二甲基精氨酸与急性缺血性脑卒中的相关性研究

目的 探讨血浆脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、非对称二甲基精氨酸(ADMA)与急性缺血性脑卒中的相关性.方法 选择急性缺血性脑卒中患者(151例)为研究对象,未卒中患者(100例)作对照,血浆Lp-PLA2检测采用酶联免疫吸附法;血浆ADMA检测采用高效液相色谱法.行头颅核磁共振检查计算脑梗死体积大小,按美国国立卫生研究所卒中量表(NIHSS)评分进行神经功能缺损程度评估.结果 急性缺血性脑卒中组患者TC、TG、LDL-C明显高于对照组[分别为(5.2±1.2) mmol/L比(3.6±0.9)mmol/L,(2.0±0.6)mmol/L比(1.5±0.4) mmol/L,(3.9±1.2) mmol/L比(2.3±1.1) mmol/L],差异均有统计学意义(均P＜0.05),HDL-C低于对照组[(1.49 ± 0.18) mmol/L比(1.57±0.20) mmol/L],但差异无统计学意义.急性缺血性脑卒中组血浆Lp-PLA2、ADMA水平第1、3、7天明显高于对照组[Lp-PLA2分别为(216±16)、(468±29)、(362±21)μg/L比(169±21) μg/L;ADMA分别为(1.03±0.22)、(1.29±0.29)、(0.83±0.19) μmol/L比(0.53 ±0.18)μmol/L],差异有统计学意义(P＜0.05),第14天恢复正常水平.血浆Lp-PLA2、ADMA水平随脑梗死体积增加而递增(P＜0.05);血浆Lp-PLA2、ADMA水平随神经功能缺损程度增加而呈递增趋势,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 急性缺血性脑卒中患者Lp-PLA2、ADMA蛋白水平明显升高,其与脑梗死体积相关和神经功能缺损程度相关.     

颈动脉硬化斑块及其相关因素与缺血性脑血管病的关系

目的 探讨颈动脉硬化（CAS）斑块及同型半胱氨酸（HCY）、C-反应蛋白（CRP）水平与缺血性脑血管病（ICVD）的关系。方法检测468例ICYD患者与456例非脑血管病患者（对照组）颈动脉内．中膜厚度（IMT）、斑块数及大小和性状,同时检测HCY和CRP水平并与对照组比较。结果（1）与对照组比较,ICVD组IMT明显增厚,CAS斑块检出率、软斑百分比明显增高（均P〈0．05）。（2）HCY和CRP水平ICVD组明显高于对照组（P〈0．05）;ICVD有斑块亚组明显高于无斑块亚组（P〈0．05）。（3）ICVD组颈动脉IMT与同型半胱氨酸和C反应蛋白水平呈正相关（r分别0．32、0．30,P〈0．05）。结论ICVD患者IMT增厚,CAS斑块及软斑发生率高,CAS斑块和高HCY血症是ICVD的独立危险因素,CRP水平是临床评价ICVD严重程度和预后的一个重要的指标。     

瑞舒伐他汀强化降脂对缺血性脑卒中血脂及颈动脉粥样硬化斑块的影响

目的 探讨瑞舒伐他汀强化降脂对缺血性脑卒中血脂及颈动脉粥样硬化斑块的影响.方法 72例缺血性脑卒中患者随机分为强化降脂组和普通降脂组.2组患者均予以控制颅压、血压和血糖、抗血小板聚集、改善脑循环等基础治疗.普通降脂组加用瑞舒伐他汀片10 mg,/次,1次/d;强化降脂组加用瑞舒伐他汀片20mg/次,1次/d,连用6个月.观察并比较2组患者治疗前后血脂水平及颈动脉粥样硬化斑块的变化.结果 治疗6个月后,2组患者总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平均较治疗前明显下降,高密度脂蛋白（HDL-C）均较治疗前明显上升（P＜0.05或P＜0.01）,且强化降脂组下降或上升较普通降脂组幅度更大（P＜0.05）;同时2组患者的斑块大小、厚度和内-中膜厚度（IMT）均较治疗前明显下降（P＜0.05或P＜0.01）,且强化降脂组下降较普通降脂组幅度更大（P＜0.05）.结论 瑞舒伐他汀强化降脂治疗缺血性脑卒中具有较好的疗效和良好的调脂作用,可降低颈动脉斑块的大小、厚度和IMT,延缓和逆转颈动脉粥样硬化斑块的进展.     

Targeting human secretory phospholipase A2 with designed peptide inhibitors for inflammatory therapy

Phospholipase A2 (PLA2) is potentially an important target for anti-inflammatory therapeutics. Here, we described a systematic scheme that integrated protein docking and peptide redocking, molecular dynamics simulation, and binding affinity analysis to rationally design PLA2 inhibitory peptides based on a solved PLA2 crystal structure. The scheme employed protein docking to sample the interaction modes of PLA2 with its natural inhibitor Clara cell protein, from which a number of peptide fragments, including a pentapeptide LLLGS, were cut off and redocked to serve as the lead entities of PLA2 inhibitory peptides. In addition, a systematic mutation energy map that characterized the binding free energy changes ΔG upon mutations of each position of the putative pentapeptide to 20 amino acids was also profiled, which was subsequently used to guide peptide structure optimization. In order to solidify the computational findings, we performed kinetic and inhibition studies of few designed peptides against human secretory PLA2. Consequently, eight peptides were successfully identified to have potent inhibition potency, in which the LLAYK and AVFRS were found to suppress enzymatic activity significantly (K_i?=?0.75?±?0.06 and 4.2?±?0.3?μM, respectively). A further structure examination revealed that the designed peptides can form intensive nonpolar networks of van der Waals contacts and hydrophobic interactions at their complex interfaces with PLA2, conferring considerable stability and affinity for the formed complex systems.     

北方农村地区高血压患者血清TC/HDL-C比值与缺血性脑卒中的关系

目的探讨北方农村地区高血压患者血清总胆固醇(TC)/高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)比值与缺血性脑卒中的关系。方法采用分层整群抽样方法于2004—2006年对辽宁省阜新县农村地区6412名(男性2805名,女性3607名)年龄≥35岁患原发性高血压病的常住人群(≥5年)进行流行病学调查和实验室检查,对血脂异常情况使用SPSS11.5软件进行统计分析。结果①缺血性脑卒中患者共330人。与非缺血性脑卒中组相比,具有较高的血压水平,TC及LDL-C水平均较高。②将TC/HDL-C比值分为<3.0、3.0～、3.5～、4.0～、≥4.5五组,随比值的增高,缺血性脑卒中的患病率显著增高。比值最高组的患病率是比值最低组的3.4倍。各组患缺血性脑卒中的危险性均高于参照组,除比值3.0～组外,各组OR值的增高均有统计学意义。结论缺血性脑卒中的患病率随TC/HDL-C比值的增高而升高。     

Inhibition of cyclooxygenase-2 aggravates secretory phospholipase A2-mediated progression of acute liver injury

Our previous study [Bhave, V. S., Donthamsetty, S., Latendresse, J. R., Muskhelishvili, L., and Mehendale, H. M. 2008-this issue. Secretory phospholipase A(2) mediates progression of acute liver injury in the absence of sufficient COX-2. Toxicol Appl Pharmacol] showed that in the absence of sufficient induction and co-presence of cyclooxygenase-2 (COX-2), secretory phospholipase A(2) (sPLA(2)) appearing in the intercellular spaces for cleanup of post-necrotic debris seems to contribute to the progression of toxicant-initiated liver injury, possibly by hydrolysis of membrane phospholipids of hepatocytes in the perinecrotic areas. To further test our hypothesis on the protective role of COX-2, male Fisher-344 rats were administered a selective COX-2 inhibitor, NS-398, and then challenged with a moderately toxic dose of CCl(4). This led to a 5-fold increase in the susceptibility of the COX-2 inhibited rats to CCl(4) hepatotoxicity and mortality. The CCl(4) bioactivating enzyme CYP2E1 protein, CYP2E1 enzyme activity, and the (14)CCl(4)-derived radiolabel covalently bound to the liver proteins were unaffected by the COX-2 inhibitor suggesting that the increased hepatotoxic sensitivity of the COX-2 inhibited rats was not due to higher bioactivation of CCl(4). Further investigation showed that this increased mortality was due to higher plasma and hepatic sPLA(2) activities, inhibited PGE(2) production, and progression of liver injury as compared to the non-intervened rats(.) In conclusion, inhibition of COX-2 mitigates the tissue protective mechanisms associated with COX-2 induction, which promotes sPLA(2)-mediated progression of liver injury in an acute liver toxicity model. Because increased sPLA(2) activity in the intercellular space is associated with increased progression of injury, and induced COX-2 is associated with hepatoprotection, ratios of hepatic COX-2 and sPLA(2) activities may turn out to be a useful tool in predicting the extent of hepatotoxicities.     

高血压病患者脉压与其并发脑卒中的关系

目的分析老年原发性高血压病患者脉压差与发生缺血性卒中的关系。方法回顾性分析60～75岁高血压病患者612例,分析脉压与发生缺血性卒中及类型的相关性。结果老年高血压病组与高血压病合并缺血性卒中组的脉压大小差异有统计学意义。结论老年高血压病患者脉压大小与是否发生缺血性卒中相关。